蛇床子素对Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎大鼠的软骨损伤的改善及免疫调节作用

目的：本文主要研究蛇床子素对Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎大鼠的软骨损伤的改善及免疫调节作用。方法：实验设置正常对照组(Norm组)、模型对照组(Model组)、地塞米松组(Dex组)、蛇床子素低剂量组(Ost 10 mg/kg组)、蛇床子素中剂量组(Ost 20 mg/kg组)、蛇床子素高剂量组(Ost 40 mg/kg组),每组20只大鼠。用牛II型胶原诱导构建类风湿关节炎大鼠模型,在造模完成一周后灌胃给药。每隔4天,测定各组大鼠的爪子体积并评定关节炎指数;30天后,通过称重法测定脾脏指数和胸腺指数,通过HE染色观察软骨损伤,通过Western blotting检测Ki67、 PCNA、Caspase-3、Caspase-9、MMP-1、 MMP-3、 MMP-13、Wnt 1 、b-catenin和LRP5的表达,通过ELISA检测外周血IL-1b、IL-6和 TNF-a的含量,通过 qRT-PCR检测MMP-1、 MMP-3和 MMP-13 mRNA表达。结果：与Norm组相比,Model组大鼠的爪子体积明显变大、关节炎评分明显变高、脾脏指数和胸腺指数明显增多,软骨细胞减少、排列紊乱并见大量炎性细胞浸润,Ki67和PCNA蛋白表达明显下调,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显上调,IL-1b、IL-6和TNF-α 含量明显升高,MMP-1、MMP-3 和 MMP-13 mRNA和蛋白表达量明显上调,Wnt 1 、b-catenin和LRP5蛋白表达明显上调(P<0.01);与Model组相比,Dex组和Ost各组大鼠的爪子体积、关节炎评分、脾脏指数和胸腺指数均有不同程度的降低,软骨细胞排列紊乱程度和炎性细胞均有不同程度的减轻,Ki67和PCNA蛋白表达均有不同程度的上调,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达均有不同程度的下调,IL-1b、IL-6和TNF-α 含量均有不同程度的降低,MMP-1、MMP-3 和 MMP-13 mRNA和蛋白表达量均有不同程度的下调,Wnt 1 、b-catenin和LRP5蛋白表达均有不同程度的下调,其中以Ost 40 mg/kg组的作用最显著(P<0.01)。结论：蛇床子素能够减轻类风湿性关节炎大鼠的软骨损伤和炎症反应及关节软骨基质胶原的破坏,其可能是通过抑制类风湿性关节炎大鼠的Wnt信号通路的激活来实现的。     

苦参碱调控Wnt/β⁃catenin途径抑制宫颈癌细胞系Caski细胞侵袭迁移

目的：基于Wnt/β?catenin途径探索苦参碱抑制人宫颈癌细胞系Caski细胞侵袭迁移的分子机制。方法：Caski细胞用不同浓度苦参碱处理后,MTT法检测细胞增殖抑制情况;Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞侵袭迁移情况;ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP?9）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的分泌变化;实时荧光定量PCR检测细胞糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK?3β）、Wnt2B蛋白的表达情况;免疫蛋白印迹检测细胞β连环蛋白（β?catenin）、磷酸化β连环蛋白（p?β?catenin）含量。结果：苦参碱对Caski细胞的增殖具有抑制作用（P＜0.05）,且呈现时间、浓度依赖性;苦参碱抑制Caski细胞的侵袭迁移率（P＜0.05）,对Caski细胞分泌MMP?9、VEGF的能力具有显著抑制作用（P＜0.05）;苦参碱可显著降低Caski细胞Wnt2B mRNA的表达及β?catenin的蛋白含量,增加Caski细胞中GSK?3β mRNA的表达和p?β?catenin的蛋白含量。结论：苦参碱通过促进Caski细胞Wnt/β?catenin通路中GSK?3β mRNA表达,提高p?β?catenin蛋白含量,降低Wnt2B mRNA表达、β?catenin蛋白含量以及Caski细胞内MMP?9、VEGF的分泌,进而抑制Caski细胞的侵袭迁移。     

S100A4 siRNA 对佐剂性关节炎大鼠炎症及细胞因子的影响

目的：研究S100A4 siRNA对关节炎大鼠炎症及细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF‐α）、IL‐1β和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法建立大鼠佐剂性关节炎模型,造模后第11天给模型干扰组大鼠关节腔内注射 S100A4 siRNA 片段。观察各组大鼠关节炎指数（AI）的变化及踝关节的病理变化;ELISA 检测血清 TNF‐α、IL‐1β和 VEGF 的表达变化。结果模型干扰组大鼠 TNF‐α、IL‐1β和 VEGF 表达水平均比模型组降低（P＜0．05）;AI 值及踝关节病理积分与模型组比较显著下降,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论抑制 S100A4基因表达,能显著降低致炎细胞因子 TNF‐α、IL‐1β及促血管生成因子 VEGF 的表达,减轻关节滑膜的病理损伤。     

栀子浸膏对类风湿性关节炎大鼠血清IL-1β和TNF-α的影响

【目的】研究栀子水提浸膏对类风湿性关节炎大鼠血清IL1β和TNFα的影响,进一步探讨该药物的作用机制。【方法】建立II型胶原蛋白诱导大鼠类风湿性关节炎模型;口服栀子浸膏,观察药物对实验性大鼠足肿胀的抑制作用;检测药物对大鼠血清IL1β和TNFα的影响。【结果】与模型组比较,栀子水提浸膏可以剂量依赖性抑制大鼠足肿胀的程度(P<0.01);用药后,给药组血清IL1β和TNFα水平明显低于模型组(P<0.01)。【结论】栀子水提浸膏在类风湿性关节炎大鼠中可以下调致炎因子IL1β和TNFα的水平,提示这可能与该药抑制实验性类风湿性关节炎病情进展密切相关。     

盘龙七片调节Wnt/β-catenin通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响

目的 探讨盘龙七片对大鼠胫骨骨折愈合的促进作用及可能作用机制。方法 选用58只8周龄、SPF级SD雄性大鼠为实验大鼠,分为造模大鼠（n=48）与Sham组大鼠（n=10）。建立胫骨骨折模型大鼠,并将模型大鼠分为 Model组、盘龙七片组（Treat组）、β-catenin抑制剂组（XAV-939）及盘龙七片+β-catenin抑制剂组（Treat+XAV 939组）4组,每组10只。X光片观察大鼠胫骨骨折愈合状况;骨密度测定仪检测胫骨骨矿物质密度值（BMD）;HE染色观察大鼠骨折部位结构变化;酶联免疫吸附法检测血清中ALP、bFGF、TNF α、IL 1β;免疫印迹法检测骨组织中p 糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、Wnt3、β 链蛋白（β=Catenin）及淋巴增强因子1(LEF1)蛋白表达。结果 与Sham组相比,Model组骨组织影像学愈合评分、BMD、ALP、bFGF水平、Wnt3、β-Catenin、LEF1蛋白表达降低,TNF α、IL 1β水平升高;与Model组相比,Treat组骨组织影像学愈合评分、BMD、ALP、bFGF水平、Wnt3、β Catenin、LEF1蛋白表达升高,TNF α、IL 1β水平降低;Treat+XAV 939组骨组织影像学愈合评分、BMD、ALP、bFGF水平、Wnt3、β-Catenin、LEF1蛋白表达高于XAV 939组,TNF α、IL 1β水平低于XAV 939组,差异有统计学意义（均P＜0.05）。 结论 盘龙七片可促进大鼠胫骨骨折愈合,其机制与抑制Wnt/β-catenin通路、缓解骨折大鼠机体炎症反应有关。     

蛇床子素对大鼠原代软骨细胞增殖的抑制作用

目的：观察蛇床子素对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法：分离出生24h内大鼠的软骨细胞,进行原代培养。细胞扩增至第2代时观察1周内细胞增殖情况,并用细胞免疫荧光法鉴定Ⅱ型前胶原基因（type Ⅱ procollagen gene,Col2a1）的表达。将第2代软骨细胞分为对照组和不同浓度蛇床子素（6．25、12．5、25和50μmol／L）组。药物作用24和48h后,观察细胞增殖情况,蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）和细胞周期素D1（cyclinD1）的表达。结果：第2代原代软骨细胞活力正常,Col2al表达明显。蛇床子素可以抑制软骨细胞的增殖,并随浓度的增加,抑制作用愈明显。蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测发现,随着蛇床子素浓度的增加,软骨细胞中PCNA和cyclinD1的表达下降。结论：蛇床子素可能通过抑制PCNA和cyclinD1的表达发挥抑制软骨细胞增殖的作用。     

复方丹参注射液对CIA大鼠滑膜细胞IL-1β mRNA表达的影响

目的：研究复方丹参注射液对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节炎模型（CIA）滑膜细胞IL－1βmRNA表达的影响。方法：用Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠关节炎模型，以逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）半定量法测定模型大鼠滑膜细胞IL－1βmRNA的表达。结果：复方丹参大剂量可以明显下调CIA大鼠滑膜细胞IL－1βmRNA的表达水平。结论：复方丹参治疗类风湿性关节炎的机制可能与下调滑膜细胞IL－1βmRNA表达的水平有关。     

雷公藤甲素对佐剂性关节炎大鼠外周血单个核细胞核因子κB受体激活剂配基表达的影响

目的 探讨雷公藤甲素（TP）对佐剂性关节炎（AA）大鼠外周血单个核细胞（PBMC）核因子KB受体激活剂的配基（RANKL）mRNA表达的影响及其可能机制。方法 建立大鼠AA模型，随机分成TP组和甲氨蝶呤（MTX）组，分别给予TP和MTX治疗，并设AA组作对照。运用逆转录聚合酶链式反应，测定各组PBMC中RANKL mRNA的表达，同时用酶联免疫吸附法测定外周血中TNF—α和IL—1β水平。结果 TP组和MTX组RANKL mRNA表达水平低于AA组（P〈0．01），并且其外周血TNF—α和IL—1β水平低于AA组（P〈0．01）。结论 TP能够抑制AA大鼠PBMC RANKL mRNA表达，其机制可能与下调AA大鼠外周血TNF—α、IL—1β水平有关。     

蛇床子素对大鼠颈动脉内膜增生的影响

目的 研究蛇床子素对球囊损伤后大鼠颈动脉内膜增生的影响。方法 SD 雄性大鼠30 只,随机 分为假手术组、模型组、低剂量蛇床子素组[10 mg/（kg·d）] 和高剂量蛇床子素组[30 mg/（kg·d）]。复制 大鼠颈动脉球囊损伤模型,蛇床子素组大鼠术前2 d 开始给药,假手术组、模型组同时给予0.9% NaCl,共给 药16 d。术后第13 天行苏木精- 伊红染色法染色,观察血管内膜的形态学变化;采用免疫荧光法检测新生 内膜增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,ELISA 检测大鼠受损血管中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞 介素-1β（IL-1β）水平,Western blot 检测核转录因子κB（NF-κB）和Toll 样受体（TLR4）蛋白的表达。 结果 与模型组相比,高、低剂量蛇床子素组均能减少球囊损伤后新生内膜面积、内膜/ 中膜比（P <0.05）, 并使PCNA 阳性指数降低（P <0.05）,降低球囊损伤血管组织TLR4 和NF-κB 的过表达和炎症介质 TNF-α 和IL-1β 水平（P <0.05）。结论 蛇床子素能够抑制大鼠颈动脉球囊损伤后的内膜增生,主要通过 影响TLR4/NF-κB 通路,减轻炎症反应,抑制血管平滑肌细胞的增殖而发挥作用。     

Wnt／β－catenin 信号通路在非小细胞肺癌组织的表达及意义

目的：研究Wnt／β－catenin信号通路中关键分子Wnt1、β－catenin及Sox－2在非小细胞肺癌（ NSCLC）组织中的表达,探讨其与患者临床特征的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测NSCLC组织和正常肺组织中Wnt1、β－catenin及Sox－2蛋白的阳性表达率,并分析其与患者临床特征的关系,采用Kaplan－Meier法分析β－catenin表达与NSCLC患者中位生存期的关系。结果 NSCLC组织中Wnt1、β－catenin及Sox－2蛋白阳性表达率明显高于正常肺组织（P＜0．05）,Wnt1、Sox－2的表达与淋巴结转移和TNM分期相关,β－catenin的表达与病理类型及组织分化程度相关,β－catenin阳性表达患者中位生存期低于阴性表达患者（P＜0．05）。结论Wnt／β－catenin信号通路中关键分子Wnt1、β－catenin及Sox－2在NSCLC组织中的阳性表达率较正常肺组织高,并且其表达水平与患者临床分期和预后有关联。