鹭科和鸬鹚科卵黄抗体的纯化

目的纯化鹭科具有代表性的夜鹭及鸬鹚科具有代表性的鸬鹚的卵黄抗体IgY。方法采用了水稀释法和硫酸铵分级沉淀法粗提IgY,再过HiTrap IgY Purification HP柱子进一步纯化。结果经两步纯化,得到了纯化的鸬鹚和夜鹭的卵黄抗体IgY,经SDS-PAGE检测为电泳纯,夜鹭和鸬鹚的卵黄抗体的相对分子质量约为180×103。结论证实了鸬鹚和夜鹭的卵黄抗体IgY的存在及其特性,为这两种鸟类的卵黄抗体IgY纯化,二级抗体制备提供了参考。     

改良的硫酸铵沉淀法纯化大雁的卵黄抗体

目的探索有效的纯化大雁卵黄抗体及高效价二抗的方法。方法应用了PEG沉淀,阴离子交换柱,硫酸铵分级沉淀纯化,免疫制备二抗,免疫电泳和免疫双扩散法及western blotting进行效价的测定。结果改良后的硫酸铵沉淀法的纯度远远高于PEG沉淀,相对于离子交换法而言更加简单方便,经济省时。从免疫电泳看已达到了电泳纯,大雁卵黄IgY的相对分子质量为180×103,重链约为66×103,轻链约为24×103。免疫获得的二抗有较强的免疫活性。结论用改良的硫酸铵沉淀法纯化大雁卵黄抗体,效率和纯度显著提高,值得推广。本实验为大雁卵黄抗体及其二抗的应用奠定了基础,也为雁形目其他种类卵黄抗体的纯化提供了参考。     

三种鸡形目雉科禽类卵黄抗体的纯化及二抗的制备

目的纯化三种鸡形目雉科的禽类孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY,并且免疫家兔制备抗血清。方法采用了水稀释法,HiTrap IgYPurification HP免疫亲和层析法和硫酸铵沉淀法纯化IgY。免疫家兔制备抗血清,免疫双扩散法测定效价。Protein-A亲和纯化兔抗IgY血清IgG。结果经亲和纯化和盐析纯化,得到了孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY,经SDS-PAGE检测为电泳纯,孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY的相对分子质量约为180×103。免疫后经Protein-A亲和纯化后获得了兔抗IgY的IgG。结论证实了孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY的存在及其特性。雉科鸡形目禽类卵黄抗体的纯化方法相似,可以推广到鸡形目其它禽类的卵黄抗体的纯化中,获得的抗血清可以进一步进行标记和今后抗原的检测。     

卵黄LT抗毒素的制备与鉴定

目的：为了进一步进行不耐热肠毒素（LT）研究，制备较纯的抗LT抗体是必要的。方法：采用初步纯化的LT免疫母鸡，从所产蛋的卵黄中提取并纯化卵黄LT抗毒素（EyIgG)，用ELISA竞争抑制试验和对流电泳鉴定其抗原性。结果：证实其有LT抗体特异性，效价分别为1：10和1：8。此抗体能保护小鼠逃脱LT的攻击，保护效价为1：16。结论：从卵黄中提纯制备LT的方法是可行的。     

p53蛋白的原核表达及其鸡卵黄抗体的制备

目的制备抗p53蛋白卵黄抗体。方法原核表达p53融合蛋白,纯化后免疫产蛋母鸡。结果融合蛋白能有效刺激母鸡产生抗体,末次免疫后其卵黄抗体滴度达到1∶106,并且能维持较长时间。结论本文介绍的方法是一种简便、经济、特异、高效、均一、来源充足的抗体产生方法。     

p53蛋白的原核表达及其鸡卵黄抗体的制备

目的 制备抗p53蛋白卵黄抗体。方法 原核表达p53融合蛋白，纯化后免疫产蛋母鸡。结果 融合蛋白能有效刺激母鸡产生抗体，末次免疫后其卵黄抗体滴度达到1：10^4,并且能维持较长时间。结论 本文介绍的方法是一种简便、经济、特异、高效、均一、来源充足的抗体产生方法。     

抗HLA-A*0201重链卵黄抗体的制备及初步鉴定

目的制备高效价特异性鸡卵黄免疫球蛋白(Yolk immunoglobulin,IgY)抗体。方法用纯化HLA-A*0201重链抗原加完全福氏佐剂免疫岭南黄鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后,用ELISA鉴定其免疫学活性,测定纯化后蛋白含量,并用SDS-PAGE进行分析鉴定。结果获得ELISA效价为1×106的抗重链IgY抗体,蛋白含量为9.77 mg/ml。经SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度达90%以上。结论用重链抗原加福氏佐剂免疫种鸡制备的IgY抗体产量多、效价高,为结合HLA-A*0201复合体诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞活化奠定了基础。     

鸡卵黄抗体的制备及其不均一性

介绍了免疫期卵黄液中白蛋白（牛）抗体效价和亲合力的变化。研究了ＰＨ对稀释卵黄液去脂效果，以及硫酸铵浓度对ＩｇＹ浓缩、纯化效果的影响。探讨了抗白蛋白ＩｇＹ的异质性。实验表明稀释卵黄液酸化处理和ＩｇＹ盐析的最适合条件分别是ＰＨ５．１和２．２ｍｏｌ／Ｌ。经免疫亲和柱层析或金属螯合亲和柱层析后，白蛋白抗体样品均出现多个不同层析行为的抗体峰。实验提示免疫卵黄液中不仅可能存在不同亲合力、特异性的白蛋白抗体，还     

抗脂蛋白脂酶卵黄抗体IgY的制备

目的:用人脂蛋白脂酶制备鸡卵黄抗体,并研究其应答持久性、稳定性.方法:用纯化的人脂蛋白脂酶免疫生蛋鸡,琼脂糖免疫扩散法测定IgY抗体效价变化.PEG法结合Sephadex-150凝胶过柱提取抗体;ELISA法测抗体对酸、碱、酶的稳定.结果:免疫后大约3～4周抗体效价达到高值,此高效价可持续3个月;抗体含量为8.11mg/ml蛋黄;IgY在70℃以下基本不失活;在pH4～10时活性无明显变化;胃蛋白酶处理90min后IgY活性稳定.结论:用人脂蛋白脂酶免疫鸡可制备高效价的特异抗体IgY,抗体应答时间持久、稳定性好.     

抗沙门氏菌IgY抗体的制备及其基本特性分析

目的制备高效价特异性的抗沙门氏菌IgY抗体,并对其基本特性进行分析和鉴定。方法以沙门氏菌作为抗原免疫产蛋的京白鸡,待抗体产生后,经过50％饱和硫酸铵盐析、透析、以及聚乙二醇浓缩等步骤纯化抗体。蛋白质定量后,再通过SDS—PAGE和ELISA等方法对该抗体进行分析鉴定。结果经抗原免疫的母鸡,10d左右就可从其所产蛋的卵黄中检测出特异性IgY抗体,抗体量在30d左右达到高峰,经纯化的抗体通过还原性SDS—PAGE显示两条带,其分子量约为67kD和28kD,抗体纯度可达92．1％。结论成功制备了抗沙门氏菌IgY抗体,实验结果表明IgY抗体是一种产量高,制备简便的新型抗体,并且高效价抗体持续时间较长,其特异性也较好。