体外直接诱导人胚胎干细胞向神经细胞分化的研究

目的探讨体外直接诱导HSF6人胚胎干细胞(humanem bryonic stem cells,hESCs)分化为神经细胞的方法。方法采用直接的方法,在1%血清培养条件下,顺序添加bFGF、RA和Forskolin,诱导HSF6人ESCs分化为神经细胞。结果细胞发生神经样形态学改变,免疫荧光细胞化学分析结果显示,分化细胞表达神经干细胞特异性标志分子——巢蛋白(nestin),以及神经元标志分子——β微管蛋白Ⅲ(neuron-specific class Ⅲ beta-tubulin,TuJ1)。实验组nestin阳性细胞数占(95.2±3.03)%,明显高于未添加诱导因子组的(31.6±4.93)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究直接诱导hESCs分化为神经细胞,减少了常规经胚胎体(embryoid body,EB)的诱导方法而产生其它胚层细胞的机会,为进一步探索hESCs源性神经细胞的功能,以及为细胞替代治疗提供高纯度的hESCs源性神经细胞奠定了基础。     

胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的实验研究

目的 探讨胚胎干细胞（ＥＳ）向神经细胞定向分化发育的可能性。方法 ＥＳ－Ｄ３在无小鼠白血病抑制因子（ｍＬＩＦ）存在的条件下培养ＥＳ细胞４ｄ,形成ＥＳ集落（即胚胎样小体）,经胰酶消化打散后种植于粘附性培养皿上。结果 上述细胞表达ＭＡＰ－２和ＧＦＡＰ蛋白。ＲＴ－ＰＣＲ分析进一步证明这些细胞能表达γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）γ亚单位和酷氨酸羟化酶以及脑因子－１神经相关基因。结论 ＥＳ细胞在体外能有效地被诱导成具有多种神经元特性的神经样细胞,可为神经移植提供源源不断的材料。     

胚胎干细胞体外定向诱导分化为神经细胞的方法

胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)是从着床前胚胎(孕3~5 d)的内细胞群(inner cell mass,ICM)或原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)等分离得到的能在体外培养的一种高度未分化细胞。早在1981年Evans及Martin分别成功分离培养了小鼠的胚胎干细胞系。1998年Thomoson     

体外分离培养Balb/c小鼠胚胎干细胞向神经细胞定向诱导分化

目的: 探讨体外分离培养、诱导胚胎干细胞(ESCs)分化为神经细胞的高效方法. 方法: 自孕3.5 d的Balb/c小鼠获得附植前的早期胚胎,机械剥离法去除胚胎的滋养层细胞获取内细胞团(ICM)分别在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层上和明胶包被的培养板中培养获得类ESCs克隆. 进行碱性磷酸酶染色,SSEA-1细胞免疫化学鉴定及体内分化实验鉴定. 模拟体内神经系统发育过程采用序贯诱导方法定向诱导ESCs分化为神经细胞,进行分化后细胞的免疫细胞化学鉴定. 结果: 所分离得到的细胞碱性磷酸酶染色阳性,SSEA-1表达阳性,体内分化实验证实具有多向分化潜能. 符合ESCs的一般特性. 经过序贯诱导方法可以高效诱导ESCs分化为神经细胞. 结论: 体外分离得到的Balb/c小鼠的ESCs经过模拟体内神经系统发育过程经过序贯诱导方法可以高效的诱导为神经细胞,且所获得的神经元比例高.     

胚胎干细胞向神经细胞分化的研究进展

胚胎干细胞 (Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ ,ＥＳｃ)是从附置前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外抑制分化培养的一种全能性细胞系。早在 1981年 ,英国剑桥大学的Ｅｖａｎｓ和Ｋａｕｆｍａｎ用延缓着床的胚泡、美国加州大学旧金山分校的Ｍａｒｔｉｎ用条件培养基分别成功地分离、体外培养了小鼠ＥＳｃ。除小鼠外 ,还有金黄地鼠、猪、牛和猴等动物的胚胎干细胞系成功建立。 1998年Ｔｈｏｍ ｓｏｎ和Ｇｅａｒｈａｒｔ分别建立了人胚胎干细胞系[1 ] 。ＥＳｃ既具有细胞系可扩增、遗传操作和冻存的特点 ;又类似胚胎细胞 ,含有正常的二倍…     

成人骨髓间充质干细胞体外诱导向神经细胞分化

目的:探讨成人骨髓间充质干细胞(MSC)向神经细胞体外定向诱导分化的条件. 方法:从正常成人志愿者髂骨中分离获取MSCs,体外培养扩增纯化后传代于塑料培养皿中,采用2-巯基乙醇(BME)和二甲亚砜(DMSO)对传至3～5代的细胞进行体外诱导分化,采用免疫细胞化学法对诱导后的细胞鉴定. 结果:诱导1 h有部分细胞表达神经干细胞标志巢蛋白nestin,4 h后大部分细胞具有典型神经元形态,表达晚期神经元标志物-中间神经丝蛋白(NF-M),部分具有神经元形态的细胞表达微管相关蛋白-2 (MAP-2). 结论:成人骨髓间充质干细胞可以在体外培养扩增并诱导成为神经元样细胞.     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化

目的：探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向神经细胞体外定向诱导分化的条件。方法：从正常SD大鼠骨髓中分离获取MSC,体外培养扩增纯化后传代于塑料培养皿中,采用丁羟茴醚(BHA)和二甲亚砜(DMSO)对传至3～5代的细胞进行体外诱导分化,采用免疫细胞化学对诱导后的细胞进行鉴定。结果：诱导1h、2h、3h后有部分细胞表达神经干细胞标志蛋白nestin,且随诱导时间延长呈下降趋势;诱导5h后,大部分细胞具有典型神经元形态,表达神经元标志物,神经元特异性烯醇化酶(NSE),少部分细胞呈星型胶质细胞状,表达胶质细胞标志物—胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结论：骨髓间充质干细胞可以在体外培养扩增并诱导成为神经元样细胞和星型胶质样细胞。     

胚胎干细胞体外诱导分化研究进展

自 198 1年以来 ,英国的Ｅｖａｎｓ等[1] 和美国的Ｍａｒｔｉｎ[2 ] 相继从小鼠囊胚的内细胞团分离建立胚胎干细胞系以来 ,胚胎干细胞体外诱导分化研究就一直是各国学者感兴趣的课题。目前 ,已从胚胎干细胞体外诱导出卵黄囊、血岛、神经细胞、心肌细胞、血管和内皮等结构及细胞。利用胚胎干细胞体外诱导分化的成果可望发展出治疗多种疾病的新方法 ,将在人体早期发育、基因功能、药物开发、细胞治疗和组织器官替代治疗中发挥重要作用 ,并成为组织器官移植的新资源。1　ＥＳ细胞的特性胚胎干细胞 (ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ,ＥＳ细…     

脂肪干细胞向神经细胞诱导分化研究进展

随着干细胞研究的不断深入,人们对胚胎干细胞、骨髓干细胞等干细胞的研究取得很大成就.现由于脂肪干细胞来源丰富,便于提取,并且与骨髓于细胞均来源于中胚层,具有自我修复能力和多向分化潜能,在特定的环境条件下可以诱导脂肪干细胞向多种细胞(神经细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、软骨细胞、心肌细胞等)分化.目前诱导脂肪肝细胞向神经细胞分化具有治疗勃起功能障碍的潜能,同时在治疗其他神经损伤方面有一定的疗效,因此脂肪干细胞向神经细胞诱导分化是值得我们进一步探索和研究的.     

βⅢ-微管蛋白在人胎肾发育不同时期的表达及意义

目的:观察βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)在人胎肾发育不同时期的表达,初步探讨其在肾胚胎发育过程中的意义。方法:取11～32周人胎肾10例,常规石蜡包埋切片,免疫组织化学二步法检测βⅢ-tubulin在不同阶段胎肾组织上的表达情况,图像分析软件分析结果。结果:正常人胎肾中,在肾浅层皮质生后肾组织帽、原始肾小球、分化早期肾小管有βⅢ-tubulin阳性表达,呈棕黄色;在深层皮质成熟肾小球和肾小管未见表达;被膜、髓质可见血管内皮表达。结论:βⅢ-tubulin主要表达于肾小球形成初期,成熟肾小球和肾小管未见表达,提示其可能在胎肾的肾小球形成早期起作用,随着发育的成熟而消失。     

大鼠不同发育期脑神经元核抗原的表达研究

目的研究正常大鼠不同发育阶段脑神经元核抗原(neuronal nuclei,NeuN)的表达。方法应用免疫组化及West-ern blot观察不同发育阶段大鼠NeuN的表达及变化。结果各发育阶段大鼠脑皮质及海马NeuN免疫组化阳性染色细胞随日龄逐渐增加,积分光密度值P0、P2、P7、P15各组之间比较差异有统计学意义。P15、P30、P90 3组间差异无统计学意义。Westernblot检测各组全脑NeuN相对光密度值随大鼠日龄逐渐增大,至P30达高峰,其后有所下降。除P15、P30组之间差异无统计学意义外,其余各组之间差异均有统计学意义。结论大鼠脑NeuN蛋白自出生时已有少量表达,P2~P15迅速增加,P30已达高峰,提示大鼠脑灰质发育优先于白质。     

大鼠胰腺发育不同阶段肝细胞生长因子受体编码基因的表达

目的研究肝细胞生长因子受体编码基因c-met在大鼠胰腺发育不同阶段的表达。方法采用高密度寡核苷酸芯片对孕12.5 d（E12.5）、孕15.5 d和孕18.5 d、新生、成年胰腺进行基因转录水平分析,并用RT-PCR技术验证基因在大鼠胰腺不同发育时期的表达。结果c-met基因在E15.5、E18.5较成年特异性高表达。经RT-PCR验证,c-met基因表达趋势与芯片结果相符;与芯片c-met探针所用引物不同RT-PCR,结果却在各发育阶段呈现与芯片不同的表达趋势。结论提示c-met可能在胰腺发育过程中起到调控作用,参与胚胎胰腺发育中晚期细胞功能完善的信号传导过程。并且c-met在胰腺发育中发挥作用有可能存在不同转录本。     

正常妊娠不同时期胎盘组织中chemerin的表达

目的 探讨正常妊娠不同时期胎盘组织中chemerin水平变化,及其与妊娠进展的关系.方法 选取妊娠早期孕妇20例,妊娠中期孕妇15例,妊娠晚期孕妇30例,采用免疫组织化学技术和实时定量PCR技术检测各妊娠组胎盘绒毛组织中chemerin水平.结果 chemerin阳性染色颗粒主要表达于胎盘组织中的合体滋养细胞及细胞滋养层细胞胞质中,各期均有不同程度的表达,妊娠晚期近临产组chemerin表达水平与早、中期妊娠组相比明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 chemerin可能在维持妊娠期间母胎免疫应答中起重要的作用.     

PEA3基因在大鼠肾脏组织不同发育时期的表达

目的:探讨PEA3基因在大鼠肾脏组织发育后期不同阶段的表达变化,分析PEA3基因与肾脏发育的关系。方法:获取出生后第1、7、21天和成年大鼠肾脏组织,采用RT-PCR技术检测肾脏组织中PEA3基因mRNA的表达水平。结果:PEA3基因在新生鼠肾脏表达丰富(64.09±10.12)%,出生后7天表达明显减少(22.43±7.97)%,出生后21天(12.79±2.90)%和成年鼠肾(11.17±3.08)%表达微弱,除出生后21天和成年大鼠两组间表达没有统计学差异外,其他各组表达差异均有统计学意义。结论:PEA3基因的表达水平随肾脏发育的成熟而下降,可能与肾脏发生发育有关。     

Prominin1在C57BL/6小鼠视网膜色素上皮中的表达

目的 探究Prominin1在不同发育时期小鼠视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium, RPE）的表达。方法 孕鼠和出生后的Prom1cre/ERT2+/Gt(ROSA)26SorCAG-ZsGreen1+转基因小鼠,腹腔注射他莫昔芬,将视网膜组织冰冻切片后,采用激光共聚焦显微镜检测Prominin1在转基因小鼠RPE中的表达;利用荧光定量PCR和免疫荧光技术检测Prominin1在野生型小鼠不同发育时期RPE中的表达。结果 对13.5d（E13.5）、15.5d（E15.5）和出生后1d（P1）小鼠的研究结果显示： Prominin1可能在胎鼠的部分RPE表达,出生后小鼠不表达。定量PCR显示： Prominin1在胎鼠RPE（E10.5、E13.5、E15.5和E17.5）表达明显高于出生后（P1和P14）（P<0.01）;在胚胎时期,Prominin1在E13.5和E15.5的RPE表达明显高于其他时期（P<0.05或P<0.01）。免疫荧光染色结果显示,Prominin1在E10.5、E13.5、E15.5和E17.5的RPE表达,而在P1不表达。结论 Prominin1在胎鼠视网膜色素上皮中表达,在E13.5和E15.5的胎鼠中尤为明显。     

不同发育时期胚胎肝Cx基因的表达

为探索不同分化阶段胚胎肝中细胞连接蛋白（Ｃｘ）基因表达的时间顺序，规律及其与细胞分化的关系，本文采用Ｃｘ基因系列作为分子探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法，研究了不同发育时胚胎肝中Ｃｘ基因表达状态。     

大鼠胰腺发育中肝细胞因子受体编码基因的表达及蛋白定位

目的 研究肝细胞因子受体编码基因c-met在大鼠胰腺发育不同阶段的表达及其编码蛋白的细胞定位.方法 采用RT-PCR技术检测c-met基因在大鼠胰腺不同发育时期:孕15.5 d(E15.5)和孕18.5 d(E18.5)、生后14 d(P14)、生后21 d(P21)、新生及成年胰腺的表达;并用免疫组化技术检测该基因编码的蛋白c-MET在胰腺发育不同阶段的细胞定位.结果 c-met基因在E15.5、E18.5 d较成年特异性高表达,免疫组化结果显示该基因编码的蛋白c-MET在新生后的胰腺大量定位于胰岛细胞.结论 c-met可能在胰腺发育过程中起到调控作用,参与胰腺发育中新生后胰岛结构重塑过程.     

人不同胎龄胎脑海马神经干细胞发育规律初探

目的探讨人不同胎龄胎脑海马部位神经干细胞的发育规律.方法收集胎龄16～32周的水囊引产胎儿100例,采用免疫组织化学和光镜技术对人胎脑海马部位神经干细胞的分布、形态、存在方式以及数量进行检测.结果不同胎龄胎脑海马均存在神经干细胞,神经干细胞位于海马多形细胞层、锥体细胞层、颗粒细胞层及分子层,以多形细胞层、锥体细胞层及颗粒细胞层多见.细胞呈圆形、椭圆形、三角形及星形,以圆形和椭圆形多见,未见明显突起.细胞胞浆丰富,核呈圆形及椭圆形,染色质疏松,2～6个核仁不等.多数单个散在分布于其它神经元间,可见对称分裂现象,但有的神经干细胞呈簇状及群状分布,各组神经干细胞随着胎龄的增加呈减少趋势.结论人不同胎龄胎脑海马广泛存在神经干细胞,各胎龄神经干细胞在分布部位、形态、存在方式及数量上存在一定的差异,海马可能是神经干细胞新的生发区.     

胰腺发育不同阶段转录因子表达的研究进展

1型糖尿病主要因胰岛β细胞破坏引起胰岛素绝对缺乏,2型糖尿病兼具胰岛素抵抗和胰岛素分泌缺陷。但目前的药物及激素替代治疗无法根本治愈糖尿病,只能延缓其进程。近年来通过体外诱导多能干细胞或成体细胞转变为胰岛素分泌细胞的研究,为治疗糖尿病提供了新的希望。本文旨在对胰腺β细胞发育过程中所表达的转录因子及其作用的相关研究进展进行综述。