三种大鼠实验性肝损伤中细胞角蛋白异常表达及其机理

作者应用ABC免疫组织化学技术显示,奶油黄(DAB)、液氮致局部冻伤及CCl_4所致的3种肝损伤中也有细胞角蛋白(CK)异常表达肝细胞.①在肝局部冻伤及DAB性肝损伤模型中,表明不伴脂肪变性的肝细胞坏死不能直接引起肝细胞CK表达的改变;②在DAB性肝损伤中,肯定了卵园细胞对肝细胞CK表达改变的诱导作用,提出层粘连蛋白(LN)是卵园细胞产生的诱导物之一;③在CCl_4性肝炎及肝硬变中进行了CK和LN免疫细胞化学定位,表明肝细胞CK异常表达和LN异常沉积无论在位相上还是在时相上都密切相关,提出肝小叶结构破坏可能通过LN异常沉积而影响肝细胞的CK表达,LN等基底膜物质也是这一过程的诱导物;④在我们设计的一种局部肝冻伤模型上证实,肝细胞CK异常表达是肝小叶结构修复过程中肝细胞的适应性反应.     

肝细胞肝癌重要表面标志的表达和定位

目的肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我国常见恶性肿瘤。作为其主要标志分子的甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)表达具有一定局限性,临床需要联合其他标志分子以提高诊断准确性。文中旨在探讨若干候选生物标志物在中国人源HCC细胞和正常肝细胞中的表达和定位。方法采用直接或间接免疫荧光染色方法,探讨角蛋白(cytokeratin,CK)、去唾液酸糖蛋白受体1(asialoglycoprotein receptor1,ASGR1)和ASGR2、细胞表面分子(GPC3、CD90、CD133和EpCAM)等7种主要HCC表面标志分子在Bel-7402、Bel-7404和SMMC-7721等人HCC及正常肝细胞HL-7702的表达与定位情况。结果 CK、ASGR1和ASGR2在所有的肝来源细胞均表达;GPC3仅在HCC细胞表达。CD90、CD133和EpCAM仅在少量肝肿瘤干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)表达。结论 CK、ASGR1和ASGR2为肝细胞标志,GPC3是HCC相关标志;CD90、CD133和EpCAM仅在极少数肝肿瘤干细胞表达。     

胃黏膜特异表达JC病毒T抗原质粒构建及表达鉴定

 目的利用鼠胃黏膜上皮细胞中高活性的角蛋白19(K19)启动子构建K19-JCVT抗原表达质粒并进行鉴定。方法利用PCR方法突变JC病毒T抗原中的NdeⅠ位点,并在两端插入BclⅠ位点,通过BamHⅠ位点将DNA片段与K19启动子连接,构建K19-JCVT抗原质粒。利用酶切和DNA测序确认其DNA序列。免疫组化筛选细胞角蛋白19阳性胃癌细胞,对细胞角蛋白19表达阳性的胃癌细胞系AGS进行K19-JCVT抗原质粒转染,用Western
      blot方法检测JCVT抗原的表达情况。结果K19-JCVT抗原表达质粒成功构建,AGS胃癌细胞系高表达细胞角蛋白19并用于K19-JCVT抗原表达质粒转染,转染K19-T抗原质粒的AGS细胞系有T抗原表达。结论同义突变和相似连接在质粒构建中起到关键作用,酶切位点的甲基化也是值得注意的问题。     

人肝病变组织低分子量角蛋白CK19的表达

目的研究低分子量角蛋白CK19在人肝细胞癌、肝癌前病变、肝硬化组织中的表达状况及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测56例肝细胞癌、8例肝硬化及9例正常肝组织中CK19的表达。结果56例肝细胞癌组织中26例CK19表达阳性,显著高于对照组(P<0.001),癌组织CK19多分布于腺样型或梁索型肝细胞癌。癌旁不典型增生组中异型增生细胞及卵圆细胞的CK19表达率(51.9%)显著高于癌旁非不典型组中肝细胞的表达率(17.2%),但与肝癌组织的表达率差别不大。肝硬化组中CK19的表达率为37.5%(3/8),阳性细胞均为卵圆细胞及异型增生细胞。结论肝细胞癌和增生的卵圆细胞及异型增生肝细胞表达CK19,提示CK19可做为判断肝细胞异型增生的一个指标。肝细胞癌CK19表达与其组织学类型有密切关系。     

CD44在小细胞肺癌中的异质性表达及意义

目的：探讨细胞粘附分子CD44在小细胞肺癌中的表达是否存在异质性及其临床意义。方法：应用免疫荧光细胞化学和免疫组织化学法检测3种小细胞肺癌细胞系和50例小细胞肺癌组织中CD44的表达。流式细胞仪分选出CD44^＋和CD44^-细胞亚群,体外Transwell实验研究细胞系中CD44不同表达强度细胞侵袭能力的差异。结果：H69、H209和H1688细胞系均呈CD44阳性表达,阳性百分率分别为82％±9．4％、79％±8．4％和88％±7．5％;不同细胞系之间及同一细胞系内表达强度均有差异。50例小细胞肺癌组织中23例可见CD44阳性表达,阳性率46％。CD44阳性癌细胞在癌巢中呈散在分布,癌巢周边部分的癌细胞及血管周围浸润的癌细胞呈聚集阳性表达。淋巴结转移组的阳性率为53．6％（22／41）,无淋巴结转移组的阳性率为11．1％（1／9）,两组间阳性率差异有统计学意义（P〈0．05）,CD44阳性表达与临床参数（患者性别、年龄、肿瘤大小）无相关性。体外侵袭实验发现H209和H1688细胞系中CD44^＋细胞亚群侵袭能力强于CD44^-细胞亚群。结论：CD44在小细胞肺癌细胞系及组织中有表达,且其表达存在异质性,CD44可能与癌浸润转移有关。     

瘦素及其受体蛋白在肝癌细胞中的表达及意义

目的:研究瘦素及其受体在人肝细胞癌细胞株中的表达情况,探讨其在肝癌发生过程中的可能作用。方法:制备人正常肝细胞株L02及人肝细胞癌细胞株HepG2、SMMC7721的细胞爬片,采用免疫组织化学染色法检测上述细胞株中瘦素和瘦素受体蛋白的表达,以医学图文分析系统进行定量分析。结果:人正常肝细胞株L02及人肝细胞癌细胞株HepG2、SMMC7721中均存在瘦素及其受体蛋白的阳性表达,并且瘦素及其受体蛋白的表达水平均是人肝癌细胞株高于人正常肝细胞株,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:瘦素及其受体以双重表达方式存在于人肝细胞癌细胞中,可能在肝癌的发生中起到一定作用。     

肝细胞癌中卵圆细胞表面标记的表达及意义

目的探讨卵圆细胞部分表面标记在肝细胞癌中的表达状况和意义。方法应用免疫组织化学SABC法检测20例肝细胞癌中CK7、CK19、CK18、CD34、e—kit抗原的表达。结果14例肝细胞癌CK7表达呈阳性，其阳性表达率为70％（14／20）；9例c—kit的阳性表达率为45％（9／20）；在20例肝细胞癌癌组织中的CK18全部呈阳性表达，CK19和CD34全部呈阴性表达。CK7、C—kit表达与患者年龄、性别无关，与肿瘤大小、是否合并肝硬化以及组织学分级也不相关（P〉0．05）。结论肝细胞癌癌组织中存在表达卵圆细胞表面标记的细胞，其表达CK7、C—kit，不表达造血干细胞标记物CD34。其进一步提示，肝细胞癌可能不是起源于肝干细胞而是来源于过渡性的前体细胞／祖细胞，如来源于Hering管的卵圆细胞。     

CK10和CK19在脂溢性角化病和基底细胞癌中的表达和作用

目的:通过分析角蛋白CK10,CK19在脂溢性角化病和基底细胞癌中的表达,探讨这两种蛋白在组织细胞增殖分化等方面的差异,根据在不同组织中角蛋白CK10,CK19的表达差异,分析两种疾病的诊断、治疗和预后.方法:用免疫组织化学的方法分别观察40例脂溢性角化病和40例基底细胞癌中CK10和CK19蛋白的表达,通过统计学进行分析.结果:在脂溢性角化中CK10阳性表达远高于基底细胞癌,差异具有统计学意义(P<0.01);在基底细胞癌中CK19阳性表达远高于脂溢性角化病,差异具有统计学意义(P<0.01).结论:研究进一步证明脂溢性角化病分化良好,为良性病变;而基底细胞癌癌细胞保持未分化,为恶性病变,两者分化差异明显.     

细胞角蛋白19及雌激素受体在甲状腺乳头状癌中的表达

目的:研究细胞角蛋白19(CK19)及雌激素受体(ER)在甲状腺乳头状癌中的表达。方法:应用SP法对81例甲状腺病变进行单克隆抗体CK19及ER的检测。结果:CK19在甲状腺乳头状癌中的阳性表达率为96.55% (28/29),且多为强阳性表达;其余52例甲状腺良性疾病的CK19基本不表达或仅为弱阳性表达;ER在29例甲状腺乳头状癌中的阳性表达率分别为72.41%(21/29),且多为阳性和强阳性,其余52例甲状腺疾病中ER的表达主要为阴性或弱阳性。结论:CK19和ER的表达对判断甲状腺良、恶性疾病,特别是对甲状腺乳头状癌的诊断具有一定的临床意义。     

小肝细胞癌、经典肝细胞癌和肝硬化免疫组化结果对比分析

目的 用多种单克隆抗体将近年来收集的小肝细胞癌与经典肝细胞癌、肝硬化标本进行对比检测研究。方法采用Envision方法以单克隆抗体AFP、AAT、CK19、CEA、CD34、CD68、PCNA、Ⅳ型胶原为一抗进行免疫组化标记。结果 小肝细胞癌、经典肝细胞癌AFP、AAT和CD34均为阳性，二者之间无显著差异。4例小肝细胞癌中3例CK19较强表达，1例CK19表达极少，经典肝细胞癌和肝硬化只有汇管区的胆管上皮CK19抗体是阳性。CD68、Ⅳ胶原抗体只在肝硬化中有表达，而小肝细胞癌、经典肝细胞癌结节内未见表达。PCNA小肝细胞癌阳性1例，经典肝细胞癌5例全部阳性，肝硬化则全部阴性。结论 (1)CD34和CD68在小肝细胞癌及肝硬化中表达的明显差异提示可以将其作为重要的鉴别标记。重要指标论点相符合。(2)高分化小肝细胞癌的癌结节内有独立的新生小叶间胆管存在，而经典肝细胞癌的肿瘤实质内未见新生小胆管，肝硬化只有在汇管区内的小胆管上皮上才有CK19抗体的表达，从另一个侧面为三者的鉴别诊断提供了帮助。(3)5例经典肝细胞癌中PCNA均为阳性，肝硬化则全部阴性。4例小肝细胞癌中有3例高分化癌未见阳性表达，1例中分化癌癌细胞中有PCNA的阳性表达，其阳性程度与5例经典肝细胞癌无明显差异。提示小肝细胞癌一般分化程度较高，如早诊断、早治疗，可以获得较好的预后，而PCNA可以作为预后不良的指标。     

正常肝组织和肝细胞系、肝癌组织及细胞系中连环蛋白P120的表达

目的：探讨正常肝细胞、肝癌细胞、正常肝组织和肝癌组织中连环蛋白P120（P120ctn)的表达及其在细胞内的分布，揭示连环蛋白与肝癌间的关系。方法：采用RT－PCR、免疫荧光标记（激光共聚焦显微镜）和免疫组织化学分析，分别对正常肝细胞、肝癌细胞、正常肝组织和肝癌组织中P120ctn进行检测。结果：RT－PCR检测结果显示，上述细胞和组织中均可检测到P120ctn同工蛋白1A和3A mRNA表达；免疫荧光标记和免疫组化检测结果显示，在正常肝细胞和正常肝组织中，P120ctn分布在细胞与细胞连接处和细胞膜上，而肝癌细胞和肝癌组织中P120ctn的分布发生了转位，胞膜表达减弱或消失，胞浆表达增强，出现核内转位。结论：P120ctn表达异常与肝癌的发生有一定关系，提示肝癌发生时肝细胞的信号转导功能和粘附功能发生异常。     

人肝细胞性和胆管细胞性肝癌的细胞角蛋白表达

为了明确用胆管型细胞角蛋白抗体在肝细胞性和胆管细胞性肝癌的鉴别诊断中的应用价值，我们用能在肝内特异性识别ＣＫ１９和ＣＫ１８的抗体及层粘连蛋白抗体进行了免疫组织化学研究。结果表明，１０例ＣＣ全为ＣＫ１９阳性，３７例ＨＣＣ中１４例（３８％）有ＣＫ１９阳性癌细胞，因此，我们提出ＣＫ１９表达与否不能作为鉴别ＨＣＣ和ＣＣ的标准，ＨＣＣ中ＣＫ１９表达与其分化程度无关，但与其组织学类型有关，呈腺样分化的癌巢全呈     

Expression of metadherin/AEG-1 gene is positively related to orientation chemotaxis and adhesion of human hepatocellular carcinoma cell lines of different metastatic potentials

Metastasis contributes to the poor prognosis of hepatocellular carcinoma (HCC). However, the mechanism through which a primary HCC cell develops into a metastatic phenotype is not well understood. The purpose of this study was to examine the correlation between metadherin (MTDH)/ astrocyte elevated gene-1 (AEG-1) expression in HCC cell lines of different metastatic potentials and such metastatic phenotypes as orientation chemotaxis and adhesion. MTDH/AEG-1 expression was detected by RT-PCR and western blotting in HCC cell lines (HepG2, Huh7, Sk-HEP-1, MHCC-97H). Distribution of MTDH/AEG-1 was observed by immunofluorescence staining and confocal laser scanning microscopy. The abilities of orientation chemotaxis and adhesion and the index of interaction between HCC cell lines and microvascular endothelial cell lines (MVECs, including HUVECs and HPMECs) were measured by chemotaxis assay and adhesion assay, respectively. The results showed that MTDH/AEG-1 protein expression was significantly higher in high metastatic potential cancer cell lines (Sk-HEP-1, MHCC-97H ) than in low metastatic potential cell lines (HepG2, Huh7) (P<0.05). The MTDH/AEG-1 protein was localized in the perinuclear region of HCC cells. Furthermore, the abilities of orientation chemotaxis and adhesion of HCC cells to HPMECs were increased as compared with those of HCC cells to HUVECs (P<0.05). The abilities of orientation chemotaxis and adhesion were much stronger in Sk-HEP-1 and MHCC-97H cells with MTDH/AEG-1 highly expressed than in HepG2 and Huh7 cells with MTDH/AEG-1 lowly expressed (P<0.05). These results suggested that the expression of MTDH/AEG-1 gene in HCC cell lines of different metastatic potentials was closely positively related to the abilities of orientation chemotaxis and adhesion of HCC cells. It was deduced that MTDH/AEG-1 might play a pivotal role in the lung-specific metastasis of HCC, which may be medi-ated through orientation chemotaxis and adhesion abilities of HCC cells. MTDH/AEG-1 may serve as a potential therapeutic target for HCC.     

肝细胞癌中CK7、CK19及AFP的表达相关性研究

目的探讨CK7、CK19在肝细胞癌（HCC）中的表达,以及与HCC患者甲胎蛋白（AFP）表达及临床病理特征的关系。方法收集65例原发性HCC患者的癌组织标本及血清标本,免疫组化检测CK7、CK19表达情况,并用ELISA法检测血清中AFP水平。结果HCC患者癌组织中CK7的表达阳性率为46.2%（30/65）,CK19表达阳性率为18.5%（12/65）。HCC癌组织中可见表达CK7、CK19的卵圆细胞,可同时表达AFP。CK19表达与血清AFP表达水平有显著相关性（P=0.000）。结论人类HCC中同样有卵圆细胞的存在,这部分HCC患者预后较差,AFP及CK19的联合检测可有助于这部分患者的早期诊断。     

原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的起源分析

目的观察原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的活化、分布、来源和免疫表达特征.方法应用HE染色、免疫组化S-P方法观察94例肝细胞癌(HCC)和12例肝内胆管细胞癌(ICC)和10例混合型肝癌的肝干细胞情况,用5例肝硬化和4例正常肝组织为对照.结果在原发性肝癌不同病理组织类型中干细胞免疫标志均有不同程度的表达,均可观察到肝于细胞向肝癌细胞的转化,以混合型肝细胞癌中肝于细胞免疫表型表达率最高(P＜0.05).结论不同病理组织类型的肝癌组织中均存在不同分化状态和不同来源的肝干细胞,可能由于肝干细胞(hepatic stem cell,HSC)分化不全或分化异常所致.     

Robo家族在肝癌细胞系的表达

目的研究不同肝癌细胞系中Robo1,Robo2、Robo3和Robo4的表达差异。方法用RT-PCR检测8个肝癌细胞系的mRNA表达。结果 Robo1和Robo4在这8个肝癌细胞系中均表达;Robo2只在PLC细胞系中微量表达;Robo3在Hep3B、Huh7表达较高,而97L和G2表达较低,其它细胞系均无表达。结论 Robo1、Robo2、Robo3和Robo4在不同的肝癌细胞系中表达水平不同,为研究Robo家族选择合适的细胞模型提供理论依据。     

肝细胞肝癌中肝脏干细胞标志物的研究

目的：检测人肝细胞肝癌中是否存在肝内干细胞（又称为肝前体细胞）以及分化状态如何,并探讨骨髓干细胞在肝细胞肝癌的病理过程中是否发挥作用。方法：用免疫组织化学法检测40例肝癌组织及癌旁组织中的HepParl（肝细胞标志物）、CK7和CK19（胆管细胞分化标志物）以及CD90（骨髓干细胞标志物）的表达情况。结果：在肿瘤结节边缘及肝硬化的门脉区可发现肝前体细胞的存在,并且HepParl、CK7和CK19表达阳性,而CD90表达阴性。结论：肝细胞肝癌可能是在肝前体细胞长期突变积累的基础上发展而成。     

缺氧再氧合过程中CD147基因在卵巢癌细胞系中的表达

目的:探讨缺氧再氧合过程中CD147基因在卵巢癌细胞系中的表达.方法:卵巢癌细胞系3-AO,HO-8910PM分别在混合气体缺氧仓中缺氧30 min后更换新鲜培养液,给予再氧合,常氧下继续培养0,4,8 h.激光共聚焦显微镜定位,定量检测CD147的表达.结果:CD147定位于细胞质.急性缺氧30 min后两种卵巢癌细胞系中CD147表达量明显高于对照组,再氧合4,8 h时CD147的表达量明显降低.两种细胞株均表现为再氧合4 h时CD147的表达与对照相比无明显差异(P>0.05),再氧合8 h时降为最低.结论:缺氧上调卵巢癌细胞系中CD147的表达,再氧合可使高表达回降.     

大鼠胎肝干细胞的体外分离、培养与鉴定

目的：体外分离、培养原代大鼠胎肝干细胞(HSCs),并对其生物学特性进行鉴定。方法：采用胶原酶灌注法及剪碎消化法分离大鼠胎肝干细胞，并用含10％优等胎牛血清的H-DMEM培养液培养。利用免疫细胞化学方法在激光共聚焦扫描显微镜下观察该细胞表面抗原的表达情况，进行鉴定。结果：分离的大鼠胎肝干细胞体外培养24 h贴壁，5 d左右可长成单层,光镜下为致密圆形细胞,边缘清楚。8 d后细胞铺展，呈上皮样，表达甲胎蛋白（AFP）抗原、细胞角蛋白（CK）18、细胞角蛋白（CK）19。结论：分离并鉴定为大鼠胎肝干细胞可在体外培养条件下迅速扩增。