泛素-蛋白酶体抑制剂对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖、迁移是动脉粥样硬化(As)、高血压和冠状动脉成形术后再狭窄的主要病理表现。而As也是导致心脑血管疾病的重要原因。泛素-蛋白酶体系统是真核细胞内主要的细胞降解系统,而泛素-蛋白酶体抑制剂可以抑制VSMC的增殖及迁移。     

牙龈卟啉单胞菌对兔血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的研究牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)上清液对兔血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响.方法组织块法进行兔腹主动脉VSMCs的原代培养,复苏培养P.gingivalis标准菌株,不同浓度细菌上清液刺激细胞48h,MTT法检测细菌上清液对细胞增殖的影响;爬片法检测7 d内4.3×106CFU/mL的P.gingivalis上清对细胞迁移的影响.结果浓度高于4.3×106CFU/mL的P.gingivalis上清液能抑制VSMCs的增殖;4.3×106CFU/mLP.gingi-valis上清作用于VSMCs前4 d能促进VSMCs的迁移,明显高于对照组(P<0.05).结论高于4.3×106CFU/mL的P.gingivalis上清液能抑制VSMCs的增殖,4.3×106CFU/mL P.gingivalis上清液可促进血管平滑肌早期的迁移,从而在动脉粥样硬化的发生发展过程中可能发挥一定的作用.     

敲低Tudor-SN对血管平滑肌细胞增殖迁移和凋亡的影响

目的 经皮冠状动脉介入治疗冠心病有较好的近期疗效,但患者长期预后却受血管再狭窄的制约,血管平滑肌细胞(VSMC)的表型转化是导致血管狭窄的主要原因。文章通过构建敲低Tudor-SN稳定株,检测Tudor-SN基因对大鼠血管平滑肌细胞A7R5增殖、迁移、凋亡的影响,为研究血管平滑肌细胞表型转化和血管再狭窄发病机制提供细胞模型。方法 通过制备敲低Tudor-SN基因的重组慢病毒,感染A7R5细胞,加入嘌呤霉素药物筛选出低表达Tudor-SN基因的稳定株;使用Western blot检测Tudor-SN敲低效果;在表型实验中,将A7R5细胞分为pLKO-Vector对照组和sh-Tudor-SN实验组,利用CCK-8实验、免疫荧光实验、细胞划痕实验和流式细胞术分别检测对照组和实验组A7R5细胞的增殖、迁移和凋亡的变化;使用PDGF诱导pLKO-Vector对照组和sh-Tudor-SN实验组细胞表型转化,检测Tudor-SN蛋白表达。结果 成功构建了敲低Tudor-SN的shRNAs的重组慢病毒稳定株;表型实验结果显示,敲低Tudor-SN后,实验组从第3天起细胞增殖能力明显低于对照组,实验...     

丹参酮ⅡA对体外兔血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的观察丹参酮A对体外兔血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响,并初步探讨丹参酮A的作用机制。方法采用兔胸主动脉,用组织贴块法培养,设立空白对照组,加入不同浓度的丹参酮A共同孵育24 h、48 h和72 h,采用MTT法观察该药对细胞增殖的影响;划痕法观测细胞迁移情况;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量;TRITC-鬼笔环肽标记F-actin,观察该药物对细胞骨架微丝结构的影响。结果1同一时间点,丹参酮A各浓度组显著抑制体外培养兔VSMC增殖和迁移。细胞的A570值(24 h、48 h、72 h分别为r=-0.762,P=0.000;r=-0.837,P=0.000;r=-0.944,P=0.000)、迁移距离(24 h、48 h、72 h分别为r=-0.966,P=0.000;r=-0.980,P=0.000;r=-0.966,P=0.000)与浓度呈负相关;2作用24 h后,处于G0/G1期的VSMC百分比增加,细胞DNA含量减少,凋亡率增加。兔VSMC在G0/G1期所占比例(r=0.962,P=0.000)、凋亡率(r=0.982,P=0.000)和浓度呈正相关;3药物干预组和对照组相比,兔VSMC的细胞骨架结构有所改变,对照组中细胞骨架呈极性分布,定向伸展,可见伪足;药物干预组细胞骨架呈非极性分布,未见伪足。结论丹参酮A对体外兔VSMC的增殖和迁移有抑制作用,上述作用可能是通过阻滞兔VSMC通过细胞周期的限制点,使其停滞于G0/G1期,诱导细胞凋亡以及影响细胞骨架微丝结构来实现。     

丹参酮ⅡA对体外兔血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的观察丹参酮ⅡA对体外兔血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和迁移的影响，并初步探讨丹参酮ⅡA的作用机制。方法采用兔胸主动脉，用组织贴块法培养，设立空白对照组，加入不同浓度的丹参酮ⅡA共同孵育24h、48h和72h，采用MTT法观察该药对细胞增殖的影响；划痕法观测细胞迁移情况；采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量；TRITC-鬼笔环肽标记F-actin，观察该药物对细胞骨架微丝结构的影响。结果①同一时间点，丹参酮ⅡA各浓度组显著抑制体外培养兔VSMC增殖和迁移。细胞的A570值（24h、48h、72h分别为r=-0．762，P=0．000；r=-0．837，P=0．000；r=-0．944，P=0．000）、迁移距离（24h、48h、72h分别为r=-0．966，P=0．000；r=-0．980，P=0．000；r=-0．966，P=0．000）与浓度呈负相关；②作用24h后，处于G0／G1期的VSMC百分比增加，细胞DNA含量减少，凋亡率增加。兔VSMC在G0／G1期所占比例（r=0．962，P=0．000）、凋亡率（r=0．982，P=0．000）和浓度呈正相关；③药物干预组和对照组相比，兔VSMC的细胞骨架结构有所改变，对照组中细胞骨架呈极性分布，定向伸展，可见伪足；药物干预组细胞骨架呈非极性分布，未见伪足。结论丹参酮ⅡA对体外兔VSMC的增殖和迁移有抑制作用，上述作用可能是通过阻滞兔VSMC通过细胞周期的限制点，使其停滞于G0／G1期，诱导细胞凋亡以及影响细胞骨架微丝结构来实现。     

黄色素对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究黄色素（ＳＹ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的作用及其作用机制。方法 以培养的家兔ＶＳＭＣ为材料，采用细胞计数和＾３２Ｐ掺入法，研究了ＳＹ对ＶＳＭＣ的增殖及ＶＳＭＣ中酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活性的影响。结果 ＳＹ对血清刺激的ＶＳＭＣ的增殖具有抑制作用，且呈剂量和时间依赖性。１．０ｇ／Ｌ达到最大抑制，抑制率为５４．６％，４ｄ（１．０ｇ／Ｌ ＳＹ）达到最大抑制，抑制率为５２．０％，超过４ｄ     

Slit2蛋白对TNF-α诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖迁移的影响

目的：观察Slit2蛋白对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖迁移的影响。方法采用川北医学院第二临床医学院实验室培养的大鼠VSMCs ,实验分两部分,第一部分：Slit2单独作用,分为正常对照组和实验组（Slit2蛋白浓度分别为：50、75、100、125、150 ng／mL）;第二部分：Slit2与TNF‐α共同作用,分为正常对照组、阳性对照组（含TNF‐α10 ng／mL）和实验组（TNF‐α10 ng／mL＋Slit250 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit275 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit2100 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit2125 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit2150 ng／mL）。分别采用CCK‐8及transwell小室法检测各组细胞的增殖及迁移能力。结果第一部分：实验组与对照组OD值及迁移细胞数目比较差异均无统计学意义（P＝0．516,P＝0．52）。第二部分：正常对照组与阳性对照组比较细胞迁移数目差异有统计学意义（P＝0．00）,实验组细胞迁移数较阳性对照组明显减少;CCK‐8结果显示实验组和阳性对照组与正常对照组OD值比较差异有统计学意义（P＜0．05）,而实验组与阳性对照组OD值比较差异无统计学意义（P＝0．173）。结论 Slit2对VSMCs增殖无影响,但能抑制TNF‐α诱导的VSMCs迁移。     

sunitinib对气道平滑肌细胞增殖和迁移的影响及机制

目的:探讨sunitinib(sunitinib malate)对血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)刺激的人气道平滑肌细胞(human airway smooth muscle cell,HASMCs)增殖和迁移的影响及其机制。方法:体外培养HASMCs分为:对照组、PDGF-BB组、PDGF-BB与sunitinib干预组、sunitinib组,四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定HASMCs增殖,流式细胞术检测HASMCs细胞周期,改良的Boyden微孔膜双槽法观察细胞迁移,Westernblot检测PDGFR-β和AKT的磷酸化。结果:与对照组相比,PDGF-BB(20ng/ml)显著诱导HASMCs的增殖和迁移(P<0.05),sunitinib(0.3～9.0nmol/L)呈浓度依赖性抑制PDGF-BB诱导的HASMCs增殖和迁移;PDGF-BB(20ng/ml)刺激HASMCs后,细胞周期S期比例显著高于对照组(P<0.05),PDGF-BB与sunitinib干预组细胞周期S期比例低于PDGF-BB组(P<0.05);PDGF-BB组PDGFR-β和AKT的磷酸化水平较对照组为高(P<0...     

小檗碱对体外血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的:观察小檗碱对体外血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移和凋亡的影响。方法:培养兔主动脉平滑肌细胞至8～10代,根据小檗碱作用时间不同分成24h、72h组,每一时间组据小檗碱浓度不同分为5组:0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L组。用台盼蓝活细胞计数法和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对VSMCs增殖的影响。用Boyden小室法检测穿膜细胞数,观察小檗碱对VSMCs迁移的影响。用TUNEL法及流式细胞仪检测小檗碱对VSMCs凋亡的影响。结果:台盼蓝活细胞计数显示小檗碱作用24h、72h后,随小檗碱浓度增加,活细胞数减少(P<0.05)。MTT法检测显示小檗碱作用24h、72h后,随小檗碱浓度增加,生长抑制率增高,随小檗碱干预时间延长,细胞生长抑制率增加(P<0.01)。Boyden小室法检测显示随小檗碱浓度增加,穿膜细胞数减少(P<0.05)。TUNEL检测显示各组施加干预48h后,对照组和各实验组的凋亡阳性率分别为13.15%、12.04%、10.62%、9.73%和9.72%(P>0.05)。流式细胞仪检测小檗碱作用48h后,对照组、50μmol/L和100μmol/L浓度小檗碱组的细胞凋亡率分别为20.4%、18.7%和17.2%。结论:小檗碱对VSMCs的增殖和迁移有显著抑制作用,而小檗碱对VSMCs的凋亡无促进作用。     

大蒜素对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响及机制研究

目的:观察大蒜素对大鼠血管平滑肌细胞迁移的作用,并初步探讨其作用机制.方法:采用组织块贴壁法获取SD大鼠原代血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC),并将VSMC分为对照组、模型组[1 mg·L-1脂多糖(li-popolysaccharide,LPS)]、大蒜素组(1 mg·...