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相似文献
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1.
目的:探讨瘦素对主动脉瓣膜间质细胞(valvular interstitial cells,VICs)表型转化的影响,揭示瘦素在钙化性主动脉瓣疾病(calcific aortic value disease,CAVD)发生发展中所扮演的角色。方法:胶原酶消化法分离并培养猪主动脉瓣膜间质细胞,采用含不同浓度的瘦素分别刺激细胞24 h,检测细胞裂解液碱性磷酸酶(ALP)活性,并确定最佳刺激浓度。用最佳刺激浓度的瘦素刺激细胞24 h,提取细胞RNA以及蛋白,通过RT-PCR以及Western blot分别测定肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)的表达情况。结果:瘦素刺激导致ALP表达上调且最大刺激浓度为100 ng/mL。相较于对照组,瘦素刺激组 OPN mRNA及蛋白表达增高,而α-SMA表达无明显变化。结论:瘦素能够诱导VICs向成骨细胞分化,从而促进VICs钙化。  相似文献   

2.
目的:探究胰高血糖素样肽?1(glucagon like peptide?1,GLP?1)对高脂高胆固醇饮食小鼠主动脉瓣钙化的影响,揭示GLP?1在钙化性主动脉瓣疾病(calcified aortic valve disease,CAVD)发生发展中的保护作用及作用机制。方法:SPF级C57BL/6小鼠36只(8周龄,雌性)随机分成4组(n=9),正常饮食组和GLP?1对照组给予正常饮食,高脂饮食组和GLP?1干预组给予高脂高胆固醇+维生素D2饮食,GLP?1对照组和GLP?1干预组在此基础上给予GLP?1处理。12周后,测量各组小鼠二维超声心动图指标,包括主动脉瓣口面积、左室射血分数、瓣叶厚度、左室收缩末内径、跨瓣流速,测定血清钙浓度,von Kossa染色观察瓣膜组织钙化情况,免疫组化法检测各组主动脉瓣标本中骨桥蛋白以及相关信号通路磷酸化p38蛋白的表达水平。结果:①正常饮食组、GLP?1对照组和GLP?1干预组小鼠瓣叶厚度、跨瓣流速、左室收缩末内径及血清钙离子浓度均低于高脂饮食组,而瓣口面积及左室射血分数均高于高脂饮食组(P<0.05);②正常饮食组、GLP?1对照组和GLP?1干预组主动脉瓣膜标本中骨桥蛋白以及相关信号通路磷酸化p38蛋白的表达水平明显低于高脂饮食组(P<0.05)。结论:GLP?1可能通过抑制磷酸化p38蛋白的表达而抑制小鼠主动脉瓣膜的钙化。  相似文献   

3.
4.
目的:探讨子宫内膜异位症(EMS)患者在位内膜腺上皮细胞中骨桥蛋白(OPN)对核因子κB(NF-κB)p65表达的影响及其与细胞侵袭的关系。方法原代分离培养12例EMS患者在位内膜原代腺上皮细胞。采用OPN siRNA干扰细胞24 h后收集,Western blot、RT-PCR方法分别检测干预前、后细胞中OPN、NF-κBp65蛋白及其mRNA表达情况;Transwell试验检测干预前、后细胞侵袭性的变化。采用相同剂量的无RNA酶水干预EMS患者在位内膜腺上皮细胞作为未干预组。结果与干预前比较,OPN siRNA干扰后细胞中OPN蛋白、mRNA的表达明显下降(t1=7.92,t2=9.87,P<0.05);与未干预组比较差异无统计学意义(P>0.05);OPN siRNA干扰后细胞中NF-κBp65蛋白及mRNA的表达明显减弱(t1=—2.13,t2=— 8 .61,P<0.05),与未干预组比较差异无统计学意义(P>0.05)。OPN siRNA干扰后原代腺上皮细胞的侵袭性明显降低(t=2.38,P<0.05),与未干预组比较差异无统计学意义( P>0.05)。O PN、N F-κBp65在 EM S患者在位内膜腺上皮细胞中的表达呈明显的正相关( r=0.87)。结论 OPN siRNA沉默EMS患者腺上皮细胞中的OPN后OPN、NF-κBp65的表达及细胞的侵袭性均明显降低,且二者呈明显正相关,揭示二者极有可能在异位细胞的侵袭中发挥同步协调作用。  相似文献   

5.
目的 研究微小核糖核酸141(miRNA-141)调控骨形成蛋白-2(Bone morphogenetic protein 2, BMP-2)诱导人主动脉瓣钙化的机制。方法 收集24例人退行性主动脉瓣,用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)检测miRNA-141和BMP-2 mRNA及蛋白的表达水平。人原代主动脉瓣膜间质细胞(human aortic valve interstitial cells, HAVIC)中上/下调miRNA-141表达,Von Kossa染色比较细胞钙化,并比较远端缺失同源盒5(Distal-less Homeobox 5, Dlx5)的mRNA以及BMP-2蛋白表达;双荧光素酶法验证Dlx5为miRNA-141的靶基因。在主动脉瓣钙化小鼠和Dlx5基因敲除主动脉瓣钙化小鼠中,上/下调miRNA-141表达,Von Kossa染色比较主动脉瓣钙化,并检测BMP-2蛋白表达。结果 与正常主动脉瓣膜组织相比,人退行性主动脉瓣miRNA-141的表达降低(1.00±0.02 vs 0.35±0.06, P=0.01),BMP-2的mRNA及蛋白表达增加(P均=0.01)。在HAVICs中,上/下调miRNA-141可抑制/促进钙化(P=0.02或P=0.01),并降低/升高Dlx5的mRNA表达(P均=0.01)以及BMP-2蛋白表达。双荧光素酶法验证Dlx5为miRNA-141的靶基因。上/下调主动脉瓣钙化小鼠miRNA-141可抑制/促进钙化(P<0.05),并降低/升高Dlx5及BMP-2表达(P<0.05);Dlx5基因敲除小鼠中,上/下调miRNA-141不影响瓣膜钙化和BMP-2的表达。结论miRNA-141靶向Dlx5基因调控BMP-2蛋白,诱导人主动脉瓣钙化。  相似文献   

6.
目的 探讨酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响及其机制。 方法 体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫细胞化学法鉴定。将VSMCs 按随机数字表法分为正常对照组、 高磷+ pH 7.4 组、高磷+ pH 7.1 组。刺激4 d 后,采用逆转录聚合酶链反应和Western blot 检测活化T 细胞 核因子c1(NFATc1)、Runt 相关转录因子2(Runx2)基因和蛋白的表达。刺激14 d 后,对各组细胞进行 钙化染色、钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性测定。结果 与正常对照组比较,高磷+ pH 7.4 组的钙含量、 ALP 活性、Runx2 和NFATc1 表达升高(P <0.05);与高磷+ pH 7.4 组比较,高磷+ pH 7.1 组的钙含量、 ALP 活性、Runx2 和NFATc1 表达降低(P <0.05)。相关性分析发现,NFATc1 蛋白表达水平与ALP 活性、 Runx2 蛋白表达水平呈正相关(P <0.05)。结论 酸性环境可以抑制高磷诱导的大鼠VSMCs 钙化,其机制可 能是通过降低NFATc1 表达,抑制VSMCs 表型转化来实现的。  相似文献   

7.
目的 研究microRNA-486(miRNA-486)对人主动脉瓣膜间质细胞(VICs)钙化的影响及作 用机制。方法 体外培养VICs,经成骨诱导后用双荧光素报告基因检测miRNA-486 靶基因。转染miR-486 mimic、miR-486 Inhibitors 后,将细胞分为miR-486 mimic 组、miR-486 mimic NC 组、miR-486 Inhibitors 组、miR-486 Inhibitors NC 组。采用茜红素染色、ALP 试验分析各组钙化程度,实时荧光定量聚合酶链反应 (qRT-PCR)、免疫荧光试验检测miR-486 靶基因及成骨相关因子mRNA 和蛋白的表达水平。结果 双荧 光素报告基因检测和Western blot 检测结果显示,转录生长因子-β1(TGF -β 1)为潜在靶基因。茜红素染 色、ALP 试验结果显示,miR-486 mimic 组钙化程度高于miR-486 Inhibitors 组。qRT-PCR、免疫荧光试验 结果表明,miR-486 mimic 组TGF-β1、SMAD3 mRNA 和蛋白表达水平较低(P <0.05);miR-486 mimic 组RUNX2、骨钙素mRNA 表达水平较miR-486 Inhibitors 组高(P <0.05)。结论 miR-486 可通过下调 TGF-β1 的表达,促进RUNX2、骨钙素的表达和活性,诱导间质细胞向成骨细胞分化。  相似文献   

8.
目的原代培养人主动脉瓣间质细胞并建立体外瓣膜细胞钙化模型,诱导人主动脉瓣间质细胞向成骨细胞分化,并观察其表型变化。方法采用胶原酶两次消化法原代培养人主动脉瓣间质细胞,取传代3~7代间质细胞,随机分为2组,实验组以钙化诱导培养基培养,对照组以标准培养基培养。1周后,行von Kossa染色观察钙化结节形成情况,分光光度计测定碱性磷酸酶活性,免疫荧光染色检测瓣膜间质细胞表型蛋白,real-time PCR及蛋白质印迹分析检测成骨相关因子的表达,评价模型建立情况。结果培养1周后实验组出现钙化结节,每孔钙化结节数量[(51.20±14.31)个]高于对照组[(3.60±1.82)个],差异有统计学意义(P<0.05),同时实验组碱性磷酸酶活性较对照组升高(约上升4倍,P<0.05),细胞收缩表型平滑肌肌动蛋白(α-SMA)增高。Real-time PCR及蛋白质印迹分析提示,实验组中成骨相关因子Runx2、osteocalcin及osteopontin在mRNA及蛋白水平均较对照组升高,磷酸化Smad1/5/8蛋白表达也同时升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立了人主动脉瓣间质细胞体外诱导钙化模型,诱导后间质细胞呈现相对激活状态,表型向收缩表型和成骨表型转化,为今后实验提供了可靠的细胞模型。  相似文献   

9.
郑人源  张琴  卓强  蒋明德  梅浙川 《重庆医学》2014,(25):3307-3310
目的:研究 p38MAPK对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)活性及 c-myc蛋白表达的影响,探讨影响酒精性肝纤维化的相关机制。方法用不同浓度的p38特异性阻断剂SB203580干预乙醛刺激的大鼠HSC,显微镜下观察细胞形态变化,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,SABC法检测 c-myc蛋白表达。结果(1)乙醛刺激后的 HSC体积增大,增殖迅速,但随着加入 SB203580的药物浓度增大,细胞增殖变缓,体积变小,变形的细胞增多。(2)p38阻断剂 SB203580可抑制乙醛刺激的 HSC增殖,且高药物浓度组抑制效果更明显。(3)随着阻断剂浓度增高,G0及 G1期细胞增加,S期细胞逐渐减少,同时 c-myc蛋白表达阳性率减少。结论阻断 p38MAPK通路活性能抑制乙醛刺激的大鼠 HSC增殖,可能与下调 c-myc蛋白表达,阻止细胞由 G0/G1期进入 S期的DNA合成有关。  相似文献   

10.
目的:探讨牙龈卟啉单胞菌重组牙龈蛋白酶(rRgpB)刺激蛋白酶激活受体(PAR)介导的人牙龈成纤维细胞(HGF)内钙离子浓度([Ca2+]i)的动态变化及细胞内信号转导通路。方法:流式细胞术检测 HGF 表达的 PAR 类型,CCK-8 法检测细胞增殖,以牙龈卟啉单胞菌rRgpB作用于 HGF,激光共聚焦显微镜观察 HGF 内[Ca2+]i的动态变化及 PAR-1 拮抗剂的阻断作用;蛋白质印迹法检测 HGF 内 c-Jun 氨基末端激酶(JNK)、胞外信号调节激酶 1/2(ERK1/2)、p38 丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)、p65 蛋白水平的变化。结果:HGF 表达 PAR-1 和 PAR-3,且 rRgpB 可促进 HGF 生长。细胞受到 rRgpB 作用后能激发瞬时增强的[Ca2+]i荧光信号,并且这种作用能够被 PAR-1 拮抗剂完全阻断;与空白对照组比较,rRgpB 诱导细胞6、12?h后,JNK、ERK1/2、p65 磷酸化蛋白表达均显著上调(均P<0.05),但 p38 MAPK 磷酸化蛋白水平未见明显变化(P>0.05);PAR-1 拮抗剂成功抑制了 rRgpB 诱导的 JNK、ERK1/2、p65 磷酸化蛋白表达的上调。结论:rRgpB 通过 PAR-1 诱导 HGF 内[Ca2+]i增加,并激活细胞内 JNK、ERK1/2、核因子κB 信号通路。  相似文献   

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