青藤碱对细菌内毒素刺激的小鼠及巨噬细胞嘌呤受体A2A、P2X_7表达的影响

【目的】探讨青藤碱(sinomenine,SIN)对细菌内毒素(LPS)刺激的小鼠内毒素血症模型及巨噬细胞RAW264.7细胞炎症模型嘌呤受体A2A、P2X7表达的影响。【方法】选用BALB/c小鼠设空白对照组,模型组,青藤碱组(剂量分别为40、80、160 mg/kg),青藤碱组给予腹腔注射青藤碱30 min后,模型组和青藤碱组给予腹腔注射LPS(剂量为15 mg/kg)建立内毒素血症小鼠模型,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏、脾脏嘌呤受体A2A、P2X7的表达。RAW264.7细胞设空白组、LPS组、青藤碱组,青藤碱组给予青藤碱(300μmol/L)干预2 h后,LPS组和青藤碱组均给予LPS(剂量为100 ng/m L),继续培养8 h后,采用ELISA法检测上清TNF-α分泌量,RT-PCR法检测细胞P2X7、A2A m RNA表达。【结果】在LPS刺激下,小鼠血清TNF-α和IL-6水平显著上升,肝脏、脾脏组织中嘌呤受体A2A、P2X7的表达显著升高,青藤碱能下调TNF-α和IL-6水平,并抑制A2A、P2X7的表达(均P0.05);体外LPS刺激下,RAW264.7细胞分泌TNF-α增加,A2A、P2X7的表达增加,青藤碱可抑制TNF-α的分泌,并下调P2X7的表达(均P0.05),但对A2A的表达有促进作用。【结论】青藤碱对LPS刺激的小鼠肝脏、脾脏及体外巨噬细胞中嘌呤受体P2X7的表达增加均表现抑制作用,而对不同组织细胞中A2A表达的影响不同,相关机制有待深入。     

青藤碱抗炎抗风湿作用机理研究

【目的】研究青藤碱抗炎、抗风湿作用机理。【方法】采用小鼠巨噬细胞株J774体外培养,观察药物对该细胞株增殖、一氧化氮(NO)合成以及肿瘤坏死因子-α信使核糖核酸(TNF-α mRNA)表达及生物合成的影响。【结果】青藤碱能够抑制该细胞株增殖,抑制脂多糖(LPS)刺激状态下的NO合成;对TNF-α蛋白合成具有抑制作用,但仅在高浓度时才对TNF-α mRNA表达具有轻微的抑制作用。【结论】青藤碱可能通过下调单核／巨噬细胞系统炎症介质和细胞因子合成发挥抗炎、抗风湿作用。     

青藤碱对肺癌细胞A549中COX2、α7nAChR和A2A表达的影响

【目的】观察青藤碱(sinomenine,SIN)对环氧化酶2(COX2)、α7烟碱型乙酰胆能受体(α7nAChR)和腺苷受体(A2A)表达变化的影响,探讨青藤碱对A549细胞增殖的抑制作用及机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测青藤碱和4-甲基亚硝胺基-1-3-吡啶基-1-丁酮(NNK)对A549细胞增殖的影响;细胞划痕实验观察青藤碱和NNK对A549细胞迁移的影响;Western blot法观察青藤碱和NNK对A549细胞COX2蛋白表达的影响;RT-PCR和Western blot法观察青藤碱和NNK对A549细胞α7n ACh R、A2A表达的影响。【结果】NNK能促进增殖和迁移,青藤碱能抑制A549细胞增殖和迁移;NNK组COX2蛋白质水平增加,青藤碱组COX2蛋白质水平下降;NNK组α7n ACh R、A2A的表达增加,青藤碱组α7n ACh R、A2A表达下降。【结论】青藤碱能通过抑制COX2蛋白表达发挥抗A549细胞增殖和迁移作用;青藤碱对α7n ACh R和A2A受体的表达均有抑制作用。     

补肾强督治偻方对脂多糖刺激的小鼠RAW264.7细胞炎性细胞因子表达的影响

【目的】研究补肾强督治偻方及其不同萃取成分对脂多糖(LPS)诱导的细胞炎性模型的细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨其主要的抗炎有效成分。【方法】采用系统溶剂法萃取补肾强督治偻方各成分,体外培养RAW264.7细胞,以LPS(1μg/m L)诱导炎症模型,补肾强督治偻方总方及不同溶剂萃取成分干预24 h,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测细胞TNF-α、IL-1βm RNA的表达。【结果】LPS刺激的RAW264.7细胞的炎症细胞因子TNF-α、IL-1βm RNA表达均显著升高(P<0.05),水与正丁醇萃取的补肾强督治偻方成分均可显著抑制RAW264.7巨噬细胞炎症模型TNF-α、IL-1βm RNA的表达(P<0.05),且呈一定的剂量依赖关系。【结论】水提取与正丁醇提取的补肾强督治偻方成分可能是其主要的抗炎有效成分部位,抑制炎症细胞因子基因表达可能是补肾强督治偻方治疗强直性脊柱炎的机制之一。     

雷公藤甲素对外周血单个核细胞分泌促炎、抑炎细胞因子的影响

【目的】探讨雷公藤甲素(triptolide A,TA)对健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)分泌促炎、抑炎细胞因子的影响。【方法】分离培养健康人PBMC,采用脂多糖(LPS,终浓度为1μg/mL)或LPS 植物血凝素(PHA,终浓度为25μg/mL)刺激培养细胞,并给予TA(终浓度为5.4 ng/mL)处理,收集培养上清液,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测上清液中肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor-,αTNF-α)、白介素4(interleukin-4,IL-4)、白介素10(interleukin-10,IL-10)的含量。【结果】TA能抑制LPS或LPS PHA刺激的PBMC分泌TNF-α和IL-10,且对正常人PBMC分泌IL-10的抑制作用强于对TNF-α的抑制作用,但对IL-4的分泌无显著性影响。【结论】雷公藤甲素可不同程度地抑制促炎性细胞因子TNF-α及抑炎性细胞因子IL-10,使促炎、抑炎两种作用趋于平衡。     

青藤碱对类风湿关节炎患者炎性细胞因子及抗环瓜氨酸肽抗体的影响

目的探讨青藤碱对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清中炎性细胞因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)及抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)的影响.方法以健康成人为正常对照组,用双抗体夹心法(ELISA)检测活动性类风湿关节炎患者予青藤碱或甲氨喋呤治疗前及治疗1、2个月时血清中TNF-α、IL-1β、IL-10的含量及抗CCP抗体的滴度.结果与正常对照组相比,RA患者血清中TNF-α、IL-1β含量明显增加(P＜0.01),IL-10的含量无明显变化.青藤碱及甲氨喋呤能显著降低RA患者血清中IL-1β、TNF-α的含量(P＜0.01),而对IL-10的含量及抗CCP抗体的滴度无明显作用(P＞0.05).结论青藤碱可通过降低RA患者中血清TNF-α、IL-1 β的含量而治疗类风湿关节炎.     

青天葵注射液对内毒素诱导急性肺损伤大鼠炎症细胞因子调控的影响

【目的】观察青天葵注射液对内毒素(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠炎症细胞因子分泌水平的调控作用,探讨其干预机制。【方法】将大鼠随机分为正常组、模型组、参麦组、青天葵组,采用LPS刺激J774巨噬细胞和舌底静脉注射LPS法复制ALI模型,通过电子显微镜和双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法,观察各组对J774细胞增殖、炎症因子分泌的影响,以及对ALI模型大鼠炎症细胞因子的影响。【结果】LPS刺激J774巨噬细胞大量增殖、炎症因子分泌失衡,大鼠舌底静脉注射LPS诱导肺部炎症反应失控。青天葵及参麦注射液可抑制J774巨噬细胞的增殖。青天葵注射液能显著抑制细胞上清液和大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的表达水平(P0.05或P0.01),增加细胞上清液IL-10的含量(P0.01),使ALI大鼠血清IL-10的含量降低(P0.05),但不能调控单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的表达(P0.05)。【结论】青天葵注射液可能通过抑制TNF-α、IL-6的过量表达,发挥炎症调控效应,减轻肺损伤,对ALI具有一定的防治作用。     

青藤碱联合氟尿嘧啶对人胃腺癌SGC7901细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨青藤碱联合氟尿嘧啶(5-Fu)对人胃癌SGC7901细胞增殖及Bcl-2、Bax和环氧化酶(COX)-2表达的影响。方法:体外培养人胃腺癌SGC7901细胞系,四甲基偶氮唑蓝法测定对照组、5-Fu组(5-Fu 50 mg/L)、青藤碱低浓度组(青藤碱 1.25 mmol/L)、青藤碱中浓度组(青藤碱2.5 mmol/L)、青藤碱高浓度组(青藤碱 5 mmol/L)及联合组(5-Fu 25 mg/L+青藤碱2.5 mmol/L)对SGC7901细胞增殖作用的影响;碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率;免疫细胞化学法测定Bcl-2、Bax和COX-2蛋白表达情况。结果:青藤碱、5-Fu作用SGC7901细胞24、48和72 h后,青藤碱对人胃腺癌SGC7901细胞的增殖具有抑制作用,呈时间、浓度依赖性,与5-Fu联用后协同抑制细胞增殖(P<0.05～P<0.01);5-Fu组、青藤碱各浓度组及联合组的细胞凋亡率均较对照组明显增高(P<0.01),其中联合组均较单药组的凋亡率明显降低(P<0.01)。对照组Bcl-2和COX-2蛋白表达较明显,而青藤碱组、5-Fu组及其联合组染色减弱;与对照组差异均有统计学意义(P<0.05～P<0.01),其中联合组均较单药组阳性率明显降低(P<0.01)。对照组Bax蛋白表达较弱,青藤碱组、5-Fu组及其联合组阳性率相对增加;与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),且联合组均较单药组阳性率明显升高(P<0.01)。结论:青藤碱联合5-Fu对人胃腺癌SGC7901细胞增殖具有协同抑制作用,能够上调Bax表达,下调Bcl-2、COX-2表达,可能发挥增敏作用。     

黄芩苷对巨噬细胞产生抵抗素和白细胞介素-1β的影响

【目的】观察黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞产生抵抗素和白细胞介素-1β(IL-1β)的影响。【方法】体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7,取生长良好的细胞进行接种。模型组加入LPS(终浓度为0.1μg/mL或5μg/mL)或重组抵抗素(终浓度为100 ng/mL);中药组加入不同浓度黄芩苷(终浓度为50、100μmol/L),预处理1 h,后加入LPS或抵抗素。24 h后吸取上清,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组IL-1β和抵抗素浓度,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测抵抗素mRNA表达。【结果】与正常组比较,LPS组促进了巨噬细胞分泌抵抗素,抵抗素mRNA表达上调,LPS和重组抵抗素均促进了巨噬细胞产生IL-1β(P<0.05或P<0.01)。黄芩苷高、低剂量组均可显著抑制IL-1β和抵抗素的浓度,且抑制抵抗素mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。【结论】黄芩苷可明显降低促炎因子产生的炎症反应,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

木犀草素的体外抗炎机制研究

【目的】观察木犀草素对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞(小鼠单核/巨噬细胞系)核因子κB(NF-κB)和环氧合酶2(COX-2)表达及NF-κB DNA结合活性的影响,探讨其体外抗炎机制。【方法】以RAW264.7细胞为研究对象,选用对数生长期的细胞,分别设空白对照组,脂多糖(LPS)处理组(模型组),5、15、45μmol/L木犀草素处理组(中药低、中、高剂量组);加入药物30 min后再加入终浓度为1μg/mL的LPS继续培养12 h,分别采用酶免疫测定法(EIA)检测木犀草素对RAW264.7细胞前列腺素E2(PGE2)生成的影响;电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF-κB的DNA结合活性;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定RAW264.7细胞中COX-2 mRNA的水平;Western blot法测定RAW264.7细胞中NF-κB和COX-2蛋白的表达。【结果】木犀草素能显著性抑制LPS诱导的RAW264.7细胞PGE2的生成,降低NF-κB的DNA结合活性;下调LPS诱导的RAW264.7细胞COX-2 mRNA、NF-κB和COX-2蛋白的表达。【结论】木犀草素的抗炎作用可能与其能抑制核内NF-κB的表达和DNA结合活性从而下调COX-2的表达有关。     

甲型H1N1流感病毒在季流病毒、禽流感病毒共感染时变异可能性的验证

目的 甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009分别与A/Brisbane/10/07和A/ShenZhen/406H/06共感染小型香猪,预测甲流病毒在与季流H3N2病毒/甲流病毒与禽流感病毒共感染时是否会发生变异.方法 分别将A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)对5～6月龄小型猪共感染,小型猪经复方氯胺酮0.1 mL/kg麻醉后进行滴鼻感染,感染后第5天安乐死动物,取动物肺组织作病毒测序分析.结果 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2)共感染后,A/California/7/2009病毒PB1基因993位G→A突变,PA基因1659位G→A突变,没有氨基酸的变异.A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后A/California/7/2009病毒PB2基因1711位T→C突变.碱基的突变未引起氨基酸的变异.结论 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后在猪的体内没有发生病毒重组、变异.     

胰腺细胞缩胆囊素和胆碱能受体对细胞内Ca~2 的调节

本文使用Fura-2做为细胞内钙离子荧光指示剂,在大白鼠胰腺分离细胞观察缩胆囊素和乙酰胆碱对细胞内钙离子的影响及其相互作用.结果表明1nmol/L缩胆囊素和lmmol/L乙酰胆碱分别使细胞内钙离子浓度从基础水平的122±8nmol/L增高至360±32nmol/L和380±20nmol/L,半最大有效浓度分别为0.45nmol/L及54μmol/L。不同剂量的缩胆囊素和乙酰胆碱彼此不同程度抑制对方的作用,后加入的试剂提高细胞内钙离子浓度的幅度与先加入的试剂所引起的增加幅度成反比,加入各自相应的受体拮抗剂可使细胞恢复对另一激素(蛙皮素)刺激的反应。说明了缩胆囊素受体和胆碱能受体的相互调节影响细胞内钙离子的活动.加入受体拮抗剂后,细胞恢复反应过程中的时间动力学改变可能与受体阻滞后钙离子通道关闭的程度和时间有关.     

甲型H1N1流感病毒感染小鼠的发病机制

目的 甲型H1N1 流感病毒A/California/7/2009感染BALB/c小鼠,研究甲型H1N1流感病毒病毒性肺炎发病机制.方法 4～6 周龄雌性BALB/c 小鼠60只,随机分为2组,实验组和对照组,每组30只.CA7 流感病毒滴鼻制备甲流病毒感染小鼠模型.攻毒后第5天解剖实验和对照组小鼠,取肺组织,测定肺组织中IL-2,IL-6,TNF-α含量.结果 结果实验组肺组织中IL-6,TNF-α,水平明显高于对照组,IL-2水平明显低于对照组,差异均有显著性(P<0.05).结论 IL-6、TNF-α、IL-2这3种细胞因子在感染甲流病毒后的显著性变化与病毒感染后的肺组织病理损伤有密切的关系.     

A/California/7/2009与A/California/4/2009病毒感染力比较

目的甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009与A/California/4/2009病毒序列比较同源性在99%以上,本实验旨在比较两株病毒感染BALB/c小鼠研究感染力强弱。方法分别将A/California/7/2009(CA7)与A/California/4/2009(CA4)两株病毒分别连续10倍稀释后,对4~6周龄雌性BALB/c小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,每个稀释度接种10只实验小鼠,测定CA7 MLD50为101.24/0.05 mL,检测小鼠感染、致病的多项指标,观察期为14 d。结果相同TCID50的CA7和CA4病毒感染小鼠,CA4感染小鼠后14 d内死亡率为20%,而CA7感染小鼠后8 d内死亡率为100%。CA7 106TCID50感染的小鼠病理表现为重度弥漫性间质性肺炎,CA4 106TCID50感染的小鼠病理表现为中度-重度间质性肺炎。结论在相同条件下,CA7感染力明显强于CA4。     

可手术胃癌血清HER-2/neu ECD水平与临床特征及疗效的研究

目的：探讨可手术胃癌患者血清HER-2/neu胞外域部分(ECD)水平与临床特征及疗效的关系。方法：收集江苏省连云港市第二人民医院2010年01月至2010年12月,可手术胃癌患者46例进入研究,术前、术后收集血清,同时获取15例正常人、22例胃良性病变患者血清为对照组。另外收集7例血清HER-2/neu ECD阳性患...     

赐百龄胶囊质量标准的实验研究

赐百龄胶囊系选用螺旋藻为原料直接精制而成。本研究采用吸收光谱法鉴别蓝藻蛋白，可见６２０ｎｍ的特征吸收峰。采用三氯化锑试管反应鉴别β－胡萝卜素，显蓝绿色。采用ＴＬＣ鉴别氨基酸，可显７个斑点。采用ＴＬＣ鉴别多糖水解液，可显３个斑点，其中２个斑点与葡萄糖、半乳糖对应．采用氨基酸分析仪测定游离、水解氨基酸，含丰富的人体必需的氨基酸，总量高达５５％以上。采用凯氏定氮法测定总氮量，提示蛋白质总量高达６０％以上。采用柱层析－ＵＶ法测定β－胡萝卜素，含量为４４ｍｇ％。     

服镁后血镁钙及24小时尿钙和钙/肌酐比值变化

研究服镁后，血镁钙及24h尿钙和钙／肌酐比值变化及与妊高征发生的关系。方法：采用前瞻性随机双盲的方法，对治疗组52例（治疗1组24例和治疗2组28例）孕妇自孕28周起，连续服用葡萄糖酸镁，每日3g。结果：治疗组血钙明显高于对照组；治疗2组的尿钙和钙／肌酐明显高于对照2组，且妊高征发生率3．57％，明显低于对照2组（30．77％）；治疗组和对照组尿钙与钙／肌酐比值分别呈正相关关系。结论：服镁后，调节体内钙平衡，使妊高征发生率降低。     

镉对大鼠胚胎损害作用的实验研究

目的 :探讨镉对大鼠胚胎的毒性效应及可能机制。方法 :雌雄性 SD大鼠按 2∶ 1同笼交配获取 38只孕鼠 ,随机分为 4组 (对照组 ,低镉组 ,中镉组 ,高镉组 )。分别在妊第7、1 0、1 3天经腹腔注射生理盐水和不同剂量的氯化镉 ( Cd Cl2 ) ,妊 2 1 d,剖宫取胎鼠 ,活杀取出胎鼠的肝、脑组织称重后测定 Cd、Zn、Ach、AKP、DNA含量。结果 :1高镉组未见存活胎鼠 ;2染镉组胎鼠肝中镉增加 ( P<0 .0 5 ) ,脑中锌有下降趋势 ;3染镉组胎鼠肝组织中的AKP活性 ,脑组织中的 Ach、DNA含量较对照组减低。结论 :1高剂量的镉可使孕鼠胚胎发育异常 ;2母鼠染镉可致胎鼠肝中 AKP酶活性降低及脑组织中 Ach、DNA含量减少 ,抗脂质过氧化能力减弱。     

动脉粥样硬化相关性疾病血清胆红素与血脂检测结果分析

目的:探讨血清胆红素浓度与四种动脉粥样硬化( AS)性疾病的关系。方法:观察组分为四组,单纯性高血压组、冠心病组、糖尿病组、脑梗死组,对照组为同年龄段健康查体者,检测空腹血清总胆红素、直接胆红素、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇,计算间接胆红素,并对检测结果进行统计学分析。结果:与对照组比较,观察组中直接胆红素均有所下降,但差异无显著统计学意义( P>0 .0 5 ) ,总胆红素与间接胆红素除脑梗死组外,其他各组均明显降低( P<0 .0 5 ) ;除脑梗死组HDL - C与对照组无显著差异外,其他观察组血脂各指标与对照组比较均有显著统计学差异( P<0 .0 5 ) ,且糖尿病组三酰甘油及冠心病组低密度脂蛋白胆固醇与对照组比较有极显著统计学差异( P<0 .0 1 )。结论:高血压、冠心病、脑梗死、糖尿病等动脉粥样硬化相关性疾病血清胆红素浓度有不同程度降低,其中,间接胆红素降低更明显,提示可将胆红素水平作为AS患者体内氧化活性增加的一个临床监测指标     

黄体不健的生殖内分泌变化

黄体不健是不孕症的重要原因之一。本文对52例黄体不健者采用放射免疫法测定其早卵泡期血请FSH、LH、PRL、E_2和黄体中期血清PRL、E_2,P_0水平,并与正常对照组进行比较。结果表明:黄体不健组早卵泡期FSH、LH、E_2及黄体中期P_0水平较正常对照组低,而PRL水平则高于正常对照组,其差别均有显著或非常显著性意义(P<0.05或P<0.01)。由此说明,黄体不健与卵泡发育障碍有关。因而认为对黄体不健的治疗,如果采用补充黄体酮的方法仅是“治标”,而促进卵泡发育成熟才是“治本”。并认为中医药的周期疗法可能为此打开一条有效途径。