甘遂配伍甘草对大鼠肝脏CYP2E1表达及活性的影响

目的通过检测细胞色素氧化酶CYP2E1的表达和活性变化,从分子水平探讨中药配伍禁忌"十八反"理论中甘遂配伍甘草的药理机制.方法利用RT-PCR检测大鼠肝脏CYP2E1 mRNA水平;通过Western blot检测大鼠肝脏CYP2E1蛋白表达;采用高效液相色谱(HPLC)法测定CYP2E1酶活性.结果甘遂组、甘草组和甘遂甘草配伍组均明显诱导大鼠肝脏CYP2E1的表达与活性上升,并发现甘草组和甘遂甘草配伍组对CYP2E1活性的诱导作用显著高于甘遂组.结论甘遂可能通过诱导肝脏CYP2E1的表达与活性上升,促使其所含的前致癌物质和前毒物转化成为致癌物和毒物,导致对机体的毒性作用;甘遂甘草配伍使用时,甘草对CYP2E1活性的诱导能力更强,故而甘草可促进甘遂所含前致癌物质和前毒物转化成为致癌物和毒物的过程,并导致对机体毒性作用的增强,从而表现出"十八反"中药物配伍禁忌的特征.     

孕期尼古丁暴露所致成年雄性子代大鼠肝脏CYP同工酶及抗氧化酶变化

目的:探讨孕期尼古丁暴露(PNE)所致雄性子代大鼠肝脏细胞色素P450(CYP)同工酶及抗氧化酶表达和功能变化。方法:建立孕中、晚期尼古丁[2mg/(kg·d)]暴露大鼠模型,检测出生后3月和7月龄雄性大鼠肝脏CYP同工酶和抗氧化酶的表达和活性变化。结果:PNE的3月龄雄性大鼠肝脏CYP1A2、CYP2C11和CYP3A1的mRNA表达显著增加,其他亚型(CYP2A2、CYP2B1、CYP2D2和CYP2E1)为增加趋势,而CYP2E1活性显著降低,其他亚型(CYP2C6、CYP2D2/3和CYP3A1)有降低趋势;7月龄雄性大鼠肝脏CYP2A2和CYP2E1的mRNA表达增加,其他亚型(CYP1A2、CYP2C11、CYP2D2和CYP3A1)为增加趋势,而酶活性无明显变化。3月和7月龄雄性大鼠肝脏抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性无明显改变。结论:PNE可导致雄性3月龄子代大鼠肝脏CYP同工酶的mRNA表达增加,但酶活性降低,7月龄雄性大鼠肝脏CYP同工酶功能趋于正常。提示PNE可改变雄性子代大鼠药物代谢功能但不影响抗氧化酶功能。     

都匀毛尖对小鼠肝脏CYP3A酶活性及其mRNA水平的影响

目的:研究绿茶对细胞色素P450 3A(CYP3A)酶活性及其mRNA水平的影响,推测绿茶对药物代谢的作用.方法:绿茶选用都匀毛尖,120只昆明种雄性小鼠随机分为4组,对照组正常饮食饮水,低、中、高剂量绿茶组分别予0.25 g/(kg·d)、0.5 g/(kg·d)、1.0g/(kg·d)都匀毛尖茶汤灌胃,分别在1周、2周、3周时处死小鼠,测定小鼠肝脏微粒体CYP3A的活性,并用RT-PCR技术检测小鼠肝脏中CYP3A11 mRNA水平.结果:都匀毛尖能抑制CYP3A酶活性,呈时间-剂量依赖性;都匀毛尖可抑制CYP3A11 mRNA表达,且呈时间-剂量依赖性.结论:都匀毛尖对CYP3A的酶活性及mRNA水平均呈时间-剂量依赖性抑制作用,提示都匀毛尖可能通过影响CYP3A酶活性对药物的代谢发挥作用.     

黄药子与甘草配伍对大鼠肝脏CYP450基因表达的影响

目的研究甘草减轻黄药子肝损伤及对CYP450基因表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应技术检测大鼠肝脏CYP1A2、CYP2C19的mRNA的表达。结果在mRNA水平上,28、35 d黄药子组显著诱导CYP1A2的基因表达,配伍甘草后表达降低,差异具有统计学意义。结论甘草通过抑制CYP1A2的mRNA表达,对黄药子致肝损伤具有一定的保护作用。     

慢性肝胆疾患P450同工酶CYP3A4表达的改变

目的:研究肝硬化和黄疸患者肝脏中CYP3A4蛋白含量、活性及其mRNA表达,进一步探讨其药理学意义.方法:提取肝炎后肝硬化、阻塞性黄疸及肝血管瘤患者的肝组织标本,以后者为正常肝组织对照;Nash法测定CYP3A4酶活性,ELISA法测定蛋白量,一步法抽提肝组织总RNA,随机引物标记法制备CYP3A4 cDNA探针,Northern杂交比较CYP3A4基因在以上三组中的表达差异.结果:肝炎后肝硬化患者CYP3A4蛋白量、活性及mRNA表达较正常肝显著降低(P<0.01),而阻塞性黄疸患者该酶改变与正常肝相差无显著性.结论:肝硬化患者CYP3A4 mRNA表达显著降低,导致同工酶含量和酶活性下降,肝脏对包括静脉麻醉药物在内的多种药物的代谢能力下降,提示临床麻醉工作中应考虑药酶改变,减低患者的麻醉药剂量.     

Hsa-miR-660负调控人类肝脏组织中药物代谢酶CYP3A4的表达

 【摘要】目的 探讨Hsa-miR-660 (简称miRNA-660)是否参与调控人类重要I相药物代谢酶CYP3A4的表达,是否影响人类肝脏组织中的CYP3A4酶活性。方法 生物信息学预测出miRNA-660可以作用于CYP3A4基因mRNA 3′端非编码区(3′untranslated region,3′UTR);细胞转染和双萤光素酶报告实验进一步验证miRNA-660能直接作用于CYP3A4 mRNA 3′UTR;收集28例人肝脏组织,检测其成熟miRNA-660表达量、CYP3A4的mRNA和蛋白质表达量及酶活性;将miRNA-660表达水平与CYP3A4 3种表达水平进行Pearson两两回归分析,探索miRNA 660与CYP3A4表达之间的相关性,从而推测miRNA-660在调控CYP3A4表达中的作用。结果miRNA-660能直接作用CYP3A4 mRNA 3′UTR(t检验,P=0.017),miRNA-660表达量与CYP3A4 mRNA表达量无显著相关性(P=0.20),但与CYP3A4蛋白表达量、酶活性负相关(P<0.05)。结论 在肝脏组织中,miRNA 660虽然不影响CYP3A4基因的mRNA表达,但可能在翻译水平抑制其蛋白质表达及酶活性,负调控CYP3A4基因的翻译过程。miRNA 660可能直接参与调控人肝脏组织中CYP3A4的表达,miRNA可能是引起人群中CYP3A4酶活多态性的重要原因之一。     

花楸猕猴桃根对大鼠肝细胞CYP1A1酶的抑制作用

目的：探讨花楸猕猴桃根对肝细胞CYP1A1酶的作用机制。方法：40正常SD大鼠随机分为空白对照组和猕猴桃根提取物高、中、低剂量组（50 g/kg、25 g/kg、13 g/kg）,连续灌胃7 d,2次/d,处死大鼠后取出肝脏,通过检测N-脱甲基酶活性反映细胞CYP1A1酶活性,提取组织RNA逆转录后用RT-PCR检测CYP1A1 mRNA表达水平。结果：与空白对照组相比,花楸猕猴桃根高、中、低剂量组CYP1A1酶活性均明显受到抑制,且呈浓度依赖性（ P﹤0.05）,但各剂量组间无显著性差异;与空白对照组比较,花楸猕猴桃根高、中、低药物剂量组能显著抑制CYP1A1 mRNA的表达（ P﹤0.05）。结论：花楸猕猴桃根可下调大鼠肝细胞CYP1A1酶的活性,并抑制其mRNA表达水平,这可能是花楸猕猴桃根能够预防癌症的作用机制。     

巴戟天不同炮制品对大鼠肝药酶CYP3A的影响

目的通过研究巴戟天不同炮制品对大鼠CYP3A的影响,探索巴戟天盐制和甘草汁制的机理。方法将110只大鼠随机分为空白对照组、苯巴比妥0.1 g/kg剂量组和生/制/盐巴戟天2.0、1.0、0.5 g/kg剂量组,予相应剂量药液灌胃给药7 d。采用体外温孵法、Western blot和荧光定量PCR技术分析CYP3A酶活性、蛋白和mRNA表达。结果与空白对照组比较,除生巴戟天2.0 g/kg组外,其余各给药组的6β-羟基睾酮生成速率均明显增加（P<0.05）;在蛋白和mRNA表达上,仅有制巴戟天1.0 g/kg组CYP3A蛋白的表达、盐巴戟天1.0 g/kg组CYP3A1 mRNA的表达和生巴戟天1.0 g/kg组CYP3A2 mRNA的表达与空白对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）,其余各给药组CYP3A蛋白和mRNA表达均明显升高（P<0.05）。与生巴戟天对应剂量组比较,制巴戟天2.0 g/kg组、盐巴戟天1.0和2.0 g/kg组的6β-羟基睾酮生成速率均明显增加（P<0.05）,制巴戟天1.0 g/kg和盐巴戟天2.0 g/kg组CYP3A蛋白的表达、制巴戟天2.0 g/kg和盐巴戟天1.0 g/kg组CYP3A1 mRNA的表达、制巴戟天1.0 g/kg组CYP3A2 mRNA的表达差异具有统计学意义（P<0.05）。结论巴戟天对CYP3A有诱导作用,用甘草汁和盐炮制后诱导作用增强。     

曲马多对大鼠CYP450及其肝功能的影响

目的 考察曲马多依赖性大鼠模型肝脏CYP450酶活力及肝功能指标的变化。 方法 将30只SD大鼠分为空白组、阳性对照组和实验组,每组10只,各组分别以生理盐水、80 mg/(kg·d)苯巴比妥和60 mg/(kg·d)曲马多灌胃给药,建立曲马多依赖性大鼠模型;采用Cocktail体外孵育法结合液质联用(LC-MS)技术测定大鼠肝脏中CYP1A2、CYP2B1、CYP2C11、CYP2D2、CYP2E1、CYP3A1各同工酶酶活性;RT-qPCR技术对上述同工酶的mRNA表达水平进行检测;血生化仪分析肝功指标。 结果 ①与空白组相比,阳性对照组CYP1A2、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP3A1酶活性分别为(190.15±33.58)、(98.02±36.00)、(1 348.79±40.76)、(3 214.66±133.51)、(292.76±33.32)μg/ml,显著高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);②与空白组相比,阳性对照组CYP1A2、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP3A1 mRNA表达显著上调,分别上调(89.88±14.22)%、(95.12±16.00)%、(351.25±32.33)%、(556.85±42.88)%、(52.56±11.12)%,差异有统计学意义,CYP2D2 mRNA无明显变化。实验组CYP1A2、CYP2B1、CYP2E1、CYP2D2 mRNA表达分别上调(75.12±21.45)%、(66.32±18.14)%、(81.35±23.55)%、(382.74±33.25)%,差异有统计学意义,CYP2C11、CYP3A1 mRNA表达无明显变化。③在肝脏生化指标水平上,与空白组相比,阳性对照组和实验组ALT、AST、LDH含量均明显上升,差异有统计学意义。 结论 曲马多滥用会诱导大鼠CYP1A2、CYP2B1、CYP2E1和CYP2D2酶活性升高和肝脏损伤。      

大鼠无肝状态小肠CYP3A1酶活性增强和mRNA表达增高及芬太尼肝外代谢

目的 研究无肝期前后芬太尼血药浓度变化及其代谢酶CYP3A1在大鼠小肠活性的改变和基因表达的变化,探讨无肝期芬太尼的代谢及其形成原因.方法 分两部分实验:实验一,20只大鼠随机分成对照组和阻断肝门组(n=10),LC/MS/MS法测芬太尼血药浓度,观察无肝期前后芬太尼的代谢;实验二,30只大鼠随机分为3组(n=10):①为对照组(BI组);②阻断肝门30 min组(B2组);③阻断肝门60 min组(B3组).采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组CYP3A1 mRNA的表达,荧光比色法检测CYP3A1酶的活性.结果 无肝期组芬太尼浓度下降比对照组明显减慢(P＜0.05),但仍有下降趋势.小肠组织CYP3A1酶的活性和mRNA表达水平B2、B3组均明显高于B1组.B2组与B3组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 芬太尼主要在肝脏代谢,无肝期小肠CYP3A1mRNA表达上调,酶活性增加, 可能为无肝期芬太尼肝外代谢的机制之一.     

大鼠肝脏D-双功能蛋白活性增加与胆汁酸合成的关系

目的研究D-双功能蛋白(DBP)活性增加对胆汁酸合成的影响,从整体水平上探讨DBP在胆汁酸合成中的作用.方法将20只雄性Wistar大鼠随机分为邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)组(n=10)和对照组(n=10).分别测定两组大鼠血清甘油三酯和总胆固醇的变化,肝脏过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)、DBP和胆固醇7αt-羟化酶(CYP7A1)mRNA的变化,以及DBP活性和粪中胆汁酸含量.结果与对照组相比,DEHP组大鼠血清甘油三酯明显降低(P＜0.01),肝脏PPARα mRNA表达明显增加(P＜0.01).在DBP mRNA表达及活性升高(P＜0.01)的同时,CYP7A1 mRNA表达加强,是对照组的1.6倍(P＜0.01);粪中胆汁酸排出增加,是对照组的1.9倍(P＜0.01).DBP mRNA水平及其活性与CYP7A1 mRNA水平均呈明显的正相关(r=0.89,P＜0.01;r=0.95,P＜0.01).结论DBP mRNA表达及活性的升高,可引起CYP7A1表达及胆汁酸合成增加,DBP协同CYP7A1参与胆汁酸的生物合成.     

人细胞色素P450 2A13基因在舌癌中的表达

目的:比较分析细胞色素P4502A13(cytochrome P450 2A13,CYP2A13)分别在舌癌组织及其对应癌旁组织中的表达水平,探讨CYP2A13与舌癌的相关性。方法:采用实时定量PCR和Western blot技术分别检测26例舌癌组织及其对应癌旁组织中CYP2A13mRNA及蛋白表达。结果:CYP2A13 mRNA及蛋白在舌癌组织中表达量均低于对应的癌旁组织(P<0.05)。结论:CYP2A13在舌癌组织中表达降低,结合CYP2A13的功能,提示CYP2A13在癌组织中的表达降低可能是舌癌发生发展过程中的自我保护效应。     

稳定表达人细胞色素P450 1A2的HepG2细胞的建立及其代谢效应

目的：建立稳定表达人细胞的色素P450 1A2(CYP1A2)的HepG2细胞。方法：将所克隆的野生型CYP1A2 cDNA从重组质粒pGEM-CYP1A2中用Kpn Ⅰ／BamHⅠ双酶切，并亚克隆到哺乳动物细胞表达栽体pREP9中。再将重组质粒转化感受态大肠杆菌Top10，用氨苄青霉素抗性筛选和限制酶谱鉴定。改良的磷酸钙介导的细胞转染法将重组质粒pREP9-CYP1A2转染肝癌细胞HepG2，用RT-PCR技术对转基因细胞的CYP1A2mRNA表达作了分析，并用MTT法比较转基因细胞对黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒敏感试验。结果：与HepG2细胞相比，HepG2-CYP1A2转基因细胞表达CYP1A2 mRNA，能增强AFB1的细胞毒作用。结论：建立了稳定表达CYP1A2的转基因细胞系，可用于由CYP1A2参与的毒理学与药物代谢研究。     

苯并[a]芘对宫颈癌HeLa细胞细胞色素P450 1A1的诱导作用

目的探讨苯并[a]芘（BaP）对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞色素P450 1A1（CYP1A1）表达的影响。方法不同浓度（0、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0μmol/L）的BaP处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测BaP对HeLa细胞增殖的影响,W estern b lotting和RT-PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法检测显示,各浓度BaP组光密度（D553 nm）均较对照组（0μmol/L BaP）升高,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。W estern b lotting和RT-PCR检测结果显示,各浓度BaP组CYP1A1 mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。CYP1A1活性检测结果显示,各浓度BaP组HeLa细胞CYP1A1酶活力均高于对照组,以5.0μmol/L BaP组活力最高（P〈0.05）。结论 BaP可诱导HeLa细胞增殖,诱导HeLa细胞表达CYP1A1,并增加酶活性。 更多还原     

奥美拉唑对HepG2细胞中CYP2C19酶表达及活性的影响

目的：研究奥美拉唑（omeprazole）对HepG2细胞CYP2C19酶表达及活性的影响,间接反映奥美拉唑和氯吡格雷联合用药是否存在药物的相互作用。方法通过MTT实验筛选出奥美拉唑对HepG2细胞的无毒浓度。采用实时定量PCR （Q-PCR）及Western印迹法检测奥美拉唑（浓度分别为0、0.1、1和10 mg/L）对HepG2细胞中CYP2C19在mRNA和蛋白水平上表达的影响。奥美拉唑（0、0.1、1、10和100 mg/L）与表达人CYP450同工酶和人CYP450还原酶的昆虫细胞的微粒体共同孵育,在体外水平上通过荧光强度的变化分析对CYP2C19酶活性的影响。结果奥美拉唑对HepG2细胞无毒性的浓度范围为0～10 mg/L。在mRNA及蛋白表达水平上,奥美拉唑各浓度组均抑制CYP2C19酶的表达,且具有浓度依赖性。酶活性检测表明,当奥美拉唑的浓度达到10、100 mg/L时,荧光强度明显减弱,表明高浓度奥美拉唑抑制CYP2C19酶的表达。结论奥美拉唑能降低HepG2细胞色素氧化酶CYP2C19的表达,并抑制其活性,提示奥美拉唑与其他需经过CYP2C19酶代谢才能转化为活性代谢产物的药物（氯吡格雷）联用时,有可能会出现药效抵抗现象。     

细胞色素氧化酶P450 3A4基因联合环磷酰胺的体外抗肿瘤效应

目的 克隆细胞色素氧化酶P450 3A4（CYP3A4）基因,构建真核表达质粒并导入K562细胞进行表达,研究CYP3A4联合环磷酰胺（CPA）的体外抗肿瘤效应。方法 利用RT-PCR从人肝细胞中克隆CYP3A4基因,构建重组真核表达载体。脂质体法导入K562细胞,RT-PCR和Western blot检测CYP3A4基因在K562细胞中的表达并筛选稳定转染的细胞克隆。MTT法检测CYP3A4联合CPA对肿瘤细胞的抑制作用。结果 成功克隆CYP3A4基因并构建了真核表达质粒pcDNA3.1/myc-His A(+)-CYP3A4。RT-PCR和Western blot分别显示转基因组的CYP3A4 mRNA和蛋白质表达水平均显著高于转空载体组和对照组。MTT示转基因组IC₅₀值为1.090 16 mmol/L,明显低于转空载体组和对照组。酶诱导剂和抑制剂分别能够减低和增高转基因组IC₅₀。结论 CYP3A4体外具有联合CPA的抗肿瘤作用,这种作用能够被CYP3A4相应的诱导剂和抑制剂增强或减低。     

裸质粒与脂质体介导转染方法对大鼠平滑肌细胞CYP2J3基因表达的影响

目的比较脂质体介导法和裸质粒直接转染法导入CYP2J3基因表达的效率。方法将CYP2J3真核表达质粒导入原代培养大鼠平滑肌细胞,用半定量RT-PCR方法检测CYP2J3 mRNA表达,Western blotting方法测定CYP2J3蛋白表达,高效液相色谱法测定培养液11,12-EET含量。实验分为裸质粒转染组(2J3)、脂质体介导转染组(L2J3)和对照组,转染后24h和48h收集细胞。结果转染后24h,2个转染组CYP2J3 mRNA表达均较对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);L2J3组蛋白含量较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01),2J3组蛋白含量较L2J3组高,差异有统计学意义(P<0.05)。培养液11,12-EET含量在3组间差异无统计学意义。转染后48h2个转染组CYP2J3 mRNA表达较24h时弱,但仍较对照组高,脂质体转染组较裸质粒转染组CYP2J3 mRNA表达增强;2J3组及L2J3组蛋白含量均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01);2个转染组培养液中11,12-EET浓度较对照组高,脂质体转染组表达高于裸质粒转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论裸质粒直接转染能成功导入CYP2J3基因并表达产物。