维甲酸对新生大鼠高氧性肺损伤转化生长因子-β1 表达的影响

目的:探讨高氧性肺损伤新生大鼠肺损伤过程中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达情况,并观察维甲酸(retinoic acid,RA)的干预效果,以期为临床防治高氧性肺损伤提供一条新的有效途径.方法:80只出生12h内的清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠作为研究对象.随机分成4组(每组20只):A组:空气对照组;B组:空气 RA组;C组:高氧组;D组:高氧 RA组.14天时观察大鼠的一般状况、体质量、肺湿重/干重值;光镜观察各组大鼠肺组织病理形态学;RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA水平;免疫组织化学染色方法检测TGF-β1蛋白表达.结果:14天时高氧组体质量明显减轻,肺组织肺湿重/干重比值、TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平显著高于其他各组(P<0.05);高氧 RA组14天时病理改变减轻,肺湿重/干重值、TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平较高氧组明显降低(P<0.05),与空气对照组及空气 RA组相比差异无显著性(P>0.05).结论:高氧性肺损伤新生大鼠TGF-β1表达增加,RA早期干预可以通过下调TGF-β1的表达对高氧性肺损伤具有改善作用.     

转化生长因子-β_1在新生大鼠高浓度氧致肺损伤中的作用研究

目的 观察应用外源性抗转化生长因子-β1(TGF-β1)抗体作用下TGF -β1在新生鼠高浓度氧(高氧,>95%O2)致肺损伤的表达.方法 将足月SD新生大鼠随机分为3组:空气对照组(Ⅰ组),高氧(>95%O2)组(Ⅱ组),高氧(>95%O2)+抗TGF-β1抗体0.4mg/kg组(Ⅲ组).每组20只,观察及检测高氧暴露3、7、14和28d时各组动物肺组织病理改变、TGF-β1免疫组织化学染色.结果 Ⅱ组3和7d时表现为明显的急性炎症改变,肺组织水肿、渗出、出血、肺泡间隔轻度增厚,14d时急性炎症减轻,而肺组织中TGF-β1表达呈强阳性;28d时出现明显的胶原沉积,形成纤维化;Ⅲ组3和7d时仍有轻度炎症反应,14和28d无明显成纤维细胞增生及胶原生成,未形成肺纤维化,Ⅲ组各时相点TGF-β1的表达明显减弱,与Ⅰ组比较差异无统计学意义.结论 新生鼠持续吸入高氧后可导致急、慢性肺损伤.高氧暴露可刺激肺部产生过量的TGF-β1,提示TGF-β1在肺纤维化过程中起重要作用;高氧暴露时给予外源性抗TGF-β1抗体对新生鼠高氧暴露有明显保护作用,可减轻高氧急性肺损伤,能有效阻断高氧肺纤维化损伤的发生、发展,从而减轻肺纤维化损伤.     

降钙素基因相关肽在高氧致幼年鼠肺损伤中的动态变化及意义

目的：探讨降钙素基因相关肽（CGRP）在高氧肺损伤形成过程中的作用．方法：SD大鼠64只按随机数字表法分为8组,每组8只,分别为空气对照组和高氧暴露1d组、3d组、7d组、14d组．通过肺组织形态学及肺组织湿／干质量,了解高氧肺损伤炎症水肿的病理改变、放射免疫法检测肺组织匀浆中CGRP含量,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定肺组织内CGRP的两个亚型（α-CGRP,β-CGRP）的mRNA表达．结果：高氧暴露组3～7d肺组织充血水肿,大量炎性细胞侵润;14d肺泡腔扩大,肺纤维细胞增生;高氧暴露7～14d组肺湿／干质量明显高于空气对照组;随高氧暴露时间延长,肺组织匀浆中CGRP浓度逐渐增高,于第3日达峰值,之后逐渐下降,第14日降至正常水平;肺组织中CGRP两个亚型mRNA表达不同,α—CGRPmRNA在高氧刺激24h内表达开始增高,高表达持续至高氧暴露7d,7d后表达明显降低;β-CGRPmRNA表达晚于α-CGRPmRNA,在高氧刺激3d时表达开始增高,高氧暴露14d仍处于高表达状态．结论：CGRP参与高氧肺损伤的形成过程,并在减轻高氧致肺损伤方面可能起着重要的作用．     

γ-干扰素对新生大鼠高氧肺纤维化的影响

目的研究γ-干扰素(IFN-γ)对新生大鼠高氧肺损伤的影响,以观察转化生长因子transforming growth factor-β(TGF-β)在新生大鼠高氧肺纤维化中的作用.方法新生大鼠随机分为:Ⅰ组-高氧对照组,Ⅱ组-高氧 IFN-γ组,Ⅲ组-空气对照组.检测暴露7d、14d、21d及28d时各组的肺组织病理学变化,肺组织TGF-β免疫组织化学染色.结果 7d时高氧对照组表现为明显的急性炎症,肺泡间隔轻度增宽,TGF-β表达强阳性;28d时出现明显的纤维化改变;高氧 IFN-γ组与空气对照组的肺组织病理改变类似,TGF-β表达弱阳性,无明显纤维增生反应.结论 IFN-γ减轻高氧诱导的纤维增生及肺泡发育与结构异常,TGF-β在高氧诱导的肺纤维化损伤过程中可能起了重要作用.     

宫内致敏及生后高氧暴露对新生小鼠TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的观察宫内炎性致敏及生后高氧暴露新生小鼠转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在新生鼠肺组织的表达情况,探讨支气管肺发育不良(Bronchop-ulmonary dysplasia,BPD)发病机制。方法新生小鼠按照随机数字表法分为LPS组+空气组、LPS+高氧组、生理盐水+空气对照组、生理盐水+高氧组,应用HE染色、放射性肺泡计数(RAC)、免疫组织化学、免疫荧光化学和荧光定量PCR技术,讨论生后第1、3、7、10、14天肺组织的病理改变,检测TGF-β1、α-SMA蛋白和基因mRNA表达水平。结果LPS+高氧组和生理盐水+高氧组出现肺发育障碍,肺泡逐渐融合,RAC逐渐降低,与生理盐水+高氧组比较,LPS+高氧组降低明显(P<0.05)。②LPS+高氧组和生理盐水+高氧组第3天后肺组织TGF-β1蛋白表达明显高于LPS组+空气组和生理盐水+空气组(P=0.000),随着暴露时间的延长进行性增高。③LPS+高氧组和生理盐水+高氧组7d后肺组织α-SMA蛋白表达明显高于LPS组+空...     

还原型谷胱甘肽对新生鼠高氧肺纤维化早期干预的研究

目的研究还原型谷胱甘肽(GSH)对新生鼠高氧肺纤维化的影响,并观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在高氧肺纤维化中的作用.方法将足月SD新生大鼠随机分为:Ⅰ组空气对照组,Ⅱ组高氧组,Ⅲ组高氧 GSH组.观察及检测高氧暴露3、7、14、28d时各组肺组织病理改变、TGF-β1免疫组织化学染色.结果Ⅱ组3、7d时表现为明显的急性炎症改变,肺组织水肿、渗出、出血、肺泡间隔轻度增厚,14d时急性炎症减轻,而肺组织中TGF-β1表达呈强阳性;28d时出现明显的胶原沉积,形成纤维化;Ⅲ组与Ⅰ组肺组织病理改变类似,Ⅲ组肺组织的TGF-β1表达呈弱阳性,无明显纤维化反应,两组无显著差异.结论 TGF-β1在高氧性肺纤维化中可能起了重要作用,GSH早期干预高氧性肺纤维有一定作用,可以明显减轻肺纤维化的发生.     

水通道蛋白1在高氧肺损伤中的表达变化

目的：探讨AQP1在高氧肺损伤中的表达变化及其在肺水肿中的作用机制。方法：将2周左右Wistar大鼠32只随机分为空气对照组和高氧暴露不同时间组，分别置于常压高氧仓中（氧体积分数〉1．95）和常压空气中，采用RT—PCR和免疫组化方法观察AQP1的分布和表达变化，并对支气管肺泡灌洗液（BALF）中的蛋白含量、肺通透系数、肺湿／干重比（W／D）及肺组织病理学改变也进行了对比分析。结果：高氧组3天时肺组织出现水肿、出血、炎性细胞浸润，7天时炎性改变进一步加重，14天时开始出现肺纤维化的倾向。W／D值、BALF蛋白含量和肺通透系数在3、7、14天时均高于空气组。肺组织AQP1mRNA的表达在高氧3、7和14天时均明显低于空气组（P〈0．05），随暴露时间延长持续下降，在14天时有所恢复；免疫组化显示AQP1主要分布在支气管和肺泡壁的毛细血管内皮细胞及间质细胞，高氧损伤后肺AQP1的表达部位未发生改变。AQP1的蛋白表达变化与其mRNA表达变化结果是一致的。结论：高氧性肺损伤可能存在AQPs的基因表达调控失衡，这可能是高氧性肺损伤肺水肿形成的原因之一。     

高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织肾素-血管紧张素系统和TGF-1β的动态变化及卡托普利的干预机制

目的 观察高氧致慢性肺疾病(CLD)新生大鼠肺组织血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、转化生长因子β1(TGF-β1)的动态变化及卡托普利的保护机制.方法 足月新生Wistar大鼠240只,随机分为4组,每组60只.模型组、盐水对照组及卡托普利治疗组将足月新生Wistar大鼠(连同母鼠)置于氧舱内持续吸入高浓度氧(FiO2:0.9)21 d造成高氧肺损伤模型,空气对照组吸入空气;卡托普利治疗组于生后7 d起经胃管灌服卡托普利30 mg·kg-1·d-1,盐水对照组每天经胃管灌服等量生理盐水.每组分别于实验开始后的第1,3,7,14,21 d随机各选取6只麻醉后处死.采用酶联免疫吸附法测定肺组织TGF-β1的含量,用日产7170全自动生化分析仪测定ACE活性,用放免法测定Ang II的含量.采用RT-PCR检测肺组织ACE、AngⅡ、TGF-β1 mRNA表达的动态变化并同时观察肺组织形态学变化.结果 4组肺组织ACE、AngⅡ和TGF-β1的含量及mRNA表达在实验后1,3.7 d差异无统计学意义(P>0.05);模型组、盐水对照组14 d明显升高,21 d达高峰,与空气对照组比较差异显著(P<0.05或0.01);卡托普利治疗组14和21 d与模型组、盐水对照组比较明显降低(P<0.05或0.01),但仍高于空气对照组(P<0.05).模型组、盐水对照组实验后1d肺组织形态学同空气对照组,14 d出现肺组织纤维化改变,21 d出现严重纤维化.卡托普利治疗组肺组织纤维化病变明显减轻.结论 高氧致CLD新生大鼠肺组织ACE、AngⅡ、TGF-β1含量及mRNA表达在高氧后14和21 d明显增高,同时肺组织出现纤维化改变,应用卡托普利干预后上述指标明显低于模型组及盐水对照组,肺纤维化病变明显减轻,表明卡托普利对高氧肺损伤具有一定的保护作用.     

卡托普利对高氧致新生大鼠慢性肺疾病的保护作用及机制探讨

目的 观察高氧致CLD新生大鼠肺组织血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及Ⅰ型胶原含量的动态变化及卡托普利的保护机制.方法 足月新生Wistar大鼠240只,随机分为模型组、空气对照组、卡托普利治疗组和盐水对照组,每组各60只.模型组、盐水对照组和卡托普利治疗组将足月新生Wistar大鼠(连同母鼠)生后即置于氧舱内持续吸入高浓度氧(FiO20.9),21 d造成高氧肺损伤模型;空气对照组吸入空气;卡托普利治疗组于生后7 d每天经胃管灌服卡托普利30mg/(kg·d),盐水对照组每天经胃管灌服等量生理盐水.每组分别于实验开始后的第1、3、7、14及21天随机选取6只麻醉后处死.采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织的Ⅰ型胶原的含量,用日产7170全自动生化分析仪测定其ACE活性,用放免法测定其AngⅡ的含量.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织ACE、AngⅡ、Ⅰ型胶原mRNA表达的动态变化并同时观察肺组织的形态学变化.结果 模型组、盐水对照组及卡托普利治疗组的肺组织ACE、AngⅡ、Ⅰ型胶原的含量及mRNA的表达在实验后第1、3和7天与空气对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);模型组、盐水对照组第14天明显升高,第21天达高峰(P＜0.05或P＜0.01);卡托普利治疗组肺组织AngⅡ、Ⅰ型胶原含量及mRNA表达第14天、第21天与模型组、盐水对照组比较明显降低(P＜0.05或P＜0.01),但仍高于空气对照组(P＜0.05).肺组织形态学改变模型组、盐水对照组第1天同空气对照组,第3～7天肺泡壁毛细血管扩张,肺间隔水肿,肺间隔及肺泡腔内有中性粒细胞浸润,第14天部分肺泡腔变狭长,肺间隔增宽,肺间质细胞增多,出现肺组织纤维化改变.第21天正常肺泡结构消失,残留肺泡直径明显缩小,肺组织出现严重的纤维化.卡托普利治疗组肺组织纤维化病变明显减轻.结论 高氧致CLD新生大鼠肺组织的ACE、AngⅡ、Ⅰ型胶原含量及mRNA表达在高氧后第14天、第21天明显增高,同时肺组织出现纤维化改变.而应用卡托普利干预后ACE、AngⅡ、Ⅰ型胶原含量及mRNA表达明显低于模型组及盐水对照组.肺组织形态学显示肺组织纤维化病变明显减轻,表明卡托普利对高氧肺损伤具有一定的保护作用.     

肺泡形成基因P311在支气管肺发育不良中的作用

目的:了解肺泡形成基因P311在支气管肺发育不良(BPD)中的作用;方法:64只早产昆明小鼠随机均分为空气组和高氧组,空气组置于室内,高氧组置于密闭的氧浓度＞90％的氧舱中复制BPD动物模型;分别于造模后第1、3、7及14天取小鼠肺组织,分别采用苏木精-伊红染色观察小鼠肺组织病理改变鉴定造模是否成功,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测P311基因mRNA表达水平.结果:早产小鼠肺组织发育不成熟,高氧组随着吸氧时间的延长,小鼠表现反应迟钝、体重增长缓慢、毛发发涩无光泽、鼻尖发绀、呼吸急促,肉眼见肺组织表面有散在甚至弥漫的淤血点、小血管扩张充血,第3天镜下见肺泡腔内有炎性细胞浸润,第7天肺泡腔增大、肺间质增生,第14天肺泡腔内间质增生、少数肺泡融合、肺泡数量减少、肺泡结构简单化,说明BPD模型造模成功;第3天时2组P311基因mRNA表达量最高,随后下降;高氧组P311基因mRNA表达水平均高于同一时点空气组(P＜0.05).结论:长时间吸入高浓度氧成功构建支气管肺发育不良的动物模型,P311基因可能是影响肺损伤修复的调控因子.