刺五加皂苷对体外培养大鼠脊髓运动神经元缺氧损伤的保护作用

目的:观察刺五加皂苷(acanthopanax senticosus saponins, ASS)对脊髓运动神经元缺氧损伤有无保护作用,并探讨其可能机制.方法:对胚鼠运动神经元进行原代分离培养,免疫组化鉴定后建立缺氧诱导的神经元凋亡模型.取运动神经元培养在24孔板中,每组10孔,分为4组:对照组,无缺氧损伤;缺氧损伤组;ASS保护组,缺氧前24 h加入50 μg/ml的ASS;神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)保护组,缺氧前24 h加入0.1 μg/ml的GDNF.倒置显微镜及电镜下观察细胞形态学变化;MTT法测定神经元细胞活性;检测细胞外液LDH释放量来观察ASS对神经元细胞膜稳定性的影响.提取细胞匀浆液,Western印迹法检测分析ASS对缺氧的运动神经元HIF-1α表达的影响.结果:形态学观察显示ASS、GDNF保护组神经元缺氧损伤较缺氧损伤组明显减轻.ASS保护组神经元的细胞活性(0.21±0.028)比缺氧损伤组(0.15±0.012)高(P<0.05),而LDH的释放量(28.6±1.309)比缺氧损伤组(40.7± 1.885)低(P<0.01);缺氧损伤组的神经元HIF-1α的相对表达量(0.72±0.027)比对照组(0.16±0.003)高(P<0.01),但ASS保护组HIF-1α的表达(1.15±0.016)最高(P<0.01).ASS对大鼠脊髓运动神经元缺氧损伤的保护作用与GDNF相仿.结论:ASS可以提高体外缺氧损伤的运动神经元的细胞活性,对细胞的缺氧损伤有明显的保护作用,其保护作用的发挥,可能与增强细胞膜的稳定性及提高细胞HIF-1α的表达有关.     

硒对大鼠肝细胞DNA损伤的体内体外研究

应用单细胞凝胶电泳研究了一定剂量的亚硒酸钠对离体和在体大鼠肝细胞 DNA损伤的作用。结果表明 :在2 .185、 4.375、 8.75 0、 17.5 0 0、 35 .0 0 0 μmol/ L 的剂量条件下 ,除 2 .185 μmol/ L 的剂量外 ,其余剂量的亚硒酸钠均可引起离体大鼠肝细胞 DNA损伤。 5、 10、 2 0 μmol/ kg的亚硒酸钠也可引起在体大鼠肝细胞 DNA损伤。亚硒酸钠引起的离体和在体大鼠肝细胞 DNA损伤均存在明显的剂量 -反应关系。研究结果提示 ,一定剂量的亚硒酸钠能引起离体和在体大鼠肝细胞 DNA损伤     

硒对大鼠肝细胞DNA损伤的体内体外研究

应用单细胞凝胶电泳研究了一定剂量的亚硒酸钠对离体和在体大鼠肝细胞ＤＮＡ损伤的作用。结果表明：在２．１８５、４．３７５、８．７５０、１７．５００、３５．０００μｍｏｌ／Ｌ的剂量条件和２．１８５μｍｏｌ／Ｌ的剂量外,其余剂业硒酸钠均可以引起离体大鼠肝细胞ＤＮＡ损伤。５、１０、２０μｍｏｌ／ｋｇ的亚硒酸钠也可引起在体大鼠肝ＤＮＡ损伤。亚硒酸钠引起的离体和大体大鼠肝细胞ＤＮＡ损伤均存在明显的剂量－反应关系     

体外大鼠肝细胞坏死性损伤模型的建立

目的　建立体外肝细胞坏死性损伤模型,为进一步研究药物对体外肝细胞损伤的保护作用奠定基础。方法　采用Ⅳ型胶原酶灌流法分离大鼠肝实质细胞并进行体外培养,利用四氯化碳(CCl4)和过氧化氢(H2O2)体外诱导肝细胞坏死性损伤,检测ALT、AST、MDA、GSHpx等指标和采用MTT比色法。结果　CCl4体外诱导肝细胞损伤的最适损伤浓度和损伤时间为:8mmol·L-1,6h;H2O2体外诱导肝细胞坏死性损伤的最适损伤浓度和损伤时间为06mmol·L-1,1h。结论　利用最适损伤浓度的CCl4和H2O2分别与大鼠肝细胞共培养最适损伤时间,可建立两种理想的体外肝细胞坏死性损伤模型。     

内毒素对体外培养肝细胞脂质过氧化损伤的作用

本研究通过体外实验,探讨了内毒素对肝细胞脂质过氧化损伤的作用以及SOD的保护效应。用分离的大鼠肝细胞与内毒素(500ng/ml)共同孵育,6h肝细胞MDA、LDH和SOD水平均显著上升(P<0.05～0.01),而且LDH和SOD升高早于MDA;预先将PMN经内毒素处理后,再与肝细胞共孵,激活的PMN能显著损伤肝细胞,引起肝细胞MDA升高和LDH释放增加(P<0.01),SOD活性下降(P<0.05)。给予SOD治疗能部分抑制PMN对肝细胞的损伤作用。上述结果提示,内毒素对PMN引起肝细胞的损伤具有增强作用,内毒素亦可直接诱导肝细胞脂质过氧化损伤,但其机制尚待进一步阐明。     

成年大鼠体外培养肝细胞方法的研究

肝细胞培养作为观察药物是否对肝有损害作用的体外实验工具,多年来一直被广泛采用,它比整体运动用药量少,易排除体内多种因素的影响。原代培养大鼠肝细胞是一种较好的体外研究方法,以它完整的实验体系而便于作专项机理研究。我们通过多次实验探索,现察比较后选择最佳方法来获得高活率、高产率及良好生长代谢活力的肝细胞。 1 材料与方法 1.1 动物：wistar大鼠,雄性,体重100～150 g,饥饿24 h。 1.2 试剂 1.2.1 肝灌注用药 D-Hanks溶液。 胶原酶溶液：10 mg IV型胶原酶(sigma分装)溶333 mL含10%胎牛血清(EBS)的DMEM-F12培养液中,4℃冰箱保存,次日滤菌,新鲜使用。 1.2.2 培养用药 DMEM-F12培养液(购自Gibco公司)：用100 mL3蒸水溶解滤菌使用。 胎牛血清：购自天津市血液研究所。     

肝细胞生长因子对大鼠急性胃粘膜损伤预防作用的研究

为了探讨内源性肝细胞生长因子（ＨＧＦ）对大鼠急性胃粘膜损伤（ＡＧＭＬ）的预防作用,以粘膜电位（ＰＤ）、ｐＨ损伤指数（ＬＩ）及组织学观察评价ＡＧＭＬ状况。结果显示,大鼠ＡＧＭＬ前静注适量肝素可以使胃粘膜中ＨＧＦ含量增加,且ＨＧＦ含量增加的大鼠胃ＰＤ、ｐＨ较对照组增高,ＬＩ降低,组织损伤改善。研究表明,大鼠ＡＧＭＬ前以肝素诱生的内源性ＨＧＦ可以预防随后的ＡＧＭＬ。     

大鼠损伤脊髓提取液对新生大鼠DRNGs体外培养的影响

目的：探讨损伤脊髓提取液对新生大鼠DRGNs（Dorsal Root Ganglion neuron,背根节神经元）轴突生长和延长的影响。方法：将正常、假手术及全瘫脊髓提取液同新生大鼠DRGsN共同培养,观察神经轴突平均长度和轴突远端微管（TubulinβIII）荧光表达。结果：全瘫组DRGNs平均轴突长度明显缩短,生长锥塌陷,轴突远端和生长锥的TubulinβIII表达明显减弱,与空白组比较有显著统计学差异;假手术组DRGNs平均轴突长度比空白组略缩短,但生长锥无塌陷,轴突远端和生长锥TubulinβIII表达强;正常组DRGNs平均轴突长度与空白组比较无差异,轴突远端TubulinβIII表达明显。结论：完全瘫痪脊髓提取液能明显抑制DRGNs轴突生长,导致生长锥塌陷;假手术脊髓提取液能轻度抑制轴突生长,但生长锥无明显塌陷;正常脊髓提取液不影响轴突生长。     

蒲公英对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

[目的 ]研究蒲公英水提物对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用 .[方法 ]采用四氯化碳诱导大鼠肝细胞损伤模型 ,观察蒲公英对肝细胞的形态结构和琥珀酸脱氢酶、酸性磷酸酶活性及糖原变化的影响 .[结果 ]蒲公英能减轻模型大鼠肝细胞病理变化 ,增加琥珀酸脱氢酶活性和糖原含量 ,降低酸性磷酸酶活性 .[结论 ]蒲公英对四氯化碳造成的原代培养大鼠肝细胞损伤具有保护作用 .     

绞股蓝总皂甙对原代培养大鼠肝细胞四氯化碳损伤的影响

采用四氯化碳（ＣＣｌ４）制成原代培养大鼠肝细胞损伤模型，观察了绞股蓝总皂甙（ＧＰＳ）对肝细胞损伤的保护作用。结果表明，预先用ＧＰＳ处理肝细胞１ｈｒ，可明显减轻ＣＣｌ４引起的肝细胞ＤＮＡ合成速率降低，减少肝细胞ＡＬＴ逸出，抑制增减上清液中ＭＤＡ含量的升高和ＳＯＤ／ＭＤＡ比值的缩小，并与ＧＰＳ浓度呈依赖关系。提示ＧＰＳ能减轻ＣＣＬ４能减轻ＣＣｌ４对离体培养的大鼠肝细胞损伤，保护肝细胞ＤＮＡ合成，其作用     

缺氧对体外培养大鼠耳蜗毛细胞的损伤作用

目的: 建立耳蜗器官体外培养模型, 观察缺氧对体外培养耳蜗内毛细胞 （IHC）及外毛细胞（OHC）的影响。方法: 分离生后3 d Wistar大鼠耳蜗基底膜, 平铺在含有DMEM培养液的培养基内 （每盘6条基底膜）,2盘为1组,随机分为8组,放置在37℃、5％CO₂培养箱培养,其中7组作为实验组,按不同时间段进行缺氧（37℃、90％N₂、5％CO₂、5％O₂） 培养;1组作为对照组放置在37℃、5％CO₂培养箱。采用Phalloidin 荧光标记观察耳蜗中IHC及OHC形态变化并计数单位面积（24 mm×36 mm）细胞数即细胞密度。结果：在缺氧早期（0.5 h）IHC形态及密度无明显变化;1 h细胞轻度肿胀,体积增大,单位面积细胞数减少,细胞密度与对照组比较差异无显著性 （P>0.05）;2 h时 IHC散在缺失, 细胞密度与对照组比较差异有显著性（P<0.01）; 6 h时 IHC缺失增多,并可见毛细胞坏死后遗留的“空神经杯”现象,细胞密度与对照组比差异有显著性（P<0.01）; 随缺氧时间延长, IHC缺失逐渐加重。OHC在缺氧早期（0.5 h、1 h）形态学改变不明显, 2 h偶见细胞缺失, 随缺氧时间延长, 6 h后出现不同程度的排列拥挤、紊乱及缺失, 单位面积细胞数目减少, 细胞密度与对照组比较差异有显著性（P<0.01）, 以48 h最严重。结论: 缺氧造成体外培养耳蜗毛细胞缺失, 以IHC为重。     

丹参素对原代培养大鼠肝细胞硫代乙酰胺损伤的影响

目的：观察丹参素对大鼠肝细胞硫代乙酰胺（ＴＡＡ）损伤的影响。方法：以体外原代培养大鼠肝细胞为模型，通过检测培养上清液中ＬＤＨ逸出量和四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）显色法了解肝细胞的存活及增殖情况，同时检测细胞内、外ＳＯＤ含量。结果：丹参麦在一定范围内呈剂量依赖性地刺激肝细胞增殖，而且能阻止ＴＡＡ引起的体外培养大鼠肝细胞ＬＤＨ逸了的增加、增生指数的下降以及细胞内、外ＳＯＤ活性的降低。丹参素对ＴＡＡ肝损伤和     

丹参成分对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的作用

目的：研究丹参成分对四氯化碳（CCl4）损伤原代培养大鼠肝细胞的作用。方法：CCl4致体外原代培养大鼠肝细胞损伤模型，观察肝细胞的ALT活性及超微结构。结果：丹参的乙酸乙酯萃取物（EAE）和正丁醇萃取物（nBE）均可使10mmol／LCCl4损伤的原代培养大鼠肝细胞培养液中的ALT活性显著降低。从乙酸乙酯萃取物中分离出A、B、C、D4种组分；在1．0mg／ml时C、D组分有显著护肝作用。含量较多的D组分经小鼠CC14肝损整体模型验证，亦有显著的护肝作用。D组分经鉴定为丹参的酚酸性成分。结论：丹参的酚酸性成分为主要护肝部分。     

丹参成分对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的作用

目的：研究丹参成分对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的作用。方法：ＣＣｌ４致体外原代培养大鼠肝细胞损伤模型，观察肝细胞的ＡＬＴ活性及超微结构。     

丹参素对原代培养大鼠肝细胞硫代乙酰胺损伤的影响

目的：观察丹参素对大鼠肝细胞硫代乙酰胺（ＴＡＡ）损伤的影响。方法：以体外原代培养大鼠肝细胞为模型，通过检测培养上清液中ＬＤＨ逸出量和四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）显色法了解肝细胞的存活及增殖情况，同时检测细胞内、外ＳＯＤ含量。结果：丹参素在一定范围内呈剂量依赖性地刺激肝细胞增殖，而且能阻止ＴＡＡ引起的体外培养大鼠肝细胞ＬＤＨ逸出的增加、增生指数的下降以及细胞内、外ＳＯＤ活性的降低。丹参素对ＴＡＡ引起的肝细胞损伤的保护作用高于市场销售的乳猪促肝细胞生长素（ＰＨＧＦ）。结论：丹参素具有抗ＴＡＡ肝损伤和刺激损伤后肝细胞再生的作用     

绞股蓝总皂甙对原代培养大鼠肝细胞四氯化碳损伤的影响

采用四氯化碳（ＣＣｌ_４）制成原代培养大鼠肝细胞损伤模型，观察了绞股蓝总皂甙（ＧＰＳ）对肝细胞损伤的保护作用。结果表明，预先用ＧＰＳ处理肝细胞１ｈｒ，可明显减轻ＣＣｌ_４引起的肝细胞ＤＮＡ合成速率降低，减少肝细胞ＡＬＴ逸出，抑制培养上清液中ＭＤＡ含量的升高和ＳＯＤ／ＭＤＡ比值的缩小，并与ＧＰＳ浓度呈依赖关系。提示ＧＰＳ能减轻ＣＣＬ_４能减轻ＣＣｌ_４对离体培养的大鼠肝细胞损伤，保护肝细胞ＤＮＡ合成，其作用机理与抗脂质过氧化有关。     

肝得健对体外培养大鼠肝细胞胶原合成的影响

利用培养的正常及损伤大鼠肝细胞 ,观察肝得健对胶原合成的影响。结果表明 ,肝得健不能抑制胶原合成 ,肝得健在动物实验及临床中改善肝脏病理变化、减轻肝纤维化沉积的机制可能与其护肝作用有关     

肝得健对体外培养大鼠肝细胞胶原合成的影响

利用培养的正常及损伤大鼠肝细胞，观察肝得健对胶原合成的影响，结果表明，肝得健不能抑制胶原合成，肝得健在动物实验及临床中改善肝脏病理变化、减轻肝纤维化沉积的机制可能与其护肝作用有关。