端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用

目的本研究将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸（PS-ASODN）经lipotap脂质体转染作用于肝癌细胞系BEL-7402,观察其对肝癌细胞端粒酶活性的影响,同时检测其对癌细胞的生长抑制作用,旨在探讨PS-ASODN对肝癌的治疗价值,为临床治疗肝癌提供一定的试验数据。方法分别采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附（ELISA）法检测不同浓度PS-ASODN对bel-7402的细胞增殖、细胞凋亡和端粒酶活性的作用。结果PS-ASODN能抑制BEL-7402细胞的生长,降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论端粒酶与BEL-7402增殖活性有关,抑制端粒酶活性可能成为肝癌基因治疗的新靶点。     

反义端粒酶RNA对肺癌细胞A549抑制作用研究

目的 探讨反义人端粒酶RNA(human telomeric,RNA,hTR)对肺癌细胞A549端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用，研究以端粒酶为靶的肺癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入到逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义hTR重组病毒，感染肺癌细胞A549。处理前后采用TRAP法检测端粒酶活性，光镜观察细胞形态，DNA电泳观察凋亡情况。结果 作用后端粒酶活性和细胞增殖受到明显抑制，并出现明显的细胞凋亡。结论 反义hTR 对肺癌细胞A549端粒酶活性具有明显的抑制作用，使肺癌细胞A549生长抑制，促进细胞凋亡。     

端粒酶RNA特异性核酶抑制卵巢癌细胞端粒酶的活性

目的：研究端粒酶RNA特异性核酶对卵巢癌细胞活性的抑制作用。。方法：用脂质体法将构建好的核酶逆转录病毒载体转染至卵巢癌HO－8910细胞，以MTT比色法检测细胞的生长，应用流式细胞仪分析细胞周期细胞，观察细胞的增殖情况，同时扩增端粒重复序列，结合杂交分析，检测细胞的端粒酶活性。结果：MTT检测发现转染核酶后的细胞生长的潜伏期延长（48→72h），对数生长期减缓（4→5d），流式细胞仪结果显示其G1期比例明显增高（70．0％→80．5％，P＜0．01），S期细胞比例明显降低（19．0％→13．7％，P＜0．01），细胞增殖下降，细胞的端粒酶活性亦降低。结论端粒酶RNA特异性核酶能抑制卵巢癌细胞粒酶活性，抑制细胞增殖。     

端粒酶反义RNA技术在抑制结肠癌生长中的研究现状

反义RNA是指能够通过碱基互补与靶RNA(主要是mRNA)特异性结合,抑制靶RNA的功能,从而控制其表达的一类小分子转录物.反义RNA的发现始于原核生物,后来发现真核细胞中也存在天然反义RNA.由于能够选择性地封闭靶基因表达,而且随着近年来反义RNA技术与端粒酶研究的不断深入,构建出针对端粒酶的反义RNA抑制其活性,达到抑制肿瘤生长的目的,成为近年来的研究热点.本文对反义RNA作用原理、抗结肠癌作用中的应用等进行综述.     

反义核酸抑制肝癌细胞生长的研究进展

某些肿瘤的发生与癌基因的激活和抑癌基因的失活有关,它们都是正常细胞内存在的,其编码的产物多为信号传导系统中的某些效应分子。癌基因和抑癌基因及它们的产物在细胞正常生长和分化中发挥重要作用,他们的突变会造成信号系统的紊乱,影响细胞的正常生命过程,从而引起肿瘤。特别是某些癌基因编码生长因子或其受体,并以自分泌的形式作用于瘤细胞,促进其生长,这是某些肿瘤无限生长的分子基础。因此,许多学者企图用反义核酸抑制癌基因的表达或自分泌生长因子的分泌或封闭其受体,来研究反义核酸在肿瘤治疗中的作用。反义基因疗法是目前肿瘤基因治疗中的一个重要方面。     

端粒酶RNA的反义寡核苷酸抑制裸鼠移植瘤生长机制的初步探讨

目的 端粒酶是迄今为止发现的最为广谱的肿瘤标志物,端粒酶RNA的反义寡核苷酸能够抑制由A549细胞株构建的裸鼠抑制瘤的生长,本研究旨在讨论其机制.方法 利用笔者前期实验获得的裸鼠抑制瘤组织,用流式细胞术检测反义寡核苷酸组(antisense ohgodeoxynucleotide group,ASODN)、正义寡核苷酸组(sense ohgodeoxynucleotide group,SODN)和生理盐水组(normal saline group,NS)移植瘤组织中癌细胞的凋亡指数.结果 反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组和生理盐水组的凋亡指数分别是(23.01±2.98)%、(5.48±1.20)%和(3.11±0.93)%,反义寡核苷酸组与正义寡核苷酸组之间、反义寡核苷酸组与生理盐水组之间的差异均有显著性(P值均小于0.01),正义寡核苷酸组与生理盐水组之间的差异无显著性(P=0.056).结论 端粒酶RNA的反义寡核苷酸抑制裸鼠移植瘤生长的机制可能是通过抑制端粒酶活性后诱导癌细胞发生了凋亡.     

端粒酶正义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长的作用

目的：探讨端粒酶正义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长的作用。方法：脂质体介导端粒酶正义，反义及无义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞，MTT法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞周期。结果：端粒酶正义寡核苷酸与反义寡核苷酸一样中抑制鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞的生长，且呈剂量和时间依赖性。1.5μmol.L^-1正义寡核苷酸与CNE1细胞共培养6，12，24和48h时抑制率分别为16．3％，15．6％，20．2％和26．3％，浓度为4．5μmol.L^-1时抑制率分别为22．5％，21．5％，32．4％和39．9％；在CNE2Z细胞，浓度为1．5μmol.L^-1时抑制率分别为7．7％，25．2％，27．0％和28．8％，浓度为4．5μmol.L^-1时抑制率分别为18．1％，30．1％，32．8％和32．9％；同时流式细胞仪检测到凋亡峰，含量分别为25．3％和19．3％，无义寡核苷酸无此作用。结论：端粒酶正义寡核苷酸可抑制鼻咽癌细胞的生长。     

端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸抑制膀胱癌细胞生长的机制

目的 :探讨端粒酶逆转录酶基因 (hTERT)反义寡核苷酸 (ASODN)对T2 4膀胱癌细胞生长的影响及作用机制 .方法 :采用脂质体介导技术 ,将hTERT基因ASODN转染入T2 4膀胱癌细胞中 ,应用端粒酶PCR ELISA法检测端粒酶活性变化 ,MTT法测定细胞生长变化 ,流式细胞术观察对细胞周期影响 .结果 :hTERT基因ASODN作用T2 4膀胱癌细胞后显著地抑制膀胱癌细胞端粒酶活性 ,吸光度A值降为 0 .4 5 .癌细胞生长增殖受限 ,抑制作用具有序列特异性和剂量依赖性 ,并出现细胞凋亡现象 ,凋亡率为 14 .8%,与SODN转染组及空白对照组进行比较 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) .结论 :hTERT基因ASODN能特异性抑制T2 4膀胱癌细胞生长 ,下调端粒酶活性 ,促进细胞凋亡 .为膀胱肿瘤基因治疗的临床应用提供新靶点     

重组人生长激素对肝癌细胞株细胞周期动力学的影响

目的了解重组人生长激素(r-hGH)对肝癌细胞有无促增殖和分化作用.方法取对数生长期的人肝癌细胞株7402,以不同浓度的r-hGH和(或)顺铂体外培养24 h,用流式细胞仪测定其细胞增殖周期及细胞凋亡等指标.结果 r-hGH组与对照组比较,G0～G1期细胞数率降低(P<0.05),S期百分率增高(P<0.05),顺铂与r-hGH合用,与单纯顺铂组比较,细胞凋亡率增加(P<0.05).结论 r-hGH在体外作用人肝癌细胞株7402,能诱导细胞分化,促进细胞DNA合成,减少导致肿瘤复发的静止期细胞,提高肿瘤对时相特异性化疗药物的敏感性.与化疗药物同用,能增加肿瘤细胞的凋亡.     

Gadd45表达对肿瘤细胞HCT116生长的抑制作用及其机理

目的利用Gadd45可诱导细胞系探讨Gadd45对肿瘤细胞生长抑制作用的分子机理。方法用四环素撤除表达系统以及克隆形成实验、流式细胞检测、TUNEL法检测、Western印迹检测等方法研究Gadd45表达对肿瘤细胞HCT116生长的抑制作用及其机理。结果用四环素撤除表达系统,建立了稳定传代的Gadd45可诱导细胞系HCT116。撤除四环素,HCT116细胞的Gadd45能够被诱导高表达。实验结果证实,在我们建立的细胞系中,Gadd45诱导高表达对细胞生长的抑制率高于85％。流式细胞检测表明,Gadd45高表达有细胞G2-M期阻滞作用。同时,TUNEL法检测到Gadd45诱导的细胞凋亡,Western印迹检测观察到PARP和半胱氨蛋白水解酶3蛋白质剪切激活。结论Gadd45高表达可以抑制HCT116细胞生长,其机理主要是通过Gadd45诱导细胞G2-M期阻滞和激活细胞凋亡途径起作用。     

bcl-2核酶对SMMC7721细胞端粒酶活性的影响作用

目的 观察bcl-2核酶对SMMC-7721细胞的作用,探讨bcl-2表达水平的改变对细胞端粒酶活性的影响。方法 经脂质体介导的方法将PMTr-neo（下向bcl-2核酶真核表达载体）导入SMMC7721细胞中,细胞克隆转移扩大培养后,采用TUNEL,TRAP-PCR-ELISA,免疫组化技术结合图像分析技术检测SMMC7721/PMTr-neo细胞凋亡=细胞端粒酶活性及P16,P12的改变。结果 较对照组SMMC7721/PMTr-neo细胞Bcl-2表达水平显著下降,伴有显著细胞凋亡现象;同时端粒酶活性下降,P16,P21表达水平显著增加。结论 bcl-2核酶可促进SMMC7721细胞发生凋亡,并降低细胞端粒酶活性,提示Bcl-2表达水平的改变对细胞端粒酶活性有一定的影响。     

端粒酶反义RNA对人髓性白血病细胞系HL-60的作用

目的 探讨抗端粒酶在急性白血病治疗中的意义。方法 用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体）导入人髓性白血病细胞系HL-60中,采用TRAP法测定端粒酶活性,细胞生长动力学检测,电镜,DNA片段分析等方法观察其对HL-60细胞的端粒酶活性、细胞增殖及细胞凋亡影响。结果 端粒酶反义RNA能显抑制HL-60细胞的端粒酶活性,抑制HL-60细胞的增殖并促进其凋亡。结论 以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。     

立体定向适形放疗对肝细胞癌端粒酶活性的抑制作用

目的 探讨立体定向适形放疗对原发性肝癌的生物学效应。方法 对16例原发性肝癌病人中6例术前先行立体定向适形放射治疗，1月后再行手术切除，与同期仅行手术切除的另外10例病人进行对比分析，对手术标本进行细胞端粒酶活性检测及DNA电泳分析。结果 立体定向适形放射治疗对原发性肝癌组织有确实的杀伤效应，肿瘤细胞内已无端粒酶活性，DNA电泳显示肿瘤细胞的DNA链呈片状断裂的阶梯状图象。而未行立体定向放疗的10例病人肝癌组织中的端粒酶活性全部阳性，DNA电泳显示其连续完整。结论 立体定向适形放疗对原发性肝癌有强烈的杀伤效应，其机制为射线对肿瘤细胞的DNA造成损伤，并与其对端粒酶活性的抑制有关。     

端粒酶反义寡核苷酸对SGC-7901胃癌细胞生长的作用

目的 探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸（PS－ASODN）对胃癌细胞生长的作用。方法 脂质体介导的PS－ASODN作用于SGC－7901细胞后，MTT法计算细胞生长抑制率，流式细胞学观察细胞周期及细胞凋亡率变化。结果 终浓度为3、2及1μM的PS－ASODN对SGC－7901细胞均有抑制作用，抑制率与对照组相比差异有显著性意义（P＜0．01）；流式细胞学检测到凋亡峰，细胞阻滞于G0／G1期。对照寡核苷酸无上述作用。结论 以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸不但明显抑制胃癌细胞的增殖，而且具有促凋亡作用，对胃癌具有重要治疗价值。     

人端粒酶RNA反义寡核苷酸对顺铂诱导K562细胞凋亡的影响

目的研究人端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸(ASODN)可否增强K562细胞对顺铂的敏感性。方法采用与hTR模板区互补的硫代ASODN处理K562细胞,用端粒酶重复扩增分析-PCR-ELISA检测法观察端粒酶活性的变化;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂;Annexin V PI双染后流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果经ASODN作用后,K562细胞端粒酶活性明显下降。ASODN作用K562细胞24 h,再加入顺铂作用72 h,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带,而正义寡核苷酸(SODN)与顺铂联合作用组及单用顺铂组均未见到明显的DNA梯形条带。ASODN作用K562细胞24 h,再加入5 μmol/L 顺铂作用48、72 h的凋亡细胞百分率(18.3%和31.6%)分别与SODN联合顺铂作用组(9.6%和10.5%)、单用顺铂组(7.1%和9.4%)比较,差异有显著性(P<0.01)。结论以hTR模板区为靶点,ASODN能抑制端粒酶活性并促进顺铂诱导K562细胞的凋亡。     

端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对甲状腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨端粒酶逆转录酶(TERT)的反义寡核苷酸(ASODN)对甲状腺癌(TC)细胞凋亡的影响.方法:体外培养TC细胞,TERT ASODN和正义寡核苷酸(SODN)分别作用于体外培养的TC细胞,采用透射电镜,Hoechest荧光染色,流式细胞仪等方法分析ASODN TERT对TC细胞凋亡的影响.结果:透射电镜示ASODN可诱导TC出现典型的细胞凋亡形态,Hoechest荧光染色显示ASODN可使TC凋亡数目增多从52±16上升到178±32,流式细胞仪证实5 μmol/L ASODN处理组,SODN处理组及空白对照组的细胞凋亡率分别为10.4%,1.6%和无凋亡(P＜0.05).结论:TERT ASODN能增强TC细胞凋亡.     

姜黄素对肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

[目的]探讨姜黄素对人肝癌SMMC7721细胞株的生长凋亡作用及机制。[方法]用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞系SMMC7721增殖的影响;应用流式细胞术检测不同浓度姜黄素对SMMC7721细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。[结果]姜黄素对SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用,在6.25～50μmol/L范围内成剂量依赖性,与对照组相比差异具有显著性意义,P〈0.01。姜黄素6.25、12.5、25、50μmol/L诱导SMMC7721细胞24 h的凋亡率为6.3%、7.2%、37.3%、72.3%,线粒体膜电位下降为6.3%、13.8%、47.8%和87.9%。[结论]姜黄素可通过诱导细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞SMMC7721增殖,并与线粒体膜电位降低相关。     

人反义端粒酶RNA转染SGC-7901细胞后细胞周期调控基因表达的改变

目的：观察反义人端粒酶RNA(Human telomerase RNA components,hTR)转染的SGC－7901胃癌细胞（7901－ahTR)细胞周期调控基因表达的变化。方法 采用RT－PCR、Western印迹和免疫组化方法检测SGC－7901和7901－ahTR细胞p21、p27、p16、c-myc等基因mRNA和蛋白的表达。结果 反义hTR转染的7901细胞p21和p27表达增加,PCNA和c-myc表达下调,而cyclinD1和p16mRNA表达无明显变化。结论 抑制端粒酶活性能调节多种细胞周期调控基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖和诱导分化。     

Inhibiting effect of antisense hTRT on telomerase activity of human liver cancer cell line SMMC-7721

Objective: To induce changes in biological character of human liver cancer cell line SMMC-7721 by blocking the expression of telomerase genes hTRT and to explore its value in cancer gene therapy. Methods: The vehicle for eukaryotic expression of antisense hTRT was constructed and then transfected into SMMC-7721 cells. The effects of antisense hTRT gene on telomerase activity, cancer cell growth and malignant phenotypes were analyzed. Results: The obtained transfectants that could express antisense hTRT gene stably showed marked decrease in telomerase activity;the shortening of telomere was obvious; cells presented contact growth inhibition; in nude mice transplantation, the rate of tumor induction dramatically decreased. Conclusion : Antisense hTRT gene expression can significantly inhibit telomerase activity of cancer cells and decrease malignant phenotypes in vitro and in vivo. Therefore, as a telomerase inhibitor, antisense hTRT gene may be a new pathway for cancer therapy.