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相似文献
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1.
目的 探讨高脂饲料喂养大鼠肝脏NF-κBp65蛋白的表达与胰岛素抵抗的关系.方法 采用高脂饲料喂养建立胰岛素抵抗大鼠模型,并用正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术评估.应用Western blotting方法检测大鼠肝脏中NF-κBp65蛋白的表达.结果 ①高脂饲料组大鼠的葡萄糖输注率明显低于基础饲料组[GIR60-120(0.76±0.28vs4.26 4±0.70)mg/(kg·min),P<0.01].②高脂饲料组大鼠肝脏NF-κBp65蛋白的表达明显高于基础饲料组(A值118.48 4±1.45vs68.13 4v±4.84,P<0.01).③高脂胰岛素抵抗大鼠肝脏NF-κBp65蛋白表达与GIR60-120(r =-0.993,P=0.000)和ISI(r=-0.773,P=0.009)负相关.结论 高脂诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏NF-κB的激活可能是产生肝脏和全身胰岛素抵抗的根源.  相似文献   

2.
目的探讨Toll样受体2、4(TLR2、TLR4)与核因子-κB(NF-κB)在溃疡性结肠炎(UC)黏膜组织中的表达,以及三者在UC发病机制中的作用。方法采用免疫组化法检测70例UC患者肠黏膜组织TLR2、TLR4与NF-κB的表达水平,并与44例结肠息肉患者的正常黏膜组织对比。结果 TLR2、TLR4和NF-κB在UC组表达率均高于对照组(P<0.01);且随内镜分级增高,UC组TLR2、TLR4和NF-κB的表达阳性细胞数均呈逐渐增加趋势(P<0.05),三者在活动期和非活动期中的表达也存在统计学差异(P<0.01),NF-κB分别与TLR2、TLR4呈显著正相关(r=0.823,P<0.01;r=0.752,P<0.01)。结论 UC组织中TLR2、TLR4和NF-κB表达异常,可能在UC发病机制中起重要作用,检测其变化对疾病活动度的评价具有重要的临床意义。  相似文献   

3.
徐晓云  李冬斌  李彬 《疑难病杂志》2012,11(3):181-183,239
目的探讨溃疡性结肠炎(UC)患者肠黏膜活检组织中Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κBp65)、白介素-8(IL-8)的表达及三者在UC发病机制中的作用。方法 内镜活检UC活动期结肠黏膜标本68份(UC组)及30例正常人结肠黏膜标本(健康对照组),采用免疫组化SP方法检测TLR4、NF-κB p65、IL-8的表达水平,并做统计学处理。结果 UC组结肠黏膜表面上皮细胞和固有层TLR4、NF-κB p65、IL-8呈阳性表达,染色为深棕黄色,较健康对照组表达均显著增强,且不同病理分级间比较,Ⅲ级>Ⅱ级>Ⅰ级,差异均有统计学意义(p<0.05)。结论 UC肠黏膜中TLR4、NF-κB p65、IL-8的表达均高度上调,并随UC病理分级的升高而升高。  相似文献   

4.
银杏叶提取物对大鼠实验性结肠炎NF-κB和ICAM-1表达的影响   总被引:4,自引:0,他引:4  
周燕红  于皆平 《广东医学》2007,28(6):889-891
目的 探讨银杏叶提取物(EGB)对大鼠实验性结肠炎核转录因子(NF)-KB和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响机制.方法 利用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS,150 mg/kg)灌肠制备大鼠实验性结肠炎模型.动物随机分为正常对照组、三硝基苯磺酸模型组、阳性药物对照组(5-氨基水杨酸,5-ASA组,100 mg/kg)和EGB组(200 mg/kg)4组.正常对照组及模型组以生理盐水代替5-ASA及EGB灌胃,每天1次共4周.评估大鼠结肠黏膜大体形态和组织学评分.应用Western印迹分析法检测肠黏膜细胞浆IκBα的变化.免疫组化检测肠组织NF-κBp65和ICAM-1的表达.结果 与正常对照组相比,三硝基苯磺酸模型组大鼠大体形态和组织学评分显著增加,IκBα表达减弱,显著降解,肠组织NF-kB p65和ICAM-1表达明显升高.银杏叶提取物能改善大鼠实验性结肠炎大体形态和组织学评分,抑制大鼠实验性结肠炎肠黏膜胞浆IκBα的降解,抑制NF-κBp65的激活,同时降低了ICAM-1的表达.结论 EGB可减轻大鼠实验性结肠炎炎症损伤,可能是通过抑制NF-κB的激活,进而降低ICAM-1的表达完成的.  相似文献   

5.
目的探讨核因子-κBp65(NF-κBp65)和乙酰肝素酶(HPA)在大肠癌浸润、转移中的作用及其相关性。方法应用免疫组织化学SP法检测60例大肠癌、23例大肠管状腺瘤及26例正常肠黏膜组织中NF-κBp65和HPA的表达情况。结果大肠癌、大肠管状腺瘤和正常肠黏膜组织中NF-κBp65和HPA的阳性率间差别有统计学意义(P〈0.01),且大肠癌、大肠管状腺瘤与正常肠黏膜NF-κBp65和HPA阳性率间两两比较差别均有统计学意义(P〈0.017);不同浸润深度组,大肠癌组织NF-κBp65和HPA的阳性率间差别有统计学意义(P〈0.017);淋巴结转移组和无淋巴结转移组癌组织NF-κBp65和HPA阳性率间差别有统计学意义(P〈0.05)。NF-κBp65和HPA在大肠癌中的表达呈正相关(r=0.49,P〈0.01)。结论NF-κBp65和HPA是大肠癌浸润、转移的重要因子,NF-κBp65可能通过上调HPA的表达来促进大肠癌的浸润、转移。  相似文献   

6.
自拟肠僻方治疗溃疡性结肠炎60例疗效观察   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的观察自拟肠僻方对溃疡性结肠炎患者肠黏膜κ基因结合核转录因子(NF-κB)及信号转导和转录激活因子6(STAT6)表达的影响及其疗效。方法120例病例随机分为两组,每组60例。对照组给予甲硝唑栓,治疗组给予自拟肠僻方治疗。4w为1个疗程,2个疗程后比较疗效及检测溃疡性结肠炎患者肠黏膜NF-κB及STAT6的表达。结果两组病例治疗后临床疗效及黏膜病变疗效比较有显著性差异,两组病例治疗后NF-κBp65及STAT6的表达均降低,两组比较有显著性差异。结论自拟肠僻方能抑制患者的NF-κBp65及STAT6的活化及表达,从而抑制相关炎性因子的表达,控制腹泻等临床症状,并促进患者受损黏膜组织的恢复。  相似文献   

7.
目的探讨5-氨基水杨酸是否通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)途径在三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的结肠炎模型大鼠中发挥抗炎作用。方法40只♂SD大鼠,随机分为5组,每组8只。设立空白对照组,另4组利用TNBS/乙醇制备大鼠结肠炎模型后,设模型组、GW9662组、柳氮磺吡啶(SASP)组、GW9662 SASP组。造模后第2天起每日灌胃、腹腔注射给药,连续2周。结肠炎症的评价包括炎症活动指数、结肠大体及组织学评分,血中白细胞介素(IL)2、IL-10水平,结肠PPARγ、NF-κBp65表达。结果与结肠炎模型组比,SASP组能明显降低DAI评分,改善结肠大体、组织病理学损伤,血IL-2降低,IL-10升高,结肠内PPARγ表达增加,NF-κBp65表达减少,差异有显著性(P<0.05),且模型组大鼠结肠黏膜PPARγ表达与NF-κBp65表达呈负相关;而GW9662 SASP组大鼠DAI、结肠大体、组织病理学损伤,较模型组及SASP组无改善,PPARγ表达增加(P<0.05),但NF-κBp65无明显变化。结论5-氨基水杨酸可能通过PPARγ途径,负性调节NF-κB的表达,从而减少促炎介质(IL-2)、增加抑炎介质(IL-10)的释放,在TNBS诱导的结肠炎模型大鼠中发挥抗炎作用。  相似文献   

8.
黄文炼  刘鸿雁  任丽蓉  唐飞  杨璐  蒋琴   《四川医学》2022,43(12):1178-1184
目的 研究栀子苷抑制Toll样受体4(TLR4)/受体相互作用蛋白3(RIP3)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对急性胰腺炎(AP)大鼠肠损伤的影响。方法 以胰管逆行注射牛磺胆酸钠溶液的方法建立AP大鼠模型,随机分为模型组、栀子苷低剂量(40 mg/kg)组、栀子苷高剂量(80 mg/kg)组、栀子苷(80 mg/kg)+脂多糖(LPS,TLR4激活剂,0.4 mg/kg)组4组(每组12只),另取12只大鼠开腹后仅翻转胰腺,不做其他处理,设为假手术组。以栀子苷、LPS分组对大鼠进行干预处理后,检测大鼠疾病活动指数(DAI)和结肠大体形态损伤评分;检测大鼠肠道通透性,比较荧光素异硫氰酸酯(FITC)葡聚糖浓度;HE染色检测大鼠结肠黏膜组织病理损伤,并进行Chiu评分;酶标仪检测大鼠血清D-乳酸、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、二胺氧化酶(DAO)、白细胞介素(IL)-17、IL-1β与IL-6水平;蛋白免疫印迹实验检测大鼠肠黏膜组织TLR4/RIP3/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠肠黏膜组织出现病理损伤严重,DAI、结肠大体形态损伤评分、Chiu评分、FITC葡聚糖浓度、血清D-乳酸、ICAM-1、DAO、IL-17、IL-1β与IL-6水平、肠黏膜组织p-NF-κB p65/NF-κB p65及TLR4、RIP3蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,栀子苷低、高剂量组大鼠肠黏膜组织出现病理损伤均减轻,DAI、结肠大体形态损伤评分、Chiu评分、FITC葡聚糖浓度、血清D-乳酸、ICAM-1、DAO、IL-17、IL-1β与IL-6水平、肠黏膜组织p-NF-κB p65/NF-κB p65及TLR4、RIP3蛋白表达水平均降低(P<0.05),高剂量栀子苷对以上指标的改善效果更明显;与栀子苷高剂量组相比,栀子苷+LPS组大鼠肠黏膜组织出现病理损伤加重,DAI、结肠大体形态损伤评分、Chiu评分、FITC葡聚糖浓度、血清D-乳酸、ICAM-1、DAO、IL-17、IL-1β与IL-6水平、肠黏膜组织p-NF-κB p65/NF-κB p65及TLR4、RIP3蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 栀子苷可通过抑制TLR4/RIP3/NF-κB信号而减轻AP大鼠体内炎症,缓解大鼠结肠黏膜病理损伤,修复肠道屏障功能。  相似文献   

9.
目的研究美沙拉嗪和柳氮磺吡啶口服对溃疡性结肠炎患者肠黏膜中TLR4和NF-κb表达量的影响。方法将该院接受美沙拉嗪治疗的80例慢性溃疡性结肠炎患者纳入研究的观察组,同期接受柳氮磺砒啶治疗的80例慢性溃疡性结肠炎患者纳入对照组。比较两组患者的临床症状和肠道黏膜评分,采用荧光定量PCR的方法检测肠道黏膜中TLR4和NF-κb的m RNA含量。结果观察组患者的腹痛、腹泻、脓血便以及黏膜评分均低于对照组。治疗后,两组患者肠道黏膜中TLR-4和NF-κb m RNA含量均低于治疗前;且治疗后观察组患者肠道黏膜中TLR-4 m RNA含量和NF-κb m RNA含量均低于对照组(P<0.05)。肠道黏膜中TLR-4和NF-κb的m RNA含量与腹痛、腹泻、脓血便和黏膜评分呈正相关(P<0.05)。结论美沙拉嗪能够更为有效的改善临床症状和黏膜情况,其作用可能是通过抑制肠道黏膜中TLR4和NF-κb的表达来发挥的。  相似文献   

10.
目的观察来氟米特(Lef)对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导大鼠结肠炎的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法以TNBS诱导大鼠结肠炎模型,将大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性药物对照组(5-ASA100mg/kg,ig,qd×14d)及Lef低剂量、中剂量和高剂量组(1.0、2.0、4.0mg/kg,ig,qd×14d)。每天观察疾病活动指数(DAI),2周后处死大鼠,并取出结肠组织进行大体形态及组织学评分。以免疫组化方法检测结肠组织核因子NF-κBp65、TNF-α的表达,Elisa法测外周血IL-10的含量。结果与TNBS模型组相比,Lef组大鼠的DAI、大体形态、组织学评分及肠黏膜组织内NF-κBp65和TNF-α表达显著降低(P<0.01);大鼠结肠黏膜组织NF-κBp65在模型组以胞核表达为主,相反正常对照组及治疗组NF-κBp65以胞质表达为主;外周血中IL-10含量显著增加(均P<0.01)。结论Lef对TNBS诱导的大鼠结肠炎有抑制作用,其机制可能是通过提高抗炎细胞因子的水平,抑制NF-κB核结合活性,进而降低致炎细胞因子的表达完成。  相似文献   

11.
Yao L  Xiao Y  Liu SP  Xu AM  Zhou ZG 《中华医学杂志》2010,90(44):3119-3123
目的 探讨肥胖症及伴相关代谢紊乱患者血清对人源单核细胞(THP-1)细胞表面Toll样受体4/转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的活化作用.方法 分别用10例单纯性肥胖及伴不同代谢紊乱患者血清干预THP-1细胞株24、48 h后,测定THP-1细胞表面TLR4和细胞内NF-κB p65磷酸化的表达水平及其分泌白细胞介素(IL-1)β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的能力.Western印迹检测TLR4蛋白和细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白水平;RT-PCR检测TLR4 mRNA的表达水平;ELISA检测细胞上清液中IL-1 β和TNF-α的水平.结果 THP-1细胞表面TLR4、细胞内NF-κB p65磷酸化的蛋白及TLR4 mRNA表达水平以及分泌IL-1β和TNF-α的能力差异有统计学意义(P<0.05);THP-1细胞表面TLR4、细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白及TLR4 mRNA表达水平以及分泌IL-1β和TNF-α的能力随肥胖症代谢紊乱组分的增加而增高,并随干预时间的延长而增高(P<0.05).正常对照组、单纯性肥胖组、肥胖伴高血糖组、肥胖伴血脂紊乱组以及肥胖伴3种代谢紊乱组血清孵育THP-1细胞48 h,TNF-α的浓度(ng/L)分别为(222±32)、(246±52)、(322±32)、(322±34)和(490±83),IL-1β(ng/L)分别为(94±19)、(133±19)、(174±22)、(180±30)、(279±38)(P<0.05).结论 单纯性肥胖及肥胖伴不同组分代谢紊乱患者的血清可不同程度地诱导TLR4/NF-κB信号通路的活化,伴代谢紊乱组分越多的肥胖患者的血清诱导TLR4/NF-κB信号通路活化的能力越强.  相似文献   

12.
目的探索Toll样受体4(TLR4)和核转录因子-κB(NF-κB)在小鼠溃疡性结肠炎(UC)中的表达及意义,从而探讨该信号通路在UC发病机制中可能的作用。方法将20只雄性Balb/c小鼠随机分为正常组(N组)和模型组(M组),每组各10只。采用葡聚糖硫酸钠诱导UC模型,各组于造模后7 d取病变处结肠组织,进行组织学评分,HE染色观察大体形态、组织学评分和免疫组化染色观察NF-κB和TLR4的表达情况。结果 TLR4和NF-κB在M组小鼠结肠黏膜表达显著高于N组(P〈0.05);且TLR4与NF-κB的表达呈正相关,Pearson相关系数r为0.816。结论TLR4和NF-κB的高表达提示该信号传导通路激活导致下游炎症因子的释放可能是UC发生的机制之一。  相似文献   

13.
目的 探讨溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单核细胞(PBMC)中TOLL样受体(TLR)4、NF-κB水平的变化及在UC发病中的可能机制.方法 选取武警浙江省总队医院嘉兴医院消化科2014年1月至2015年1月收治的UC患者30例作为观察组,另选取该院体检科健康体检者10例作为对照组.采用流式细胞仪检测外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率,RT-PCR检测TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB(P65) mRNA表达水平,Western blot检测TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平.结果 观察组外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率明显高于对照组(P<0.05);对照组TLR4、MyD88、NF-κB(P65) mRNA及蛋白水平明显低于观察组(P<0.01);TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平与UC严重程度呈正相关.结论 UC患者PBMC中TLR4、NF-κB明显增高,临床可通过检测TLR4、NF-κB水平判断UC的发展程度.  相似文献   

14.
  目的  观察绿原酸通过调控TLR4/NF-κB信号通路减轻脓毒症(sepsis)大鼠肠道氧化应激损伤、改善肠上皮细胞屏障功能的作用。  方法  选取SD大鼠60只,采用随机数字表法分成假手术组、模型对照组、绿原酸(低、高剂量)组,每组15只。术后24 h,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10;比色法测定小肠组织中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;采用Western blotting法测定小肠组织中的蛋白表达[密封蛋白-1(Claudin-1)、闭锁连接蛋白-1(ZO-1)及TLR-4/NF-κB通路相关的蛋白]。  结果  与模型对照组[(4.45±0.14)分]比较,低剂量组[(4.17±0.22)分]、高剂量组[(1.95±0.08)分]Chiu评分明显下降(t=4.159、60.048,均P < 0.001);高剂量组血清TNF-α、IL-6、IL-10水平及小肠组织中NO、MDA含量均显著降低(均P < 0.05),SOD含量、Claudin-1、ZO-1蛋白表达量及MyD88、TLR-4蛋白与p-NF-κB p65(Ser536)水平均显著升高(均P < 0.05)。  结论  绿原酸可经抑制TLR4/NF-kB信号转导途径,减轻脓毒症大鼠的炎症反应程度及小肠组织的氧化应激损伤,进而促进大鼠的肠道屏障功能改善。   相似文献   

15.
Tian ZF  Zhang ZM  Li YH  Zhao S  Wang X 《中华医学杂志》2011,91(30):2143-2147
目的 探讨高氧暴露对新生大鼠肺组织高级糖基化终产物受体(RAGE)-核因子κB(NF-κB)信号通路的影响及粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)肺损伤保护作用的相关机制.方法 24只3日龄新生大鼠随机平均分为3组:正常对照组(空气环境下7 d)、高氧对照组(95%氧暴露7 d)、高氧干预组(95%氧暴露7 d+GMCSF皮下注射9 μg/kg/次,共3次);光镜观察并盲法进行肺组织病理学损伤评分;RT-PCR法检测肺组织匀浆RAGE mRNA、NF-κB mRNA表达;Western印迹检测肺组织匀浆RAGE、NF-κB蛋白表达;ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化法检测肺组织石蜡切片RAGE表达情况.结果 正常对照组、高氧对照组、高氧干预组肺组织损伤评分分别为0.46±0.20、3.06±0.33、2.31±0.56,差异有统计学意义(P=0.000);3组RAGE mRNA和蛋白表达分别为0.14±0.02、0.34±0.06、0.28±0.04和0.30±0.04、0.76±0.11、0.55±0.08,差异均有统计学意义(均P=0.000);3组NF-κB mRNA和蛋白表达分别为0.41±0.21、0.90±0.36、0.69±0.30和0.41±0.26、0.96±0.43、0.77±0.33,差异均有统计学意义(P=0.000和P=0.017);3组BALF中TNF-α水平分别为76±10、224±42、143±24,差异有统计学意义(P=0.000).以上各指标结果在高氧对照组、高氧干预组均明显高于正常对照组(均P<0.05),高氧干预组低于高氧对照组(P<0.05).3组血清TNF-α水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 GMCSF可能通过下调RAGE-NF-κB信号通路对高氧肺损伤发挥保护作用.
Abstract:
Objective To explore the effects of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GMCSF) on hyperoxia exposure lung injury in newborn rats and elucidate its protective mechanism of operating via the signaling pathway of advanced glycation end products (RAGE)-NF-κB.Methods Twenty-four 3-day-old SD rats from 3 litters were randomly divided into 3 groups. They were hyperoxia exposure plus GMCSF group (group A), hyperoxia exposure group (group B) and air exposure group (group C). The rats from groups A and B were placed in a sealed Plexiglas chamber with a minimal in-and-outflow, providing 6-7 exchanges per hour of chamber volume and maintaining O2 levels above 95%.While the rats in group C only were exposed to air simultaneously.The rats in group A received subcutaneous injections of recombinant murine GMCSF (9 μg/kg) during hyperoxia exposure at 24 h, 72 h and 120 h respectively. And the rats in groups B and C received subcutaneous injections of saline vehicle alone at the same time point. Seven days later, all were sacrificed and immunohistochemistry was employed to assess the expression of RAGE in lung tissue. The levels of tumor necrosis factor-α in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) and serum samples were detected by ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). The RAGE mRNA and NF-κB mRNA in tissue homogenates were detected by RT-PCR while RAGE and NF-κB by Western blot. Also the values of lung damage score were calculated with microscopic histology.Results The value of lung damage score in group C, B and A was 0.46±0.20, 3.06±0.33 and 2.31±0.56 respectively, there was significantly difference among three groups (P=0.000). The expression of RAGE mRNA and protein in three groups were 0.14±0.02, 0.34±0.06, 0.28±0.04 and 0.30±0.04, 0.76±0.11, 0.55±0.08 respectively. There were both significantly differences among three groups (P=0.000, P=0.000). The expression of NF-κB mRNA and protein in three groups were 0.41±0.21, 0.90±0.36, 0.69±0.30 and 0.41±0.26, 0.96±0.43, 0.77±0.33 respectively, there were both significantly difference among three groups (P=0.000, P=0.017). The level of TNF-α in BALF was 76±10, 224±42 and 143±24 respectively, there was significantly difference among three groups (P=0.000). All indicators above in group B and group A were significantly more than those in group C (all P<0.05), while these indicators in group A were lower than those in group B. But there was no difference in the level of TNF-α of serum among three groups (P>0.05).Conclusion GMCSF may protect hyperoxia-induced lung injury via down-regulating the signaling pathway of RAGE-NF-κB.  相似文献   

16.
目的构建靶向小鼠核因子κB(NF-κB)P65进行RNA干扰(RNAi)的逆转录病毒载体,鉴定其生物学效应。方法采用分子克隆技术构建靶向小鼠NF-κB P65 siRNA的逆转录病毒载体,转染293E细胞,包装成逆转录病毒,以不同滴度感染小鼠单核巨噬细胞J774A.1,用相同浓度的脂多糖(LPS)刺激,在不同时间点用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白水平上检测细胞NF-κBP65表达,并用RT-PCR和ELISA方法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果成功构建靶向小鼠NF-κB P65基因的小干扰RNA逆转录病毒表达载体。经LPS刺激后,siRNA病毒组J774A.1细胞中NF-κB P65 mRNA的表达明显受到抑制,2 h即明显低于Scramble病毒组(0.91±0.03比1.02±0.02,P〈0.01),此后持续降低;在LPS刺激后的24、36、48和72 h,siRNA病毒组NF-κB P65蛋白表达均明显低于Scramble病毒组(0.97±0.02比1.01±0.01,0.94±0.01比1.02±0.01,0.94±0.02比1.02±0.01,0.93±0.01比1.00±0.02,P〈0.05)。LPS刺激后2、6、12和24 h,siRNA病毒组TNF-α的mRNA表达水平均明显低于Scramble病毒组(P〈0.01),而相同时间点siRNA病毒组细胞上清TNF-α的含量亦明显低于Scramble病毒组(P〈0.01)。结论将小干扰RNA片段连接到空白质粒中构建逆转录病毒表达载体的方法是可行的。采用RNA干扰技术抑制NF-κB的表达后,可以减少其下游炎症因子的释放,提示RNA干扰技术在炎性损伤性疾病如急性肺损伤的防治中具有潜在应用价值。  相似文献   

17.
核因子κB小干扰RNA对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠结肠炎的影响   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 探讨核因子κB小干扰RNA(siRNA)对葡聚糖硫酸钠(DSS)小鼠结肠炎的影响,为寻找治疗溃疡性结肠炎(UC)的新药提供实验依据.方法 36只BALB/C小鼠随机分为4组(每组9只):正常对照组、核因子κB siRNA组、错义siRNA组、DSS模型组.每日观察各组小鼠的体重、活动、大便性状和便血情况以评估小鼠的疾病活动情况;对小鼠结肠组织进行大体及组织形态学观察;免疫组织化学染色观察核因子κB p65在结肠黏膜内的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测定结肠黏膜组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量.结果 (1)核因子κB siRNA组小鼠的DAI评分[(2.31±0.26)分]和组织学评分[(2.19±0.77)分]明显低于错义siRNA组[(3.42±0.67)分和(4.65±1.53)分]及DSS模型组[(3.73±0.55)分和(4.47±1.52)分,均P<0.05].(2)核因子κBsiRNA组小鼠结肠黏膜核因子κB p65的阳性表达及结肠黏膜组织内TNF-α含最[(266±35)pg/ml]明显低于错义siRNA组[(412±51)pg/ml]和DSS模型组[(449±44)pg/ml,均P<0.05].结论 核因子κB p65 siRNA对小鼠DSS结肠炎有一定的治疗作用,核因子κB p65 siRNA有望成为一种新型的治疗UC的基因药物.  相似文献   

18.
目的观察Toll样受体(TLRs)系统在肾脏衰老中的表达变化。方法用免疫印迹和实时定量PCR(qRT—PCR)技术分析3月龄组(青年组,n=20)、12月龄组(中年组,n=20)和24月龄组(老年组,n=20)大鼠肾脏中TLRs系统分子、核转录因子(NF—κB)信号通路分子以及炎症因子包括趋化因子配体3(CCL3)、CCL4、CCL5、CD80、肿瘤坏死因子-d(TNF—α)和白细胞介素-12b(IL-12b)的表达变化情况。结果①12月龄组和24月龄组体重[(466.86±32.62)、(617.8±57.34)g]、肾重[(43.25±0.50)、(5.01±1.00)g]、三酰甘油(TG)[(2.32±0.46)、(3.22±0.82)mmol/L]和尿蛋白/肌酐比值[(164.81±38.31)、(256.00±49.39)mg/mmoL]高于3月龄组[(236.3±12.28)g、(1.67±0.68)g、(1.20±0.32)mmol/L、(146.01±22.72)mg/mmoLl,差异有统计学意义(P〈0.05);24月龄组大鼠血尿素氮(BUN)水平[(6.86±1.10)mmol/L]高于3月龄组[(5.73±0.47)mmol/L1,差异有统计学意义(P〈0.05);而血肌酐(SCR)、血糖(GLU)和胆固醇(CrtOL)水平三组差异无统计学意义(P〉0.05)。24月龄组肾重I(5.01±1.00)g]和尿蛋白/肌酐比值[(256±49.39)mg/mmoL]高于12月龄组[(3.25±0.50)g、(164.81±38.31)mg/mmoL],差异有统计学意义(P〈0.05)。②12月龄组和24月龄组TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLRll表达水平均高于3月龄组,24月龄组TLRl和TLR3水平高于3月龄组,24月龄组TLR9水平高于3月龄组,差异均有统计学意义(P〈0.05):三组TLR6、TLR7、TLRl0水平差异无统计学意义(P〉0.05);TLR8未检测到。24月龄组TLRl:TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLRll水平高于12月龄组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。③12月龄组和24月龄组IK—Ba和活化的磷酸化NF—κBp65(Phospho—NF—κBp65)水平高于3月龄组,差异有统计学意义(P〈0.05);24月龄组NF—κBp65水平高于3月龄组,差异有统计学意义(P〈0.05)。24月龄组NF—κBp65和Phospho—NF—κBp65水平高于12月龄组,差异有统计学意义(P〈0.05)。④24月龄组CCL3、CCL4、CCL5、CD80、TNF—d和IL-12b水平高于3月龄组,差异有统计学意义(P〈0.05);12月龄组CD80和IL-12b水平低于3月龄组,差异有统计学意义(P〈0.05)。24月龄组CCL3、CCIA、CCL5、CD80、TNF-仅和IL-12b高于12月龄组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论TLRs系统可能通过激活NF—κB信号通路、促进炎症因子的表达而在肾脏衰老过程中发挥重要作用。  相似文献   

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目的 观察未成熟树突状细胞(DC)经尿酸刺激成熟过程中,TLRs mRNA的表达情况。方法 分离培养小鼠骨髓来源未成熟 DC。以尿酸体外刺激48 h后,RT-PCR方法检测DC TLR2 mRNA、TLR3 mRNA、TLR4 mRNA 、IL-12p70 mRNA等的表达,ELISA法检测上清IL-12P70水平。尿酸及NF-κB抑制剂PDTC刺激不同时间点时,免疫印迹法检测DC NF-κB p65活化情况。结果 尿酸刺激后DC TLRs mRNA 表达出现明显的变化,与培养基对照组相比,TLR2 mRNA、TLR3 mRNA、TLR4 mRNA表达下降(P<0.05),以TLR4 mRNA下降最明显;IL-12p70表达显著增高(P<0.05);与LPS组相比,TLRs mRNA 与IL-12p70表达水平相似(P>0.05)。尿酸刺激后15~45 min,DC核因子NF-κB p65显著活化。结论 尿酸能调节未成熟树突细胞 TLR2 mRNA、TLR3 mRNA、TLR4 mRNA及IL-12 p70的表达,促进NF-κB向核内转移,促进DC成熟。TLRs mRNA的动态变化可能为其诱导 DC 成熟及免疫功能提高的机制之一。  相似文献   

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