白龙片与HMBA对人胃癌周期细胞分化作用的比较研究

目的:对比研究白龙片与HMBA对人胃癌细胞的诱导分化作用。方法:采用高压笑气法将MGc803细胞进行同步化,分别收集G_1、S、G_2、M四期细胞,将中药复方白龙片与已知诱导合化剂HMBA分别处理各期细胞。结果:实验结果表明两种药物均可使MGC803细胞生长受到抑制、软琼脂集落形成减少及微丝结构增长。且以G_1期细胞效果最为明显。结论:表明白龙片与HMBA对人胃癌MGC803细胞的诱导分化作用具有明显相似的特点。     

热化放三联因子对Hela细胞杀伤效应的实验研究

本文以体外培养的宫颈癌Hela细胞系为模型,以细胞克隆形成实验及细胞周期相分布测定为指标,观察了高温、顺铂及放射线对细胞的杀伤效应。结果表明:①从细胞克隆形成实验所得存活分数(SF)证明热化或热放二联因子较热、化、放任何单一因子对细胞的杀伤效应大,且热化优于热放。热化放三联因子应用时,杀伤作用更大。②从流式细胞仪测定的细胞周期时相分布表明,Hela细胞周期时相对热化因子较敏感,剂量小时,S+G_2/M增殖期细胞增加,呈激惹反应;剂量大时,S+G_2/M增殖期细胞减少,呈抑制反应。热放组于24小时无明显改变,96小时S+G_2/M增殖期细胞呈轻度增加现象。     

复发与缓解期急性白血病的细胞周期分析

应用流式细胞术对初治、复发及缓解期急性白血病骨髓细胞的周期分布进行测定。复发期及缓解期患者骨髓增殖期细胞(s+G_2M％)高于初治病例。缓解期骨髓s+G_2M％存在个体差异性,多数接近正常骨髓s+G_2M％均值。3例同种异体骨髓移植后造血重建及1例胎肝移植后患者的骨髓s+G_2M％均达到或超过正常水平。     

照射和加温对Hela S3细胞周期及DNA含量的影响

用流式细胞分析和图象分析技术,测定照射和加温后HeLa S_3细胞周期及DNA含量的变化。结果表明照射后HeLa S_3细胞DNA含量增加,照射及加温后HeLa S_3细胞出现G_2+M期延搁现象,提示DNA含量增加是G_2+M期延搁的结果。G_2+M期显著延搁时,细胞克隆源性存活率亦明显降低,X线照射细胞存活低于1％,加温处理细胞存活低于2.65％,提示G_2+M延搁现象不仅是细胞周期受阻的结果,也是细胞严重杀伤的后果。本实验证实,流式细胞分析和图象分析技术是快速测定受照和加温细胞反应的有效手段。     

开口箭皂甙抑制小鼠S-180肉瘤细胞增殖及实体瘤生长的实验研究

目的 研究开口箭皂甙(STCB)体内外抗S-180肉瘤活性的强度及其作用机制.方法 MTT法检测S-180细胞的增殖程度;制备昆明种小鼠S-180移植实体瘤模型,观察STCB的抑瘤作用;光镜和电镜下观察药物作用后S-180细胞形态及超微结构变化;以不同浓度STCB处理S-180细胞,经碘化丙啶染色后应用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果 STCB体外明显抑制S-180细胞增殖,IC50为34.64μg/ml.经灌胃给药,STCB对荷S-180实体瘤小鼠表现出良好的抑瘤作用,低剂量(0.5 g/kg体质量)时,抑瘤率已超过30%,高剂量(2 g/kg体质量)时,抑制率达到54.86%.电镜观察和FCM检测证明肿瘤细胞凋亡率随STCB浓度增加而增加.STCB的浓度为10和30μg/ml时,S期细胞百分率上升,G2/M期细胞百分率下降;当STCB的浓度达到60μg/ml,G0/G1期细胞百分率下降,G2/M期细胞百分率上升:提示低浓度STCB阻止S-180细胞从S期进入G2期;高浓度时,STCB还干扰S-180细胞的有丝分裂.结论 STCB在体内外对S-180肉瘤细胞均有抑制作用,其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡和干扰细胞周期有关.     

人胃癌细胞不同增殖周期与HPD光敏损伤的关系

应用超微结构技术研究 HPD 加红光对人胃低分化粘液腺癌细胞损伤敏感部位与细胞周期时相的关系.HPD 光敏作用从细胞超微结构损伤中呈现出显著的周期特异性,M 期细胞以核部位损伤比胞质更为敏感。且损伤严重;G_1期细胞以质膜与胞质损伤明显;S 和 G_2期细胞以线粒体和其它细胞器的损伤最为严重,与 G_1期相似但质膜损伤很小.     

miR-15b-5p在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测miR-15b-5p在胃癌中的表达变化,探索其对胃癌细胞功能的影响。方法:采用实时定量PCR检测35例胃癌组织及其对应的癌旁正常胃组织中miR-15b-5p的表达;构建miR-15b-5p过表达载体及合成miR-15b-5p抑制剂,并转染胃癌细胞系AGS;应用MTT法检测胃癌细胞增殖能力变化;采用流式细胞术分析miR-15b-5p对细胞周期和凋亡的影响。结果:miR-15b-5p在胃癌组织中的表达显著下调(P<0.01);转染miR-15b-5p过表达载体抑制了胃癌细胞的增殖,将细胞周期阻滞在G_0/G_1期,并诱导了细胞凋亡;转染miR-15b-5p抑制剂促进了胃癌细胞的增殖,使细胞进入S和G_2/M期,并抑制细胞凋亡。结论:miR-15b-5p在胃癌中下调,抑制胃癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

脐血造血干细胞体外培养及其特性研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术(FCM),观察了脐血中粒-单系祖细胞(CFU-GM)和红系祖细胞(BFU-E)的数量和特性,并对其细胞增殖周期和骨髓及成人外周血做了比较.结果表明,脐血中含丰富的CFU-GM和BFU-E,其数量低于成人骨髓而大大超过外周血水平;脐血红系祖细胞对促红细胞生成素(EPO)和爆式促进活性(BPA)表现出更高的敏感性,而粒系祖细胞对集落刺激因子(CSF)的敏感性和骨髓比较似无明显差别;脐血S期、G_2+M期及S+G_2M期细胞数均明显低于骨髓,虽略高于外周血各期细胞数,但差别无显著性意义.提示脐血造血干细胞体外培养可以得活性较高的祖细胞.     

Hela细胞的热疗动力学研究

用双层琼脂培养及羟基脲(HU)同步化方法,对细胞周期各时相的Hela细胞的热敏性(45℃,1h)及S中期细胞受热后的动力学改变进行了观察。结果表明:S晚期和G_2+M期细胞对热敏感,而S中期和G_1早期的热敏性稍差。S中、晚期和C_1早期细胞,在连续热作用下均呈指数型杀伤;S中期细胞经热作用后,60％左右的细胞能在11小时内恢复DNA合成,但生长延迟至少持续45小时,提示单独热疗(≥45℃)对Hela 细胞具有明显的杀伤效应。本文采用的羟基脲同步化和双层琼脂培养法可能也适用于肿瘤临床热敏性预测。     

亚硒酸钠对单个直肠腺癌细胞DNA含量影响的研究

1.7μmol/L浓度的亚硒酸钠对人体直肠腺癌细胞系HR8348作用48小时,用萤光半定量方法测定单个细胞的萤光位。细胞群体萤光值的频率分布提示:G_1期细胞增多,S期、G_2期和M期细胞减少,可能该浓度亚硒酸钠抑制G_1期细胞的代谢而使DNA的合成减少。     

肺癌患者血清对正常人自然杀伤细胞活性抑制性影响的研究

探讨肺癌患者血清对正常人ＮＫ细胞杀伤活性的影响，同时检测患者血清ｓＩＬ─２Ｒ的水平。结果显示：患者血清可使正常人外周血ＮＫ细胞杀伤活性明显降低，血清中ｓＩＬ─２Ｒ水平较对照组明显升高，其升高的程度与ＮＫ细胞杀伤活性的降低相关，这些提示肺癌患者血清中存在免疫抑制物质，高水平的ｓＩＬ─２Ｒ可能是一种主要的免疫抑制因子。     

喉癌CD133+肿瘤干细胞与化疗抵抗

目的 筛选喉癌细胞中的CD133+细胞亚群,探讨其肿瘤干细胞特性及化疗抵抗性,并分析其原因。 方法 流式细胞仪检测Hep-2细胞经顺铂,氟尿嘧啶,紫杉醇作用后,CD133表达率的变化。采用流式细胞分选技术分离CD133+,CD133-细胞亚群,观察各亚群对上述药物的反应。采用软琼脂克隆形成实验检测各亚群的克隆形成能力,采用transwell小室体外侵袭实验,检测各亚群细胞的侵袭能力。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和western blot法,检测各亚群细胞中耐药基因ABCG2基因的表达。 结果：Hep-2细胞中CD133表达率为1-2%. 化疗药物作用后CD133+亚群被富集。CD133+细胞克隆形成率为(41.9±3.9%)显著高于CD133-细胞(11.7±1.6%), P<0.01。CDl33+细胞侵袭细胞数为(88±9.7)显著高于CD133-细胞（53±7.2）, P<0.01。CD133+细胞ABCG2的表达水平显著高于CD133-细胞。 结论： CDl33+喉癌细胞具有肿瘤干细胞的生物学特性, CD133+喉癌肿瘤干细胞存在化疗抵抗,ABCG2的高表达是其中的主要原因。针对CD133+细胞的治疗势必会促进对喉癌治疗的进展。     

Chemoresistance of CD133+ cancer stem cells in laryngeal carcinoma

Background  Mounting evidence suggests that tumors are histologically heterogeneous and are maintained by a small population of tumor cells termed cancer stem cells. CD133 has been identified as a candidate marker of cancer stem cells in laryngeal carcinoma. This study aimed to analyze the chemoresistance of CD133⁺ cancer stem cells.

Methods  The response of Hep-2 cells to different chemotherapeutic agents was investigated and the expression of CD133 was studied. Fluorescence-activated cell sorting analysis was used to identify CD133, and the CD133⁺ subset of cells was separated and analyzed in colony formation assays, cell invasion assays, chemotherapy resistance studies, and analyzed for the expression of the drug resistance gene ABCG2.

Results  About 1%–2% of Hep-2 cells were CD133⁺ cells, and the CD133⁺ proportion was enriched by chemotherapy. CD133⁺ cancer stem cells exhibited higher potential for clonogenicity and invasion, and were more resistant to chemotherapy. This resistance was correlated with higher expression of ABCG2.

Conclusions  This study suggested that CD133⁺ cancer stem cells are more resistant to chemotherapy. The expression of ABCG2 could be partially responsible for this. Targeting this small population of CD133⁺ cancer stem cells could be a strategy to develop more effective treatments for laryngeal carcinoma.

     

体外诱导激活的杀伤细胞对癌细胞的作用

作者用低浓度(200 U/ml)重组人白细胞介素2(γIL-2)体外诱导人外周血淋巴细胞,研究了体外淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)对传代瘤细胞株的杀伤作用机理。倒置显微镜卜观察。LAK细胞可在体外增殖,较一般淋巴细胞体积增大3～7倍,且在培养96 h后,可见分裂象。在LAK细胞与瘤细胞共育时,LAK细胞对瘤细胞有显著的趋向性,首先接近包围瘤细胞,然后裂解为小效应细胞,攻击进入瘤细胞浆内,致其崩溃死亡。     

榄香烯对人肝癌细胞7402、宫颈癌细胞Hela的凋亡诱导作用及下调Bcl—2蛋白表达

目的 研究中药榄香烯对人肝癌细胞7402、宫颈癌细胞Hela的体外抑瘤效应及其作用机制。方法 应用MTT比色法观察榄香烯对细胞的生长抑制作用;荧光显微镜和透射电镜观察细胞结构的改变;DNA凝胶电泳和流式细胞术等分析细胞凋亡、周期变化及Bcl-2蛋白表达情况。结果 榄香烯对7402和Hela细胞有较强的体外增殖抑制作用。榄香烯能诱导7402和Hela细胞凋亡,同时伴随有Bcl-2蛋白表达下调。结论 榄香烯对7402、Hela细胞有较强的抗瘤效应,其可能与Bcl-2蛋白下调引起的细胞凋亡有关。     

肺癌患者外周血树突状细胞的体外扩增及生物学特性的观察

目的 从肺癌患者外周血诱导扩增的树突状细胞。观察其形态、表型、抗原递呈功能和对LAK细胞抗肿瘤作用的影响。方法 肺癌患者外周血单个核细胞经GM-CSF、IL-4诱导扩增成为树突状细胞,FACS检测其表型,MLR测定其抗原递呈能力及对LAK细胞增殖的影响。TAA冲击的DC与LAK细胞混合培养诱导的CTL,用MTT法测定其细胞毒,结果 肺癌患乾外周血诱导的树突状细胞具有典型的形态、表型特征和激发MLR的能力,TAA冲击的DC能显著地提高LAK细胞的增殖能力和增强对靶抗原细胞的细胞毒效应。结论 从肺癌患者外周血中可获得典型的树突状细胞,经TAA冲击的DC能从LAK细胞中诱导出特异性CTL细胞,以该DC为基础的疫苗联合LAK细胞,可能在肺癌生物治疗中发挥重要的作用。     

Gab2对结肠癌细胞MMP合成的影响

目的:探讨Gab2对结肠癌细胞MMP合成的影响.方法:临床选择2015年7月~2016年4月本院收治的接受手术的结肠癌病人的临床病理资料及组织标本,应用Western blot法检测接头蛋白Gab2水平,分析接头蛋白Gab2对结肠癌细胞侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9合成的影响.结果:结肠癌接头蛋白Gab2的阳性表达与病人的性别、年龄等临床指标无相关性,而与结肠癌的是否发生远处转移、肿瘤直径大小等临床指标密切相关,差异有统计学意义;接头蛋白Gab2阳性组的MMP-9、MMP-2指标水平显著高于Gab2阴性组,差异有统计学意义.结论:接头蛋白Gab2可通过影响结肠癌细胞MMP-9、MMP-2的表达进而影响结肠癌细胞的转移侵袭.     

RNA干扰IDH2基因对HCT-8细胞增殖能力的影响

目的：研究RNA干扰(RNAi)对结肠癌HCT-8细胞IDH2基因表达的抑制作用及干扰后对HCT-8细胞增殖的影响,为结肠癌的基因靶向治疗提供理论依据。方法：实验分siRNA干扰质粒转染组、阴性质粒对照组和HCT-8细胞空白对照组。构建靶向基因IDH2的siRNA真核绿色荧光载体重组质粒PGPU6/GFP/Neo-IDH2,利用FuGENE HD转染剂转染HCT-8细胞,通过荧光定量PCR检测IDH2 mRNA的表达情况及MTT法检测结肠癌HCT-8细胞增殖变化。结果：在荧光显微镜下进行细胞计数,细胞转染率为74%。实时荧光定量PCR检测,siRNA重组质粒PGPU6/GFP/Neo-IDH2对IDH2基因表达的抑制率为85.02%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。MTT检测,干扰质粒转染组细胞的增殖能力明显低于空白对照组(P<0.05)。结论：抑制IDH2基因的表达可影响结肠癌细胞的增殖能力,提示IDH2基因在结肠癌的发生发展中起重要作用,抑制IDH2基因的表达可能成为一种治疗结肠癌的方法。     

抗癌生物活性肽对人胃癌BGC-823细胞周期相关蛋白CDC2、CDK4表达的影响

目的：探讨抗癌生物活性肽对人胃癌细胞周期相关蛋白CDC2、CDK4的影响及其作用机制。方法：实验分为活性肽组及对照组,将不同浓度的抗癌生物活性肽按不同时间作用于培养的人胃癌细胞株（BGC-823）,应用MTT法检测增殖抑制率。建立荷胃癌裸鼠模型,给予生理盐水作为阴性对照组,应用免疫组化技术对抗癌生物活性肽作用前后的胃癌裸鼠肿瘤中CDK4、CDC2的表达进行检测。结果：不同浓度的抗癌生物活性肽对胃癌细胞均有增殖抑制作用;抗癌活性肽S-2作用后人胃癌组织中的CDK4表达明显低于对照组（P〈0.01）,而CDC2表达高于对照组（P〈0.01）。结论：抗癌生物活性肽具有抗胃癌细胞增殖作用,其抗肿瘤作用机制可能是通过下调CDK4和上调CDC2的表达实现。     

PFN2在胃癌组织中高表达并促进胃癌细胞的增殖和迁移

目的 研究PFN2作为胃癌新的预后评价指标及作为胃癌治疗全新靶点的潜力。方法 组织层面上,应用免疫组织化学检测100例胃癌组织及其癌旁组织中PFN2蛋白表达水平;根据PFN2表达量,将研究对象分为癌组织中PNF2高表达组（46例）、低表达（48例）组,以及癌旁组织中PFN2高表达组（26例）、低表达（49例）组;采用χ2检验、Spearman相关性以及Kaplan-Meier 生存分析法,分析PFN2蛋白表达水平与患者的临床参数之间关系;细胞功能上,敲低MKN-45细胞中PFN2,将其分为controlsiRNA组与PFN2-siRNA组;过表达MKN-45细胞中PFN2,将其分为control-vector组与PFN2-vector组,选取Transwell实验、CCK-8实验检测PFN2对胃癌MKN-45细胞增殖及迁移影响。结果 在胃癌组织中PFN2蛋白表达高于癌旁组织（P<0.01）;PFN2蛋白的表达水平和胃癌病人的M分期显著正相关（P<0.05）;在胃癌组织中,PFN2表达和VEGFR表达呈正相关关系（P<0.01）;PFN2蛋白高表达的胃癌患者预后更差（P<0.01）,并且是胃癌预后的独立预测因子（P<0.05）;MKN-45细胞中高表达PFN2组较低表达组增殖、迁移能力更强（P<0.001）。结论 PFN2蛋白在胃癌组织中高表达,并促进人胃癌MKN-45细胞的增殖、迁移。