3种分离流感病毒方法的比较分析

目的：为了比较流感病毒3种分离方法的敏感性及确定流感优势病毒株,1996年5月～9月,对江西南昌地区流感病毒进行了分离和鉴定研究。方法：采用细胞接种培养法、鸡胚羊膜腔接种培养法、鸡胚尿囊腔接种培养法。结果：细胞接种法分离的流感病毒株14株、鸡胚羊膜腔法得12株、鸡胚尿囊腔法得2株,共28株,其中甲1型18株、甲3型4株、乙型6株。结论：流感病毒分离中,细胞接种法与鸡胚羊膜腔接种法同样敏感。鸡胚分离培养中,应高度重视羊膜腔接种法。1996年南昌地区的优势而行珠是甲1型。     

3种流感病毒检测方法的比较

目的对病毒分离培养法、实时荧光PCR法和鸡胚培养法3种检测流感病毒的方法和结果进行比较研究,筛选快速准确的检测方法,为流感监测与防控工作提供及时可靠的病原学依据。方法同时采用病毒分离培养法、实时荧光PCR法和鸡胚培养法对2014年10月~2015年3月牡丹江市流感监测哨点医院采集的流感样病例咽拭子样本进行检测,比较检测结果。结果实时荧光PCR法的流感病毒核酸检测阳性率为15.52%,其中169份为季节性H3N2流感病毒,73份为B型Yamagata株;病毒分离培养法的阳性率为6.29%,分离出63株季节性H3N2流感病毒,35株B型Yamagata株;鸡胚分离培养法检出率为0.64%。3种方法中,实时荧光PCR法的阳性率最高,病毒分离培养法次之,鸡胚分离培养法阳性率最低。结论实时荧光PCR法比病毒分离培养法和鸡胚培养法灵敏快捷、特异性强、敏感度高,适用于流感病毒的快速检测。     

Real-Time PCR与流感病毒分离关系研究

目的研究提高流感病毒分离率的方法。方法 Real-Time PCR检测500份流感监测病例,选择甲型流感H1N1、H3N2和乙型流感阳性及阴性样品各10份共计40份,分别接种MDCK细胞和鸡胚,用红血球凝集试验测定病毒滴度,以血凝抑制试验鉴定毒株型别。结果阳性样品中,MDCK细胞分离出季节性甲型流感H1N1型8份、H3N2型7份、乙型流感8份;鸡胚分离出季节性甲型流感H1N1型3份、H3N2型0份、乙型流感5份。阴性样品中,MDCK细胞分离出季节性甲型流感H1N1型3份、H3N2型3份;鸡胚分离出季节性甲型流感H1N1型2份、H3N2型0份。结论 MDCK细胞分离流感病毒时,Ct值已经在阴性范围之内的样品也应进行病毒分离,以提高病毒分离率;鸡胚分离流感病毒时,应选择MDCK细胞接毒一代且滴度达到1∶128的强毒株进行分离。     

2种纯化流感病毒方法的比较研究

目的比较2种纯化浓缩鸡胚尿囊液中流感病毒方法。方法将流感病毒鸡胚尿囊液分别采用蔗糖密度梯度离心法(sucrose—density—gradient—centrifugation,SDGC)和红细胞吸附释放法(absorption and release-RBC,AR—RBC)进行纯化,收集纯化病毒测定血凝效价,比较2种纯化方法。结果SDGC法纯化病毒可在30％和45％蔗糖层面交界处的区带中检测到流感病毒,血凝效价为1：2560;用AR—RBC法纯化病毒过程中用新鲜鸡红细胞出现了溶血现象,而用甲醛处理过的鸡红细胞则无此现象,血凝效价均为1：2560。结论与SDGC法纯化病毒比较,AR-RBC法是一种经济实用、操作简便并有较高纯化效率的方法,尤以甲醛处理过的鸡红细胞纯化效果最好。     

儿茶提取物抗甲型流感病毒作用的实验研究

目的　研究从中药儿茶中提取的药物成分抗甲型流感病毒的作用。方法　用狗肾传代MDCK细胞培养法观察儿茶提取物抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用;用鸡胚培养法观察儿茶提取物抑制甲型流感病毒增生的作用;用红细胞凝集试验观察儿茶提取物体外直接抑制甲型流感病毒的作用。结果　1)儿茶提取物的细胞毒性较低,可有效抑制甲型流感病毒感染细胞(P<0.05);2)儿茶提取物在一定范围内可明显抑制甲型流感病毒在鸡胚内的增生,经红细胞凝集试验测定抑制病毒效价为8倍或8倍以上;3)儿茶提取物直接与甲型流感病毒作用后可抑制病毒血凝效价达16 倍以上。结论　儿茶提取物具有很好的抗甲型流感病毒的作用。     

流感病毒两种鸡胚接种方法的比较

流感病毒属正黏病毒在鸡胚羊膜腔及尿囊腔中均生长良好,故常应用羊膜腔接种.鸡胚分离病毒是一种经典的病毒分离方法[1,2],但传统壳外接种鸡胚的方法成功率低,常常影响实验教学.2003年以来采用打开鸡胚气室卵壳接种流感病毒的方法,接种成功率高,满足了教学的需要,有利于学生观察操作,收到良好效果.     

四种板兰根提取物抗流感病毒作用实验研究

【目的】研究板蓝根中性、酸性、碱性和两性提取物抗流感病毒作用及其对机体免疫力的影响。【方法】用鸡胚培养法观察板蓝根提取物对流感病毒接种鸡胚的毒性抑制作用;以病毒滴鼻感染小鼠,建立病毒感染小鼠的模型,观察4种提取物对模型小鼠死亡率及脾T细胞、B淋巴细胞增殖的影响。【结果】鸡胚实验显示,板蓝根酸性提取物能显著阻滞病毒感染鸡胚。动物实验表明,经过酸性提取物治疗的小鼠死亡率明显降低,鼠脾T细胞、B淋巴细胞刺激指数增高,免疫功能增强,其它3种提取物均无上述作用。【结论】板蓝根酸性提取物具有较强的直接抑制流感病毒的作用。     

三种流感病毒检测方法的比较

目的对胶体金法、病毒分离培养法和荧光定量RT-PCR法等3种检测流感病毒方法和结果进行比较研究,筛选快速准确的检测方法,为流感监测与防控工作提供及时可靠的病原学依据。方法同时采用胶体金法、病毒分离培养法和荧光定量RT-PCR检测法对2012年深圳市龙岗区流感监测哨点医院采集的流感样病例样本进行检测,比较检测结果。结果荧光定量RT-PCR的流感病毒核酸检测阳性率为70.8%,其中98份为季节性H3N2流感病毒,51份为B型Victoria株,4份为B型Yamagata株;病毒分离培养法的阳性率为46.3%,分离出61株季节性H3N2流感病毒,35株B型Victoria株,4株B型Yamagata株;胶体金法检出率为3.7%。3种方法中,荧光定量RT-PCR的阳性率最高,病毒分离培养法次之,胶体金法阳性率最低。结论与病毒分离培养法和RT-PCR法相比,胶体金法并不适合单独用于诊断流感病毒感染,病毒分离培养法费时费力,荧光定量RT-PCR法有较高的敏感性和特异性,适用于流感疫情的病原学快速诊断。     

抗病毒1号中药在鸡胚中对流感病毒的抑制作用

目的 开发安全有效的抗流感病毒新药。方法 采用鸡胚实验技术观察抗病毒１号中药对流感病毒的抑制作用。结果 抗病毒１号最大无毒剂量大于７２０ｍｇ／胚;３６０、２４０ｍｇ／胚剂量组对流感病毒Ａ３有显著的抑制作用（Ｐ〈０．０５）,半数有效量（ＥＤ５０）为１３０．６４ｍｇ／胚,９５％可信区间为１０２．１３～１６７．１１ｍｇ／胚,治疗指数（ＴＩ）大于５．５;３６０、２４０、１６０、１０６．６ｍｇ／胚剂量组对流     

经卵白给药研究利巴韦林在鸡胚内抗甲型流感病毒的作用

目的建立抗甲型流感病毒作用新的鸡胚模型。方法设计尿囊腔中接种流感病毒(甲型流感病毒鼠肺适应的FM1株及流感病毒A3),鸡胚卵白注射利巴韦林,35℃培养72 h后,观察尿囊液流感病毒血凝素滴度。结果在新的模型下,利巴韦林100、50、25 mg/kg剂量组对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P<0.05)。感染前2 h及感染后0 h、2 h、4 h注射利巴韦林,对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P<0.05)。结论在新的鸡胚模型中,利巴韦林可明显地抑制流感病毒的复制。     

银翘感冒颗粒体外抗甲型流感病毒作用的药效学实验

目的通过实验观察银翘感冒颗粒的体外抗甲型流感病毒作用。方法采用鸡胚接种和血凝试验测定病毒效价。结果药物的直接灭活作用(A组)和药物抑制病毒在鸡胚内的增殖作用(B组)的血凝滴度(GMT)分别为13.61和18.52(P<0.01)。结论银翘感冒颗粒在对甲型流感病毒的直接灭活作用和抑制病毒在鸡胚内的增殖作用方面均有效。     

流感病毒MDCK细胞培养条件的优化

目的优化流感病毒MDCK细胞培养条件,提高流感病毒分离率和流感监测效果。方法使用MDCK细胞培养法,比较传统的与优化的实验条件对流感病毒分离率和对血凝试验滴度的影响。结果不同的优化实验条件可明显提高流感病毒的分离率和滴度。结论已筛选出流感病毒MDCK细胞培养法适宜的条件。     

流感病毒在MDCK细胞中分离与培养的影响因素

目的探求流感病毒在MDCK（狗肾细胞）中培养的影响因素。方法将流感病毒吸附接种于MDCK细胞,对一些因素（样本处理情况、吸咐和培养时间、血清浓度、胰酶浓度、接种量和传代次数等）进行比较。结果样本反复挤压,最佳收获病毒时间为72h;加牛血清白蛋白组分V和维持液中终浓度为2．5μg/ml的胰酶可明显提高细胞增殖病毒的血凝效价。结论通过对MDCK细胞培养与增毒的影响因素分析,明显提高流感病毒分离与增毒的效价。     

流感病毒在不同细胞中适宜培养条件的研究

目的 探索流感病毒在细胞中培养的适宜条件.方法 采用MEK细胞、FRhK-4细胞、MDCK细胞分别接种甲型流感病毒H1N1型、H3N2型和乙型流感病毒疫苗毒株,观察3种毒株在不同培养条件下的细胞病变、血凝滴度.结果 3株流感病毒接种细胞在33℃培养72 h后出现拉网、圆缩、脱落等现象;FRhK-4细胞和MDCK细胞对流感病毒较敏感.胞龄为48 h的细胞,在NaHCO3的终浓度为1.4%o,TPCK-胰酶浓度为1.0μg/ml的病毒维持液培养流感病毒为最适条件.结论 寻找到了细胞流感病毒的适宜条件.     

鸡胚材料体外培养的方法

可供培养的细胞种类极其广泛，由于胚体与成体所处生存环境的不同，开展胚胎组织细胞的培养有着广泛的意义。本文结合自己在胚胎组织细胞培养方面的实践经验，简述鸡胚整胚、器官、组织和细胞体外培养的方法及其应用。     

用MDCK细胞培养副流感病毒的初步尝试

目的:初步探索用MDCK细胞培养副流感病毒。方法:用不同血凝效价副流感病毒感染MDCK细胞,观察副流感病毒在细胞上的生长情况,并检测血凝效价的变化。结果:1∶512副流感病毒感染MDCK细胞后24h即出现明显的细胞病变效应,但病毒的血凝效价有所下降。结论:副流感病毒可以引起MDCK细胞出现细胞病变效应,但在该细胞内不能复制。     

一种快速检测甲型流感病毒的方法

目的 开发一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法（GICA）的试剂盒，以用于对甲型流感病毒的检测。方法以柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗甲型流感病毒内部抗原的单克隆抗体。硝酸纤维素膜上包被两种抗甲型流感病毒单克隆抗体的混合液，制成免疫层析试纸。待测样品中的甲型流感病毒首先与胶体金标记抗体结合，后移动至硝酸纤维素上与固定的单克隆抗体发生反应，形成肉眼可见的红色带。结果GICA试纸条与甲1型和甲3型流感病毒共16种毒株均能发生特异性反应，与乙型流感病毒、副流感病毒、腺病毒和呼吸道合胞病毒无交叉反应。用三种不同甲型流感病毒毒株的不同浓度标本与美国同类经过FDA批准的产品比较，灵敏度相同。结论GICA试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求，并具有简便快速、无需特殊仪器设备等优点，对甲型流感的诊断和流行病学调查具有十分重要的应用价值。     

四种气管上皮细胞分离培养方法的比较研究

目的：比较四种不同的方法在培养气管上皮细胞中的异同，改进其培养技术，为组织工程气管提供种子细胞。方法：用两步酶消化法（使用0.1％ Dispase 4℃消化18h后，用0．25％的胰酶37℃消化5min）、Dispase冷消化法（用0．1％Dispase 4℃消化18h）、胰酶温消化法（0．25％的胰酶37℃消化10min）和机械刮刷法四种方法分离、培养兔气管上皮细胞，测定分离细胞的数量和纯度。结果：两步酶消化法、Dispase冷消化法较其他两种方法得到的气管上皮细胞纯度高，细胞状态好；Dispase冷消化法得到细胞数量较其他方法少，其余三种方法得到的细胞数统计学上不存在差异。结论：两步酶消化法较其他方法所得细胞数量多、纯度高、细胞成活率高，是一种较好的气管上皮细胞体外分离培养方法。     

多孔板对B型流感病毒分离影响因素分析

目的 研究B型流感病毒在不同多孔板中的生长情况,探索其合适的分离条件。方法 对4株B型流感病毒进行血凝鉴定后将滴度调整到1∶32,稀释10 000倍后接种于6孔板,按接种量(0.40ml、0.60ml、0.80ml和1.00ml)分为4组,吸附后每组加入2.00ml、2.50ml、3.00ml和3.50ml病毒维持液。接种于24孔板,按接种量(0.10ml、0.15ml、0.20ml和0.25ml)分为4组,吸附后每组加入0.80ml、1.00ml、1.20ml和1.40ml病毒维持液,每24h观察致细胞病变并进行血凝滴度(hemagglutination titer, HA)鉴定。采用χ²检验对不同多孔板的HA进行分析。结果 随时间增长,病毒滴度均增加,所有致细胞病变均有滴度,6孔板每24h检测各孔滴度均能达到1∶8以上,B/Yamagata和B/Victoria亚型滴度最高为1∶256,24孔板每24h检测各孔阴阳性不一,B/Victoria亚型的滴度最高为1∶16,B/Yamagata亚型的滴度最高为1∶32。不同多孔板的HA差异有统计学意义(χ^2...