应用重组基底膜侵袭技术对人肺腺癌细胞侵袭能力的研究

目的　研究RAB5A基因转染后对肺腺癌侵袭能力的影响。方法　采用重组基底膜侵袭实验 ,观察转染前后的细胞系对基底膜侵袭能力的改变。结果　转染pcDNA3.1 RAB5A正义表达载体的AGZY83 a细胞系基底膜侵袭能力增强 ,转染pcDNA3 AntiRAB5A反义RNA重组质粒的Anip973细胞系侵袭能力明显减弱。结论　RAB5A在人非小细胞肺癌的侵袭及转移特性的形成中具有重要的作用 ,RAB5A的反义分子能够有效地阻断该基因表达的翻译过程 ,在细胞内发挥预期作用。     

基底膜侵袭实验技术对人肺腺癌细胞侵袭能力的研究

目的:研究RAB5A基因转染后对肺腺癌侵袭能力的影响。方法:采用重基底膜侵袭实验,观察转染前后的细胞系对基底膜侵袭能力的改变。结果：转染PcDNA3.1-RAB5A正义表达载体的AGZY83-a细胞系基底膜侵袭能力增强,转染PcDNA3-AntiRAB5A反义RNA组质粒的Anip973细胞系侵袭能力明显减弱。结论：RAB5A在人非小细胞肺癌的侵袭及转移特性的形成中具有重要的作用,RAB5A的反义分子能够有效地阻断该基因表达的翻译过程,在细胞内发挥预期作用。     

RAB5A对人肺腺癌细胞系粘附能力的影响

目的：研究RAB5A基因转染后对肺腺癌粘附能力的影响。方法：采用细胞粘附能力测定,观察转染前后细胞系粘附能力的改变。结果：转染PAB5A正义表达载体的AG2Y83－α细胞系粘附能力增强,转染反义重组质粒的Anip9n3细胞系粘附能力明显减弱。结论：RAB5A在人肺腺癌转移特性的形成中具有重要的作用。     

应用重组基底膜侵侵袭技术对人肺腺癌细胞侵袭能力的 …

目的 研究ＲＡＢ５Ａ基因转染后对肺腺癌侵袭能力的影响。方法 采用重组基底膜侵袭实验,观察转染前后的细胞系对基底膜侵袭能力的改变。结果 转染ｐｃＤＮＡ３．１－ＲＡＢ５Ａ正义表达载体ＡＧＹ８３－ａ细胞系基底膜侵袭能力增强,转染ｐｃＤＮＡ８３－ｎｔｉＲＡＢ５Ａ反义ＲＮＡ重组质粒的Ａｎｉｐ９７３细胞系侵袭能力明显减弱。结论 ＲＡＢ５Ａ在人非小细胞肺癌的袭及转移特性的形成中具有重要的作用,ＲＡＢ５Ａ的反义分     

长链非编码RNA MUC5B-AS1在人肺腺癌细胞系中的功能研究

目的 研究lncRNA MUC5B-AS1基因在肺腺癌中的表达情况及对肺腺癌细胞系生物学行为的影响.方法 利用RT-PCR、qRT-PCR检测肺腺癌细胞系中MUC5B-AS1基因的表达情况;构建MUC5B-AS1过表达载体,通过转染构建MUC5B-ASI过表达细胞系;采用CCK-8检测肺腺癌细胞的增殖情况;应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭的影响.结果 检测了MUC5B-AS1在4株肺腺癌细胞系(A549、SPCA1、H1975和H1299)和1株肺正常上皮细胞系(HBE)中的表达情况,发现MUC5 B-AS1在H1299细胞系中表达最低,同时A549细胞系表达最高;通过转染构建MUC5B-AS1过表达H1299、A549细胞系,利用qRT-PCR检测细胞系中MUC5B-AS1基因的表达,与对照组比较,MUC5B-AS1基因在H1299、A549细胞系均升高,且有统计学差异(P ＜0.05);CCK-8检测细胞增殖,与对照组比较过表达MUC5B-AS1对H1299、A549细胞生长并无影响(P＞0.05);应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭,过表达MUC5B-AS1促进H1299、A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MUC5B-AS1可能在肺癌的迁移和侵袭发挥重要作用,但对肺腺癌细胞的增殖能力没有显著影响.     

抑癌基因KAI1对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的 研究抑癌基因KAI1对大肠癌细胞生物学特性的影响。方法 用KAI1 cDNA质粒转染低表达KAI1基因的人大肠癌LoVo细胞。免疫组化和原位杂交检测转染后mRNA和蛋白的表达，利用体外肿瘤同质性粘附、异质性粘附实验和肿瘤侵袭模型等方法，检测KAI1／CD82对大肠癌粘附与侵袭的影响；以空白质粒转染组为对照组。结果 体外实验发现转染KAI1质粒的。LoVo细胞同质性粘附能力高于对照组．异质性粘附及侵袭能力明显低于对照组。抑癌基因KAI1对肿瘤的增殖能力没有影响。结论 KAI1基因表达的减少可以导致大肠癌细胞同质性粘附降低，对基底膜粘附及侵袭转移的能力增加。因此，KAI1基因可以作为大肠癌的一种转移抑制基因。     

抑癌基因KAI1对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的研究抑癌基因KAI1对大肠癌细胞生物学特性的影响。方法用KAI1 cDNA质粒转染低表达KAI1基因的人大肠癌LoVo细胞。免疫组化和原位杂交检测转染后mRNA和蛋白的表达,利用体外肿瘤同质性粘附、异质性粘附实验和肿瘤侵袭模型等方法,检测KAI1/CD82对大肠癌粘附与侵袭的影响;以空白质粒转染组为对照组。结果体外实验发现转染KAI1质粒的LoVo细胞同质性粘附能力高于对照组,异质性粘附及侵袭能力明显低于对照组。抑癌基因KAI1对肿瘤的增殖能力没有影响。结论KAI1基因表达的减少可以导致大肠癌细胞同质性粘附降低,对基底膜粘附及侵袭转移的能力增加。因此,KAI1基因可以作为大肠癌的一种转移抑制基因。     

RAB5A基因对大肠癌细胞侵袭能力的影响

目的研究RAB5A基因转染后对大肠癌细胞侵袭能力的影响.方法用脂质体将RAB5A反义寡核苷酸转染人大肠癌细胞LS174T,48h后transwell小室法观察其对细胞转移能力的影响.结果 RAB5A反义寡核苷酸转染后48h,transwell小室结果可见转染后大肠癌细胞LS174T的侵袭和运动能力明显低于对照组(P《0.01).结论 RAB5A在人大肠癌细胞的侵袭及转移特性的形成中具有重要的作用,RAB5A的反义分子能够有效地阻断该基因表达的翻译过程,在细胞内发挥预期作用.     

ndr2基因在肺腺癌细胞GLC-82中的诱导表达

目的 构建蜕皮素诱导的抑癌基因ndr2哺乳动物真核表达载体（pIND-ndr2)，转染肺腺癌细胞GLC－82，观察ndr2基因表达，为进一步研究ndr2的生物学功能打下基础。方法 以RT－PCR方法确定正常人肺组织和肺腺癌GLC－82细胞ndr2的表达高低。PCR方法扩增ndr2，以BamHI EcoRI双酶切连接入pUC19载体中，测序正确后，插入到蜕皮素诱导的真核表达载体pIND中。连有ndr2基因的载体（pIND-ndr2)用指质体方法转染到培养的肺腺癌细胞GLC－82中。经G418和zeocin双抗生素筛选后，挑取单克隆进行培养，用蜕皮素诱导ndr2表达，用RT－PCR，western印迹和免疫组织化学方法验证获得表达的细胞株。结果 PCR的方法扩增获得大小约1200bp的片段，连接入预先插入HA－tag的pUC19载体的ndr2基因经HindⅢ EcoRI酶切后，构建到真核表达载体pIND中，酶切鉴定后证明连接片段正确。通过双载体转染和双抗生素筛选后，培养的细胞经诱导后检测到实验组ndr2的高表达，而对照组和未诱导的实验组ndr2表达均较低。结论 ndr2基因成功转染培养的肺腺癌GLC－82细胞，建立了ndr2的可诱导表达的细胞系。     

GPC5基因在肺腺癌细胞系中的功能研究

目的 研究GPC5基因在肺腺癌细胞系中的表达情况及其对肺腺癌细胞系生物学行为的影响.方法 采用逆转录PCR (RT-PCR)、实时定量PCR (qRT-PCR)以及Western blot分析肺腺癌细胞系中GPC5基因mRNA及蛋白表达情况;构建GPC5过表达载体及干扰载体,通过转染构建GPC5过表达细胞系及GPC5沉默细胞系;利用CCK-8法分析肺腺癌细胞系生长情况;通过流式细胞术检测肺腺癌细胞系的周期及凋亡变化.结果 检测了GPC5基因在4株肺腺癌细胞系(A549、H1299、H358和H1975)和1株肺正常上皮细胞系(HBE)中的mRNA表达情况,发现与HBE细胞系相比,GPC5基因在A549细胞系中呈低表达,在H1299细胞系中高表达,同时蛋白检测结果与mRNA水平一致;A549细胞中过表达GPC5基因可抑制细胞生长,引起细胞周期阻滞;在H1299细胞中干扰GPC5基因表达促进细胞生长,促进细胞周期;在过表达和干扰细胞模型中均未发现GPC5基因对细胞凋亡的显著影响.结论 GPC5基因可以对肺腺癌细胞系的生物学行为产生影响,可能是肺腺癌的抑癌基因.     

Over-Expression of the RAB5 Gene in Human Lung Adenocarcinoma Cells with High Metastatic Potential

The objective of this study is to better understand the molecular mechanism of tumor invasion and metastasis, and isolating tumor metastasis-related genes. Two human lung adenocarcinoma cell lines AGZY-83a and Anip973 were studied, Anip973 was derived from AGZY 83a ,but it manifested a very much higher metastatic potential than the parent lirie. Differential cDNA fragments were isolated by oslag the techniques of mRNA differential display, and analyzed by means of molecular cloning and sequencing. The expression of RABSA gene in clinical samples of non-small cell lung cancer was determined by RT-PCR. There were significant differences between AGZY-83a and Anip973 in gene expression, part of the differential cDNA fragments were cloned and sequenced. We found that there was over-expression of RABSA gene in the Anip973 cell line. And there was over-expression of RABSA gene in those samples of ehnlcal lung cancer showing metastasis. In conclusion, the expression or over expression of RABSA gene was associated with the metastatic phenotype of Anip973. Probably, over-expression of RABSA gene in ncaa-trmall lung cancer may serve as a diagnostic marker for metastasis.     

基因治疗与化疗联合应用对人肺腺癌GLC-82细胞作用的实验研究

目的 探讨基因治疗和化疗联合应用提高肿瘤疗效的可能性和初步机制。方法 将重组腺病毒载体（Ａｄ）介导的ｐ５３基因（Ａｄ－ｐ５３）与化疗药顺铂（ＣＤＤＰ）或三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）联合,通过细胞生长和存活的抑制实验,流式细胞分析,末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记检测,逆转录－聚合酶链反应,免疫组织化学检测,以及裸鼠皮下移植瘤模型的治疗实验,观察其对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的作用及可能机制。结果 Ａ     

Interaction between gene p53 and oncogene mdm2 in human glandular lung cancer cell line GLC-82

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｏｎｃｏｇｅｎｅｍｄｍ２ａｎｄｗｐ５３ｉｎｈｕｍａｎｇｌａｎｄｕｌａｒｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＧＬＣ８２．ＭｅｔｈｏｄｓＢｙｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅｍｅｄｉａｔｅｄＤＮＡｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ,ｗｐ５３ａｎｄｍｄｍ２ｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｓｅｐａｒａｔｅｌｙｏｒｃｏｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＧＬＣ８２ｃｅｌｌｓｖｉａｒｅｔｒｏｖｉｖａｌｖｅｃｔｏｒｐＤＯＲｎｅｏ,ａｃａｒｒｉｅｒｏ…     

表皮生长因子受体单抗诱导人肺癌SPC A1细胞凋亡

目的观察表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体是否可诱导人肺癌SPCA1细胞凋亡,以进一步说明EGFR单抗所具有的抗肿瘤作用。方法以不同浓度的EGFR单克隆抗体干预培养人肺腺癌SPCA1细胞株72h,收集癌细胞并提取DNA,采用凝胶电泳法和流式细胞仪分析细胞凋亡现象。结果凝胶电泳显示,单抗浓度为1.0μmol/L时,可见明显的凋亡梯状条带出现。流式细胞仪分析发现,在EGFR单抗干预培养的各SPCA1细胞样本存在低荧光的亚G1细胞群,而在空白对照和正常非相关IgG对照样本均未见低荧光细胞群存在。结论表皮生长因子受体单克隆抗体可诱导人肺癌SPCA1细胞出现凋亡。     

RMB5A反义寡脱氧核苷酸对不同转移潜能大肠癌细胞系裸鼠移植癌体内影响研究

目的 观察RMB5A反义寡脱氧核苷酸对人大肠癌高、低转移潜能细胞系的裸鼠移植瘤的抑制作用及抑制肿瘤转移效果.方法 建立人大肠癌高转移和低转移的裸鼠模型,分组给予RAB5A反义寡核苷酸治疗,观察荷瘤鼠的肿瘤体积、肿瘤大小以计算抑瘤率;RT-PCR和免疫组化法检测治疗组RAB5A的表达.结果 在大肠癌裸鼠移植瘤高转移和低转移组中RAB5A反义寡核苷酸均具有抑瘤效果(P＜0.05).反义寡核苷酸组的肿瘤组织中RAB5A基因和蛋白质表达均减少,远隔脏器无转移发生.而正义寡核苷酸组以上指标均与模型组无差别(P＞0.05).结论 体内抑制RAB5A可抑制裸鼠移植癌生长及推迟转移.     

肿瘤转移相关基因mts1及nm23-H1在肺癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的探讨转移相关基因mts1及nm23-H1在人肺癌中的表达及其与淋巴结转移的关系.方法对手术切除后新鲜的26例肺鳞癌和13例肺腺癌组织标本采用地高辛标记的mts1及nm23-H1 cDNA探针进行原位杂交.结果26例鳞癌中,淋巴结转移组11例,mts1 mRNA阳性表达9例,阳性率82%,nm23-H1 mRNA阳性表达8例,阳性率73%;无淋巴结转移组15例,mts1 mRNA阳性表达4例,阳性率27%,nm23-H1 mRNA阳性表达10例,阳性率67%.13例肺腺癌中,淋巴结转移组5例,mts1 mRNA阳性表达4例,阳性率80%,nm23-H1 mRNA阳性表达4例,阳性率80%;无淋巴结转移组8例,mts1 mRNA阳性3例,阳性率38%,nm23-H1 mRNA阳性表达6例,阳性率75%.结论mts1 mRNA表达在肺鳞癌的淋巴结转移与非转移组之间相差显著,在肺腺癌的淋巴结转移组与非转移组之间差异性无统计学意义;nm23-H1 mRNA表达在肺鳞癌、腺癌的淋巴结转移组与非转移组之间差异性不显著.