化合物XW630对成骨细胞的作用

为探讨新合成化合物ＸＷ６３０对成骨细胞的作用，采用噻唑蓝比色法（ＭＴＴ）法和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）测定法观察了ＸＷ６３０对体外培养的成熟大鼠头盖骨成骨细胞的增殖和ＡＬＰ的表达，并用抗酒石酸磷酸酶染色法观察ＸＷ６３０对体外培养的破骨细胞形成的影响。结果显示：ＸＷ６３０有刺激成骨细胞增殖，提高ＡＬＰ活性及抑制甲状旁腺素促进破骨细胞形成的作用，从而表明ＸＷ６３０有可能成为治疗骨质疏松症的有效药物。     

不同浓度淫羊藿苷对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的：观察不同浓度淫羊藿苷对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化及功能的影响。方法：利用酶消化法从新生小鼠颅盖骨中分离和培养成骨细胞;用组织化学染色和矿化结节法进行细胞鉴定;用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测不同淫羊藿苷浓度对大鼠成骨细胞的增殖、分化作用;同时通过检测成骨细胞碱性磷酸酶的活性,以观察淫羊藿苷对成骨细胞功能的影响。结果：与各浓度组比较,10μg/L淫羊藿苷对成骨细胞的生长增殖、分化均有促进作用,且作用最强,最为持久。结论：浓度为10μg/L的淫羊藿苷能显著促进成骨细胞增殖,并增强其成骨活性。     

阿魏酸钠对大鼠贮脂细胞株HSC-T6增殖及胶原合成的影响

目的：研究阿魏酸钠对大鼠贮脂细胞株ＨＳＣ－Ｔ６增殖及胶原合成的影响。方法：采用肝贮脂细胞株,以细胞增殖抑制率为指标,用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对大鼠贮脂细胞株ＨＳＣ－Ｔ６增殖的影响;通过＾３Ｈ－脯氨酸掺入法测定药物对ＨＳＣ－Ｔ６胶原合成的影响。结果：阿魏酸钠对大鼠贮脂细胞株ＨＳＣ－Ｔ６增殖及胶原合成的抑制率随药物浓度增加（２８．９～４６２．６ｎｍｏｌ／Ｌ）而升高,呈药物浓度依赖关系。结论：阿魏酸     

溶血磷脂酸刺激兔血管平滑肌细胞增殖的信号转导途径

目的：探讨溶血磷脂酸（ＬＰＡ）刺激兔血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的信号转导途径，方法：在培养的家兔血管平滑肌细胞上，测定＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）参入和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性。结果：ＬＰＡ呈浓度依赖地刺激＾３Ｈ－ＴｄＲ参入，并平行地激活ＭＡＰＫ二间呈显正相关，乙二醇－双（氨基乙酯）－四乙酸（ＥＧＴＡ）尼卡地平，ｒｙａｎｏｄｉｎｅｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎｈｅｒｂｉｍｙｃ     

P物质对体外培养成骨细胞增殖和活性的影响

目的: 观察P物质(substance P,SP)对体外培养的成骨细胞增殖和活性的影响. 方法: 采用新生大鼠颅盖骨消化法培养成骨细胞,再加入不同浓度的SP,观察细胞生长数量,测定碱性磷酸酶活性及观察细胞周期变化. 结果: 浓度范围从1×10-12～1×10-6 mol/L的SP对成骨细胞的增殖和活性都有促进作用,在浓度为1×10-8 mol/L对成骨细胞增殖和活性的促进作用最强. 结论: SP对成骨细胞增殖和活性有促进作用.     

溶血磷脂酸刺激兔血管平滑肌细胞增殖的信号转导途径

目的：探讨溶血磷脂酸（ＬＰＡ）刺激兔血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的信号转导途径。方法：在培养的家兔血管平滑肌细胞上，测定３Ｈ胸腺嘧啶核苷（３ＨＴｄＲ）参入和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性。结果：ＬＰＡ呈浓度依赖地刺激３ＨＴｄＲ参入，并平行地激活ＭＡＰＫ，二者间呈显著正相关。乙二醇双（氨基乙酯）四乙酸（ＥＧＴＡ）、尼卡地平、ｒｙａｎｏｄｉｎｅ、ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ、ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ不影响ＬＰＡ促ＶＳＭＣ增殖作用。ＰＱ０９８０５９、Ｈ７、佛波酯（ＰＭＡ）及百日咳毒素（ＰＴＸ）均可抑制ＬＰＡ的促增殖和激活ＭＡＰＫ作用。结论：ＬＰＡ浓度依赖地促进ＶＳＭＣ增殖，其细胞内信号转导与ＰＴＸ敏感的Ｇ蛋白介导的蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和ＭＡＰＫ途径有关。     

丹参对克隆化成骨细胞株MC3T3－E1细胞影响的实验研究

目的：了解丹参对体外培养的成骨细胞生长、分化与代谢的影响．方法：选择克隆化成骨细胞株ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞，采用细胞培养方法，观察细胞内ＤＮＡ合成与碱性磷酸酶（ＡＬＰａｓｅ）活性．结果：丹参明显增强ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内ＡＬＰａｓｅ活性，丹参浓度为５．０ｇ／Ｌ时，对ＭＣ３Ｔ３－Ｅｌ细胞内ＡＬＰａｓｅ活性影响最大，比对照组强约１３５％。丹参这种促进作用只限于分化晚期的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞，而对分化早期细胞内的ＡＬＰａｓｅ活性起抑制作用，其次，这种作用还与药物作用时间有关．但是，丹参对各生长分化期的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内ＤＮＡ合成均无影响。结论：丹参可明显增强体外培养分化晚期ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内的ＡＬＰａｓｅ活性，该作用不是通过促进细胞增殖，而是改善细胞功能而实现的，并且受丹参药物浓度与作用时间的影响，说明丹参可能在正畸牙齿移动中促进新生牙槽骨的形成方面发挥重要作用。     

护骨胶囊对成骨细胞增殖、分化影响

目的：探讨护骨胶囊对体外培养的大鼠成骨细胞增殖、分化的影响。方法：采用多次酶消化法分离出大鼠颅盖骨的成骨细胞,采用MTT法和碱性磷酸酶法分别检测护骨胶囊对成骨细胞增殖和分化的作用;采用SYBRgreenI嵌合的RT-PCR方法检测Runx2mRNA表达水平。结果：护骨胶囊在浓度0.025~2.5μg/mL对成骨细胞有促增殖的作用,护骨胶囊在浓度0.025~25μg/mL对碱性磷酸酶的活性均有提高的作用,护骨胶囊在浓度25μg/mL下,对Runx2mRNA水平有上调的作用。结论：护骨胶囊对成骨细胞有促增殖、促分化的作用,可能与上调Runx2mRNA水平有关。     

维生素E影响肿瘤坏死因子-α对贮脂细胞增殖及胶原合成的作用

目的：研究维生素Ｅ（ＶｉｔＥ）对大鼠贮脂细胞增殖及胶原合成的影响。方法：以链酶蛋白酶和胶原酶液原位循环灌注法分离大鼠贮脂细胞,以肿瘤坏死因子－α作为刺激因素,采用３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）和３Ｈ－脯氨酸（３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ）掺入法分别测定ＶｉｔＥ对贮脂细胞增殖和胶原合成的影响,并在倒置显微镜下观察贮脂细胞的形态。结果：（１）肿瘤坏死因子－α能明显促进贮脂细胞增殖,并能明显抑制其胶原合成;（２）ＶｉｔＥ能显著抑制肿瘤坏死因子－α引起的贮脂细胞增殖,并能增强肿瘤坏死因子－α对贮脂细胞胶原合成的抑制作用。结论：ＶｉｔＥ对贮脂细胞增殖及胶原合成具有抑制作用,这可能是ＶｉｔＥ抗肝纤维化作用的重要机制之一。     

汉防己甲素对血小板衍生生长因子促细胞增殖效应的阻断作用

目的研究血小板衍生生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）对人成纤维细胞（ＨＬＦ）、大鼠肝贮脂细胞（Ｉｔｏ细胞）增殖活性和胶原合成的影响及汉防己甲素（Ｔｅｔ）对ＰＤＧＦ促细胞增殖效应的阻断作用。方法采用胶原酶灌流、密度梯度离心方法分离大鼠肝Ｉｔｏ细胞，并以Ｈ－ＴｄＲ、Ｈ－Ｌ－脯氨酸掺入法观察细胞增殖效应。结果在１％血清存在下，ＰＤＧＦ对ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞具有显著的促进ＤＮＡ合成和细胞增殖的作用，并随ＰＤＧＦ浓度的升高而作用增强；对无血清培养的ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞并无明显的促进增殖作用，但与胰岛素样生长因子（ＩＧＦ）等联合应用时，则可促进细胞的增殖，并证实ＰＤＧＦ具有促进ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞胶原合成的作用。Ｔｅｔ在不抑制细胞ＤＮＡ合成的剂量范围内，即可拮抗ＰＤＧＦ的促细胞增殖及胶原合成作用。结论ＰＤＧＦ对肝纤维化相关细胞ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞增殖活性及胶原合成具有促进作用，Ｔｅｔ对ＰＤＧＦ促细胞增殖效应具有阻断作用。     

依普拉芬对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖和分化的影响

目的 研究依普拉芬对体外培养的原代大鼠成骨细胞增殖和分化功能的影响.方法 体外分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,将不同浓度的依普拉芬加入培养液,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙化结节.结果 与阴性对照组相比, 各浓度组的依普拉芬均可增加成骨细胞数量(P＜0.01),提高细胞的ALP活性和促进钙化结节形成(P＜0.01),其中10-8～10-5 mol/L作用更为显著.结论 依普拉芬具有促进体外培养成骨细胞增殖、分化的作用.     

大黄酸-雌酮对大鼠成骨细胞增殖和分化的作用

【目的】研究大黄酸-雌酮（LC-1）对原代培养大鼠成骨细胞增殖和分化的作用。【方法】酶消化法分离培养SD乳鼠颅盖骨成骨细胞；采取MTT法测定细胞增殖，磷酸苯二钠法（pNPP）测定细胞内外碱性磷酸酶（ALP）活性，研究不同浓度LC-1对成骨细胞增殖和分化能力的影响，并与雌酚酮和大黄酸的作用进行比较。【结果】给药3d后，与空白对照组相比：10^-6mol／L LC-1组、10^-7mol／L LC-1组和10^-7mol／L雌酚酮组明显促进成骨细胞增殖和增加细胞内外ALP活性（P〈0．05）；大黄酸抑制成骨细胞增殖，其中10^-6mol／L组有明显差异（P〈0．05），同时有增加细胞ALP活性的趋势，但无统计学差异。【结论】大黄酸-雌酮在体外可以促进成骨细胞增殖和分化。     

补骨脂素对酒精诱导的成骨细胞增殖的影响

【目的】观察补骨脂素对酒精诱导的成骨细胞增殖的影响,探讨补骨脂素防治酒性性骨质疏松的机制。【方法】采用碱性磷酸酶(ALP)染色法鉴定从大鼠乳鼠头盖骨分离的成骨细胞。将鉴定成功的成骨细胞随机分为4组:空白对照组、酒精组(即模型组)、补骨脂素组、补骨脂素+酒精组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况。【结果】与空白对照组比较,酒精组24、48、72、96 h各时间点成骨细胞增殖活性均显著降低(P0.05),补骨脂素组各时间点成骨细胞增殖活性虽升高,但差异均无统计学意义(P0.05)。与酒精组比较,补骨脂素+酒精组24 h成骨细胞增殖活性显著升高(P0.05),2组48、72、96 h细胞增殖活性差异均无统计学意义(P0.05)。【结论】补骨脂素对体外酒精诱导的成骨细胞增殖有促进作用。     

改良贴壁组织块法与改良Ⅰ型胶原酶消法对成骨细胞增殖效果的比较研究

目的 比较改良贴壁组织块法与改良Ⅰ型胶原酶消法对SD大鼠颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞的增殖效果.方法 取10只出生1 -3dSD乳鼠颞下颌关节髁突软骨下骨,将骨片平分成2份,分别采用改良贴壁组织块法和改良Ⅰ型胶原酶消法培养颞下颌关节髁突成骨细胞,并标记为Ⅰ组和Ⅱ组,通过细胞形态学观察、HE染色、ALP染色鉴定成骨细胞.取第4代成骨细胞进行细胞计数、MTT生长曲线及流式细胞仪周期分析,比较2种原代培养方法对成骨细胞增殖能力的异同.结果 （1）Ⅰ组和Ⅱ组培养的细胞经鉴定均为成骨细胞; （2） Ⅱ组成骨细胞总量约为Ⅰ组细胞总量的1.5倍; （3） Ⅱ组成骨细胞MTT生长曲线较Ⅰ组细胞提前2d进入对数生长期及达到生长高峰; （4）2组细胞在达到第4代时,细胞周期含量差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 改良贴壁组织块法和改良Ⅰ型胶原酶消化法均适用于颞下颌关节软骨下骨成骨细胞的培养,但改良Ⅰ型胶原酶消化法可以更快速有效地获得大量成骨细胞.     

表面纳米化钛合金对成骨细胞的增殖、分化和矿化的促进作用研究

Background  Previous studies have demonstrated increased functions of osteoblasts on nanophase materials compared to conventional ceramics or composites. Nanophase materials are unique materials that simulate dimensions of constituent components of bone as they possess particle or grain sizes less than 100 nm. However, to date, interactions of osteoblasts on nanophase materials compared to conventional metals remain to be elucidated. The objective of the present in vitro study was to synthesize nanophase metals (Ti6Al4V), characterize, and evaluate osteoblast functions on Ti6Al4V. Such metals in conventional form are widely used in orthopedic applications.

Methods  In this work, nanophase Ti6Al4V surfaces were processed by the severe plastic deformation (SPD) principle and used to investigate osteoblast long-term functions. Primary cultured osteoblasts from neonatal rat calvaria were cultured on both nanophase and conventional Ti6Al4V substrates. Cell proliferation, total protein content, and alkaline phosphatase (ALP) activity were evaluated after 1, 3, 7, 10 and 14 days. Calcium deposition, gene expression of type I collagen (Col-I), osteocalcin (OC), osteopontin (OP) and the production of insulin-like growth factor-I (IGF-I) and transforming growth factor-beta 1 (TGF-β1) were also investigated after 14 days of culture.

Results  Functions of osteoblasts including proliferation, synthesis of protein, and ALP activity were improved on the nanophase compared to the conventional Ti6Al4V. The expression of Col-I, OC and OP mRNA was also increased on nanophase Ti6Al4V after 14 days of culture. Calcium deposition was the same; the average number of the calcified nodules on the two Ti6Al4V surfaces was similar after 14 days of culture; however, highly significant size calcified nodules on the nanophase Ti6Al4V was observed. Of the growth factors examined, only TGF-β1 showed a difference in production on the nanophase surface.

Conclusion  Nanophase Ti6Al4V surfaces improve proliferation, differentiation and mineralization of osteoblast cells and should be further considered for orthopedic implant applications.

     

重组人胰岛素样生长因子I(rhIGF-I)对大鼠成骨细胞增殖和功能的影响

目的:观察胰岛素样生长因子I(IGF鄄I)对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶(ALP)的合成和钙化结节形成的影响。方法:不同浓度IGF鄄I分别刺激培养的大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力;采用对硝基酚磷酸盐法测定细胞裂解液中ALP活性;VonKossa染色测定钙化结节数目。结果:一定浓度IGF鄄I能明显增加大鼠成骨细胞数量(P<0.05),在0.1～100.0ng/ml这种作用与IGF鄄I的浓度呈正相关;经IGF鄄I刺激,大鼠成骨细胞ALP合成明显高于对照组(P<0.05);经IGF鄄I刺激,大鼠成骨细胞钙化结节数目明显高于对照组(P<0.001)。结论:IGF鄄I能增加体外培养的大鼠成骨细胞数量,促进成骨细胞ALP合成和钙化,提示IGF鄄I可能直接促进骨形成。     

唑来膦酸联合Ghrelin对人成骨细胞增殖及成骨活性影响

目的:研究唑来膦酸联合Ghrelin对人成骨细胞hFOB1.19的作用。方法:以不同浓度唑来膦酸和Ghrelin处理成骨细胞,以MTT法检测其不同浓度和处理时间下细胞增殖情况,研究其最佳作用浓度;并以最佳作用浓度,单独和联合处理成骨细胞,检测成骨细胞在不同时间内碱性磷酸酶活性和骨钙素的表达量,研究成骨细胞的成骨活性。结果:唑来膦酸和Ghrelin对成骨细胞增殖均具有促进作用,其最佳作用浓度分别为10^(-10)mol/L和10(-10)mol/L和10^(-11)mol/L;该浓度下两者均可提高碱性磷酸酶活性和骨钙素表达量,但两者联合应用时碱性磷酸酶活性无明显差异,骨钙素表达量在作用72 h时有明显差异。结论:唑来膦酸和Ghrelin可以促进成骨细胞的增殖,提高碱性磷酸酶活性和骨钙素表达量,两者联合应用可能促进成骨细胞活性。     

含利塞膦酸的磷硅酸钙水门汀对成骨细胞增殖和功能的影响

目的探讨含利塞膦酸磷硅酸钙水门汀浸提液对胎鼠成骨细胞增殖、分化和功能的影响。方法利用MTT法检测含利塞膦酸磷硅酸钙水门汀浸提液对成骨细胞增殖影响,用酶标仪检测碱性磷酸酶（ALP）比活性。结果添加0．1％和0．5％利塞膦酸的骨水泥对成骨细胞没有毒性,1％利塞膦酸的骨水泥浸提液与成骨细胞共同培养3d后对成骨细胞产生毒性反应。0．1％和0．5％利塞膦酸浸提液对成骨细胞ALP比活性增加。结论高剂量含利塞膦酸的磷硅酸钙水门汀对成骨细胞毒性较小,是潜在的填充骨缺损的新型材料。     

连续植块培养原代成骨细胞及其特性的比较

目的: 探讨简便、经济、高效的原代成骨细胞培养方法,并比较其特性.方法: 收集1～4次连续植块培养获得的SD乳鼠颅盖骨原代成骨细胞,观察第1～4次连续植块培养获得的成骨细胞在细胞形态、分裂增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及骨钙素和BMP-2免疫组织化学表达的变化.结果:连续植块培养收集的1～4次原代成骨细胞,在细胞贴壁、变形、铺展、汇合时间,Gomori改良钙-钴法ALP活性,骨钙素及BMP-2免疫组织化学染色表达上,均没有明显的区别.结论: 连续植块培养可获得与植块培养性状相同的SD乳鼠原代成骨细胞,且细胞数量多,节约经费、时间,操作简便.     

雌马酚对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

【目的】研究雌马酚对体外原代培养的成骨细胞增殖和分化作用的影响,以探讨其预防骨质疏松症的作用机制。【方法】用含20%胎牛血清的α-MEM培养新生Wistar大鼠颅骨分离培养的成骨细胞,同时分别给予10-8mol/L-10-6mol/L的雌马酚、雌二醇或二者分别联合雌激素受体拮抗剂ICI182780,MTT法检测细胞增殖能力,对硝基酚磷酸盐法测定成骨细胞碱性磷酸酶活性。【结果】雌马酚与雌二醇均能显著增加体外培养大鼠成骨细胞增殖能力和碱性磷酸酶活性,且雌激素受体拮抗剂可显著抑制雌马酚和雌二醇的上述效应。【结论】雌马酚可明显促进体外培养大鼠的成骨细胞增殖,并促进前成骨细胞向成骨细胞的分化,推测该促效应可能是通过ER途径来介导的。