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相似文献
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1.
曲古菌素A调节NB4细胞组蛋白乙酰化和p21WAF1/CIP1表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatinA,TSA)对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21^WAF1/CIP1。表达的影响。方法应用300、150、75、37.5、18.75nmol/L浓度的TSA分别作用NB4细胞4、8、12、24、48h,提取细胞的总mRNA和总蛋白,采用RT-PCR技术检测p21^WAF1/CIP1表达情况,并用免疫印迹技术(Western blot)观察组蛋白H3的乙酰化水平变化及p21^WAF1/CIP1蛋白的表达水平。结果TSA对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化;在低浓度时就可引起组蛋白H3的乙酰化。TSA对p21^WAF1/CIP1 p21^WAF1/CIP1蛋白表达的影响呈时间和剂量依赖性。结论TSA能够明显上调NB4细胞组蛋白H3的乙酰化水平,促进细胞周期依赖性激酶抑制剂p21^WAF1/CIP1的表达。  相似文献   

2.
目的:研究组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭、细胞周期及ERa表达的影响.方法:100~400nmol/L的TSA分别处理MDA-MB-231细胞6~48h后用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测MDA-MB-231细胞的生长活性.应用流式细胞仪观察细胞周期的变化.采用RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞在24h不同浓度100~400nmol/L TSA作用下对ERa,MMP-9 mRNA表达的影响.采用免疫组织化学法检测MDA-MB-231细胞在24h不同浓度100~400nmol/L TSA作用下对ERa,MMP-9在细胞中表达的影响.采用细胞侵袭实验检测MDA-MB-231细胞在24h不同浓度100~400nmol/L TSA作用下细胞侵袭力的变化.结果:TSA可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,呈时间及剂量依赖性.TSA能够延缓细胞周期C2/M期进程,阻滞细胞于G2期.RT-PCR显示,TSA能够上调ERa mRNA在MDA-MB-231细胞中的表达,下调MMP-9在MDA-MB-231细胞中的表达.侵袭实验显示TSA能够较明显的抑制MDA-MB-231细胞的侵袭.结论:TSA能够较明显的上调ERa与下调MMP-9的表达可能是抑制MDA-MB-231细胞增生侵袭与转移的重要机制之一.  相似文献   

3.
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor, HDACi)曲谷抑霉素A(trichostain A, TSA)对人干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3, IRF3)基因表达的影响,初步分析TSA调控IRF3基因的乙酰化机制。方法:双荧光素酶活性分析法检测TSA和组蛋白乙酰化酶(histone acetylase, HAT)野生型p300对IRF3基因启动子活性的影响;实时荧光定量PCR检测TSA对IRF-3基因mRNA水平的影响;Western blot检测TSA对IRF3蛋白水平的影响。结果:不同浓度TSA干预后IRF3基因启动子活性均增加,TSA浓度为1 μmol/L时,PS1、PS6相对荧光素酶活性分别增加75%、155%;过表达野生型p300后PS1相对荧光素酶活性增加267%;TSA(1、10 μmol/L)干预细胞6 h后,IRF3基因mRNA水平增加23%、39%,干预24 h后,mRNA水平增加17%、64%;TSA(0.1、1、5 μmol/L)干预细胞24 h后,蛋白表达量分别增加15%、72%、191%。结论:TSA上调IRF3基因mRNA和蛋白表达,TSA和组蛋白乙酰化酶p300均可正向调控IRF3基因启动子活性,TSA可能通过IRF3通路发挥治疗免疫性疾病和抗肿瘤作用。  相似文献   

4.
目的 评价组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对肺腺癌细胞株A549的生长抑制作用.方法 分别以体外药物敏感实验、流式细胞术观察TSA处理肺腺癌细胞株A549后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化,Western blot检测p21及细胞外信号调节激酶(ERK)表达水平的变化.结果 TSA对肺腺癌细胞株A549具有生长抑制作用,其细胞毒性呈时间依赖性和浓度依赖性;TSA作用48及96h后,A549细胞凋亡、G0/G1期及G2/M期细胞显著增加(P<0.05);S期细胞显著下降(P<0.05).p21蛋白表达显著增强,磷酸化ERK蛋白表达显著下降.结论 HDAC抑制剂TSA对肺腺癌细胞株A549具有生长抑制作用,其机制可能是上调p21蛋白的表达,阻断ERK通路的活化,从而引起细胞周期的阻滞和细胞凋亡.  相似文献   

5.
目的研究表明组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC1)在多种肿瘤中高表达,曲古菌素A(trichostatin A,TSA)可以抑制肿瘤细胞的生长.该实验研究HDAC1在K562细胞的表达及TSA对其增殖的影响.方法50~400 nmol/L的TSA分别处理K562细胞8~48 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT法)比色检测K562细胞的生长活性;应用流式细胞仪法观察细胞凋亡.RT-PCR和蛋白印迹法(western blot)方法检测K562细胞在24 h不同浓度(50~400 nmol/L)的条件下HDAC1的mRNA和蛋白的表达以及TSA对其作用.结果TSA可显著抑制K562细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈时间及剂量依赖性.HDAC1的mRNA A值的半定量表达以及蛋白表达明显增强(P<0.05),但随着浓度的增加而表达下调.结论TSA对K562细胞具有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,抑制HDAC1的表达,可能是其重要作用机制之一.  相似文献   

6.
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase, HDAC)抑制剂曲古菌素A (trichostatin A, TSA)、Apicidin与Bortezomib单药及联合应用对恶性血液病肿瘤细胞凋亡的影响.方法 应用200~2 000 nmol/L TSA、 Apicidin, 5~80 μmol/L Bortezomib分别处理恶性血液病肿瘤细胞株K562、 SHI-1、 Jurkat 24 h, 用流式细胞仪检测细胞凋亡.根据流式细胞术结果选取TSA 800 nmol/L,Apicidin 400 nmol/L分别与5~80 μmol/L Bortezomib联合作用于K562细胞,TSA 1 000 nmol/L, Apicidin 400 nmol/L分别与Bortezomib联合作用于SHI-1细胞,TSA 600 nmol/L, Apicidin 600 nmol/L分别与Bortezomib联合作用于Jurkat细胞.以上药物作用24 h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡并绘制浓度-凋亡曲线.分别以Apicidin 200 nmol/L,Bortezomib 20 μmol/L及Apicidin 200 nmol/L 与Bortezomib 5 μmol/L联用作用于K562细胞24 h, 用Western blot检测 Bcl-XL蛋白的表达差异.结果 TSA、Apicidin、Bortezomib均可促进K562、Jurkat、SHI-1细胞凋亡.TSA、Apicidin分别与Bortezomib联用,可导致K562、SHI-1细胞系凋亡率的明显提高,而对 Jurkat 细胞系没有明显影响.Bcl-XL蛋白在Apicidin与Bortezomib联用24 h组较对照组及单一药物处理组表达水平明显下调.结论 小剂量Bortezomib联合TSA或Apicidin应用于K562、SHI-1细胞系,可以明显提高细胞凋亡率,此时,TSA、Apicidin用量较用单药时显著减少.  相似文献   

7.
目的:观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古霉素A(TSA)对体外培养膀胱癌细胞生长情况及相关基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:MTT法检测不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 μmol/L)的TSA对人膀胱癌T24细胞生长的影响.透射电镜观察TSA(0.4 μmol/L) 诱导后膀胱癌细胞的形态学变化;流式细胞术检测处理后膀胱癌细胞周期分布及凋亡率的变化;Western 印迹法检测处理后膀胱癌细胞组蛋白乙酰化水平的变化;FQ-PCR检测处理后膀胱癌细胞p21CIP1/WAF1、cyclin A和cyclin E mRNA的表达.结果:TSA体外能明显抑制T24细胞生长,且抑制作用呈明显的剂量、时间依赖性.TSA(0.4 μmol/L)诱导后,透射电镜下可见大量具有凋亡形态特征的T24细胞;流式细胞术检测示细胞阻滞于G0/G1期,并且出现典型的亚二倍体(Sub-G1)峰;TSA可明显提高组蛋白乙酰化水平,并诱导p21CIP1/WAF1的mRNA表达和抑制cyclin A的mRNA表达,而对cyclin E无明显作用.结论:TSA可通过诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞而发挥体外抗膀胱癌作用,其作用机制可能涉及组蛋白乙酰化水平以及相关基因(p21CIP1/WAF1、cyclin A)表达的调控.  相似文献   

8.
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌MKN-28细胞生物学行为及其RASSFIA基因表达调控的影响.方法 0.1、0.3、1.0μmol/L不同浓度的TSA分别处理人胃癌MKN-28细胞,MTT比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR、Western blot分别检测RASSFIA mRNA和蛋白表达水平.结果 不同浓度的TSA处理MKN-28细胞后,细胞增殖受到明显抑制,细胞周期发生改变,使细胞阻滞于G1期,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.05),并呈浓度及时间依赖性(P<0.05),细胞凋亡率无明显变化,差异无显著性(P>0.05).RT-PCR、Western blot显示MKN-28细胞无RASSF1A mRNA及蛋白表达,TSA处理后,KASSF1A mKNA及蛋白表达分别上调,呈浓度及时间依赖性(P<0.05).结论 TSA抑制人胃癌MKN-28细胞增殖,使细胞阻滞于G1期,可能与KASSF1A基因异常乙酰化状态恢复导致基因重新表达有关.  相似文献   

9.
热休克诱导细胞周期素D1表达水平降低的转录调控机制   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:研究人的细胞周期素D1基因启动子热休克效应的表达调控机制.方法:以RT-PCR技术研究细胞周期素D1mRNA水平的变化;构建一系列人细胞周期素D1基因启动子报告基因质粒.通过报告基因方法确认细胞周期素D1启动子的热休克效应区.应用染色质免疫沉技术检测核心启动子区域的组蛋白乙酰化修饰情况.结果:热休克造成细胞周期素D1mRNA水平下降;报告基因结果显示人细胞周期素D1基因的热休克的效应区位于-50~+141bp范围.核心启动子区组蛋白H3第九位赖氨酸乙酰化程度降低.结论:热休克抑制人的细胞周期素D1基因的启动子转录活性,其效应区位于核心启动子的-50~+141bp范围.热休克效应与核心启动子区的组蛋白乙酰化程度下降有关.  相似文献   

10.
【目的】探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。【方法】应用不同浓度的TSA处理子宫内膜癌HEC-1B细胞72 h,Western blotting法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平及p21蛋白,荧光定量PCR方法检测p21基因mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】经TSA作用后,人子宫内膜癌HEC-1B细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加,p21基因mRNA及蛋白表达增加;同时细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加。【结论】TSA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖和诱导细胞凋亡。  相似文献   

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