黄鳝IgM的分离纯化及兔抗黄鳝IgM抗血清的制备

目的分离纯化黄鳝血清免疫球蛋白,制备其兔抗血清,并检测抗血清的特异性。方法用Protein A亲和层析的方法纯化黄鳝血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价,通过western blotting检测抗血清的特异性。结果纯化了黄鳝血清免疫球蛋白,免疫双扩散法测定兔抗黄鳝免疫球蛋白血清效价为1∶32,western blotting结果显示抗血清具有很好的特异性。结论成功纯化了黄鳝免疫球蛋白,制备了兔抗黄鳝IgM抗血清,为建立黄鳝的血清学检测系统奠定了基础。     

兔抗五种鱼免疫球蛋白抗体的制备和HRP标记

目的制备兔抗鱼类免疫球蛋白抗体并进行辣根过氧化酶标记,为鱼类血清学检测系统的建立提供工具。方法利用proteinA亲和层析的方法纯化鱼血清免疫球蛋白,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗鱼免疫球蛋白的抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗鱼免疫球蛋白的抗体进行HRP标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blotting来考察标记抗体与其他常见鱼类血清蛋白间的交叉反应。结果纯化了鳙、鲤、乌鳢、黄鳝、鲈五种鱼血清免疫球蛋白,免疫双扩散法测定兔抗这五种鱼免疫球蛋白的抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗鳙、鲤、乌鳢、黄鳝、鲈五种鱼类免疫球蛋白的抗体进行了HRP标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶10000左右,Western blots显示标记抗体与部分其他鱼类免疫球蛋白之间存在不同程度的交叉反应。结论成功制备了HRP标记的兔抗鱼类免疫球蛋白抗体,为鱼类血清学检测体系的建立提供了工具。     

蝙蝠血清IgG的纯化及兔抗蝙蝠IgG酶标抗体的制备

目的纯化蝙蝠血清IgG,制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体。方法采用亲和层析纯化法纯化蝙蝠血清IgG,SDS-PAGE电泳鉴定蝙蝠IgG纯度。免疫大白兔制备兔抗蝙蝠IgG抗血清,免疫双扩散法测定抗血清效价,亲和层析纯化法纯化抗血清IgG。用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,直接ELISA和Western blot法对兔抗蝙蝠IgG酶标抗体进行工作浓度测定。结果纯化的蝙蝠血清IgG,其SDS-PAGE测定纯度大于95%;免疫大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价为1∶64;用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,其直接ELISA和Western blot工作浓度分别为1∶12800和大于1∶2000。结论制备了蝙蝠血清IgG的抗血清和酶标抗体,为蝙蝠的血清学检测体系提供了技术和资源储备。     

貉血清IgG纯化及抗血清的制备

目的制备高纯度貉血清IgG和兔抗貉IgG抗血清,作为建立多种动物抗体检测技术的储备。方法采用Hitrap Protein A亲和层析及盐析再沉淀法纯化貉血清IgG,通过PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法对IgG作纯度及免疫活性检测;常规免疫法制备兔抗貉IgG血清。结果貉血清IgG与Protein G虽有较强的结合力,但同时也结合血清中其他杂蛋白;用二步纯化法可从5 mL貉血清中纯化IgG约7 mg,电泳和免疫印迹测定显示,IgG纯度大于95%,常规免疫法制备抗血清免疫双扩散效价达1∶32。结论建立了可行的貉血清IgG的纯化方法和高效价的兔抗貉血清IgG抗血清,为貉血清IgG二级抗体酶联物的制备储备了资源。     

人血清Lp(a)的抗血清制备

用分离纯化的人血清Lp(a)免疫兔得到兔抗人Lp(a)抗血清,用免疫双扩散测定其效价为1:4。     

兔抗金黄地鼠酶标抗体的制备及应用

目的纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测。方法采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG, 用SDS- PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab₂)；用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG(Ab₂)；采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(rabbit anti-hamster IgG-HRP)；用直接ELISA 和 Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定；应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA)。结果金黄地鼠血清IgG纯度达95%；兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab₂)免疫双扩散效价为1:64；兔抗金黄地鼠IgG-HRP经直接ELISA 和 Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000；酶免(IEA)效价为1∶2000。 结论高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件。     

七种常见宠物二级抗体的制备和HRP标记

目的 制备兔抗7种中国家庭中常见宠物的二级抗体,并进行辣根过氧化酶标记,为宠物血清学检测系统的建立提供工具.方法 利用饱和硫酸铵沉淀法粗纯抗体后,再利用protein A 或protein G 亲和层析的方法进一步纯化宠物的IgG,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗宠物的二级抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗宠物的二级抗体进行HRP标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blotting考察标记抗体的特异性.结果 纯化了狗、家猫、豚鼠、金仓鼠、松鼠、花鼠和龙猫7种宠物的血清IgG,免疫双扩散法测定兔抗这7种宠物的抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗7种宠物的二级抗体进行了HRP标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶(2000～15000)左右,Western blots显示标记抗体具有很好的特异性.结论 成功制备了HRP标记的兔抗7种中国家庭中常见宠物的二级抗体,为宠物血清学检测体系的建立提供了工具.     

长爪沙鼠IgG的纯化及抗血清的制备

目的纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清。方法采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清。结果7 mL长爪沙鼠血清纯化得到11 mg IgG;电泳和免疫印迹测定,IgG纯度大于95%;用纯化的IgG作抗原制备了兔抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32。结论建立了长爪沙鼠血清IgG的纯化方法,制备了长爪沙鼠IgG抗血清,证实长爪沙鼠血清IgG和Protein G具有较高的亲和性。     

九种重要经济动物二级抗体的制备和HRP标记

目的 制备兔抗9种重要经济动物的二级抗体,并进行辣根过氧化酶标记,为经济动物血清学检测系统的建立提供工具.方法 利用饱和硫酸铵沉淀粗纯抗体后,再利用protein A或protein G 亲和层析的方法进一步纯化动物血清IgG,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法纯化兔抗经济动物的二级抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的二级抗体进行HRP标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blotting考察标记抗体的特异性.结果 纯化了家猪,绵羊、山羊、牛、马、驴、狐狸、貉和黑貂9种重要经济动物的血清IgG,免疫双扩散法测定兔抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗家猪,绵羊、山羊、牛、马、驴、狐狸、貉和黑貂9种重要经济动物二级抗体进行了HRP标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶(2000～15000)左右,Western blots显示标记抗体具有很好的特异性.结论 成功制备了HRP标记的兔抗9种重要经济动物的二级抗体,为经济动物血清学检测体系的建立提供了工具.     

三种鸡形目雉科禽类卵黄抗体的纯化及二抗的制备

目的纯化三种鸡形目雉科的禽类孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY,并且免疫家兔制备抗血清。方法采用了水稀释法,HiTrap IgYPurification HP免疫亲和层析法和硫酸铵沉淀法纯化IgY。免疫家兔制备抗血清,免疫双扩散法测定效价。Protein-A亲和纯化兔抗IgY血清IgG。结果经亲和纯化和盐析纯化,得到了孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY,经SDS-PAGE检测为电泳纯,孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY的相对分子质量约为180×103。免疫后经Protein-A亲和纯化后获得了兔抗IgY的IgG。结论证实了孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY的存在及其特性。雉科鸡形目禽类卵黄抗体的纯化方法相似,可以推广到鸡形目其它禽类的卵黄抗体的纯化中,获得的抗血清可以进一步进行标记和今后抗原的检测。     

Argus软件在乙型肝炎肝硬化患者全肝及半肝体积测量中的应用

目的探讨采用心脏专用软件包(Argus)测量乙型肝炎肝硬化患者全肝和半肝体积的可行性。方法 53例乙型肝炎肝硬化患者,常规磁共振成像(MRI)扫描及钆喷酸葡胺增强后容积内插值体部检查(VIBE)序列扫描,容积数据传入西门子后处理工作站行多平面重建(MRP)。首先在viewing模式下诸层绘出全肝体积及左半肝、右半肝体积,并计算时间。然后将相同数据导入Argus软件计算全肝、右半肝及左半肝体积,并分别计算所用时间。采用直线相关分别对比手工测量和Argus测量全肝及半肝体积的相关性。采用配对t检验对比2种检查方法所需时间的差异。结果手工测量全肝、左半肝、右半肝体积分别为(977.1±225.3)、(522.1±143.4)、(455.0±165.0)cm3;Argus测量全肝、左半肝、右半肝体积分别为(975.3±220.8)、(532.3±129.4)、(450.7±162.4)cm3。手工测量和Argus测量全肝、左半肝、右半肝体积间均有相关关系(r=0.999、0.913、0.987;F=23 680、22 579、23 017;P<0.05)。手工测量所需时间为(40.73±3.93)min,明显长于采用Argus测量所需时间(10.45±1.81)min(t=21.88,P<0.05)。结论Argus软件与手工测量相比,对于肝硬化全肝及半肝体积测量相关性好,并且省时、简便,具有较高的临床应用价值。     

Fish odor syndrome

Fish odour syndrome (trimethylaminuria) is a metabolic syndrome caused by abnormal excretion of trimethylamine in the breath, urine, sweat, saliva and vaginal secretions. Trimethylamine is derived from the intestinal bacterial degradation of foods rich in choline and carnitine and is normally oxidised by the liver to odorless trimethylamine N-oxide which is then excreted in the urine. Impaired oxidation of trimethylamine is thought to be the cause of the fish odour syndrome and is responsible for the smell of rotting fish. Certain foods rich in choline exacerbate the condition and the patients have a variety of psychological problems. Recognition of the condition is important as dietary adjustments reduce the excretion of trimethylamine and may reduce the odour. Occasionally, a short course of metronidazole, neomycin and lactulose may suppress production of trimethylamine by reducing the activity of gut microflora.     

横根费菜的生药学研究及没食子酸的含量测定

目的:对横根费菜的组织形态进行鉴别,并建立横根费菜中没食子酸含量测定方法.方法:采集原植物,对该植物进行植物学及生药学的鉴定;采用HPLC-UV法,色谱柱为Hypersil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-体积分数为0.3%磷酸水溶液(94:6);检测波长:273 nm;流速:1.0 mL...     

实验用鱼类福利的发展现状

伴随着鱼类作为科研重要材料的迅猛发展,实验用鱼类福利引起了人们的关注。本文旨在阐述国内外鱼类福利发展的历史和现状,剖析鱼类福利实施困难的因素,提供提高福利的参考对策,以期帮助科研工作者进一步地了解实验用鱼类福利,促进在实验过程中鱼类福利的发展。     

鱼类抗病基因的研究进展

鱼类虽是低等脊椎动物，但它仍具有较完善的免疫系统。从体系方面来讲，鱼类的免疫防御系统由免疫细胞和免疫分子两部分组成。从应答方面来讲，鱼类的免疫防御系统又划分为先天性免疫细胞及分子和适应性免疫细胞及分子。鱼类的非特异性免疫系统在鱼类自身抗病作用中，较特异性免疫系统发挥更大作用。本文从鱼类免疫系统的防御功能，分别综述了主要组织相客性复合体基因、免疫球蛋白基因，补体基因、干扰素基因，凝集素基因、白细胞介素基因，抗菌肽基因、p53基因、溶菌酶基因，转铁蛋白基因，鱼精蛋白基因以及金属硫蛋白基因等12种鱼类非特异性免疫因子和抗病因子厦其基固的分子生物学研究进展，并分析了上述因子及其基因的特点。