阿魏酸钠干预对Rho/Rock信号通路的影响及其对肝脏的保护作用

［摘 要］ 目的：探讨阿魏酸钠(SF)干预后对Rho/Rock信号通路相关蛋白表达及肝脏的影响,阐明其对脏器的保护作用。方法：雄性Wistar大鼠20只,分为正常对照组、模型组、阳性药组及SF干预组。除正常对照组外,其余组大鼠注射盐酸异丙肾上腺素（Iso）15 mg/kg诱发大鼠心肌纤维化模型;稳定2 d后,除模型组外,其余2组给予SF和贝那普利。利用Masson染色分析给予SF后心肌胶原的含量变化;RT-PCR法分析Rho A和Rock mRNA表达;采用免疫组织化学染色分析心肌Rock蛋白表达;拉曼光谱分析肝脏的损伤。结果：与正常对照组比较,注射Iso后3周,Rho A和Rock mRNA表达即有所增加 (P<0.01);给予SF和贝那普利后,Rho A和Rock基因和蛋白表达水平较模型组明显降低(P<0.01);拉曼光谱分析结果显示,给予SF后大鼠肝脏组织的峰位较模型组向右移动1个单位,趋近正常对照组峰位。结论：SF可能通过阻断Rho/Rock信号通路进而起到抑制纤维化的作用,同时又起到肝脏保护作用。     

Rho蛋白信号通路和神经元树突重塑

神经元树突重塑是神经元正常生长发育关键环节.实验证明Rho GTPase信号通路在神经元树突重塑过程中发挥着重要的作用.Rho GTPase是神经元细胞骨架形成的关键性调节因子,作为信号转导通路中的信号转换器和分子开关,它可以作用于细胞骨架或其靶蛋白,影响肌动蛋白的聚合与肌球蛋白的激活,从而影响神经元树突重塑.本文将重...     

Rho /Rock信号通路在原发性高血压肾纤维化中作用

目的探讨Rho／Rock信号通路在原发性高血压肾纤维化中的作用。方法选择31例原发性高血压病人,依据24h尿微量清蛋白排泄率（UAER）分为正常清蛋白尿组（A组）11例、微量清蛋白尿组（B组）10例和尿毒症组（C组）10例,选取正常体检者10例作为对照组,用酶联免疫吸附法（ELISA法）测定各组血清转化生长因子β（TGF-β）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1（ROCK-1）水平,分析TGF-β、MMP-9、ROCK-1在各组间的表达规律及三者之间的相关性。结果与对照组比较,A、B、C组TGF-β、MMP-9、ROCK-1血清浓度均显著升高（F=14．498～126．037,q=3．222～20．617;P〈0．05、0．01）;B、C组TGF-13及ROCK-1血清浓度较A组显著升高（q=4．797～17．636,P〈0．01）,B、C组间TGF-β、ROCK-1血清浓度差异无显著（q=0．612、1.175,P〉0．05）;B组MMP-9血清浓度较A、C组显著增高（q=4．799、5．959,P〈0．01）,而A、C组之间差异无显著性（q=1．299,P〉0．05）。血清TGF-β与MMP-9、TGF-β与ROCK-1、MMP-9与ROCK-1浓度之间均呈正相关（r=0．381～0．652,P〈0．05）。结论Rho／Rock信号通路可能参与了高血压肾纤维化过程。     

透骨消痛胶囊对TNF-α诱导关节软骨细胞Rho/Rock信号通路的影响

目的观察透骨消痛胶囊对TNF-α诱导体外培养大鼠关节软骨细胞Rho/Rock信号通路的影响,探讨其防治骨性关节炎的作用机制。方法采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,选取第3代软骨细胞进行实验,20 ng/mL的TNF-α诱导体外培养软骨细胞的凋亡,诱导成功后,给予透骨消痛胶囊(500、100、20μg/mL)孵育24 h后,用流式细胞仪检测软骨细胞Annexin-Ⅴ观察细胞凋亡情况,采用RT-PCR和Western Blot测定各组软骨细胞RhoA、Rock1和PKN等mRNA和蛋白表达。结果 TNF-α组细胞凋亡明显增多,透骨消痛胶囊各组能减少软骨细胞的凋亡,TNF-α组的RhoA、Rock1、PKN、MKK3、ERK6、Cbfα1等mRNA和蛋白表达较空白组上升,而透骨消痛胶囊各组对RhoA/Rock信号传导通路关键信号分子RhoA、Rock1、PKN及Cbfα1等的mRNA和蛋白的表达有抑制,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论透骨消痛胶囊可减轻TNF-α所致的软骨细胞凋亡,其机制可能与抑制软骨细胞的RhoA/Rock信号通路有关。     

Rho/ROCK信号通路与青光眼

青光眼是眼科临床中常见的致盲性眼病之一。目前的治疗方法主要是通过药物或手术降低眼压,对视网膜神经节细胞及其轴突损伤的保护也越来越引起人们的重视。随着对相关卷曲螺旋形成蛋白激酶通路(Rho/ROCK)生物学功能的深入研究,目前发现抑制Rho/ROCK通路可以增加小梁网途径的房水引流,降低眼内压,增加眼部血液供应,促进神经节细胞的存活。本文就Rho/ROCK通路与青光眼关系的研究进展进行综述。     

Rho／Rho激酶在COPD大鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的探讨Rho／Rho激酶信号通路在慢性阻塞性肺疾病大鼠气道中的表达及其对气道的影响。方法清洁级相同重量级Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组、COPD组、Y-27632干预组,每组20只。分析各组大鼠的支气管壁厚度（War）和平滑肌厚度（Warn）,以及RhoA,ROCKlImRNA的表达。结果与对照组相比,COPD组大鼠RhoA,ROCK1ImRNA表达明显增高,wat、wam也明显增加（P〈0．05）;与C（）PD组相比,Y-27632干预组大鼠RhoA,ROCKIImRNA的表达明显降低,Wat、wam也明显降低（P〈0．05）。结论COPD组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA表达明显增高;应用ROCKⅡ特异性拈抗剂Y一27632能够明显控制RhoA,ROCKⅡmRNA的表达,从而抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠的气管壁增厚和平滑肌增殖。     

Rho/ROCK激酶信号通路在大鼠宫腔粘连中的作用

目的 复制宫腔粘连大鼠模型,探讨Rho/ROCK信号通路相关蛋白的表达及其在宫腔粘连中的作用机制。方法 SD大鼠宫腔注入0.5?ml 95%乙醇,复制宫腔粘连模型;对照组注入等量生理盐水。术后15?d观察两组子宫内膜形态学变化,免疫组织化学法检测子宫内膜角蛋白、波形蛋白、Rho（RhoA、RhoB、RhoC）、Rho激酶（ROCKI、ROCKII）及TGF-β1表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠子宫内膜厚度变 薄（P?<0.05）;两组腺体数目比较,模型组腺体数目减少（P?<0.05）;两组角蛋白比较,模型组表达下降（P?<0.05）;两组波形蛋白比较,差异无统计学意义（P?>0.05）;两组大鼠子宫内膜RhoA、RhoB、RhoC、ROCKI、ROCKII的表达比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,模型组均高于对照组;模型组大鼠子宫内膜TGF-β1的表达高于对照组（P?<0.05）。结论 注射无水乙醇可复制稳定的大鼠宫腔粘连动物模型,其Rho/ROCK信号通路处于激活状态,TGF-β1通过激活Rho/ROCK信号通路促使子宫内膜损伤后组织纤维化,参与宫腔粘连的发生、发展。     

Rho／Rock 信号通路在 TGF －β1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞表型转化中的作用及可能机制

目的：探讨Rho／Rock信号通路在TGF－β1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞（ ISMC）表型转化中的作用及可能机制。方法 ISMC随机分为两组：空白对照组和TGF－β1刺激组,以不同浓度（1、5、10、20、50 ng／mL） TGF－β1刺激细胞24 h,用荧光实时定量PCR法检测转凝蛋白（ SM22α）和骨桥蛋白（ OPN） mRNA的表达;再以上述得出的最佳TGF－β1浓度刺激细胞,在不同时间（6、12、24、48 h）收集细胞,采用同样方法检测SM22α、OPN mRNA的表达水平;经无血清DMEM高糖培养基静止培养24 h后,随机分为以下各组：空白对照组、TGF－β1（10 ng／mL）刺激组及TGF－β1（10 ng／mL）＋法舒地尔（Fasudil）（10、30、50μmol／L）组,分别采用FQ－RT－PCR法检测SM22α、OPN、RhoA、Rock－1 mRNA的表达;Western blot法检测SM22α、OPN蛋白表达水平;根据实验结果用透射电镜观察各组细胞超微结构的相应变化。结果10 ng／mL TGF－β1刺激大鼠ISMCs 24 h达顶峰。 TGF－β1＋Fasudil组SM22αmRNA和蛋白表达水平较TGF－β1刺激组高（P＜0．01）,且在Fasudil浓度为30μmol／L时达到高峰,随后下降;TGF－β1＋Fasudil组OPN mRNA表达水平较TGF－β1刺激组低,呈浓度依赖性,至30μmol／L达最低（ P＜0．05）,后又呈上升趋势。 Western blot结果显示TGF－β1＋Fasudil组的OPN蛋白表达水平较TGF－β1刺激组低,至Fasudil浓度为30μmol／L达最低（ P＜0．05）。同时FQ－RT－PCR结果显示TGF－β1刺激组的RhoA和Rock－1 mRNA表达水平较空白对照组高（P＜0．01）,在Fasudil浓度为30μmol／L时TGF－β1＋Fasudil组的RhoA和Rock－1mRNA表达水平较TGF－β1刺激组低（ P＜0．05）。电镜下观察各组细胞显示,空白对照组（×20000） ISMC高尔基体肥大,线粒体及粗面内质网正常,10 ng／mL TGF－β1刺激后细胞内线粒体增多,在上述基础上加入30μmol／L Fasudil后电镜下观察细胞又回到正常成熟结构状态。结论10 ng／mL TGF－β1刺激大鼠ISMC 24 h可成功刺激其表型转化,且该过程可能通过Rho／Rock信号通路实现;Rho／Rock信号通路抑制剂Fasudil可增加TGF－β1刺激的SM22α的表达,下调OPN的表达水平,抑制大鼠ISMCs表型转化。     

Rho／Rho激酶在哮喘小鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的研究Rho／Rho激酶（ROCK）信号通路在哮喘小鼠气道中的表达及其对气道重塑的作用。方法清洁级BALB／c雄性小鼠39只,随机分为对照组、哮喘组、Y-27632干预组、地塞米松干预组,每组10只（其中对照组9只）。建立哮喘小鼠模型,并应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632进行干预,光镜观察肺组织结构,Image—proplus图像分析软件测量支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam）,免疫组化法测定肺组织ROCKⅡ蛋白含量,RT—PCR法测定RhoA、ROCKⅡ mRNA含量。结果（1）哮喘组小鼠RhoA、ROCKⅡ表达明显增高,应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达。（2）Y-27632干预组小鼠Wat和Wam均明显低于哮喘组小鼠。结论哮喘小鼠肺组织RhoA及ROCKⅡ表达增多,ROCKll受体拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达,明显抑制哮喘小鼠Wat和Wam。     

基于Rho/Rho-kinase信号通路探讨丙泊酚减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的效果

目的 基于Rho/Rho-kinase信号通路探讨丙泊酚减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的效果.方法 SD大鼠100只分成:对照组、模型组、丙泊酚低、中、高剂量组(20.0、40.0、80.0 mg/kg),模型组、丙泊酚低、中、高剂量组建立脑缺血再灌注损伤模型,建模成功后,丙泊酚低、中、高剂量组给予相应剂量丙泊酚灌胃,对照组...     

阻断Rho/ROCK信号传导通路对大鼠脊髓损伤的治疗效果

目的：探究阻断Rho/ROCK信号传导通路对大鼠脊髓损伤的治疗效果。方法选取大鼠脊髓损伤动物模型150只,分为假手术组、实验组和对照组,各50只。假手术组进行椎板切除术;对照组进行脊髓横断损伤,并对其腹腔注射生理盐水;实验组进行脊髓横断手术,给予腹腔注射Fasudil。结果实验组的RhoA mRNA明显降低。同时还能见到部分纤维以及大量的NF阳性纤维穿过脊髓横断部位,并沿其尾端伸长。结论阻断Rho/ROCK信号传导通路对轴突再生、传导功能恢复以及损伤脊髓运动具有显著的促进作用。     

罗布麻提取物对AngⅡ诱导的大鼠心肌纤维化中ERK通路的影响

目的:探讨罗布麻提取物对血管紧张素Ⅱ (Ang Ⅱ)诱导的大鼠心肌纤维化模型中ERK通路的影响,并初步探索罗布麻提取物抗心肌纤维化机制。 方法： 采用1×10－6 mol•L^-1 Ang Ⅱ诱导大鼠心肌成纤维细胞复制心肌纤维化模型,细胞分为正常对照组、AngⅡ组、缬沙坦治疗组1×10-6 mg•L^-1)及罗布麻提取物高剂量组（0.8 mol•L^-1）、中剂量组（0.4 mol•L^－1）、低剂量组（0.2 mol•L^－1）。通过对羟脯氨酸及Ⅰ、Ⅲ型胶原（ColⅠ、ColⅢ）的检测鉴定模型的成功复制,RT-PCR及 Western blotting方法检测raf、ERK、c-fos mRNA 及ERK蛋白在各组细胞中的表达量。 结果： 成功建立Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化模型。与AngⅡ组比较,不同剂量罗布麻提取物组羟脯氨酸及ColⅠ、ColⅢ的表达量均下调（P<0.05或P<0.01）;RT-PCR及 Western blotting检测发现,罗布麻提取物不同剂量组的raf、ERK、c-fos mRNA 及ERK蛋白表达量较AngⅡ组降低（P<0.05或P<0.01）。结论： ERK信号通路在罗布麻提取物调控心肌纤维化发生和发展的过程中发挥重要作用。     

Rho/ROCK信号转导通路在哮喘大鼠气道重塑中的作用及干预

目的 观察法舒地尔对慢性哮喘大鼠镜下气道重塑改变及肺组织RhoA和ROCKⅠ表达的影响,探讨Rho/ROCK信号转导通路在哮喘气道重塑中的作用。方法 雄性SD大鼠分为3组,建立慢性哮喘大鼠型,统计支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞计数,观察肺组织病理及超微结构的变化,测定肺内支气管壁厚度（WTt）和支气管平滑肌厚度（WTm）,免疫组化法和real-timePCR法分别检测肺组织中RhoA及ROCKⅠ表达情况。结果（1）哮喘组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞占细胞总数百分比均明显高于正常对照组（均P＜0.01）;法舒地尔干预后明显抑制炎症细胞浸润,该组BALF中细胞总数较哮喘组不同程度降低（P＜0.01）。（2）哮喘组肺组织镜下可见明显炎症性和结构性病理变化,法舒地尔组肺组织炎症反应及重塑改变较哮喘组改善。（3）哮喘组WTt和WTm较正常对照组明显增加（均P＜0.01）,法舒地尔组WTt和WTm较哮喘组明显降低（均P＜0.01）。（4）哮喘组大鼠肺组织RhoA和ROCKⅠ蛋白和mRNA的表达水平明显高于正常对照组（均P＜0.01）,法舒地尔组明显低于哮喘组（均P＜0.01）。（5）WTt、WTm均与大鼠肺组织中ROCKⅠ蛋白水平呈明显正相关（r=0.743、0.974,均P＜0.01）。结论哮喘大鼠RhoA和ROCKⅠ表达增高,法舒地尔可能通过影响RhoA和ROCKⅠ的表达,减轻气道炎症及改善气道重塑,表明Rho/ROCK信号转导通路参与哮喘气道重塑的形成。     

芦荟苷通过调控AMPK/NRF-2/GSH通路抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚

目的 探讨芦荟苷(ALO)对小鼠心肌肥厚的保护作用及其分子机制。方法 将30只C57小鼠随机分为5组：对照组、异丙肾上腺素(ISO)组、ALO干预组(低剂量组(ISO+low-dose ALO,I+L-A)、中剂量组(ISO+middle-dose ALO,I+M-A)、高剂量组(ISO+high-dose ALO,I+H-A)。ISO组：每日腹腔注射ISO;ALO干预组：在ALO灌胃的同时腹腔注射ISO;对照组：每日予以等量生理盐水腹腔注射及灌胃。以上各组每天处理1次,连续15 d后处死小鼠、称重,计算小鼠心脏体质量比(HW/BW);hematoxylin-eosin染色(HE)及Masson染色观察心脏形态和纤维化程度;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定心肌细胞肥大相关基因心房利钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的mRNA表达;为检测组织中氧化还原情况,分光光度法测定抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)及硫代巴比妥酸法测定脂质过氧化指标-丙二醛(MDA);Western Blot法测定心肌组织肥大标志物BNP、心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CKMB)、抗氧...     

法舒地尔对大鼠动脉粥样硬化及Rho激酶表达的影响

目的 探讨Rho激酶抑制剂-法舒地尔对大鼠动脉粥样硬化的防治作用及其相关机制.方法 以普通饮食喂养大鼠作为对照组(n=10);链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠内膜损伤存活后,高脂饮食8周,分为动脉硬化组、瑞舒伐他汀组及法舒地尔组(n=10),继续高脂饮食4周,药物干预2个月,行血脂、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及Rho激酶mRNA检测.结果 与对照组相比,动脉硬化组大鼠血脂增高,VCAM-1、ICAM-1及Rho激酶mRNA表达增加(P<0.05);与动脉硬化组对比,瑞舒伐他汀组各指标均改善,而法舒地尔组除对血脂无明显影响外,与瑞舒伐他汀具有相似的抗动脉粥样硬化作用(P<0.05).结论 法舒地尔具有抗动脉粥样硬化作用,其机制可能在于通过干预Rho/Rho激酶信号通路表达,抑制动脉内皮的炎症反应.     

HDAC8在异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化中的作用

目的：初步探讨组蛋白去乙酰化酶( HDAC8)在盐酸异丙肾上腺素( ISO)诱导的大鼠心肌纤维化中表达的机制。方法将40只雄性SD大鼠随机均等分为正常组和模型组。模型组给予ISO 1次/d(5 mg/kg),正常组予以等剂量生理盐水皮下注射,连续注射7d后处死大鼠取血液标本,并取心肌组织。测定心脏质量指数;ELISA法检测血清中I型胶原和Ⅲ型胶原的含量;HE和Masson染色法观察心肌纤维化程度;Western blot法测定HDAC8和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达情况;qRT-PCR 法检测 HDAC8 mRNA 的表达。结果与正常组比较,模型组心脏质量指数明显增加(P<0．05);HE和Masson染色显示模型组心肌组织出现明显的胶原纤维增生;模型组血清标本中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的含量较正常组明显增加(P<0．05);Western blot法检测显示模型组HDAC8、α-SMA的蛋白表达明显高于正常组( P<0．05,P<0．01);qRT-PCR 检测模型组 HDAC8 mRNA 表达明显高于正常组( P<0．05)。结论 HDAC8在心肌纤维化中高表达,而在正常心肌组织中低表达,提示其在心肌纤维化的发生发展中可能发挥作用。     

川芎嗪对阿霉素诱导的大鼠心肌重塑中TGF-β1表达的影响

目的:研究川芎嗪对阿霉素(ADM)诱导的大鼠心肌重塑的影响及是否通过改变TGF-β1的表达产生作用。方法:SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,n=8;生理盐水2 m L/kg腹腔注射)、模型组(ADM组,n=9;ADM 2mg/kg腹腔注射)、川芎嗪治疗组(Lig组,n=11;ADM 2 mg/kg+磷酸川芎嗪20 mg/kg腹腔注射)3组。测定各组SD大鼠心重指数(CWI)、左室心脏重量指数(LVWI),光镜下观察心肌病理学变化,免疫组化方法检测各组大鼠心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原的表达,Western blot方法检测各组大鼠心肌组织中TGF-β1蛋白的表达。结果:3组大鼠间的心肌纤维化病理改变不同,CWI、LVWI、心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原蛋白、Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比值及TGF-β1蛋白的表达差异有统计学意义(F=5.971、5.556、51.740、57.281、28.934和61.263,P<0.05)。与ADM组相比,Lig组大鼠的心肌纤维化病理改变明显减轻,CWI、LVWI、心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原蛋白、Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比值及TGF-β1蛋白表达明显下降(P<0.05);Lig组大鼠的心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原蛋白、Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比值及TGF-β1蛋白的表达仍高于NC组(P<0.05)。结论:川芎嗪能改善阿霉素诱导的大鼠心肌重塑,其机制可能与影响TGF-β1的表达有关。     

LPA对子宫颈癌干细胞生物学特性的影响及对RhoA/Rock2通路调控作用

目的:研究和探讨溶血磷酸酯(lysophosphatidic acid,LPA)对子宫颈癌干细胞生物学特性的影响及对RhoA/Rock2通路的调控作用,进一步明确宫颈癌的发病机制,并为将来研制宫颈癌靶点药物提供理论依据.方法:以宫颈癌Siha细胞株为原代细胞,球囊培养富集宫颈癌干细胞,观察细胞的克隆形成能力,检测细胞表...     

ROS-MAPK信号通路与心肌纤维化的研究进展

心肌纤维化(MF)是多种心血管疾病发展最终导致心脏功能衰竭的一个重要病理改变,其主要表现为成纤维细胞的增殖以及心肌组织中胶原纤维过度沉积.活性氧(ROS)是氧化系统中产生的不稳定、高活性氧分子的化合物统称.丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导刺激信号从细胞膜传递到细胞核内并作出反应的一个主要系统.ROS可作为第二信使激活MAPK信号通路,使细胞外基质代谢紊乱,在心肌纤维化的发生发展过程中发挥重要作用.干预POS-MARK信号通路对心肌纤维化乃至多种心脑血管疾病的防治提供了一个新的治疗思路.