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相似文献
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1.
大鼠脑神经干细胞神经巢蛋白表达的流式细胞术检测   总被引:9,自引:1,他引:8  
检测胎鼠及成年大鼠脑内神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白的表达,判明啮齿类哺乳动物脑内神经干细胞存在的可能性及相应的部位。方法:显微手术下采取胎鼠及成年大鼠大脑与皮质下脑组织,间接荧光法标记nestin,以流式细胞术检测。结果胎鼠脑内普遍存在nestin阳性细胞,成年大鼠脑室旁组织中也存在nestin阳性细胞。  相似文献   

2.
小鼠神经干细胞的分离和培养及其鉴定   总被引:25,自引:1,他引:24  
Zhang X  Li X  Wu J  Wang Z  Xu H  Yang D 《中华医学杂志》2002,82(12):832-835
目的:探讨体外分离和培养及鉴定小鼠神经干细胞,为相关的实验研究奠定基础。方法:利用神经干细胞条件培养基和单细胞克隆技术,从胚胎小鼠大脑皮质分离并体外培养胚胎期小鼠大脑皮质细胞,连续稳定传代20代后,以免疫荧光细胞化学法检测克隆细胞Nestin和分化后细胞中胶质原纤维酸性蛋白、β-tublin和半乳糖苷酶的表达。结果:从小鼠大脑皮层分离的细胞群具有连续形成克隆能力,其Nestin表达阳性。分化后的细胞可表达神经元、星形胶质细胞和寡突胶质细胞的特异性抗原。结论:成功分离并获得了小鼠皮层神经干细胞,该细胞可连续稳定传代,具备多向分化潜能,可用于进一步的实验研究。  相似文献   

3.
胚胎大鼠中枢神经系统神经干细胞的分离培养与观察   总被引:9,自引:0,他引:9  
目的:建立神经干细胞分离、培养、分化鉴定技术,观察神经干细胞增殖、分化特点。方法:利用无血清培养和细胞克隆培养技术,从胚胎大鼠海马、纹状体、脊髓等区分离神经干细胞,进行体外扩增培养、传代、贴壁分化观察。采用免疫细胞化学、透射电镜检测技术,观察鉴定神经干细胞和分化的神经细胞。结果:从胚胎大鼠海马、纹状体、脊髓等区分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞克隆中有nestin表达阳性细胞,透射电镜观察见典型的干细胞特征和不对称分裂现象。贴壁分化后可以出现MAP2、NSE、GFAP和GC表达阳性的细胞。结论:用上述方法分离培养的神经干细胞具有自我更新和增殖能力,并具有向神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的潜能。  相似文献   

4.
目的:建立胎鼠大脑皮层神经干细胞体外分离、培养、分化及鉴定的方法,探讨神经干细胞的基本生物学特性.方法:取孕14 d胎鼠大脑皮层,吸管吹打机械分离制成单细胞悬液,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化,应用免疫荧光技术鉴定神经干细胞及其分化的子代细胞.结果:从胎鼠大脑皮层分离的细胞呈神经巢蛋白(Nestin)免疫阳性并能在体外传代培养,血清诱导分化后的细胞可表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原微管相关蛋白2和胶质纤维酸性蛋白,诱导分化成的神经元能表达突触的特异性标志Synatophymin.结论:分离和培养的细胞能表达神经干细胞的特异性标志物Nestin,并且具有很强的增殖能力和多向分化潜能,属于中枢神经系统的神经干细胞.  相似文献   

5.
目的建立神经干细胞分离、培养、分化鉴定技术,观察神经干细胞增殖、分化特点.方法利用无血清培养和细胞克隆培养技术,从胚胎大鼠海马、纹状体、脊髓等区分离神经干细胞,进行体外扩增培养、传代、贴壁分化观察.采用免疫细胞化学、透射电镜检测技术,观察鉴定神经干细胞和分化的神经细胞.结果从胚胎大鼠海马、纹状体、脊髓等区分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞克隆中有nestin表达阳性细胞,透射电镜观察见典型的干细胞特征和不对称分裂现象.贴壁分化后可以出现MAP2、NSE、GFAP和GC表达阳性的细胞.结论用上述方法分离培养的神经干细胞具有自我更新和增殖能力,并具有向神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的潜能.  相似文献   

6.
大脑皮质机械性损伤诱导Nestin表达和神经前体细胞增殖   总被引:20,自引:1,他引:19  
目的:探讨皮质损伤后Nestin的表达和神经前体细胞的增殖情况。方法:在立体定位仪上横切成年大鼠的大脑皮质和胼胝体,于术后14d和30d分别杀死动物。用Nestin,GFAP免疫组化和Nissl染色方法,观察损伤后神经前体细胞和反应性星形胶质细胞的反应模式。结果:损伤后,伤口周围的皮质,扣带和胼胝体出现大量的Nestin阳性细胞,伤侧侧脑室室管膜下区(SVZ)的神经前体细胞也分裂增殖。Nestin  相似文献   

7.
不同脑区来源的成体大鼠神经干细胞体外增殖特性   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:探讨成年大鼠神经干细胞的脑内分布及体外培养条件,增殖特性,为自体神经干细胞移植修复神经损伤提供理论依据。方法:分离成年大鼠纹状体,室区(VZ)和室下区(SVZ)的细胞,利用无血清培养技术培养并观察神经干细胞的生长规律,采用SABC法进行神经上皮干细胞蛋白(Nestin),增殖细胞核抗原(PCNA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及胶质纤维酸蛋白(GFAP)检测,并作姬母萨染色,对细胞进行鉴定,结果:由成年大鼠纹状体,VZ和SVZ区获得的细胞群,均可在体外分裂增殖形成神经球,Nestin阳性,进一步分化后分别呈现NSE和GFAP阳性。结论:成年大鼠脑内特定区域具有存在神经干细胞。  相似文献   

8.
大鼠海马神经干细胞的分离、培养及鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:探寻出生后1~3d和成年大鼠海马分离、培养并鉴定神经干细胞(NSC)的可行性。方法向培养基添加碱性成纤维细胞生长因子、脑源性神经营养因子及其他生长因子,采用单细胞克隆技术,分离出生后1-3d和成年SD大鼠海马组织并分别无血清培养;以免疫细胞化学方法对原代和传代培养形成的克隆细胞,以及其分化后的细胞进行鉴定。结果上述条件下培养可形成悬浮生长的表达巢蛋白的神经球,且具有连续克隆的能力;分化后可得到具有网状联系的、分别呈神经元特异性烯醇化酶阳性和胶质纤维酸性蛋白阳性的神经元及胶质细胞。结论新生及成年SD大鼠海马存在神经干细胞.  相似文献   

9.
人胚神经干细胞体外分离扩增及移植应用   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 从胎龄 10周 - 12周的人工流产胚胎脑皮分离 ,鉴定神经干细胞并加以扩增后移植进入脑瘫患儿脑内的治疗效果。方法 利用无血清培养从胎龄 10周 - 12周的人工流产胚胎皮层分离具有增殖能力的细胞群 ,经过连续传代后得到大量亚克隆 ,采用免疫荧光细胞化学技术检测 Nestin抗原和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达。确定合适的受体后将其多点植入胼胝体及受损脑区。结果 从皮层分离的细胞群具有连续克隆能力 ,免疫组化证实其 Nestin抗原阳性。移植术后患儿病情有一定好转。结论 我们分离的中枢神经系统的细胞具有自我更新能力 ,是神经干细胞。这种神经干细胞为以脑瘫为代表的某些神经系统疾病的进一步治疗提供了有潜在价值的细胞资源。  相似文献   

10.
目的:分离培养新生大鼠海马区神经干细胞(Neural stem cells,NSCs),建立NSCs单细胞克隆系。方法:取新生SD大鼠海马组织分离NSCs后无血清技术培养,建立其克隆系并行单细胞传代克隆培养。采用细胞免疫荧光和RT-PCR等技术对NSCs进行鉴定,分子标志物选择Nestin和Sox2。NSCs诱导分化的神经元的鉴定,标示物选择早期神经元特异性微管蛋白(β-tubulin),星形胶质细胞标示物为特异性胶质酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),少突胶质细胞特异性标记蛋白为髓鞘相关蛋白(cyclic nucleotide phosphodiesterase,CNP)。结果:无血清培养法可维持NSCs生长和促进其增殖。成功建立NSCs单细胞克隆系,传代可获得大量亚克隆NSCs株团。单细胞克隆NSCs球团经早期酶消化结合后期机械吹打法传代,分散为单细胞或类单细胞后,增殖及分化能力依然存在。单细胞克隆系株经Nestin和Sox2细胞免疫荧光或RT-PCR检测均为阳性表达。在加有胎牛血清培养基条件下进行诱导分化,来自单细胞克隆系的细胞株同样可分化为神经元样、星形胶质细胞样和少突胶质细胞样3种神经细胞,即β-tubulin、GFAP、CNP免疫荧光染色分别呈阳性。结论:无血清培养可成功建立新生SD大鼠海马区NSCs单细胞克隆系,并可稳定传代增殖,并在一定条件下可诱导分化为成熟的神经元和神经胶质细胞。  相似文献   

11.
血管性痴呆大鼠海马神经干细胞移植   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 探讨新生大鼠脊髓神经干细胞(NSC)移植至血管性痴呆(VD)大鼠海马后在体内的存活、迁移和分化。方法 用无血清培养和单克隆技术从新生大鼠脊髓分离具有单细胞克隆能力的细胞群并连续传代培养,鉴定为NSC后,将其用BrdU标记后移植入VD大鼠海马内,利用免疫荧光化学技术检测移植后细胞的生存、迁移和分化。结果 从脊髓分离的细胞群具有NSC的特性,这些细胞在移植入VD大鼠海马8周后能检测到其存在并向四周迁移,并且分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论 从脊髓分离的细胞是脊髓NSC,将其移植到VD大鼠海马内能生存、迁移和分化。  相似文献   

12.
成鼠神经干细胞的分离、克隆和增殖   总被引:13,自引:2,他引:11  
目的:从成年大鼠前脑室下带(SVZ)中分离神经干细胞,证实其增殖潜能和胚胎源性。方法:利用无血清培养和单细胞克降技术,在成年大鼠SVZ中分离出具有多潜能的神经干细胞。在单个细胞克实验中,将培养板分为两组:第1组采用纯新鲜培养液,第2组为新鲜与原代培养液各半的混合液。选取单个细胞克隆连续传代获得大量来源于同一细胞 的亚细胞系克隆。用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)标记和免疫荧光检测证实其增殖潜能,并用免疫荧光技术检测神经上皮干细胞蛋白(Nestin)抗原的表达以证实其胚胎源性。结果:原代培养1周后每瓶细胞培养液中可见形成这些克隆细胞可连续传代。BrdU标记、免疫荧光检测及Nestin免疫荧光标记均获得阳性结果。结论:采用新鲜和原代培养各半混合的方法可提高神经干细胞单克隆形成率,且本实验中分离培养的神经干细胞具有增殖潜能和胚胎源性。我们的研究结果为下一步神经干细胞的分化研究奠定了基础。  相似文献   

13.
利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞,并进行传代培养,采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力,并表达神经巢蛋白,分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原,为中枢神经系统的干细胞。  相似文献   

14.
It is traditionally believed that that the nerve generation of central nervous system stops before or soon after birth. But studies in recent years have demonstrated that the embryonic and adult mammalian central nervous system contains neural stem cells (NSCs) which have the capa- bility of self-renewal and multi-directional differentiation. The NSCs generally exist in ependyma, subependymal region, cerebral cortex, cornu, hindbrain and spinal cord etc, and usually remain quiescent. But whe…  相似文献   

15.
目的 观察大鼠脑缺血再灌注后神经细胞巢蛋白(Nestin)、干细胞因子(SCF)和神经细胞黏附分子(NcAM)基因的表达。方法 成年健康雌性SD大鼠36只,以线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分为缺血1.5h再灌注2h、6h、12h、24h、2d、3d、7d、14d组和假手术组,每组4只。应用原位杂交技术检测脑缺血再灌注后脑组织Nestin、SCF和NCAM mRNA的表达。结果 假手术组皮质和纹状体区Nestin、SCF和NCAM mRNA均有微弱表达。脑缺血再灌注后Nestin mRNA表达增高,皮质除再灌注2h以外、纹状体除再灌注2、6h以外,其余各时间点均明显高于假手术组。SCFmRNA表达,皮质除再灌注2、6、12h以外,纹状体除再灌注2、6h以外,其余各时间点均明显高于假手术组。NCAM mRNA于再灌注2h后在皮质和纹状体区开始表达,分别于再灌注12h和1d达高峰,7d后逐渐减少,14d降至假手术组水平。结论 脑缺血再灌注后SCF mRNA表达可能具有促进神经千细胞增殖作用,NCAM表达可能参与了损伤后脑组织的修复过程。  相似文献   

16.
人胚脑神经干细胞的分离、培养和鉴定   总被引:2,自引:2,他引:0  
目的:探讨人胚脑神经干细胞的体外生长特性、分化情况和培养条件,为相关实验研究提供条件。方法:利用神经干细胞的条件培养基,对从9周和12周胚龄的自然流产胎儿分离的前脑、后脑进行神经干细胞培养,并比较其生长特性。以免疫荧光细胞化学技术检测神经上皮干细胞蛋白(Nestin)和分化后神经细胞抗原的表达。结果:两胚龄前、后脑组织中均分离出神经干细胞,他们均表达Nestin抗原阳性。血清诱导分化后,表达神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原。9周胚龄的脑组织原代培养形成细胞克隆的比例高于12周胚龄的脑组织。在条件培养基存在的情况下,后脑组织分离的神经干细胞比前脑组织来源的更容易分化。结论:从人胚脑组织中的前、后脑中分离出神经干细胞,较小胚龄的脑组织原代培养时细胞克隆的形成比例较高,后脑组织分离的神经干细胞比前脑组织来源的更容易分化。  相似文献   

17.
目的探寻出生后1~3 d和成年大鼠海马分离、培养并鉴定神经干细胞(NSC)的可行性。方法向培养基添加碱性成纤维细胞生长因子、脑源性神经营养因子及其他生长因子,采用单细胞克隆技术,分离出生后1~3 d和成年SD大鼠海马组织并分别无血清培养;以免疫细胞化学方法对原代和传代培养形成的克隆细胞,以及其分化后的细胞进行鉴定。结果上述条件下培养可形成悬浮生长的表达巢蛋白的神经球,且具有连续克隆的能力;分化后可得到具有网状联系的、分别呈神经元特异性烯醇化酶阳性和胶质纤维酸性蛋白阳性的神经元及胶质细胞。结论新生及成年SD大鼠海马存在神经干细胞。  相似文献   

18.
新生大鼠海马齿状回神经干细胞的分离培养与鉴定   总被引:5,自引:1,他引:4  
目的:从新生大鼠海马齿状回分离并鉴定神经干细胞。方法:利用无血清方法分离、培养新生大鼠齿状回神经细胞,采用免疫细胞化学方法检测神经巢蛋白(Nestin)并鉴定神经元和神经胶质细胞。结果:从新生大鼠海马齿状回分离的细胞群可不断增殖形成神经球,并能自我更新,表达Nestin。自神经球分化出的细胞分别表达神经元、星形胶质细胞特异性抗原。结论:自海马齿状回分离的神经干细胞具有自我更新能力和多分化潜能。  相似文献   

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