IL-18对肾小管上皮细胞Col-Ⅳ及MCP-1表达和分泌的影响

目的探讨白细胞介素-18(IL-18)对肾小管上皮细胞Col-Ⅳ及MCP-1表达和分泌影响。方法应用终浓度为0,0.1,1,10,100ng/ml的IL-18处理体外培养人类近端肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)24,48,72h,用RT-PCR法检测IL-18对HK-2细胞Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达;采用ELISA法测定细胞培养上清中Col-Ⅳ及MCP-1分泌水平。结果IL-18呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞Col-ⅣmRNA和MCP-1mRNA的表达,IL-18呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞Col-Ⅳ的分泌,呈剂量依赖性地促进HK-2细胞MCP-1分泌,但其蛋白分泌量在24h即达高峰,未见时间依赖关系。结论IL-18可能部分通过促进细胞外基质的过度分泌和炎症细胞趋化,参与促进肾间质纤维化的进程。     

中药复方别敏胶囊对呼吸道变应性小鼠内分泌免疫功能的调节作用

目的：观察中药复方别敏胶囊对呼吸道变应性模型小鼠内分泌免疫功能的影响。方法：利用卵清蛋白建立呼吸道变应性小鼠模型,采用苏木精和伊红染色观察肺组织病理变化,运用流式细胞仪检测脾淋巴细胞中Th1和Th2细胞变化,利用酶联免疫吸附测定方法检测脾淋巴细胞培养上清白细胞介素4（interleukin-4,IL-4）、白细胞介素5（interleukin-5,IL-5）、干扰素γ（interferon—gamma,INF-γ）水平及血清皮质酮浓度。 结果：别敏能够明显减轻模型小鼠肺组织的炎症反应,降低模型小鼠Tb_2细胞及其细胞因子IL-4、IL-5水平,升高Th1细胞及其细胞因子INF-γ水平,显著抑制模型小鼠内源性皮质酮水平的下降。 结论：别敏对机体内分泌免疫系统功能紊乱的调节作用可能是其治疗呼吸道变应性疾病的重要机制之一。     

IL-18对肾小管上皮细胞Col-IV及MCP-1表达和分泌的影响

目的 探讨白细胞介素18（IL-18）对肾小管上皮细胞Col-IV及MCP-1表达和分泌影响。 方法 应用终浓度为0、0.1、1、10、100ng/mL的IL-18处理体外培养人类近端肾小管上皮细胞株（HK-2细胞）24h、48h和72h。应用RT-PCR法检测IL-18对HK-2细胞Ⅳ型胶原（Col-IV）及单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA表达；采用ELISA法测定细胞培养上清中Col-IV及MCP-1分泌水平。 结果 IL-18呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞Col-IVmRNA和MCP-1 mRNA的表达，IL-18呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞Col-IV的分泌，呈剂量依赖性地促进HK-2细胞MCP-1分泌，但其蛋白分泌量在24h即达高峰，未见时间依赖关系。 结论 IL-18可能部分通过促进细胞外基质的过度分泌和炎症细胞趋化，参与促进肾间质纤维化的进程。     

HCV包膜蛋白E2高变区1模拟肽诱导小鼠树突状细胞免疫应答机制的实验研究

目的探讨7肽诱导小鼠树突状细胞免疫应答机制。方法采用＂Bulk培养法＂制备树突状细胞,经7肽免疫10d的小鼠,取脾细胞,分选CD4＋T细胞与经过7肽负载并成熟树突状细胞共孵育24h,收集上清,应用流式细胞技术检测上清细胞因子。结果细胞表面CD11c的表达率超过80%,具有典型的树突状细胞形态。实验组CD4＋T上清中TNF-α降低,IL-5、IL-2及INF-r均升高（P〈0.05）。结论利用此法能在体外培养出大量的未成熟树突状细胞,7肽能诱导以Th1细胞为主的细胞免疫。     

SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变促进白细胞黏附和迁移的观察

目的 采用已经建立的SHP-2 D61G基因敲入小鼠为研究对象,观察SHP-2激活突变是否对白细胞的黏附、侵袭及细胞因子分泌产生影响,并探讨可能的分子机制.方法 常规分离小鼠白细胞,Fibronectin黏附实验检测细胞黏附能力并用结晶紫染色定量,Transwell小室分析细胞迁移,半定量RT-PCR分析白细胞介素-2(IL-2)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达,ELISA法检测细胞培养上清中IL-2及TNF-α浓度,凝胶阻滞实验分析白细胞内NF-κB核内转移情况.结果 SHP-2 D61G/+激活突变的小鼠白细胞黏附、迁移能力较对照小鼠的白细胞明显增强;突变小鼠白细胞IL-2及TNF-α mRNA表达丰度明显增高,其培养上清中IL-2、TNF-α浓度也相应升高;突变小鼠白细胞NF-κB核内转移明显增多.结论 SHP-2激活突变后可能通过增强的NF-κB信号途径,促进白细胞黏附并侵袭;同时增强其分泌炎症因子的能力,可能介导多器官损伤.     

小鼠白细胞介素-3的制备及其检测条件的分析

从小鼠白细胞介素-3(IL-3)分泌细胞株WEHI-3获取了IL-3,同时用小鼠IL-3依赖细胞株32-D检测IL-3和滴定标本中IL-3的活性单位,并对检测条件进行了探索。结果表明,WEHI上清中含高活性IL-3,不含IL-2,其最佳收集条件是5×10~5/ml细胞浓度培养48h。32-D细胞生长依赖于IL-3。检测细胞的浓度、培养时间及同位素加入时间直接影响检测结果,最佳检测条件是(5～10)×10~5/ml细胞浓度、培养36h、终止前12h加~3H-TdR。     

白细胞介素-1对骨髓瘤细胞粘附诱导骨髓基质细胞分泌白细胞介素-6的影响

目的探讨白细胞介素-1(IL-1)对骨髓瘤细胞粘附诱导骨髓基质细胞(BMSCs)分泌白细胞介素-6(IL-6)的影响及多发性骨髓瘤(MM)患者和正常对照BMSCs分泌IL-6的差异.方法建立人BMSCs培养方法,采用MTT比色法检测BMSCs培养上清中IL-6量.结果(1)MM患者BMSCs具有异常增殖能力;(2)单纯KM3细胞培养上清中IL-6量为7±2.3u/ml;(3)单纯BMSCs培养时,MM患者BMSCs分泌IL-6量为26±7.5u/ml,高于正常对照16±4.7u/ml(P＜0.01);(4)KM3细胞与MM患者或正常对照BMSCs共培养24小时后,其培养上清中IL-6量分别为49±181u/ml和27±6.9u/ml,均高于单纯BMSCs培养上清中IL-6量(P＜0.01);(5)将BMSCs经1%多聚甲醛固定,再与KM3细胞共培养24小时后,其培养上清中IL-6量与单纯KM3细胞培养上清比较差异无显著性;(6)单纯BMSCs培养体系中加入IL-1,IL-6分泌量差异无显著性;(7)在KM3细胞与BMSCs共培养体系中加入IL-1,IL-6分泌量达74±20.5u/ml(MM组)和46±10.5u/ml(正常对照组),均高于单纯KM3与BMSCs共培养(P＜0.01).结论MM患者BMSCs具有异常增殖和分泌IL-6能力,IL-1通过骨髓瘤细胞介导可促进BMSCs分泌IL-6.     

约氏疟原虫感染早期易感和抵抗小鼠树突状细胞细胞因子的分泌特点

目的 探讨在致死型约氏疟原虫(P.y 17XL)感染早期,树突状细胞(DC)调控Th1细胞免疫应答的相关机制.方法 用Py 17XL感染BALB/c和DBM2小鼠,计数红细胞感染率;感染前和感染后3和5 d制备脾细胞悬液,磁珠分选、纯化DCs并体外培养;ELISA方法检测DCs培养上清中IL-12p40、IL-10和TGF-β1的水平.结果 DBM2小鼠DCs培养上清中IL-12p40的水平在感染后3～5 d明显升高,与感染前相比具有统计学意义;而BALB/c小鼠DCs培养上清中IL-12p40的水平始终未见明显升高;两种小鼠DCs培养上清中IL-10和TGF-β1水平在感染后3～5 d均明显升高,但BALB/c小鼠DCs培养上清中IL-10和TGF-β1水平明显高于DBA/2小鼠.结论 P.y 17XL感染早期,BALB/c和DBA/2小鼠在DCs细胞因子的分泌模式上存在显著差异.     

低氧条件下气道上皮细胞增加巨噬细胞趋化和炎症因子的分泌

目的：探讨低氧条件下气道上皮细胞对巨噬细胞趋化和炎症因子表达的影响。方法：将0,100,200, 400,800 μmol/L氯化钴(CoCl2)处理或转染缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α siRNA的人支气管上皮细胞 HBE与人单核细胞THP-1诱导分化的M1或M2巨噬细胞共培养,采用Transwell小室趋化实验记录巨噬细胞趋化数量, ELISA法检测巨噬细胞上清中TNF-α,IFN-γ,IL-4,IL-13,IL-10浓度,RT-qPCR检测HBE细胞HIF-1α和巨噬细胞Cav-1 mRNA的表达。结果：共培养8和12 h,HBE细胞诱导巨噬细胞趋化,并且呈时间和CoCl2浓度依赖性;转染HIF-1α siRNA的HBE相对于未转染组对共培养的M1或M2巨噬细胞趋化诱导明显减弱(P<0.01),在相同培养条件下,M2巨噬 细胞趋化性高于M1巨噬细细胞。巨噬细胞上清中TNF-α,IFN-γ,IL-4,IL-13,IL-10水平呈时间和CoCl2浓度依赖性升 高,共培养8和12 h,TNF-α和IFN-γ浓度增加较IL-4,IL-13,IL-10浓度增加更明显;共培养24 h,IL-4,IL-13,IL-10浓 度增加程度高于TNF-α和IFN-γ。与转染HIF-1α siRNA的HBE共培养的巨噬细胞上清中各细胞因子水平较未转染组均明 显降低(P<0.05或0.01),其中TNF-α,IFN-γ降低更明显。共培养8和12 h,HBE细胞HIF-1α和巨噬细胞Cav-1 mRNA表达 均呈CoCl2浓度依赖性增加;转染HIF-1α siRNA后,HBE细胞HIF-1α和巨噬细胞Cav-1 mRNA表达量均明显减少。结论： 低氧环境下气道上皮细胞可增加巨噬细胞趋化因子和致炎因子的表达,HIF-1α和Cav-1可能是这些过程的重要介质。     

IL-37b通过抑制树突状细胞相关的免疫应答缓解感染性休克

目的表达IL-37b重组蛋白,研究其在调节机体免疫应答方面的作用机制。方法构建原核表达载体p ET28/IL-37b,诱导表达的IL-37b重组蛋白由Ni~(2+)-NTA凝胶进行纯化。将IL-37b作用于C57BL/6 J小鼠,注射LPS诱导感染性休克,检测小鼠血清中IL-1β、IL-6、IFN-γ的表达水平。分离并培养小鼠树突状细胞,用IL-37b处理,经LPS诱导活化,检测细胞表面CD40、CD80、MHCII等标志物分子表达情况,以及培养上清中IL-1β、IL-10、IL-12、TNF-α的表达水平。分离小鼠CD4~+T细胞,检测IL-37b对LPS诱导的T细胞培养上清中IFN-γ、TNF-α、IL-10的抑制作用。结果IL-37b能够降低感染性休克的小鼠血清中促炎性细胞因子的表达;并抑制小鼠树突状细胞共刺激分子和促炎性细胞因子的表达,以及CD4~+T细胞表达促炎性细胞因子。结论纯化的IL-37b具备生物学活性,能够通过抑制树突状细胞活化及相关的T细胞免疫应答缓解机体感染性休克。