芦荟大黄素对阿尔茨海默病大鼠PI3K/AKT/mTOR通路介导自噬的影响

目的 研究芦荟大黄素对阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）大鼠的神经保护作用以及可能的调控机制。方法 选择健康雄性SD大鼠30只,采用随机分组的方式将大鼠分为空白组、模型组和芦荟大黄素组,每组10只。采用腹腔注射D-半乳糖和双侧颅内海马注射Aβ25-35的方式联合进行AD大鼠模型的复制。芦荟大黄素组大鼠按10 mL/kg给予芦荟大黄素混悬液,空白组和模型组给予等容积纯水,共28 d。Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力,苏木精-伊红染色观察海马CA1区神经细胞损伤情况,Western blot法和qRT-PCR法分别检测大鼠海马磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B（protein kinase B, AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（the mammalian target of rapamycin,mTOR）通路蛋白、自噬相关蛋白及其mRNA的表达水平。结果 AD大鼠学习记忆能力明显下降（P＜0.05）,海马CA1区神经细胞出现明显损伤,而芦荟大黄素可显著改善 AD大鼠学习记忆能力（P＜0.05）,减轻海马CA1区神经细胞损伤;AD大鼠海马p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62蛋白表达水平明显增加（P＜0.05）,Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而芦荟大黄素可以显著减少AD大鼠海马p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62的蛋白表达水平（P＜0.05）,显著增加Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平（P＜0.05）;AD大鼠海马PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平显著增加（P＜0.05）,Beclin-1和LC3 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）,而芦荟大黄素可以显著减少大鼠海马PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平（P＜0.05）,显著增加Beclin-1和LC3 mRNA表达水平（P＜0.05）。结论 芦荟大黄素能够显著改善AD大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能是通过调控PI3K/AKT/mTOR通路介导的自噬来实现的。     

新风胶囊通过miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR抑制骨关节炎CD4+T与软骨细胞共培养的免疫炎症

目的 观察新风胶囊（XFC）含药血清通过调控miR-23a-3p /PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨关节炎（OA）CD4+T与软骨细胞共培养中免疫炎症反应的作用机制。方法 选取30例OA患者（OA组）及30例正常人（NC组）检测miR-23a-3p、10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达,观察临床指标：红细胞沉降率（ESR）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、IgA、IgG、IgM、补体 C3、补体C4的表达,并观察通路与临床指标的相关性。观察 30 例 OA 患者经 XFC 治疗后通路及临床指标的变化。分离及提取 OA-CD4 +T 细胞,transwell小室培养OA-CD4+T细胞与OA-CH,SD大鼠给药灌胃制备XFC含药血清;采用CCK8法检测OA-软骨细胞的细胞增殖;双荧光素酶报告实验分析miR-23a-3p和PTEN的靶向关系;RT-PCR技术检测共培养细胞中miR-23a-3p、PTENmRNA、PI3KmRNA、AKTmRNA、mTORmRNA 的表达;采用 ELISA 法检测 IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平;Western blotting 检测PTEN、PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与NC组相比,OA组miR-23a-3p、PTEN、PI3K、AKT、IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著上调,而PTEN、IL-10表达显著下调（P<0.01）;相关性分析表明：miR-23a-3p与IL-6呈正相关（P<0.01）,PI3K与IL-10呈正相关,mTOR与IL-6、IL-10、补体C3、补体C4呈正相关（P<0.01或P<0.05）;加入XFC含药血清,miR-23a-3p及PI3K/AKT/mTOR通路被抑制,L-1β、IL-6、TNF-α表达水平下降、IL-10表达水平升高（P<0.01）;Model组miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平升高,PTEN、IL-10表达水平降低（P<0.01）;miR-23a-3p经过表达后,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平显著升高,PTEN、IL-10表达水平显著降低（P<0.01或P<0.05）;XFC组IL-1β、IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR表达下调,PTEN表达上调（P<0.01或P<0.05）。结论 XFC可通过下调miR-23a-3p的表达,抑制PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路的活化,改善IL-1β、IL-6,IL-10和TNF-α的表达,降低OA患者炎症反应。     

基于PI3 K/AKT/mTOR信号通路研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用

目的 研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的关系.方法 给6～8周龄雌性大鼠灌服补肾调经Ⅲ号方制备含药血清.将3～4周龄雌性小鼠随机分为A、B组,A组灌胃蒸馏水,B组序贯灌胃补肾调经系列方(Ⅱ号方和Ⅲ号方),各灌胃12 d.第11天腹腔注射孕马血清促性腺激素(5 IU/只),48 h后剥离卵巢,取出卵丘-卵母细胞复合体(COCs)进行体外培养.将A组COCs分为空白对照组和抑制剂组(25μmol/L LY294002),B组分为补肾组(10％补肾调经Ⅲ号方含药血清)和补肾加抑制剂组(10％补肾调经Ⅲ号方含药血清+25μmol/L LY294002).体外培养18 h后,在显微镜下统计各组第一极体排出量并计算排出率.收集COCs,RT-PCR法检测各组COCs中Bcl-2、Bax、PI3 K、AKT、mTOR mRNA的表达,免疫荧光染色法检测各组COCs中Bcl-2、Bax、PI3 K、AKT、mTOR、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的蛋白表达.结果 第一极体排出率补肾组高于空白对照组(P<0.05),抑制剂组低于空白对照组(P<0.05),补肾加抑制剂组低于补肾组(P<0.05).RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,补肾组COCs中Bcl-2、PI3 K、AKT、mTOR mRNA表达及Bcl-2/Bax值均升高(P<0.05),Bax mRNA表达降低(P<0.05);抑制剂组COCs中Bcl-2、PI3K、AKT、mTOR mRNA表达及Bcl-2/Bax值均下降(P<0.05),Bax mRNA表达升高(P<0.05).与补肾组比较,补肾加抑制剂组COCs中Bcl-2、PI3K、AKT、mTOR mRNA表达及Bcl-2/Bax值均降低(P<0.05),Bax mRNA表达升高(P<0.05).免疫荧光染色结果显示,各组间PI3 K、AKT、mTOR蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,补肾组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3 K/PI3 K、p-AKT/AKT升高(P<0.05),Bax蛋白表达降低(P<0.05);抑制剂组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.05).与补肾组比较,补肾加抑制剂组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3 K/PI3 K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.05).结论 补肾调经系列方可通过调控PI3 K/AKT/mTOR信号通路、上调Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达的比值、抑制COCs凋亡从而促进小鼠卵母细胞成熟.     

PI3K/AKT/mTOR信号通路异常激活导致强直性脊柱炎患者的间充质干细胞自噬减弱

目的 比较强直性脊柱炎患者间充质干细胞（ASMSCs）与健康人间充质干细胞（HDMSCs）自噬水平的差异及其机制。 方法 将ASMSCs和HDMSCs种于6孔板,细胞贴壁后,实验组加入25 ng/mL α-肿瘤坏死因子（TNF-α）及培养液,对照组单纯加入培养液,诱导6 h后进行后续实验。用GFP-LC3B免疫荧光染色检测自噬情况,并通过检测LC3 II/LC3 I及P62的蛋白表达进一步确认。通过qRT-PCR检测基因表达水平,通过Western blot检测蛋白表达水平。使用TG100713特异性阻断PI3K的磷酸化以明确PI3K/AKT/mTOR通路与ASMSCs自噬减弱的关系。 结果 ASMSCs的LC3 II/LC3 I表达水平和GFP-LC3B免疫荧光斑点明显弱于HDMSCs（P<0.05）,而P62表达水平明显高于HDMSCs（P<0.05）。在自噬过程中,ASMSCs中p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表达明显高于HDMSCs（P<0.05）。阻断PI3K磷酸化后,p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表达及ASMSCs的自噬可恢复至HDMSCs的水平。结论 TNF-α诱导下,PI3K/AKT/mTOR信号通路异常是导致ASMSCs自噬减弱的关键,可能参与AS慢性炎症的发生。     

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路对电针干预慢性结肠炎大鼠的腧穴特异性及机制研究

目的：基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨电针“天枢”、“大肠俞”、“足三里”、“上巨虚”穴对慢性实验性结肠炎大鼠的效应差异及作用机制。方法：将60只清洁级SD大鼠随机分为正常组、模型组、天枢组、大肠俞组、足三里组、上巨虚组，每组各10只，采用免疫致敏法结合局部刺激制备慢性结肠炎大鼠模型；各腧穴组于造模结束后行电针干预，疏密波，频率2 Hz/50 Hz，电流强度2 mA，每日1次，20 min/d。分别观察各组大鼠结肠组织黏膜炎症损伤情况；ELSA检测大鼠血清中促炎因子IL-23、IL-17、IL-10水平；RT-PCR检测结肠组织中PI3K、Akt、mTOR mRNA的表达；Western blot检测结肠组织中p-PI3k/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白含量。结果：与正常组相比，模型大鼠一般状态较差，结肠黏膜受损严重，有大量炎性细胞浸润；血清中IL-23、IL-17表达水平明显升高，IL-10表达水平明显降低（P<0.01）；结肠组织中PI3K、Akt、mTOR mRNA及p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平显著升高（P<0...     

南方红豆杉水提物通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调控HER2阳性胃癌移植瘤生长实验研究

目的：初步探讨南方红豆杉水提物抑制磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide-3 kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,又称AKT） /雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路上相关靶点蛋白调控裸鼠人类表皮生长因子受体2（HER2）阳性胃癌移植瘤生长及其机制。方法：建立荷瘤裸鼠模型,将80只BALB/c裸鼠接种人HER2阳性胃癌NCI-N87细胞株并随机分组给药及取瘤,采用Western blot法检测PI3K、pAKT、mTOR蛋白表达情况,实时荧光定量PCR法检测PI3K、AKT1、mTOR mRNA表达水平。结果 ：Western blot法检测PI3K、pAKT、mTOR蛋白,红豆杉中、低剂量组下调PI3K蛋白表达更显著[（0.9123±0.0480、1.1440±0.1663）比1.4160±0.0730,P<0.01],红豆杉各剂量联合赫赛汀后明显下调pAKT蛋白表达（P<0.05）,红豆杉组均明显下调mTOR蛋白表达（P<0.01）,联合赫赛汀后下调更显著。2、实时荧光定量PCR法检测PI3K、AKT1、mTOR mRNA,红豆杉低剂量组PI3K mRNA表达降低[（0.6906±0.0710）比（0.9018±0.0696）,P<0.05],红豆杉各剂量组联合赫赛汀后明显下调AKT1 mRNA表达,红豆杉中、低剂量组mTOR mRNA表达显著降低[（0.8183±0.0664、0.7917±0.0699）比（1.0004±0.1182）,P<0.05）]。结论：南方红豆杉水提物可部分下调PI3K、pAKT、mTOR蛋白及PI3K、AKT1、mTOR mRNA表达水平,联合赫赛汀可增强其抑制作用。     

三七总皂苷对K562细胞增殖、凋亡及周期的影响及机制

目的研究三七总皂苷（PNS）对K562 细胞增殖、凋亡、周期的影响及其相关分子机制。方法采用MTT法检测PNS对
K562细胞增殖的影响;AO/EB双荧光染色法及Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞凋亡及死亡状况;流式细胞术检测K562
细胞的周期变化;RT-PCR检测mTOR信号通路主要分子mRNA的表达变化;Western blot 检测cleaved caspase-3 蛋白、cyclin
D1蛋白及mTOR信号通路主要蛋白及磷酸化蛋白的表达量变化。结果100~800 μg/mL的PNS 作用于K562细胞后能够抑制
细胞增殖。PNS能够上调cleaved caspase-3蛋白表达,促使K562细胞发生凋亡。并且下调cyclin D1蛋白表达,促使K562细胞
阻滞在G0/G1期。同时,PNS 能够抑制K562 细胞mTOR mRNA 表达,降低mTOR 蛋白和磷酸化蛋白p-mTOR（Ser2448）、
p-p70S6K（Thr229/389）及p-4E-BP1（Thr37/46）的表达,从而抑制mTOR信号通路活性。结论PNS 对体外培养K562细胞有抑
制增殖,促进凋亡,使其发生周期阻滞的作用。其机制可能与PNS抑制mTOR信号通路活性、上调cleaved caspase-3蛋白表达
及抑制cyclin D1蛋白表达有关。
     

黄芪甲苷对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其自噬机制研究

  目的  研究黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的保护作用,并探讨其潜在的作用机制。  方法  提取并培养新生大鼠心肌细胞,随机分为6组:对照组,H/R组,H/R+低、中、高浓度AS-Ⅳ（AS-Ⅳ终浓度0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L）组,和H/R+高浓度AS-Ⅳ（10 μmol/L）+AKT抑制剂（5 μmol/L）组。H/R前分组预处理心肌细胞（对照组和H/R组不进行预处理）48 h后,除对照组外,其余各组心肌细胞建立细胞H/R损伤模型。MTT法检测各组心肌细胞活力,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测自噬基因LC3-Ⅱ、p62的表达,Western blot 检测LC3-Ⅱ、P62蛋白和磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（PI3K/AKT）通路蛋白〔包括AKT、磷酸化（p-）AKT（p-AKT）、p-雷帕霉素（p-mTOR）〕和自噬启动因子未配位的51样激酶1（ULK1）的表达,免疫荧光染色检测心肌细胞自噬体P62的表达。  结果  AS-Ⅳ在本研究低、中、高浓度范围内以浓度依赖的方式改善H/R损伤下心肌细胞活力,并抑制H/R损伤后的心肌细胞自噬基因LC3-Ⅱ和p62 mRNA和蛋白的表达,抑制ULK1蛋白的表达（P<0.05）,添加AKT抑制剂后,AS-Ⅳ的以上作用被部分抑制（P<0.05）。AS-Ⅳ对AKT和mTOR蛋白的表达没有影响（P>0.05）,但可以促进AKT和mTOR的磷酸化（P<0.05）。免疫荧光染色检测结果显示,高浓度AS-Ⅳ可以逆转H/R损伤诱导的自噬体P62的表达。  结论  AS-Ⅳ对H/R损伤心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能是通过激活PI3K/AKT途径中的mTOR信号降低自噬水平,从而预防H/R损伤。     

柯萨奇病毒B3感染HeLa细胞后mTOR通路部分信号蛋白表达的变化

目的研究柯萨奇病毒B3(CVB3)感染宫颈癌细胞株(HeLa)后mTOR通路中信号分子哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)、p70S6激酶(p70S6K)、磷酸化真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)、磷酸化p70S6激酶(p-p70S6K)等蛋白表达的变化。方法 CVB3感染Hela细胞后3、6、9、12和24 h作为病毒组,未被CVB3感染的同时间点细胞作为对照组;运用Western blotting检测mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K、4EBP1、p-4EBP1表达的变化。结果①CVB3感染Hela细胞后,不同时间点感染后的mTOR、p-mTOR、4EBP1、p70S6K、p-4EBP1、p-p70S6K表达含量变化及与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②通过直线相关性分析发现,病毒组mTOR与p70S6K蛋白表达之间具有正相关关系,对照组间无相关关系;病毒组mTOR与4EBP1蛋白表达之间具有负相关关系,而对照组具有正相关关系;两组间的mTOR与p-mTOR均具有正相关关系,病毒组p70S6K与p-p70S6K蛋白表达具有正相关关系,对照组无相关关系。病毒组4EBP1与p-4EBP1蛋白表达无明显相关,对照组具有正相关关系。结论 CVB3感染HeLa细胞后可抑制mTOR/p70S6K通路,激活mTOR/4EBP1通路调控细胞的生长。     

氯化锂对脑缺血预处理后PI3K/AKT/GSK3β通路的影响机制

目的：研究脑缺血预处理（CIPC）中氯化锂对PI3K/AKT/GSK3β信号通路调节变化及影响。方法：制作脑缺血、CIPC及氯化锂干预模型,进行神经功能缺损评分;TTC法脑组织染色计算脑梗死体积;应用Western blotting检测AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β（ser9）、Mcl-1的蛋白表达。结果：与脑缺血组比较,氯化锂组及CIPC组p-AKT、Mcl-1、p-GSK-3β（ser9）的蛋白表达均增高,神经功能缺损评分及脑梗死体积降低（P〈0.05）;与CIPC组比较,氯化锂组进一步提高了p-AKT、Mcl-1、p-GSK-3β（ser9）的蛋白表达、降低了神经功能缺损评分及脑梗死体积（P〈0.05）。结论：脑缺血预处理增高p-GSK-3β（ser9）表达,增加p-AKT、Mcl-1的表达。氯化锂可加强脑缺血预处理的这一神经保护作用。     

AKT／FOXOs／Atrogin-1／MuRF1信号通路在慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌萎缩中的作用

目的探讨AKT／FOXOs／Atrogin-1／MuRFl信号通路在慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠骨骼肌萎缩中的作用。方法采用单纯熏香烟法复制COPD大鼠动物模型。采用逆转录．聚合酶链式反应（RT-PCR）和Westernblot技术检测COPD大鼠伸趾长肌内E3连接酶的两个肌肉萎缩特异性指标Atrogin-1和MuRF1,以及其上游FOXOs转录因子的基因与蛋白表达的变化;对伸趾长肌中磷酸化AKT（p-AKT）的蛋白表达及其与总AKT（t-AKT）的蛋白表达比率进行测定。结果RT-PCR分析结果显示,COPD大鼠伸趾长肌组织中的Atrogin-1的mRNA表达明显上调（P〈0．01）;MuRF1和FOXO-1的mRNA表达与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。Westernblot分析结果显示,伸趾长肌组织中Atrogin一1的蛋白相对表达量COPD组较对照组明显增加（P〈0．01）;MuRFl的蛋白表达COPD组较对照组增加（P〈0．05）;FOXO-1的蛋白表达两组比较无明显差异（P〉0．05）。COPD组大鼠伸趾长肌中P-AKT的蛋白表达较对照组增加（P〈0．05）,p-AKT／t-AKTCOPD组明显高于对照组（P〈0．01）。结论AKT／FOXOs／Atrogin-1／MuRF1信号通路参与COPD骨骼肌萎缩机制并发挥重要作用。     

抑制剂PI-103对786-O细胞株PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨抑制剂PI-103对786-O细胞株PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法:本文建立PI3K抑制剂作用786-O细胞模型,CCK-8法检测PI-103的IC50值,Western blot法检测PI-103作用后细胞内pAkt蛋白表达水平。结果:786-O细胞72 h的IC50为(9.06±0.06)μmol/L,在此浓度下,细胞内p-Akt蛋白的表达水平显著降低(P<0.01)。结论:PI-103通过抑制PI3K来调控PI3K/Akt/mTOR信号通路下游分子,此信号通路在肾细胞癌发生发展中起着重要作用,为肾细胞癌的分子靶向治疗提供理论依据。     

EGF通过PI3K/AKT通路介导小鼠卵巢颗粒细胞增殖

目的探讨表皮生长因子（EGF）介导,经PI3K/AKT信号通路调控小鼠卵巢颗粒细胞增殖的作用与机制。方法取分离纯化的小鼠卵巢颗粒细胞,添加10ng·mL^-1的EGF对其培养24h后,然后再添加20μM浓度的P13K抑制剂LY294002处理细胞72h,利用CCK-8检测颗粒细胞增殖情况;应用Real-time PCR法检测AKT mRNA的表达;应用Western blot法检测体外培养小鼠颗粒细胞中总AKT（t-AKT）及磷酸化AKT Thr308位点（p-AKTThr308）蛋白的表达情况。结果 （1）10ng·mL^-1的EGF对小鼠颗粒细胞增殖效应明显,能够显著提高AKT基因在颗粒细胞中的表达（P〈0.05）,能显著性促进t-AKT及p-AKTThr308蛋白的表达（P〈0.05）。（2）PI3K特异性抑制剂LY294002明显抑制EGF促进颗粒细胞增殖的效应（P〈0.05）。结论EGF能活化小鼠颗粒细胞的PI3K/AKT信号通路,促进颗粒细胞生长、增殖。     

鱼腥草素钠对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织PI3K?AKT1及mTOR mRNA 表达的影响

目的 观察鱼腥草素钠对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织中PI3K?AKT1 及mTOR mRNA 表达的影响,并探讨其作用机制?方法 选取Wistar 雄性大鼠24 只,体重(220 ± 20)g,随机分为正常组?模型组?地塞米松组和鱼腥草素钠组(每组6 只)?采用烟熏和脂多糖气管滴注联合方法建立慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD) 大鼠模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测PI3K?AKT1 及mTOR mRNA 表达,并观察大鼠肺组织病理变化?结果 与正常组相比,模型组大鼠肺组织PI3K?AKT1 mRNA 表达显著增高( P <0.01, P <0.05),mTOR mRNA 表达显著降低( P <0.01);与模型组相比,鱼腥草素钠组和地塞米松组肺组织PI3K?AKT1 mRNA 表达显著降低( P <0.01, P <0.05),mTOR mRNA 表达显著增高( P <0.01);与地塞米松组相比,鱼腥草素钠组肺组织mTOR mRNA 表达显著增高( P <0.05)?病理观察结果显示,与正常组比较,模型组局部肺实变,肺泡腔内大量中性粒细胞浸润,胶原染色显示肺间质纤维组织大量增生;鱼腥草素钠组和地塞米松组肺组织病理改变明显轻于模型组,鱼腥草素钠组和地塞米松组肺组织呈轻度间质性肺炎,仅见少量的纤维组织增生?结论 鱼腥草素钠能够减轻慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织损伤,其机制可能与其能够下调PI3K?AKT1 mRNA 的表达?上调mTORmRNA 表达有关?     

脑胶质瘤中IMP3的表达与PI3K/AKT信号通路相关性及靶向干预

目的 探讨胰岛素样生长因子II mRNA结合蛋白3（insulin-like growth factor-II mRNA-binding protein 3,IMP3）、磷酸肌醇三磷酸激酶-丝氨酸（phosphatidylinsitol 3-OH kinase-RAC-alpha serine,PI3K）、苏氨酸蛋白激酶（threonine-protein kinase,AKT）蛋白在人脑胶质瘤组织及细胞中的表达及相关性。 方法 采用免疫组织化学方法检测53例人脑胶质瘤组织及20例非瘤脑组织中IMP3,PI3K及AKT蛋白的表达情况;采用Westen-Blot及RT-PCR方法检测瞬时干扰IMP3基因后的胶质瘤U138细胞株IMP3、PI3K的蛋白及基因表达情况;检测抑制剂LY294002抑制U138细胞株的PI3K/AKT信号通路后相关蛋白IMP3、PI3K的表达情况。 结果 人脑胶质瘤组织中IMP3（P均=0.000）, PI3K（P均=0.000）和AKT（P均=0.000）蛋白的表达均高于非瘤脑组织中的表达,且表达程度（中重度阳性表达率,P均=0.000）随肿瘤病理级别升高而增高。胶质瘤U138细胞株干扰IMP3基因后,IMP3蛋白（P=0.038）及基因（P=0.031）的表达均降低,PIK3蛋白（P=0.019）及基因（P=0.023）的表达均降低,LY294002抑制U138细胞株的PI3K/AKT信号通路后,PI3K蛋白（P=0.039）及基因（P=0.035）的表达均降低,而IMP3的蛋白（P=0.907）及基因（P=0.102）表达没有明显变化。 结论 IMP3、PI3K、AKT蛋白的表达与胶质瘤的组织病理分级、肿瘤细胞增殖密切相关,IMP3与PI3K/AKT具有相关性,且有望成为治疗胶质瘤的一个新靶点。     

雷帕霉素抑制人神经母细胞瘤细胞株生长及诱导凋亡的机制研究

目的研究雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的生长抑制和诱导凋亡作用,以及对靶向信号通路磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（P13K／AkCmTOR）的影响。方敞用不同浓度的雷帕霉素（10、15、20μmol／L）处理SH-SY5Y细胞（雷帕霉素干预组）,以加入相同体积二甲基亚砜（DMSO）的SH-SY5Y细胞作为阴性对照组,设立空白对照组。CCK．8法测定细胞生长率;采用流式细胞仪检测细胞周期,通过AnnexinV-FITC／PI双染法检测细胞凋亡率;Westernblotting检测easpase-3剪切体及P13K／Akt/mTOR信号通路上下游分子PDKp85、Akt、mTOR、4E-BPl表达及其磷酸化水平的变化。结果与阴性对照组和空白对照组比较,雷帕霉素干预组细胞生长率显著降低（P〈0．05或P〈0．01）;G。／G,期细胞百分比显著增高（P〈0．05）;细胞凋亡率显著升高（P〈0．01）。Westernblotting检测结果显示：与阴性对照组和空白对照组比较,雷帕霉素干预组easpase-3剪切体表达水平较高;P13K／Akt/mTOR信号通路上下游分子的活性均被抑制,P13Kp85、Akt、mTOR、4E-BP1的磷酸化水平均明显降低。结论雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y具有抑制生长和诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制P13K／Akt/mTOR信号通路有关。     

PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对胰腺癌PANC-1细胞VEGF表达的影响

目的:探讨PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对人胰腺癌PANC-1血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:抑制剂LY294002和PD98095分别处理人胰腺癌PANC-1细胞,Western blotting检测细胞VEGF蛋白表达。结果:分析表明LY294002和PD98095处理后的PANC-1细胞的磷酸化AKT、磷酸化ERK1/2及VEGF蛋白表达水平均明显低于对照组VEGF(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2细胞信号通路能够下调VEGF蛋白表达,进而抑制肿瘤新生血管的生成及浸润转移能力。     

富血小板血浆促进人子宫内膜间充质干细胞(EnMSCs)增殖的机制

目的 探讨PRP促进EnMSCs增殖的机制,为EnMSCs的扩增及临床应用提供理论基础.方法 将EnMSCs随机分为对照组、2％PRP组、2％PRP+LY294002组,CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪监测细胞周期及Western Blot和ELISA检测细胞中p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR及p-m...