PCR结合DNA测序技术检测急性白血病FLT3与NPM1基因突变及其临床意义

目的 研究成人急性白血病(AL)患者FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)及核仁磷酸蛋白(NPM1)基因突变发生情况及临床意义.方法 采用PCR结合DNA测序技术分析65例初诊急性白血病(AL)患者骨髓单个核细胞中FLT3及NPM1基因突变发生情况.结果 在59例急性髓系白血病(AML)患者中检测到FLT3-ITD突变阳性10例(16.9%),NPM1突变阳性15例(25.4%),其中3例同时存在FLT3-ITD突变及NPM1基因突变;而在6例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中均未检测到FLT3-ITD突变或NPM1基因突变.两种突变均与初诊时中位WBC数、染色体正常核型比例及伴有特异性融合基因患者比例有相关关系(P＜0.05).FLT3-ITD+AML患者初诊时骨髓原始细胞比例高(P＜0.05),单纯NPM1+AML患者初诊时表现为BPC较高(P＜0.05)、免疫表型CD34阳性患者比例低(P＜0.05);FLT3-ITD突变阳性者化疗后有低缓解率趋势.结论 FLT3-ITD突变和NPM1基因突变是AML患者常见的基因突变类型.对初诊时高白细胞计数、血小板计数不低、骨髓原始细胞比例高、CD34阴性表型和正常核型的AML患者检测FLT3-ITD突变和NPM1突变,有利于临床判断预后和指导治疗.     

急性髓系白血病FLT3基因突变的研究进展

近年来对急性髓细胞性白血病（AML）中FLT3突变及FLT3抑制剂的研究十分广泛和深入。研究表明,野生型FLT3基因在AML中普遍高表达70％～100％,FLT3突变存在于部分AML中（成人约20％～30％）,FLT3基因突变已经被公认是AML中发生率最高的一种基因改变。目前认为FLT3突变在白血病的发生、预后判断、微小残留病变检测等方面具有重要意义。近来FLT3抑制剂治疗AML的研究很多,     

稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞株的构建及鉴定

构建稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞(AML)株,为研究FLT3-ITD在急性髓细胞白血病中的作用和以FLIT3为靶点的治疗提供一种新的体外模型。筛选临床上FLT3-ITD突变的AML患者,选取mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变作为克隆对象,PCR扩增FLT3基因全长。然后通过同源重组的方法构建FLT3-ITD/FIV慢病毒载体并包病毒,收集病毒液上清液进行K562白血病细胞株感染,通过流式细胞分选术筛选阳性转染细胞。收集阳性转染细胞做Western blot验证阳性质粒的表达情况。207名AML患者中有42例FLT3-ITD突变,成功扩增出了mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变患者的FLT3基因全长。双酶切FIV载体和模板DNA,连接以及感受态细胞转化筛选出阳性重组子,双酶切鉴定和测序结果验证。慢病毒成功感染K562白血病细胞株,用流式细胞分选术筛选出了稳定感染的细胞,且该细胞可以传代、扩增。同时,稳定感染细胞的Western blot鉴定也证实了阳性质粒的表达情况。通过筛选FLT3-ITD突变的AML患者,成功构建了稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的白血病细胞株,为研究FLT3-ITD在AML发病中的作用以及针对FLT3-ITD为靶点的药物筛选治疗等提供了一个稳定的体外细胞模型。     

FLT3及C-kit突变在急性髓系白血病的临床意义

目的探讨FLT3及C-kit基因突变在急性髓细胞白血病(AML)中的临床意义。方法回顾性分析南方医院2010年1月—2013年12月期间初诊AML患者的临床资料,PCR分析FLT3及C-kit基因突变情况。结果248例初诊AML患者中,FLT3-ITD突变率为16.9%,TKD突变率为3.2%,C-kit8号外显子突变率为1%,17号外显子突变率为5.2%;FLT3-ITD突变更倾向发生于正常染色体核型的AML患者;FLT3突变阳性组及C-kit突变阳性组患者的外周血白细胞数高于基因突变阴性组,染色体核型正常患者的无病生存时间较阴性组缩短(P<0.05)。但是对血红蛋白、血小板及完全缓解率(CR率)并无影响(P>0.05)。结论 FLT3及C-kit突变的AML患者有较差的临床预后。     

FLT3基因突变与IL-3受体α在急性髓系白血病的表达意义

目的 研究FLT3基因突变与受体α(IL-3Rα)在急性髓性细胞白血病(AML)的表达及临床意义.方法 采用RT-PCR及限制性片段长度多态性(RFLP)分析检测20例AMI患者IL-3Rα的表达水平及FLT3/ITD与D835突变.结果 20例中IL-3Rα高表达18例,FLT3/ITD突变7例,D835突变1例,总突变率44.4%,对照组未检测到FLT3/ITD突变高表达IL-3Rα与FLT3/ITD阳性患者外周血白细胞计数高,白血病细胞比例高,完全缓解率低.结论 IL-3Rα高表达和 FLT3基因突变均赋予急性髓系白血病细胞增殖优势,检测两者水平对于评价AML患者疗效、估计预后具有重要意义.     

急性髓性白血病FLT3检测及临床意义

目的 探讨FLT3在急性髓性白血病(AML)中的表达情况.方法 核型正常的AML患者20例,核型异常的AML患者30例,分别于化疗前抽取骨髓3ml,用PCR方法检测白血病细胞FLT3的表达情况.结果 核型正常的AML FLT3的表达率为5.0%,核型异常的AML FLT3的表达率为26.7%.难治复发的AML FLT3...     

FLT3突变,FLT3表达水平在急性髓系白血病中的意义

目的研究FLT3基因长度突变(FLT3-LM)及FLT3受体在初诊AML患者中骨髓单个核细胞(MNC)的表达水平在急性髓系白血病(AML)的临床意义。方法采用基因组DNA聚合酶链反应(PCR)技术检测95例初诊AML患者FLT3-LM,采用流式细胞仪(FCM)检测分析其中68例FLT3的表达水平。结果初诊AML患者中FLT3-LM阳性率为15.8%;FLT3-LM 存在于AML-M1(3/18),M2(4/24),M3(2/17),M5(5/25),M6(1/4)亚型中(P>0.05);22例ALL和10例正常对照中均未检测到FLT3-LM阳性;FLT3-LM在正常染色体核型组和伴t(15;17)核型异常患者中突变率分别为23.0%(10/52例)和16.7%(2/12例),较其他核型组突变率4.3%(1/23例)高,但无统计学差异;FLT3-LM组与非突变组在年龄,性别,诱导缓解率方面无统计学差异(P>0.05);FLT3-LM阳性患者外周血白细胞高,骨髓原始细胞高(P<0.05)。AML患者FLT3表达水平为(11.48%±14.87%),高于10例正常对照组水平(1.10%±0.31%)(P<0.05);FLT3表达水平在12例FLT3-LM 组为(5.86%±6.85%),低于56例非突变组(14.14%±16.25%)(P<0.05);临床资料显示,诱导治疗后缓解组的FLT3表达水平为(5.52%±2.67%),低于非缓解组FLT3表达水平(25.53%±22.60%)(P<0.05)。结论FLT3长度突变是AML中发生频率较高的一类突变;突变患者临床特征表现为外周血高白细胞,骨髓高原始细胞;FLT3受体在AML患者单个核细胞中呈高水平表达;FLT3受体高表达与低诱导缓解率有关。FLT3突变与FLT3受水平检测可能有助于白血病诊断,预后判断和靶向治疗。     

NPM1和FLT3基因突变的正常核型急性髓系白血病病人临床特征及预后分析

目的 了解正常核型急性髓系白血病(AML)病人核仁磷酸蛋白1(NPM1)、FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)基因突变的发生频率,并探讨基因突变伴随的临床特征及对近期预后的影响。方法 收集94例初治的正常核型AML病人(M3除外),行NPM1、FLT3基因突变检测。结果 94例正常核型AML病人,NPM1基因突变阳性率为40.43%;FLT3内部串联重复突变(FLT3-ITD)阳性率为28.72%;NPM1并FLT3-ITD基因突变阳性率为14.89%;FLT3点突变(FLT3-TKD)阳性率为7.45%。与无突变组相比,NPM1+/FLT3-组发病年龄、外周血白细胞和血小板计数、骨髓原始细胞比例均较高,差异有显著性(t=2.048~2.072,P<0.05)。NPM1-/FLT3-ITD+组外周血白细胞计数和骨髓原始细胞比例均较无突变组高(t=2.549、2.784,P<0.05)。NPM1+/FLT3-组1疗程化疗诱导完全缓解率为87.50%,高于无突变组的63.89%(χ2=4.205,P<0.05);NPM1-/FLT3-ITD+组完全缓解率为53.85%,与无突变组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NPM1、FLT3基因突变是正常核型AML病人中常见的分子学异常,此两种基因突变检测对AML病人的个体化治疗及预后评估有重要意义。     

初治急性白血病患者CD133的表达与临床特征关系的探讨

目的探讨肿瘤干细胞分化抗原CD133的表达与急性白血病患者临床特征的关系。方法 90例初治急性白血病患者,急性髓细胞白血病(AML)患者60例,急性淋巴细胞白血病(ALL)患者30例,对所有的患者骨髓进行流式细胞术进行免疫分型及检测CD133的表达,同时采用高分辨溶解曲线技术(HRM)和变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测AML患者的FLT3-ITD和NPM1基因突变,所有患者常规进行外周血WBC、Hb和PLT,以及骨髓象的检测,分析AML和ALL的临床特征以及常见的预后指标与CD133表达关系,以及AML患者CD133的表达与FLT3-ITD与NPM1基因突变的关系。结果 AML患者CD133阳性率60%,ALL患者CD133阳性率为40%。CD133阳性表达者,肝脏、脾脏肿大的发生率两组急性白血病均高于阴性表达(P<0.05);而在AML患者,骨痛发生率阳性表达CD133者为77.8%,显著高于阴性表达者(P<0.05)。在AML组患者中,CD133表达与WBC计数呈现正相关(P<0.01)。AML患者NPM1突变型占35%,FLT3-ITD突变型占30%,FLT3-ITD突变组CD133阳性表达率高于FLT3-ITD野生型组(P<0.05);而NPM1基因突变组与野生型组CD133的表达无统计学差异(P>0.05)。结论白血病细胞CD133的表达与急性白血病常见预后指标、以及FLT3-ITD突变密切相关,有可能成为急性白血病预后不良的指标。     

动态监测 FLT3-ITD 基因突变在急性髓系白血病中的意义

目的:分析急性髓系白血病(AML)化疗前后FLT3-ITD基因突变与临床缓解的相关性,探讨FLT3-ITD基因动态改变对评估AML患者临床疗效的意义.方法:分析2016年6月—2019年6月中山市人民医院收治的初诊AML患者178例(除M3型),通过PCR扩增联合一代测序的方法检测骨髓单个核细胞FLT3-ITD突变情况,比较FLT3-ITD阳性患者与阴性患者临床特征和缓解率的差异.结果:AML初诊患者中FLT3-ITD阳性患者(33例)的中位白细胞计数、骨髓原始细胞比例及血乳酸脱氢酶水平明显高于FLT3-ITD阴性患者(145例)(P<0.05);AML初诊FLT3-ITD阳性患者与阴性患者相比,具有更低的完全缓解率(42.4％vs58.6％,P<0.05);而在FLT3-ITD初诊阳性患者(33例)中,化疗后持续阳性患者(5例)的完全缓解率显著低于化疗后阴性的患者(28例)(0.0％vs 50.0％,P<0.05).结论:AML初诊FLT3-ITD阳性患者化疗效果欠佳,化疗后FLT3-ITD持续阳性与AML难以缓解相关,提示连续监测FLT3-ITD突变有助于判断治疗效果、评估疾病预后.     

FLT3抑制剂治疗急性髓系白血病患者研究进展

急性髓系白血病（AML）是一种高度异质性的恶性血液肿瘤,其中伴 FLT3基因突变患者复发率较高、预后较差,因此 FLT3成为AML治疗的重要靶点。近年来,先后有第一代、第二代共8个FLT3抑制剂注册临床试验,其中可用于AML患者治疗的有米哚妥林、吉瑞替尼和奎扎替尼三种药物。FLT3抑制剂通过与标准化疗药物联用进一步提高疾病缓解率,在后续的维持治疗中,FLT3抑制剂同样可以降低患者的疾病复发率,改善患者整体预后。部分患者可出现因骨髓微环境导致的原发性耐药或用药后并发其他突变所致的继发性耐药。FLT3抑制剂与其他化疗药物联用可以减少耐药的发生。本文对常见FLT3抑制剂治疗AML患者的研究进展进行综述,以期为临床提供参考。     

急性髓细胞白血病FLT3-ITD基因突变与细胞遗传学的关系

目的探讨急性髓细胞白血病（AML）FLT3-ITD基因突变与细胞遗传学关系.方法采用PCR-DHPLC方法检测60例初治AML患者骨髓单个核细胞FLT3-ITD突变;应用G显带技术进行核型分析.结果 60例初发AML中,FLT3-ITD突变阳性率为21.67%（13/60）;10例对照组均未检测到该突变;不同预后核型组FLT3-ITD突变阳性率不同,预后中等核型组突变率较高40.0%（6/15）,预后中等核型组FLT3-ITD突变阳性者外周血白细胞数、骨髓白血病细胞比例高于预后好核型组及预后差核型组（P〈0.01）.结论 FLT3-ITD突变在AML中多发生于预后中等核型组,而且与预后不良相关;预后中等核型组FLT3-ITD突变阳性者具有外周血高白细胞、骨髓白血病细胞比例高的临床特点.FLT3-ITD突变检测在一定程度上可以弥补细胞遗传学的不足,有可能成为AML常规检测项目之一,有助于白血病的诊断及预后判断.     

FLT3基因突变与急性髓细胞性白血病的关系及临床意义

目的研究FLT3基因内部串联重复(internal tandemduplication,ITD)突变与急性髓细胞性白血病(AML)的关系及临床意义。方法采用基因组PCR及RT-PCR方法检测126例AML患者的FLT3/ITD突变。结果106例初治AML患者检出FLT3/ITD突变者18名,突变率17.0%,在20例完全缓解期患者及对照组中均未检测到FLT3/ITD突变,基因组PCR及RT-PCR两种方法检测FLT3/ITD突变的结果一致,对其中3例特征性突变测序结果显示,ITD主要位于外显子14,亦可累及内含子14和外显子15,长度为21～42bp,均为框内突变。FLT3/ITD阳性患者外周血白细胞计数高(P<0.01),骨髓白血病细胞比例高(P=0.039),早期病死率高(P=0.036)。在M3患者中,FLT3/ITD阳性者完全缓解率低(P=0.015)。在非M3患者中,FLT3/ITD阳性者的完全缓解率与阴性者比较,差异无统计学意义(P>0.05),FLT3/ITD阳性患者完全缓解后检测FLT3/ITD转阴性。结论FLT3/ITD阳性AML患者早期死亡率高,FLT3/ITD阳性M3患者预后差,FLT3/ITD突变检测对于AML患者疗效评价、预后估计具有重要意义。     

FLT3-ITD 突变的急性髓系白血病免疫表型 及临床特征分析

目的 讨论FLT3-ITD 突变的急性髓系白血病（AML）的免疫表型及临床特征。方法 回顾性 分析2015 年6 月—2017 年6 月中国医科大学附属第四医院收治的FLT3-ITD+ 及FLT3-ITD- AML 组患者的 免疫表型、临床资料,并对两组患者化疗后临床结局及生存状况进行比较。结果 FLT3-ITD+ AML 组患者 CD56、CD33、CD11b 及CD7 表达高于FLT3-ITD- AML 组（P <0.05）,而CD34、CD117 表达低于FLT3- ITD- AML 组（P <0.05）。与FLT3-ITD- AML 组患者比较,FLT3-ITD+ AML 组患者外周血白细胞计数及骨 髓原始细胞比例升高（P <0.05）,而血红蛋白及血小板计数比较,差异无统计学意义（P >0.05）;FLT-ITD- AML 组患者总反应率高于FLT3-ITD+ AML 组（P <0.05）;FLT3-ITD- AML 组患者无病生存率和总生存率 高于FLT3-ITD+ AML 组（P <0.05）。FLT3-ITD+ AML 组患者完全缓解患者CD56、CD34、CD11b、CD7、 CD33 及CD117 的表达水平低于未缓解患者（P <0.05）。结论 FLT3-ITD+ AML 患者白血病细胞抗原表达 紊乱,外周血白细胞及骨髓原始细胞高,完全缓解率低,预后差,是AML 预后不良因素。AML 患者早期检测 FLT3-ITD 突变及免疫分型对于指导治疗、判断预后具有重要临床意义。     

FLT3基因在各种血液肿瘤患者中的表达及其临床意义

目的 为进一步研究各种类型血液肿瘤患者FLT3基因的表达情况。方法 采用多聚酶链反应（PCR）方法检测103例初治AML、76例急性淋巴细胞白血病（ALL）、53例慢性粒细胞白血病（CML）慢性期、31例CML急变期、11例慢性淋巴细胞白血病（CLL）、36骨髓增生异常综合征（MDS）患者、9例多发性骨髓瘤（MM）及13例伴有骨髓侵犯非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者FLT3基因表达情况。结果 FLT3基因在各种血液肿瘤表达为AML患者90．3％（93／103）、ALL患者60．5％（46／76）、CML慢性期患者5．7％（3／53）、CML急变期患者61．3％（19／31）、CLL患者9．1％（1／11）、MDS患者25．0％（9／36）。9例MM和7例伴有骨髓浸润NHL患者均未发现FLT3基因表达。AML患者FLT3基因检测阳性率显著高于其他类型白血病患者，CML急变期患者FLT3基因检测阳性率显著高于慢性期患者，ALL患者FLT3基因检测阳性率显著高于CLL患者。结论 各种类型白血病均可出现FLT3基因的表达，但表达率不同，以AML最高，而CLL和CML慢性期最低，FLT3基因在急性髓系白血病恶性克隆的增殖和维持中起重要作用。     

FLT3基因突变与白血病的关系

FLT3属于Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族成员之一,研究表明,其在正常造血及免疫系统的发育中起重要调节作用。FLT3基因突变常见有两种,即内串联复制和点突变。FLT3在急性髓细胞白血病中有过度表达,FLT3基因的内部串联重复(FLT3-ITD)是急性髓细胞白血病最常见的基因异常。FLT3还可作为白血病基因诊断及微小残留病灶的检测标志。本文就FLT3及其突变与白血病的发生、发展及预后的关系予以综述。     

急性髓细胞白血病与CD25表达的相关性探讨

目的：探讨CD25与急性髓细胞白血病（acute myeloid leukemia,AML）的常见免疫表型标记间的相关性,及CD25与 FLT3-ITD 基因的关系。方法通过流式细胞术检测 CD7、CD117、CD33、CD34、CD38、cyMPO、CD13、CD36、CD56、CD11b、CD19、CD16、CD14、CD64及白介素2三条受体链CD25（α链）、CD122（β链）、CD132（γ链）在36例AML患者骨髓表达,运用PCR技术检测本组患者FLT3-ITD基因的表达。结果36例AML患者中, CD25＋表达率为13.89%（5/36）,在AML-M2组为12.5%（1/8）、AML-M4组为18.18%（2/11）、AML-M5组为20%（2/10）, CD25＋表达率在各组间差别无统计学意义（P＞0.05）。表达CD7、CD117、CD33、CD34、CD38、cyMPO、CD13、CD36、CD56、CD11b、CD19、CD16、CD14、CD64、CD122、CD132单克隆抗体的骨髓原始细胞百分比在CD25＋AML-M2组和CD25-AML-M2组间、CD25＋AML-M4组和CD25-AML-M4组间、CD25＋AML-M5组和CD25-AML-M5组间无统计学差异（P＞0.05）。PCR结果显示,7例AML患者出现FLT3-ITD突变基因,5例CD25＋AML患者组中FLT3-ITD＋者为3例,CD25＋AML合并FLT3-ITD＋率为60%,高于CD25-AML组（P＜0.05）。结论（1）CD25在AML患者中可出现阳性表达,但阳性率较低,CD25与AML患者的FAB亚型和常见的髓系免疫表型标记无明显相关性;（2）CD25＋AML患者合并FLT3-ITD基因突变率较高,明确CD25与FLT3-ITD基因的相关性有一定临床意义。     

骨髓增生异常综合征患者FLT3基因及FLT3／ITD基因突变的检测及价值

目的　研究骨髓增生异常综合征 (MDS)患者DNA水平FLT3基因及FLT3 /ITD基因突变情况。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)联合单链构象多态性 (SSCP)分析 3 6例MDS患者FLT3基因及FLT3 /ITD基因突变。结果　 3 6例MDS患者中 9例 ( 2 5 %)FLT3基因检测阳性 ,难治性贫血伴原始细胞增多 (RAEB)、慢性粒单细胞白血病和转变中的RAEB(RAEBT)组FLT3基因检测阳性率显著高于难治性贫血 (RA)和环形铁粒幼细胞性难治性贫血 (RAS)组 (P <0 0 2 5 )。FLT3基因检测阳性MDS转化为急性髓性白血病 (AML)时间显著短于FLT3检测阴性患者 (P <0 0 5 )。 3 6例MDS患者中有 2例 ( 5 6%)出现FLT3 /ITD基因突变 ,RAEB及RAEBT各 1例。结论　部分MDS患者可检测出FLT3基因表达和FLT3基因突变 ,FLT3基因及FLT3 /ITD基因突变检测可能有助于MDS的预后判断