NGAL在肾损伤中的研究进展

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（Neutro-phil gelatinasas soeiated lipoealin,NGAL）作为新型肾损伤标志物成为最近研究的热点。NGAL是25KD的新型小分子蛋白质,1993年KjeldsenEl]在研究中性粒细胞中MMP-9时发现的。NGAL具有多种生物功能,参与人体内重要的生理、生化过程：疏水性小分子的运输作用、细胞内铁离子的转运、肿瘤细胞转移等。近年来发现NGAL在缺血性肾损伤及肾毒性因素所致肾损伤中高表达,动物试验发现其可能具有治疗作用,因此成为肾脏疾病相关分子研究的热点,本文就其研究进展情况进行综述。     

NGAL与代谢综合征的关系研究进展

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)是脂质运载蛋白家族的成员之一,作为一类新发现的脂肪细胞因子,广泛存在于机体发生代谢异常时的病变组织细胞内。NGAL可作为多种与糖脂代谢相关疾病的标志物,在肥胖-炎症-代谢综合征及其引起的胰岛素抵抗、糖脂代谢异常、血管内皮功能紊乱和动脉粥样硬化中发挥重要作用。     

冠心病患者血清NGAL和MMP-9的表达及临床意义

目的探讨冠心病（CAD）患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达及临床意义。方法应用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测74例不同类型的CAD患者（即急性心梗组11例,不稳定心绞痛组46例和稳定型心绞痛组17例）和18例正常对照者的血清NGAL和MMP-9水平。结果 CDA患者的血清NGAL水平为37.1±28.7 ng/mL,明显高于对照组（P〈0.05）。CDA患者的血清MMP-9水平为9.98±5.76 mg/L,明显高于对照组（P〈0.05）。急性心梗组、不稳定心绞痛组的MMP-9值与NGAL值呈明显正相关（r=0.387,P〈0.05和r=0.314,P〈0.05）,与Gensini积分无相关性。结论血清NGAL和MMP-9水平升高与斑块的不稳定性有关,可作为CAD患者病情评估和预测斑块不稳定性的一个重要指标。     

NGAL与不同类型冠心病的相关性研究

目的 探讨血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白水平与冠心病病程的关系.方法 对106例不同类型的冠心病患者行冠状动脉造影进行Gensini评分,应用双抗体酶联免疫吸附法检测患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白水平.结果 不稳定性心绞痛、稳定型心绞痛、急性心肌梗死三组患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白浓度均高于正常对照组,差别均具有统计学意义(P<0.05),且三组患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白水平与冠状动脉硬化Gensini积分呈显著正相关性(r=0.326,P<0.05).结论 血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白水平增高与冠状动脉硬化Gensini积分呈正相关性,血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白水平与冠心病病程密切相关.     

急性肾功能衰竭患者血清NGAL测定的临床意义

目的探讨急性肾功能衰竭（ARF）患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）水平变化及其临床意义。方法应用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测80名健康对照者和76例ARF患者治疗前后的血清NGAL水平。结果 ARF患者血清NGAL水平较健康对照者明显增高,其差异具有统计学意义（P〈0.01）。ARF患者治疗后血清NGAL水平较治疗前明显降低,其差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论动态检测ARF患者血清NGAL水平变化,对监测ARF病情变化及预后判断有重要价值。     

慢性心力衰竭患者尿液NGAL水平与肾功能恶化的关系

目的 探讨慢性心力衰竭患者尿液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)水平与患者发生肾功能恶化的关系.方法 慢性心力衰竭的患者共38例,采集入院和3天时尿液标本,用ELISA法测定尿液NGAL水平.根据患者肾功能是否恶化,将患者分为肾功能恶化组和肾功能未恶化组,比较两组间入院和3天时尿液NGAL水平.结果 38例患者中有11例患者(28.9％)发生了肾功能恶化.肾功能恶化组患者入院和3天时尿液NGAL水平分别高于肾功能未恶化组患者(P＜0.01);且肾功能恶化组患者入院时尿液NGAL水平明显低于3天时尿液中NGAL水平(P＜0.01).肾功能恶化组患者入院和3天时尿液NGAL水平与血肌酐差值(3天和入院时)之间呈正相关.结论 尿液NGAL水平升高可能作为慢性心力衰竭患者肾功能恶化的早期预警信号.     

NGAL 及 MMP9在原发性肝癌患者血清中表达及意义

目的：探讨原发性肝癌（PHC）患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL ）及基质金属蛋白酶9（MMP9）的变化及临床意义。方法采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测47例 PHC 患者（PHC 组）及19例健康体检者健康血清中 NGAL 及 MMP9水平,并分析二者与临床病理的联系,同时使用 ROC 曲线分析二者对 PHC 的诊断价值,Kaplan-Meier 生存曲线分析不同 NGAL 、MMP9水平的生存差异。结果 PHC 组 NGAL 、MMP9水平明显高于健康体检者对照组,差异有统计学意义（P＜0．05）;NGAL 及 MMP9的水平在Ⅲ～Ⅳ期组高于Ⅰ～Ⅱ期,差异有统计学意义（P ＜0．05）;血清 MMP9、NGAL 检测灵敏度分别为70．2％和83．0％。二者联合检测可提高灵敏度至94．9％。 Kaplan-Meier 生存分析发现血清 NGAL 水平高患者预后差。结论 PHC 患者血清 NGAL 及 MMP9与 PHC 的发生、发展密切相关;联合检测血清水平 NGAL 及 MMP9可明显提高敏感度,对 PHC 诊断及预后指标有一定的价值。     

NGAL与肾脏疾病关系的研究进展

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是目前研究较多的一种脂质运载蛋白,其可能与炎症、肿瘤、肾脏疾病等密切相关。近年来研究发现,NGAL可作为早期检测急性肾损伤(AKI)的一个敏感指标,并对肾脏有保护作用。新近研究发现,NGAL也可作为慢性肾脏疾病(CKD)的一个有效的、易于检测的标志物,且比其他评估肾脏损害的指标更为敏感,其能更早期地发现肾脏的损害,为肾脏疾病的预防、早期诊断和治疗开辟新道路。     

血清NGAL与NLR在代谢综合征中的预测价值

目的：观察血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase?associated lipocalin,NGAL）水平与中性粒细胞?淋巴细胞比值（neutrophil?lymphocyte ratio,NLR）的相关性,探讨NGAL联合NLR对代谢综合征（metabolic syndrome,MS）诊断的预测价值。方法：选取本院非MS（Non?MS）组及MS组各60例,所有研究对象行口服葡萄糖耐量试验（oral glucose tolerance test,OGTT）和胰岛素释放试验,检测NGAL、NLR、血糖、血脂等相关生化指标。结果：MS组血清NGAL水平高于Non?MS组（P < 0.01）。NGAL与体重指数（BMI）、腰围（WC）、腰臀比（WHR）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、空腹血糖（FPG）、OGTT 2 h血糖（2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、甘油三酯（TG）、HOMA?IR、NLR呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇（high density lipopmtein cholesterin,HDL?C）及胰岛β细胞功能（HOMA?β）呈负相关（P＜0.05或P＜0.01）。Logistic回归分析显示,随着血清NGAL及NLR水平升高,MS的发病风险呈上升趋势（P＜0.05）。ROC曲线分析提示,NGAL联合NLR预测MS的曲线下面积（AUC）为0.683（95%CI：0.592~0.765）,优于单用NGAL（AUC=0.664,95%CI：0.573~0.748）］NLR（AUC=0.598,95%CI：0.505～0.687）（P＜0.01）。结论：MS患者NGAL水平与NLR呈正相关,NGAL联合NLR预测MS优于单独使用NGAL及NLR。     

抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体的研制及其检测试剂的初步应用

目的 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在国际上已成为临床诊断急性肾损伤(AKI)的主要生物标志物.该课题主要研制抗人NGAL单抗及探讨其国产化诊断试剂的初步应用.方法 预测NGAL抗原表位并结合NGAL的晶体结构,设计合成抗原表位肽并与血蓝蛋白偶联,免疫小鼠制备抗NGAL单抗;人工合成NGAL基因构建原核表达载体pET-DsbA-NGAL,诱导表达后分离纯化重组NGAL蛋白,研制NGAL标准品;建立双单抗体夹心ELISA法,检测该方法的线性范围、检测限、灵敏度和精密度,同时检测20份健康对照组和20份AKI患者血清和尿液样品.结果 针对NGAL两个表位(21-34aa;58-71aa)分别获得了4株和3株能够稳定分泌抗NGAL单抗的细胞株;ELISA法最低检出限为0.25 ng/ml,标准曲线在2.5～125.0 ng/ml范围内线性良好,批间变异CV值均小于10％;冻干NGAL标准品在4℃稳定达6个月;AKI组血清和尿液中NGAL含量分别为(589.5±75.5)和(89.4±12.4)ng/ml,而健康对照组血清和尿液中NGAL含量分别为(58.8±9.5)和(7.2±1.4)ng/ml;两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 该研究获得了抗人NGAL单抗及其基因工程NGAL标准品并建立了ELISA定量检测试剂,为实现NGAL临床免疫检测诊断试剂的国产化提供了良好的技术基础.     

人L-选择素的原核表达及多克隆抗体的制备

目的：构建人L-选择素原核表达载体,表达并纯化人L-选择素重组蛋白,制备兔抗人L-选择素多克隆抗体。方法：利用人L-选择素cDNA的N末端胞外结构区153个氨基酸的开放阅读框架(ORF),通过PCR方法扩增出人L-选择素目的片段。将扩增的基因插入表达载体pQE40的BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点之间,再经转化使其在大肠杆菌M15中表达,产生含6-His-tag的融合蛋白。融合蛋白经Ni亲合层析柱纯化和SDS-PAGE分析后,用以免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体。最后经Western blotting检测和斑点杂交（DIBA）进行抗体效价测定。结果：酶切鉴定和DNA测序显示,pQE40-L-选择素重组表达载体含有人L-选择素N末端结构区153个氨基酸的cDNA序列;通过在大肠杆菌M15中的表达和纯化分析,获得了蛋白含量为600 mg·L^-1的人L-选择素蛋白;通过免疫新西兰白兔和抗体效价测定,得到抗血清效价达1∶1 000的多克隆抗体。结论：人L-选择素蛋白可在M15大肠杆菌中高效表达,其多克隆抗体效价较高。     

人睾丸特异表达基因PIAS-NY 原核表达 和多克隆抗体的制备

目的 构建PIAS-NY-pET30a 原核表达载体,并诱导其成功表达,经纯化后获得高浓度的可溶性融 合蛋白His-PIAS-NY,免疫小鼠获得鼠源性PIAS-NY 多克隆抗体。方法 以人精原cDNA 文库为模板,通过 聚合酶链反应（PCR）扩增PIAS-NY 开放阅读框,克隆到pET30a 表达载体中,酶切、PCR 鉴定构建重组质粒。 测序完全正确后将质粒PIAS-NY-pET30a 转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行大量扩增,异丙基-β-D- 硫 代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。超声、离心、His-Ni 柱亲和层析纯化包涵体蛋白,依次经过不同浓度尿素进 行蛋白质复性,获得高浓度的可溶性His-PIAS-NY 融合蛋白。分6 次BalB/C 小鼠腹腔注射乳化纯化蛋白。 2 个月后小鼠眼球取血,收集血清。结果 成功构建原核表达质粒PIAS-NY-pET30a ;利用终浓度1 mmol/L IPTG 37℃诱导4 h,大肠杆菌BL21 大量表达融合蛋白His-PIAS-NY,并以包涵体形式存在于菌体中;尿素 变性后His-Ni 柱纯化融合蛋白,复性后获得高浓度的可溶性蛋白His-PIAS-NY ;6 次免疫后收获存活小鼠 抗血清;酶联免疫吸附测定（ELISA）抗血清滴度达到1 ∶ 100 000 ;免疫印迹和免疫共沉淀证实PIAS-NY 抗血清能特异性识别293T 细胞和GC2 细胞中PIAS-NY 蛋白。结论 成功获得PIAS-NY 多克隆抗体,而且 具有高反应性和高特异性,PIAS-NY 在GC2 细胞和293T 细胞中表达,并且能够与RUVBL2 蛋白发生相互作用。     

Myosin-Vc特异性片段的原核表达及其抗血清的制备

目的 原核表达Myosin-Vc(Myo5c)蛋白并纯化,制备小鼠、家兔多克隆抗体,为探索MyoSc在病毒感染中的作用提供研究工具.方法 采用RT-PCR方法从人胃粘膜组织中克隆编码Myo5c特异性蛋白的基因片段,构建该片段与6×His标签的融合蛋白表达质粒pQE-31/Myo5c,原核表达与蛋白纯化后,分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,制备Myo5c抗血清.采用ELISA检测抗体效价,Western blot和间接免疫荧光染色检验抗体特异性.结果 获得Myo5c特异性片段约42×103的纯化蛋白.ELISA检测小鼠和家兔抗血清效价分别为1:12 800、1:6 400.Western blot和间接免疫荧光染色显示所制备的抗体能特异性识别Myo5c.结论 获得Myo5c特异性蛋白,并成功地制备了Myo5c特异性的小鼠和家兔抗血清.     

肾脏中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的表达与肝硬化时肾功能的关系

目的 观察肝硬化模型中肾脏中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）表达与肾功能受损之间的关系.方法 选择60只SD雄性大鼠,其中27大鼠在建模过程中死亡,5只SD雄性大鼠作为空白对照,28只SD雄性大鼠经持续服用四氯化碳诱导形成肝硬化腹水模型,按照免疫组化检测肾脏表达NGAL的强度和阳性细胞数建立不同级别组：低度表达组,中度表达组,高度表达组,极高表达组.Western blot测定各组NGAL的表达,并通过检测蛋白条带的光密度值进行半定量分析.通过全自动生化分析仪测定肌酐（Cr）及尿素氮（BUN）.结果 28只大鼠出现肝硬化腹水,Western blot半定量检测发现各组之间差异有统计学意义（P＜0.05）,极高表达组表达量最高,而高度表达组、中度表达组、低度表达组表达量依次降低;肾脏NGAL的表达越强,大鼠血中BUN、Cr升高的越多,且差异有统计学意义（P＜0.05）.肾脏NGAL表达主要分布在近曲肾小管及远端肾单位.结论 在肝硬化腹水肾脏功能损伤时,肾脏NGAL主要分布于近曲肾小管及远端肾单位,且其表达提示肾脏损伤程度.     

中性粒细胞明胶酶载脂蛋白在慢性阻塞性肺疾病不同阶段的改变及意义

目的观察中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)在慢性阻塞性肺疾病不同阶段水平的改变及其临床意义。方法随机选择慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者(AECOPD)57例,稳定期患者30例,对照组28例,应用ELISA法检测血浆NGAL水平及超敏C反应蛋白(hs-CRP)等指标,同时进行肺功能和动脉血气监测。结果慢性阻塞性肺疾病急性期和稳定期及对照组NGAL水平分别为(105.32±17.11)μg/L、(74.36±14.29)μg/L、(58.76±10.68)μg/L,3组间比较差异有统计学意义(P0.01)。NGAL水平与动脉血氧分压(PaO2)、FEV1%预计值、FVC%预计值、中性粒细胞数、hs-CRP水平等有关。结论慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者的血浆NGAL水平明显升高,且和肺功能、动脉血气等指标相关,NGAL有可能作为评估AECOPD新的标志物。     

Mrell多克隆抗体的制备及初步鉴定

目的原核表达人Mrell蛋白,并制备出Mrell蛋白的多克隆抗体,为研究Mrell蛋白功能奠定基础。方法以人cDNA文库为模板,构建出原核表达质粒PET41a—Mrell,然后转化受体茵E-coliBL21,再经IPTG诱导表达,通过采用GST亲和纯化获得GST-融合蛋白,将该融合蛋白免疫免以制备出Mrell多抗血清,最后采用western—blot及免疫荧光等方法检测其在细胞中的特异性。结果在受体茵E-coliBI。21中成功诱导表达出了GST—Mrell融合蛋白,免疫新西兰大白兔后获得了高效价的Mrell蛋白抗血清,IP、western—blot及免疫荧光等多种方法检测证实该抗血清能够特异性识别293T和U20S细胞株中Mrell蛋白,并能够正确清楚检测293T和U20S细胞株中的Mrell表达情况,具有良好的特异性和高效性。结论成功制备出了兔抗人Mrell蛋白的多克隆抗体,为深入研究Mrell蛋白在DNA损伤中的功能奠定了基础。     

NGAL在急性药物相关性间质性肾炎中的表达及其意义

目的了解急性药物相关性间质性肾炎(acutedruginducedinterstitialnephritis,AIN)患者肾组织中NGAL的表达及NGAL与肾小管间质病理损害程度的关系。方法免疫组化观察正常肾组织和AIN患者肾组织NGAL的表达,以及NGAL阳性强度与小管间质病理损害程度的关系。结果AIN患者肾组织表达NGAL较正常组增多、增强;其小管NGAL阳性强度与小管间质病理损害程度呈负相关。结论NGAL在AIN肾小管间质病理损害中起重要作用。     

UROC28基因的原核表达及抗UROC28多抗制备和初步应用

目的: 在原核细胞大肠杆菌中融合表达UROC28基因产物,分离、纯化后制备其特异性多克隆抗体,并初步应用于肿瘤标本的检测,为进一步研究该分子的功能和组织分布等提供条件. 方法: 利用DNA重组技术将UROC28基因克隆入融合表达载体pRSET-c质粒,并在大肠杆菌BL-21中融合表达目的蛋白,回收后制备兔抗血清,Western blot鉴定抗体后,应用该抗体对前列腺癌石蜡切片进行免疫组化染色. 结果: His-UROC28融合蛋白的Mr约为22 000,与预期相符;融合蛋白占菌体总蛋白的20%. 目的蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体,Western blot结果显示制备的抗UROC28多克隆抗体具有较高的特异性,无明显交叉反应,并成功在前列腺癌组织标本中检测UROC28的表达. 结论: 本研究成功构建了UROC28融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达. 制备了该分子的多克隆抗体,经初步验证其效价高、特异性好,为深入研究UROC28的功能及其与疾病的关系创造了条件.     

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白在妇产科领域中的研究进展

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是一种敏感的早期疾病预测指标,在急慢性肾损伤方面作用尤为突出,属于脂质运载蛋白lipocalin家族中的一员,且该指标已逐渐用于临床.NGAL与机体的多种生理病理过程联系紧密,与炎症免疫应答、信号转导、细胞分化及肿瘤的发生发展、胰岛素抵抗等过程密切相关.近年来,国内外研究学者...