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目的:观察丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白DNA疫苗诱导BALB/c小鼠体液免疫应答的效力,为研制应用于人类的HCV DNA疫苗提供实验依据。方法:将全长HCV核心蛋白基因插入真核表达质粒载体pcDNA3.1,构建HCV核心蛋白重组表达质粒pcDNA3.1HCVcore,肌注BALB/c小鼠,以ELISA法检测小鼠血清HCV抗体。以此重组质粒转染小鼠NIH3T3细胞,以HCV抗体阳性小鼠血清为捕获抗 相似文献
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HBV中片段表面抗原及E抗原真核表达质粒的构建与体外表达 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 构建乙型肝炎病毒(HBV)中片段表面抗原真核表达质粒和E抗原真核表达闰。方法 将编码HBV中片段表面抗原(preS2+S)的基因片段和E抗原(HBeAg_的基因片段分别插入真核细胞表达载体(pJW4303)中,构建成的重组体经筛选鉴定后,再转染哺乳动物细胞,检测表达产物。结果 电泳鉴定显示目的基因片段正确插入了表达载体。经筛选、纯化的阳性克隆转染哺乳动物细胞后可表达preS2+S和HBeAg 相似文献
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通过磷酸钙法用含HBVS基因的质粒pRc/CMVS与含筛选标记基因—neor基因的质粒pSV2neo对BALB/C近交系小鼠肥大细胞瘤细胞株—P815细胞进行了质粒共转染,并经G418筛选得到了G418抗性细胞,即P815S细胞。斑点杂交和免疫组化实验分别证实P815S细胞内有HBVS基因的存在;P815S细胞浆内和膜上有HBsAg的表达。表明了P815S细胞可作为体外检测BALB/C小鼠HBsAg特异性CTL的靶细胞。进一步对P815S细胞成功地进行51Cr标记,以及标记靶细胞51Cr最大释放值和自然释放值的测定表明:利用51Cr释放法体外检测近交系小鼠(BALB/C)HBsAg特异性CTL功能的方法被建立。 相似文献
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核酶对2.2.15细胞中HBeAg表达抑制作用的初步观察 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:观察针对H了C区双位点核酶对2.2.15细胞中HBeAg表达的抑制作用。方法:利用亚克隆技术,从质粒pGEM-Rz123切下EcoR1-BamH1片段克隆于真核表达质料pBBS212中,将该质料转染2.2.15细胞,用ELISA及免疫组化方法观察该核酶对HBeAg合成的抑制作用。结果:细胞表达出针对HBV C区核酶,该核酶对HBeAg的抑制制达48.6%。结论:该双位点核酶可能通过针对HBV 相似文献
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HPV16E6羧基端编码基因的克隆及真核细胞表达 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨用人乳头瘤病毒16型(HPV16)早期基因E6羧基端基因片段(E6C)研制DNA疫苗的可行性。方法:采用PCR方法从质粒pHPV16中获得E6C端基因片段,将其克隆入含巨细胞病毒(CMV)启动子的真核表达载体,脂质体介导基因转染LA795小鼠肺腺癌细胞并检测E6C的表达。结果:成功构建了真核表达质粒pLNCE6C,免疫组化结果显示真核表达质粒pLNCE6C在LA795细胞中获得有效表达。 相似文献
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乙型肝炎病毒X蛋白单克隆抗体的制备及肝癌组织中相应抗原的检测 总被引:2,自引:0,他引:2
应用基因工程技术制备的17000乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)免疫动物,成功地制备了抗-HBx单克降抗体,以此抗体对原发性肝癌(HCC)组织、慢性活动性肝炎(CAN)肝组织行相应抗原检测,并同时进行乙型肝炎表面抗原(HBsAg)及乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)的检测。在HCC标本中HBxAg在癌内及癌周肝组织中的阳性率分别为56%及48%,HBsAg为16%及74%。HBcAg仅见于癌周,阳性率为18%。在CAH标本中,HBxAg、HBsAg、HBcAg阳性率分别为6.6%、73.3%及0。血清HBsAg阳性HCC标本中,HBxAg的检出率为82.3%、明显高于血清HBsAg阴性标本(54.5%)。结果显示。HBxAg在HCC标本中的表达是HBV标志物中最活跃的。HBxAg的表达不依赖于HBV的复制,可能是HBVX基因同宿主细胞基因整合后的产物,HBxAg在HCC标本中的活跃表达为抗-HBx抗体作为HCC导向治疗载体提供了依据。 相似文献