大白鼠骨髓粒系祖细胞(GM-CFU-C)的体外琼脂培养

目前对多种动物的粒系祖细胞(GM-CFU-C)测试技术研究和应用日趋广泛。但是,迄今对大鼠骨髓GM-CFU-C体外琼脂培养的研究方法国内未见公开报道,国外有关文献也为数不多。我们在小白鼠骨髓GM-CFU-C体外琼脂培养方法的基础上,进行了较系统的探索,初步建立起     

骨髓干细胞体外双层软琼脂培养方法

造血干细胞与血液系统疾病有密切关系。利用骨髓造血干细胞培养,对各类血液病的病因、发病机理的探讨、临床诊断及疗效和预后的观察都有重要意义。1965年Pluznick 等首先报告用小鼠骨髓细胞或血细胞,在集落刺激因子(下称 CSF)作用下,在半固体琼脂培养基上,形成粒细胞和单核-巨噬细胞组成的集落(下称 CFU-C)。1970年 Pike 等进一步研究了人的骨髓细胞体外软琼脂培养技术,并成功地培养了人     

人骨髓、胎肝GM-CFU体外微量培养观察

我们在GM—CFU传统体外琼脂培养(简称全量法)基础上,参照葛忠良等建立的GM—CFC体外微量法(筒称微量法),对“正常人”骨髓及3.5～5个月胎龄的胎肝细胞悬液各9例进行了GM—CFU体外微量琼脂培养。“正常人”骨髓取自本院胸科手术中切除的肋骨,半小时内将骨髓细胞挤压在RPMI1640液,用吸管打散,过7号及41/2号针头后以2000r/min离心10min。弃上清,加适量RPMI1640液打散,淋巴细胞分层液(比重1.077)4ml的离心管内加上骨髓细胞分层以1700r/min离心25min.     

应用造血干细胞培养对血液病的研究

自1970年Pike和Robinson应用体外软琼脂培养技术,成功地培养了人骨髓粒系祖细胞(CFU—C)以来,造血干细胞培养技术被广泛用于造血理论和临床实践的研究,特别是对白血病、再生障碍性贫血(再障)的发病机理、诊断、治疗及予后等方面的研究提供了有价值的资料,本文采用人骨髓细胞体外培养皿琼脂培养方法,对白血病、再障及其他血液病作了初步观察,现将结果报导如下.     

小鼠肠道Caja1间质细胞膜雌激素受体的检测和分析

目的:检测并分析体外培养的小鼠肠道Cajal间质细胞(Interstitial cells of cajal,ICC)膜雌激素受体(Membrane estrogenreceptor,mER).方法:利用原代培养小鼠ICC,采用免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜技术分析ICC细胞膜雌激素结合位点;采用密度梯度离心法分离ICC细胞膜,采用同位素法、放射性配体结合分析法对mER的最大结合容量(Bmax)和平衡解离常数(kD)进行分析.结果:免疫组化结果证实体外成功分离培养小鼠肠道ICC;激光共聚焦观察显示,ICC细胞膜上存在雌激素作用位点;放射性配体结合分析及Scatchard分析证实ICC细胞膜雌激素受体的的受体最大容量(Bmax)为45.75 fmol/mg protein,平衡解离常数(kD)为0.717 3 nmol/L.结论:ICC表达mER,该受体可能介导雌激素对ICC的快速非基因组作用.     

冷冻保护剂二甲基亚砜的毒副作用及应用剂量研究

本文主要用台盼兰排斥试验、CFU-GM体外琼脂培养技术和细胞电泳技术研究了冷冻保护剂二甲基亚砜(DNISO)在4℃和室温条件下对细胞活力的影响。结果表明,DMSO对骨髓、胎肝和淋巴细胞的毒性在室温比在4℃时大。小鼠静脉注射DMSO的LDS0剂量为3.9364±0.8709mg/g体重。提出了应用DMSO作为冷冻保护剂冻存人骨髓和胎肝细胞悬液的临床输注方法和DMSO的剂量安全值。     

生长因子(EGF和PDGF-BB)对小鼠骨髓基质干细胞增殖的作用及其意义

目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和血小板源生长因子(platet-derived growth factor,PDGF-BB)对体外培养的小鼠骨髓基质干细胞(murine bone marrow stromal stem cells,mMSCs)增殖的作用,探索小鼠骨髓基质干细胞体外快速增殖的条件和方法.方法将小鼠骨髓基质干细胞进行分离和纯化培养后,加入EGF和PDGF-BB,利用3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入反映细胞增殖效果,倒置显微镜下观察细胞增殖及分化状态.结果EGF和PDGF-BB干预后,3H-TdR掺入(11456.14±968.86)dpm较对照组(3271.88±420.91)dpm明显增高,说明EGF和PDGF-BB可促进小鼠骨髓基质干细胞的增殖;倒置显微镜下观察可见EGF和PDGF-BB处理组mMSCs具有增殖优势,分化相对延迟,而对照组提前显示出自然分化现象.结论生长因子(EGF和PDGF-BB)可促进小鼠骨髓基质干细胞的增殖,是小鼠骨髓基质干细胞体外大量培养和快速增殖的有效刺激因子.     

体外微量琼脂法培养人类紅細胞系統先驅細胞

利用体外骨髓干细胞克隆生长技术,可以研究人类造血的早期状况。以往常用2种方法研究体外红细胞系发生,组织凝浆法和甲基纤维素法。近来,有人利用微量琼脂法培养人类T细胞克隆。作者则用此法培养人类骨髓红细胞系先駆细胞。先分离骨髓中单个核细胞,取30×10~4细胞混入1ml含20％胎牛血清,0.3％琼脂的     

促肾上腺皮质激素对小鼠骨髓粒系定向干细胞的抑制效应

本文报道了 ACTH 对小鼠腹腔琼脂扩散盒内拉系或单核—巨噬细胞团(CFU-C)生长的影响。无论是受体小鼠注射 ACTH(1单位/日,共五日),受体小鼠切除肾上腺后注射 ACTH(剂量同前)或培养体系内加入 ACTH(0.08～0.16单位/扩散盒)其细胞团产率都明显低于对照组,表明 ACTH 对小鼠骨髓 CFU-C 有直接抑制作用。     

小鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养

目的　建立成年小鼠骨髓间充质干细胞 (MSC)的分离和培养方法。方法　应用体外细胞培养技术将成年小鼠骨髓间充质干细胞自股骨、胫骨中分离、纯化和培养 ,用形态学鉴定培养的MSC ,用台盼蓝染色法及在光镜下观察分离培养的细胞和摄像纪录。结果　经培养存活的骨髓间充质干细胞呈长梭形 ,似成纤维样细胞 ,长宽比约为 2～ 3:1。结论　该方法是比较理想的骨髓间充质干细胞培养法     

组胺和甲氰咪胍对粒-单系祖细胞的影响

用体外琼脂培养法研究组胺和甲氰咪胍对小鼠粒-单系祖细胞的影响,结果表明,10~(-9)M～10~(-5)M 组胺和10~(-8)M～10~(-4)M 甲氰咪胍分别作用时,对粒-单系祖细胞的产率没有影响,用甲氰咪胍阻断 H_2-受体后,组胺可增加粒-单系祖细胞的产率和自杀率。对此结果的理论意义和临床意义进行了讨论。     

骨髓干细胞输注修复放疗免疫抑制的动物实验

目的 探讨骨髓干细胞 (bone marrowstem cell, BMSC) 对放疗所致免疫抑制小鼠的修复作用, 为干细胞用于临床修复放化疗后免疫抑制的患者提供一定的理论依据.方法 选择雌性BALB/C小鼠, 随机分为实验组、对照组和空白组, 实验组和对照组的每只小鼠经照射剂量为8 Gy的6 MV直线加速器X线照射, 随后实验组小鼠通过尾静脉输注小鼠骨髓干细胞1×107个, 0.2 m L, 对照组小鼠通过尾静脉输入0.2 m L生理盐水, 空白组小鼠不做任何处理.于移植后第15、25、35天用血细胞分析仪检测外周血血常规, 流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群 (CD3+、CD4+、CD8+) 、ELISA试剂盒检测血清免疫球蛋白Ig M变化情况, 并观察生存状态和存活率.结果经放疗所致免疫抑制的小鼠经骨髓干细胞输注后35 d存活率为80%, 未经输注的小鼠35 d存活率为10%;放疗后小鼠经骨髓干细胞输注后外周血白细胞数、淋巴细胞比例及CD3+T细胞亚群较未经输注干细胞的小鼠高 (P<0.05) ;在骨髓干细胞移植后第15天, CD4+%、CD8+%和免疫球蛋白Ig M最低, 随后逐渐升高 (P<0.05) ;骨髓干细胞移植后能降低免疫抑制小鼠外周血单核细胞比例及CD4+/CD8+比值 (P<0.05) .结论 骨髓干细胞的输注能够修复免疫抑制小鼠的免疫功能, 这为干细胞用于临床修复放化疗所致的免疫抑制的病人提供了一定的实验基础和理论依据.     

培养温度、时间及db-cAMP对骨髓细胞~3H-TdR参入的影响

本文以~3H-TdR参入技术探讨了几种因素对短期离体培养的小鼠骨髓造血细胞增殖活性的影响。结果表明:温度和时间的影响是十分明显的。为减少骨髓细胞原有的~3H_TdR参入活性的变化,骨髓样品应放在4℃下。db-cAMP的作用决定于浓度。10M~(-8)时,db-cAMP具有刺激效应。大于或小于该浓度,它显示抑制作用。     

组胺H_2-受体激动剂和H_1-受体激动剂对多能造血干细胞(CFU-S)细胞周期影响的拮抗作用

本实验显示组胺H_2受体激动剂4-甲基组胺可促使更多的多能造血干细胞进入细胞周期,而组胺H_1受体激动剂2-甲基组胺则能拮抗4-甲基组胺的这一作用。4-甲基组胺与2-甲基组胺对造血干细胞周期状态的影响之间又呈现相互竞争现象。文中讨论了上述实验事实的理论意义。     

HYDROCORTISONE POTENTIATES THE INHIBITORY EFFECT OF INTERLEUKIN-1 ON PANCREATIC BETA-CELL FUNCTION IN VITRO

To test the possible influence of hydrocortisone on the inhibitory effect of interleukin-1 on the pancreatic beta-cell function, insulin release and insulin content of newborn rat islets incubated without or with interleukin-1 and/or hydroc-ortisone were measured. Interleukin-1 (500 ng/1) resulted in a decrease of insulin release during day 1～3, but a partial recovery from inhibition during days 4～7. The insulin content of the islets was not changed significantly. Hydrocortisone had an inhibitory effect on insulin release (at 10~(-7) M) or both insulin release and insulin content of islets (at 10~(-6) M). Both 10~(-7) and 10~(-6) M hydrocortisone seem to prevent the initial decrease in insulin release exerted by interleukin-1 (500 ng/1) during day 1-3,but thereafter resulted in an even more marked decrease of insulin release correspon-ding to 51% (at 10~(-7) M) or 25% (at 10~(-6) M) of control islets, respectively, duringdays 4～7. Rebound of insulin release after interleukin-1 was not seen. Insulin c     

雌激素对小鼠骺板AgNORs的影响

目的：探讨雌激素对骨的作用机制。方法：采用体外培养胚胎小鼠长骨模型，激素对板软骨细胞核仁组成区嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲｓ）数目和面积的影响。结果：当雌酚酮 度为１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ，静止区和增殖区ＡｇＮＯＲｓ颗粒面积／细胞总面积与对照线相比有显差异（分虽为Ｐ〈０．０５和Ｐ〈０．０１），雌酚酮浓度为１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ时，只有增殖区与对照组有差异（Ｐ〈０．０５），当浓度降至１０＾－９ｍｏｌ／Ｌ时，各区均与对照组无统计学差异，在增殖区，ＡｇＮＯＲｓ颗粒数随雌酚酮浓度降低而减少，当雌酚酮浓度降至１０＾－９ｍｏｌ／Ｌ时，与对照组无差异，雌酚酮对静止区和肥大区ＡｇＮＯＲｓ颗粒数无显影响。结论：雌激素可能增强软骨细胞伯增殖活性，保进软骨细胞分裂，增殖，从而促进软骨内成骨。     

乙酰胆碱对蟾蜍心脏的双重作用

将Ach配成10~(-14)、10~(-13)……10~(-2)M—系列溶液,观察对离体蟾蜍心脏收缩的影响。发现在阿托品化前和后,10~(-14)～10~(-11)M和10~(-9)～10~(-6)M的Ach使心脏收缩产生轻度增强效应;10~(-9)～10~(-6)M和10~(-4)～10~(-3)M的Ach使其产生抑制作用。兴奋效应与NE释放有关;抑制作用在阿托品化前为Ach作用M_1受体所致,阿托品化后主要与M_2受体有关。     

电离辐射诱导小白鼠染色体畸变的比较研究

本文采用不同剂量的~(?)C_0—γ射线对小白鼠作一次性全身均匀照射,诱发骨髓细胞染色体畸变。统计各种类型的畸变,对结果进行回归分析,作出了剂量—效应曲线。在实验的辐射剂量范围内剂量—效应关系呈线性。     

AGE-RELATED CHANGES OF BONE MARROW OF NORMAL ADULT MAN ON DIFFUSION WEIGHTED IMAGING

Objective To investigate the signal intensity and apparent diffusion coefficient （ADC） of bone marrow of normal adult man on diffusion weighted imaging （DWI）.
Methods Fifteen healthy volunteers and thirty-eight patients with benign prostatic hyperplasia or normal prostate were enrolled in this study, with age range 28-82 years old （mean 55.26 ± 18.05 years）. All people were examined with large field DWI on a 3.0T magnetic resonance scanner, which ranges from the top of head to the lower limb. The signal-to-noise ratio （SNR） on the DWI and ADC of lumber vertebra at renal hilum level, left ilium and superior segment of left femur were measured. The measured SNR and ADC value of the above sites were compared by one way analysis of variance and their correlations with age were investigated by Pearson＇s correlation analysis.
Results The SNR of lumber vertebra, left ilium and left femur showed no significant difference （F = 0.271, P = 0.763）. The SNR of lumber vertebra （r = 0.309, P = 0.024） and left ilium （r = 0.359, P = 0.008） showed positive correlation with age, while the SNR of left femur showed no correlation with age （r = -0.163, P = 0.283）. The ADC of lumber vertebra [（0.617 ± 0.177） ×10^-3 mm^2/s] was significantly higher than that of left ilium [（0.404 ± 0.112） ×10^-3 mm^2/s, P 〈 0.001] and left femur [（0.362 ± 0.092） ×10^-3 mm^2/s, P 〈 0.001], while the ADC of left ilium and left femur had no significant difference. The ADC of lumber vertebra, left ilium and left femur showed no correlation with age.
Conclusion Understanding of age-related changes of normal adult bone marrow on DWI is very important to differentiate the normal bone marrow and abnormal lesions.     

组胺受体激动剂及其拮抗剂对红系祖细胞产率的影响

研究组胺及其拮抗剂对早期和晚期红系祖细胞(BFU-E 和CFU-E)产率的影响。结果表明,一定浓度的组胺和2—噻唑乙胺对CFU-E和BFU-E的产率均产生抑制效应,而4—甲基组胺则无此作用;事先用甲苯苄二胺阻断H_1-受体,能减弱组胺对CFU-E和BFU-E的抑制效应;相同条件下用甲氰咪胍阴断H_2-受体无此效应。提示组胺对红系祖细胞的抑制效应系通过组胺H_1—受体所介导。