氮化碳纳米片耦合适配体的赭曲霉毒素荧光检测新方法研究

目的建立快速测定药材外源性有害成分赭曲霉毒素（OTA）的含量,为药材快速质控技术提供前期基础。方法制定一段一端标记有羧基荧光素（FAM）荧光团的赭曲霉毒素DNA适配体序列片段:5’-GAT-CGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-FAM-3’,在20 mM Tris-HCl缓冲液（包含100 mM NaCl、5.0mM KCl、5.0 mM MgCl2,pH 7.4）中,以氮化碳纳米片（g-C3N4nanosheets,CNNS）为荧光淬灭基质,利用CNNS对游离态DNA和OTA-DNA复合态的吸附差异和其对FAM的荧光淬灭作用,实现对OTA的检测。结果该传感器对OTA的检测线性范围为1～100 nM,检测限为0.7 nM,且10倍浓度的赭曲霉毒素B和黄曲霉毒素B1均不会对检测结果有明显影响。结论氮化碳纳米片耦合OTA适配体的荧光检测方法具有较高的选择性和灵敏度,且操作简单,有望成为中药材中赭曲霉毒素含量测定的新方法。     

光纤生物传感器检测嗜肺军团菌方法的建立

目的建立光纤生物传感器检测嗜肺军团菌的方法,为嗜肺军团菌提供一种快速、现场的检测手段。方法先用抗原或抗体包被光纤,再加入待测物质孵育6-10 min,最后加入荧光探针反应6-10 min,根据理化换能元件可以将荧光信号转换成电信号的原理,实现对样品的定性或定量检测目的。同时探讨了光纤修饰方法,包被缓冲液以及离子强度等因素对实验结果的影响。结果光纤生物传感器法检测嗜肺军团菌时,最低可检测到3×104cfu/mL,检测响应时间为20 min;伤寒沙门菌、大肠杆菌、结核杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌、痢疾志贺菌的检测结果均为阴性,显示出良好的特异性。结论光纤生物传感器检测嗜肺军团菌时,表现出快速、灵敏度高、特异性强、重复性好等优点,可作为嗜肺军团菌的一种初筛方法。     

荧光淬灭法分析奈韦拉平含量

目的建立测定奈韦拉平含量的新方法。方法采用合成的荧光试剂[Ni(phen)2PHPIP].2ClO4],在激发波长226 nm,发射波长340 nm的条件下,用荧光淬灭法测定奈韦拉平。结果在pH 6.0的磷酸盐缓冲介质中,荧光试剂的荧光淬灭程度与奈韦拉平浓度呈良好的线性关系。奈韦拉平的线性范围为5.0×10-7~1.0×10-5mol/L,检测限为1.0×10-7mol/L,相关系数0.9946,奈韦拉平回收率102%(n=5),RSD 2.57%,日内及日间RSD分别为2.64%和3.77%(n=5)。结论测定奈韦拉平含量的荧光淬灭方法具有杂质干扰少、操作简便等优点。     

结核分枝杆菌自身淬灭探针荧光定量PCR检测方法的建立

目的利用自身淬灭探针技术建立敏感、特异、快速、价廉且能广泛应用的结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒PET-32a（＋）-16srRNA作为标准品,自行设计自身淬灭探针,建立、优化定量PCR体系。并进行方法学评价及临床应用。结果所建立方法的线性检测范围为102～109copies／μL,灵敏度为lcopy／μL,特异性为100％。高拷贝样品的天问CV为2．65％、批内CV为1．86％,低拷贝样品的天间CV为2．12％、批内CV为0．78％。该方法比培养方法更快速、灵敏。结论以自身淬灭探针技术为平台的结核分枝杆菌荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,对结核病的早期快速诊断有较高价值。     

荧光原位杂交法在检测硫酸盐还原菌中的应用

目的 探讨荧光原位杂交法在检测淡水湖泊沉积物硫酸盐还原菌检测中的应用.方法 建立荧光原位杂交方法 并应用该法进行洱海沉积物硫酸盐还原菌含量分析,所用寡核酸苷酸探针为依据硫酸盐还原菌16SrRNA特异性区域而设计的SRB385.结果 荧光显微镜下标本中可见发特异性红色荧光的硫酸盐还原菌菌体.经荧光原为杂交分析,洱海沉积物前18cm硫酸盐还原菌含量为(0.08-8.50)×103个/g,平均为(1.91±2.51)×103个/g.硫酸盐还原菌含量在空间分布上表现为悬浮层、5和8cm深度有较小谷值,3、6和11cm深度有较高的峰值,其中11cm深度形成的峰较宽.结论 荧光原位杂交法具有快速准确、检测信号强、杂交特异性高的特点,可以进行淡水湖泊沉积物硫酸盐还原菌含量的检测.洱海沉积物硫酸盐还原茵含量丰富且不同深度的沉积物中硫酸盐还原菌含量分布是不均一的.     

NH4+敏传感器的研制及初步应用

目的结合平面半导体技术及生物化学原理,制作NH 4敏感的尿素传感器,并对其检测性能进行评价.方法采用平面半导体技术制作ISFET,在栅上固化脲酶得到NH 4敏尿素传感器,并在ISFET自身稳定性、传感器响应时间、检测范围及保存时间几个方面对该传感器进行评价.结果ISFET自身性能较稳定,传感器响应时间＜60s,尿素检测范围为10～1 000 mg/L,保存7 d内该传感器检测性能较稳定.结论NH 4敏感的尿素传感器有实际应用价值.     

增强型场效应管NH+4敏尿素传感器的实验研究

目的结合平面半导体技术及生物化学原理,制作NH 4敏感的尿素传感器,并对其检测性能进行评价.方法采用平面半导体技术制作ISFET,在栅上固化脲酶得到NH 4敏尿素传感器,并在ISFET自身稳定性、传感器响应时间、检测范围及保存时间几个方面对该传感器进行评价.结果 ISFET自身性能较稳定,传感器响应时间<60s,尿素检测范围为10～1 000mg/L,保存7d内该传感器检测性能较稳定.结论 NH 4敏感的尿素传感器有实际应用价值.     

毛细管电泳-激光诱导荧光检测装置的研制及应用

目的　自行组建高效毛细管电泳 -激光诱导荧光分析装置。方法　以波长 5 4 3.5 nm He- Ne激光为激发光源 ,滤色片 -单色仪分光 ,光电倍增管检测 ,用计算机采集和处理电泳图谱。结果　优化了毛细管电泳 -激光诱导荧光检测装置的设计和分析参数 ,用该装置获得了高信噪比毛细管电泳谱。对罗丹明类荧光试剂 (Sulforhdam ineB)溶液的检出限为 10 - 9m ol/ L,线性范围为 1× 10 - 6～ 1× 10 - 9mol/ L。采用该装置检测了分枝杆菌 DNA的 PCR扩增产物、酶切产物以及人血清白蛋白。结论　所组建的高效毛细管电泳 -激光诱导荧光分析装置结构合理 ,灵敏度高 ,成本低、光路校准方便 ,分离效能明显高于常规琼脂糖电泳 ,能作为研究生物样品中 DNA片段和蛋白质含量的有效检测手段。     

基于CRISPR-Cas12a系统反式切割活性的凝血酶检测技术研究

目的 通过构建快速、灵敏的凝血酶检测技术,为多种血管栓塞性疾病,如脑静脉窦血栓形成（cerebral venous sinus thrombosis,CVST）的早期诊断和治疗提供新的策略。方法 利用所筛选的高特异性凝血酶适配体设计发夹结构变构探针,用于高特异性识别凝血酶并将凝血酶信号转化为核酸信号。在变构探针识别凝血酶后,适配体结合凝血酶引发变构探针变构,暴露Cas12a活性部分。CRISPR-Cas12a系统识别活性部分后,其反式切割特性被触发,开始无序切割周围存在的单链DNA荧光探针,导致标记在荧光探针两端的荧光基团（Cy3）和淬灭基团（BHQ）分离,使处于被淬灭状态的Cy3荧光重新出现。所产生的荧光信号的强度与体系中存在的凝血酶浓度呈正相关。结果 通过荧光实验证实所设计的变构探针对凝血酶表现出极高的识别特异性和稳定性;在所优化的实验条件下,该方法表现出良好的检测性能,检测限为0.23 pmol/L。结论 该方法结合了高灵敏度、低成本和良好的便携性等优点,为凝血酶相关疾病的检测与精准诊断提供了强有力的技术支持。     

绿原酸抑制低密度脂蛋白非酶糖基化和氧化修饰研究

目的: 研究绿原酸对人体低密度脂蛋白（LDL）非酶糖基化和氧化修饰的抑制作用。方法: 建立LDL非酶糖基化孵育体系,采用紫外-可见分光光度法测定糖基化早期产物（Amodori产物）和中期产物（二羰基化合物）的含量,荧光分光光度计测定糖基化末期产物的含量;建立LDL氧化孵育体系,采用紫外-可见分光光度法测定硫代巴比妥酸反应物（TBARS）和共轭二烯的含量,荧光分光光度法测定色氨酸荧光淬灭强度以及脂褐素、总荧光产物、活性醛和丙二醛的含量,并进一步通过三维荧光等高线特征谱验证。结果: 在LDL糖基化修饰模型中,150 μg/mL和300 μg/mL的绿原酸均能够抑制Amodori产物、二羰基化合物和糖基化末期产物的生成;在LDL氧化修饰模型中,15 μg/mL和25 μg/mL的绿原酸均能够抑制TBARS的生成;5 μg/mL和10 μg/mL的绿原酸对色氨酸荧光淬灭,以及对活性醛、丙二醛、总荧光产物、脂褐素和共轭二烯的生成均有抑制作用。三维荧光等高线特征谱结果与前一致。结论: 绿原酸能够抑制LDL非酶糖基化和氧化修饰。