首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 62 毫秒
1.
大肠杆菌色氨酸酶基因的克隆与表达   总被引:3,自引:1,他引:2  
应用PCR技术从E.coliJM105中扩增出长约1.4Kb的色氨酸酶基因,将其插入高表达载体pET3a的NdeI/BamHI位点,转化E.coliBL21(DE3),构建高产色氨酸酶基因工程菌。SDS-PAGE电泳和薄层扫描表明,工程菌色氨酸酶的表达量占细胞总可溶性蛋白的69.8%。酶活测定结果表明,7株工程菌色氨酸酶的活力比宿主菌均有不同程度的提高,其中WW-11号比宿主菌高16倍。  相似文献   

2.
目的 构建人IL-6重组质粒(rhIL-6),并使其在E.coli中高效表达。方法 经计算机分析设计,人工合成3条寡核苷酸引物,通过定点诱变并优化起始区,应用PCR扩增及重组DNA技术,构建重组质粒pBV-IL-6,并转化至E.coli宿主菌DH5α中诱导表达,对产物进行纯化和复性,MTT法检测生物活性。结果 获得2种rhIL-6高效表达的E.coliDH5α/pBV-IL-6工程菌,一种表达20  相似文献   

3.
大肠杆菌N—乙酰神经氨酸裂合酶基因的组成型高效表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
应用PCR技术从E.coliJM105中扩增出长约890bp的N-乙酰 酶基因,将其插入高表达载体pET28a的NcoI/BamHI痊点,转化E.coliBL21(DE3),构建高产N-乙酰神经氨酸裂合酶基因工程菌,其表达量占菌体总可溶性蛋白的76.8%,活力比宿主菌均有不同程度的提高,其中107号比宿主菌高14倍。  相似文献   

4.
目的构建人IL-6重组质粒(rhIL-6),并使其在E.coli中高效表达。②方法经计算机分析设计,人工合成3条寡核苷酸引物,通过定点诱变并优化起始区,应用PCR扩增及重组DNA技术,构建重组质粒pBV-IL-6,并转化至E.coli宿主菌DH5α中诱导表达,对产物进行纯化和复性,MTT法检测生物活性。③结果获得2种rhIL-6高效表达的E.coliDH5α/pBV-IL-6工程菌,一种表达20.8kuIL-6全蛋白;另一种表达16.8ku,N端缺失25个氨基酸IL-6蛋白。薄层密度扫描分析表达产率,前者为28.3%,后者为33.4%,且均具有生物学活性。④结论rhIL-6构建成功,并获高效表达  相似文献   

5.
在完成了用基因重组技术把人白细胞介素6(IL-6)基因表达在大肠杆菌中的基础上,我们除了用不同的宿主菌,又用了不同的诱导时间及不同的培养基等条件对人IL-6表达的影响进行了进一步的比较研究。结果表明,人IL-6基因在E coll DH菌密度达OD600 0.65左右时,42℃最佳诱导表达时间为5h,其表达最高,SDS-PAGE和凝胶密度扫描分析证明,表达的人重组IL-6(分子量20.8ku)占菌体总蛋白的41.0%,而在E-coli RRI及JM103中表达率最高值各为24.7%(诱导4h)和22.4%(诱导5h),用MsCA替代LB后,人IL-6在E coli DH5m中的表达量降低很少。  相似文献   

6.
在成功构建了谷脱甘肽(GSH)合成酶基因表达质料(pTrc-gsh)的基础上,对不同大肠杆蓖突主菌进行了比较,筛选出高效、稳定表达GSH合成酶的工程菌并进行了最佳酶表达条件的研究。结果表明:重组工程菌E.coliBL21(pTrc-gsh)表达量最高,质粒稳定性好;以5%接各量于37℃、pH7.2培养至OD550=0.5左右,加入诱导剂IPTG(0.mmol/L),同时切换培养条件为34℃、pH6  相似文献   

7.
目的:构建S-腺苷甲硫氨酸合酶基因工程菌,为酶促转化法生产S-腺苷甲硫氨酸奠定基础。方法:应用PCR技术从S-腺苷甲硫氨酸高产酿酒酵母染色体DNA中扩增得到S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因sam2,将其克隆至表达载体pT7-7,转化大肠杆菌,1%琼脂糖电泳比较大小,筛选重组予。结果:SDS-PAGE显示重组菌S-腺苷甲硫氨合成酶亚基分子量约为42KDa,平均表达量约占菌体总可控性蛋白的42%,酶活达到14.1U/g湿菌体,比宿主菌酶活提高15.7倍。结论:酿酒酵母SAM合成酶基因在大肠杆菌中高效表达,重组菌已具有初步的工业化应用价值。  相似文献   

8.
重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a的制备及纯化   总被引:4,自引:3,他引:1  
制备符合临床应用标准的高纯度重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a;高效表达rh-=TNFα3a的E.coli工程菌经过超声破碎,硫酸铵分段盐析,Sephacryl S-200层析,得到电泳rh-TNFαD3a,其比活性为1.88×10^8IU/mg。  相似文献   

9.
目的:探讨腺病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(E.coli CD)基因在胰腺癌细胞中靶向性表达的可能性及其作用。方法:将含癌胚抗原(carcinoembryonic antigen CEA)启动子的重组腺病毒感梁人胰腺癌SW1990细胞(CEA^+)、Capan-2细胞(CEA^-)和入宫颈癌Hela细胞,观察CD基因在3种细胞中的表达及细胞对5-FC的敏感性差异。结果:腺病毒介导CD基因仅在SW1  相似文献   

10.
人干细胞因子在大肠杆菌中的表达研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 经过改造重组人干细胞因子(human stem cell factor,hSCF),提高其表达量。方法 应用人工合成寡核苷酸引物及PCR技术,改变人工干细胞因子hSCF cDNA起始密码子ATG与SD序列之间的距离及在翻译起始区(即N端氨基酸)部分采用大肠杆菌(E.coli)喜用型密码子的策略,使重组表达质粒pBV220-hSCF在E.coli中获得高效稳定表达。结果 DNA序列测量证明基因  相似文献   

11.
近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。  相似文献   

12.
目的以研究方法LiPA(Line Probe Assay)分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果(1)87位患者以sic(88.5%)和m2a(63.2%)分布为主,未发现s1b和s2;(2)混合菌株感染率为41.4%,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高(62.5%),与北京(41.0%)和南宁(20.8%)相比具有显著性差异,P〈0.01;(3)北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;(4)溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。  相似文献   

13.
《中国现代医生》2019,57(36):77-79
目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月~2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1~4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。  相似文献   

14.
尿液pH值对红细胞检验影响的探讨   总被引:2,自引:1,他引:1       下载免费PDF全文
[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。  相似文献   

15.
目的:提高十二指肠损伤的诊治水平,方法:回顾总结该院1999年-2001年间收治的十二指肠损伤7例临床经验。结果:合并其他腹部脏器损伤86%(6/7),单纯十二指肠损伤14%(1/7)。损伤部位以十二指肠降部为多占71%(5/7),水平部和球部各占14%(1/7),术后并发症发生率28%(2/7)、病死率14%(1/7)。结论:掌握十二指肠损伤的特点,早诊断、早手术、术中认真探查,掌握好检查指征,选择合理恰当术式,加强术后管理,可提高治愈率。  相似文献   

16.
醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。  相似文献   

17.
目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980~1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月~1年,优7例(68.4%),良3例(36.8%),差1例(2.8%)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。  相似文献   

18.
扩张兔皮肤超微结构的变化   总被引:4,自引:4,他引:0  
目的:动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法:选用2--3kg新西兰大白兔64只,分为2大组,快速扩张组和常规扩张组,每组32只,每大组再分为4组,为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只,其中4只为实验组,另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果:表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生,功能由静止转向活跃,胶原纤维碎裂成片,弹力纤维部分断裂,炎症细胞浸润;扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周,成纤维细胞趋于稳定、形态狭长,部分胶原排列紊乱,部分有似癜痕样改变。结论:扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。  相似文献   

19.
目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。  相似文献   

20.
阴道炎1236例病原检查分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
对1236例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查;结果,细菌感染900例,念珠菌234例,滴虫102例。900例细菌经鉴定;葡萄球菌300例,阴道加特纳菌276例,淋病奈瑟菌170例,其它细菌124例。结果表明,葡萄球菌,阴道加特纳菌,淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号