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1.
目的:预测及鉴定结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8^+CTL表位,为基于表位的结核疫苗研究提供依据。方法:应用SYFPEITHI数据库预测结核杆菌抗原Ag85C序列中可能存在的HLA-A*0201限制性T细胞表位,利用T2细胞株分析各预测的抗原肽与HL-A*0201分子的亲合力,选取高亲合力肽诱导特异性CTL细胞,检测各高亲合力肽刺激其特异性CTL细胞分泌的IFN-γ水平、在体外的CTL增殖反应以及细胞杀伤毒性,逐步鉴定出Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8^+CTL表位。结果:SYFPEITHI数据库从Ag85C序列中预测到14条能够结合HLA—A*0201分子的抗原肽,其中3个抗原肽(170~178aa、317~325aa和144~153aa)显示与T2细胞上HLA-A*0201分子有高结合力,而抗原肽FLTREMPAWL(144~153aa)能够诱导大多数HLA—A*0201阳性结核患者及PPD(+)健康志愿者产生特异性CTL细胞,并分泌大量的IFN-γ,能够诱导CTL体外发生增殖,能够产生特异性杀伤活性。结论:成功鉴定出抗原肽FLTREMPAWL(144~153aa)结核杆菌抗原Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8^+CTL表位,可作为结核疫苗设计的候选表位,为进一步研发新型有效的抗结核疫苗奠定了基础。  相似文献   

2.
目的 研究体外负载K562细胞冻融抗原的树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的特异性杀伤作用。方法 联合应用细胞因子从外周血单个核细胞(PBMC)诱导培养出DC,在体外负载K562细胞冻融抗原。采用乳酸脱氢酶释放法,对比K562冻融抗原致敏DC组、未致敏DC组、淋巴细胞组、前列腺癌PC3冻融抗原致敏DC组分别激活的CTL对K562细胞的杀伤作用。结果 培养出具有典型特征的DC;在效靶比为10:1及20:1时。K562冻融抗原致敏DC组诱导的CTL对K562细胞的杀伤率分别为55.9%土22.0%、90.2%+24.8%,均高于其他3组(p,0.05)。结论 K562细胞冻融抗原致敏DC可诱导激活CTL,具有明显杀伤K562细胞作用。并具有特异性。  相似文献   

3.
目的鉴定隐球菌抗原MP98中的HLA—A*0201限制性CD8^+CTL表位。方法应用数据库SYFPEITHI预测隐球菌MP98中可能存在的HLA—A*0201限制性CD8^+CTL表位,经流式细胞术分析各抗原肽与HLA-A*0201的亲合力,经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMC5)对各抗原肽产生的增殖反应,经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性,逐步鉴定MP98的HLA—A*0201限制性CD8^+CTL表位。结果位于MP98氨基酸序列肽3(93—102aa)与HLA—A*0201分子具有较高的亲合力,并都能刺激HLA—A*0201阳性个体PBMC增殖,并诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL。结论肽3QLFATINSTL(93—102aa)是抗原MP98上HLA—A*0201限制性CD8^+CTL的优势表位,可作为隐球菌疫苗设计的候选表位。  相似文献   

4.
Gu WY  Cao XS  Qiu GQ  Chen ZX  Sheng LX  Xie XB  He J  Cen JN  Shen HL 《中华医学杂志》2005,85(49):3475-3480
目的探讨肾母细胞瘤基因(WT1)肽负载树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对白血病细胞体外靶向免疫治疗作用。方法合成一段针对HLA-A0201锚位的WT1特异性九聚肽(CMTWNQMNL),体外负载来源于HLA-A0201阳性健康志愿者的DC后,诱导产生WT1肽特异性、HLA-A0201限制的CTL(A组),四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法观察其对白血病细胞株及原代白血病细胞体外杀伤效应。采用流式细胞术直接免疫荧光标记法,检测DC表面抗原CD83、CD1α、CD80、CD86、CD14、HLA-DR和T细胞表面的CD3、CD4、CD8、CD56等的表达。设立单独DC诱导CTL(B组)和IL-2诱导T细胞(C组)作为对照组。结果K562细胞不表达HLA-A0201但高表达WT1基因(1.111±0.128);U937细胞表达HLA-A0201,但极低表达WT1基因(0.006±0.001);NB4细胞表达HLA-A0201,且高表达WT1基因,NB4/WT1D、NB4/WT1A及NB4细胞株中WT1表达水平分别为1.42±0.07、3.20±0.19和1.14±0.09,均显著高于U937细胞株(P均<0.01)。A组CTL能够通过HLA-A0201限制方式杀伤HLA-A0201阳性,WT1+NB4白血病细胞株和白血病患者原代骨髓单个核细胞,而不能特异性杀伤HLA-A0201阳性,WT1-U937细胞胞株及白血病细胞,HLA-A0201-,WT1+K562细胞株及白血病细胞,对HLA-A0201阳性或阴性正常骨髓细胞也无杀伤活性;A组CTL对NB4/WT1D、NB4/WT1A和NB4细胞株杀伤活性无统计学意义(P=0·065,P=0·621)。结论WT1肽特异性CTL能够以HLA-Ⅰ类抗原限制方式杀伤高表达WT1基因的白血病细胞,而对正常骨髓细胞无杀伤作用,WT1基因的表达产物可以作为白血病免疫治疗靶点。  相似文献   

5.
目的甲胎蛋白作为一种肿瘤特异性抗原,是临床上诊断肝癌的重要指标。本研究中,检测AFP特异性T细胞的体外抗肿瘤免疫活性。方法采用经过AFP抗原决定簇肽刺激或慢病毒转染的的树突状细胞(dendriticcells,DC),活化AFP特异性的CD4+T细胞和CD8+T细胞,并在体外检测这群T细胞对人肝癌细胞HepG2的杀伤活性。结果本研究结果显示,AFP特异性的CD4+T细胞和CD8+T细胞体外能有效杀伤HepG2细胞,上调培养体系中IL-2、IFN-γ、TNF-α、穿孔素、颗粒酶的水平,对于T细胞活化的负调控因子IL-10,具有显著的抑制作用。结论经DC活化后的AFP特异性T细胞具有显著的体外抗肿瘤免疫活性,有望成为肝细胞癌的免疫治疗新方法。  相似文献   

6.
目的研究树突状细胞(DC)吞噬包被有甲胎蛋白HLA—A2限制性表位肽(AFP218-226,LLNQHACAV)的聚乳酸微球(PLA—AFP218-226)后诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞株HepG2和负载有AFP218-226的T2细胞株的毒性作用。方法用GM—CSF和IL-4诱导HLA—A2^+的健康志愿者外周血单核细胞,LPS诱导成熟,使其分化为高纯度DC,在诱导过程中加入PLA—AFP218-226微球,用吞噬了PLA—AFP218-226微球的DC诱导自身T淋巴细胞,使其成为肝细胞癌(HCC)特异性CTL。用流氏细胞仪检测DC膜分子标志,T2细胞与AFP218-226结合实验检测HLA—A2分子与AFP218-226之间的亲合力,MTT法检测特异性CTL杀伤HepG2和T2细胞株的能力。结果AFP218-226与HLA—A2分子具有较高的亲合力,吞噬微球后的成熟DC高表达CD83、CD86、CD40等膜分子,其诱导的特异性CTL对HepG2和负载有AFP218-226的T2细胞株具有强的细胞毒作用。结论PLA—AFP218-226被DC细胞吞噬后,能够诱导HCC特异性CTL的产生,可能成为一种新型的抗肿瘤表位肽疫苗,在肝癌的防治中得到应用。  相似文献   

7.
目的:寻找并鉴定MUC4 HLA-A^*0201限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位.方法:结合2种常用表位预测数据库(SYFPEITHI和ProPred-I)和工具,应用多种参数和方法进行综合分析,包括MHC结合力、蛋白酶体切割位点等综合预测方法.预测得到的抗原表位合成相应抗原肽.用T2细胞株测定各肽与HLA-A^*0201分子的亲和力.结果:综合分析预测得到HLA-A^*0201的5个可能表位;合成抗原肽经纯化后纯度>95%;在5个候选表位肽中,LLLGVGTFV(u25-33)和LLGVGTFVV(1126-34)2个九肽与HLA-A^*0201的结合力较强.结论:多参数表位预测结果和结合力分析实验结果一致性较好,两者联合应用初步认为LLLGVGTFV(1125-33)和LLGVGTFVV(1126-34)2个九肽为MUC4 HLA-A^*0201限制性CTL表位的可能性最大.  相似文献   

8.
目的:观察人脑胶质母细胞瘤特异性抗原(IL-13Rα2)致敏的同源细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)在体外对U251的细胞毒效应。方法:用密度梯度分离法获取HLA-A*0201+健康志愿者的人外周血树突状细胞(dendritic cells,DC)的前体细胞与淋巴细胞,并在体外诱导而获得成熟的DC细胞和CIK细胞。收获IL-13Rα2抗原负载的DC与CIK细胞共培养,使DC递呈肿瘤抗原予CIK细胞,并激活CIK细胞。激活的CIK细胞与U251细胞在96孔板内混合培养24 h后,以CCK-8试剂间接检测其对U251细胞杀伤率。结果:IL-13Rα2抗原肽成功负载DC,CIK细胞被负载抗原的DC激活并增殖;特异性抗原肽激活的CIK细胞对人胶质瘤U251细胞有杀伤效应(P〈0.01)。结论:IL-13Rα2抗原肽激活的CIK细胞对人胶质瘤U251细胞有杀伤效应。  相似文献   

9.
目的 探讨肾母细胞瘤基因(WT1)衍生肽负载树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对白血病CD34+细胞的体外清除效应.方法 合成一段针对HLA-A*0201锚位的WT19聚肽,体外负载来源于HLA-A*0201*健康人的DC后,诱导产生WT1肽特异性CTL(A组),以噻唑盐(MTT)比色法观察其对WT1表达阳性白血病患者(HLA-A* 0201+者3例,HLA-A*0201-者3例)骨髓CD34+细胞、健康人(HLA-A*0201+者2例,HLA-A*0201-者1例)外周血CD34+细胞和白血病NB4、K562及U937细胞株的体外杀伤效应,粒细胞-巨噬细胞系集落形成试验观察其对白血病患者骨髓CD34+细胞和健康人外周血CD34+细胞粒细胞-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)形成的影响.设立单独DC诱导CTL(B组)和IL-2诱导T细胞(C组)作为对照.结果 在效靶比为20:1时,A组CTL对3例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞和NB4细胞的杀伤活性(分别为55.3%±2.8%,67.1%±3.2%、49.4%±3.8%和55.0%±3.7%)明显高于对3例HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞及K562、U937细胞的杀伤活性(均<20%),并明显高于B组和C组CTL(均P<0.01).2例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞经A组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率分别为17.8%±4.0%和20.8%±3.4%,明显低于经B组CTL处理后(分别为88.9%±3.4%和91.8%±5.7%,均P<0.01);HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞经A组和B组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率差异尤统计学意义.结论 WT1肽特异性CTL能够以HLA-1类抗原限制方式杀伤高表达WT1基因的白血病CD34+细胞,且能特异性抑制其CFU-GM集落形成,WT1基因的表达产物可以作为清除白血病CD34+细胞靶点.  相似文献   

10.
张兵  杨波  郭运芬 《西部医学》2010,22(9):1586-1589
目的探讨基于树突状细胞(DC)的CTL表位肽疫苗应用于治疗肝癌实体瘤的可能性。方法观察经负载甲胎蛋白(AFP)218-226细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位肽激活的CTL细胞抑制HepG2肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的情况,并与淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)抑瘤率进行比较。结果经负载AFP218-226CTL表位肽的健康志愿者DC细胞激活的CTL细胞可以明显抑制HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,平均抑瘤率达86.7%,远高于LAK细胞治疗组的抑瘤率52.6%。结论基于DC的HLA-A2限制性表位肽疫苗,对表达AFP的HLA-A2+肝细胞癌(HCC)有潜在的治疗作用,具有一定的临床应用前景。  相似文献   

11.
目的:鉴定出丙型肝炎病毒(HCV)特异性HLA-A*1101限制性和A*2402限制性CD8+T细胞表位.方法:采用T细胞表位预测软件SYFPEITHI预测HCV特异性CD8+T细胞表位,合成HLA-A*1101限制性、A*2402限制性候选表位;建立永生化的HLA-A*1101阳性、A*2402阳性B细胞株,采用竞争性肽结合实验检测候选表位与HLA-A*1101或A*2402分子的结合力;候选表位体外分别刺激HLA-A*1101阳性或A*2402阳性HCV感染者外周血单个核细胞(PBMCs)后,采用酶联免疫斑点(ELISPOT)和细胞内细胞因子染色(ICS)实验分别检测肽特异性分泌γ-干扰素(IFN-γ)的细胞的水平和(肝) 异性IFN-γ+CD8+T细胞的水平.结果:5条HLA-A*1101限制性候选表位中,NS3_609(ITLTHPITK)和NS2_165(VVFSDMETK)与HLA-A*1101分子具有高结合力.3条HLA-A*2402限制性候选表位中,NS3_373 (KCDELASKL)和NS5b_382 (YYLTRDPTI)与HLA-A*2402具有高结合力;在HLA-A*1101阳性HCV感染者PBMCs中存在NS3 609和NS2_165特异性分泌IFN-γ的CD8+T细胞,而在HLA-A*2402阳性HCV感染者PBMCs中存在NS3_373和NS5b 382特异性分泌IFN-γ的CD8+T细胞.结论:本研究证实NS3_609(ITLTHPITK)和NS2_165(WFSDMETK)为全新的HCV特异性HLA-A*1101限制性CD8+T细胞表位,NS3_373 (KCDELASKL)和NS5b_382 (YYLTRDPTI)为全新的HCV特异性HLA-A*2402限制性CD8+T细胞表位.  相似文献   

12.
目的建立HLA-A*0201/2403限制的HBcAg表位特异性CTL细胞克隆。方法HLA-A*0201/2403阳性HBV感染者的外周血单个核细胞(PBMC)分别用限制性表位肽HBc18-27和HBc117-125刺激,并以有限稀释法进行克隆化,期间单独使用植物血凝素(PHA)及联合使用表位肽刺激。用免疫荧光、流式细胞术以及乳酸脱氢酶释放实验对所获克隆进行鉴定。结果从HBc18-27活化的细胞中获得29株细胞克隆,其中28株为CD8^+T克隆,均具有特异性细胞毒活性。从HBc117-125激活的细胞中获得12株CD8+T克隆,其中9株有明显的细胞毒活性,另3株细胞毒活性则显著低下。克隆化过程中单独使用PHA及联合使用表位肽,克隆形成率分别为15.62%和14.58%。结论分别用表位肽HBc18-27和HBc117-125,能激活HLA-A*0201/2403阳性HBV感染者的CD8^+T细胞。建立CD8^+T克隆过程中,表位肽的使用不能提高克隆形成率。  相似文献   

13.
目的探讨树突状细胞(Dc)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后对白血病细胞株K562、淋巴瘤细胞株Raji、肺癌细胞株A549、胃癌细胞株BOG-803的杀伤作用。方法采集健康志愿者外周血50mL,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,分别用不同的细胞因子诱导,培养D0细胞与CIK细胞。然后将成熟的DC和CIK细胞混合培养,用流式细胞仪检测两组细胞中。D3+CD56+、CD3+CD8+T细胞的比例;用MTT法检测其对K562、P-ajj、A549、BCG-803细胞株的杀伤活性。结果DC-CIK组较CIK组具有较高的CD3+CD56+、CD3+CD8+T细胞比例(p〈0.05);DC—GIK、GIK对K562、Pajj、A549、BCG-803细胞株均具有较强的杀伤作用,且随着效靶比的增加,杀伤活性逐渐增加;DC—CIK的杀伤活性较CIK明显增高(P〈0.05)。结论DC—CIK共培养体外可增强对肿瘤细胞的杀伤作用,为肿瘤的临床治疗提供了理论和实验依据。  相似文献   

14.
目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)分别与两种冻融抗原致敏DC细胞共培养后获得的DC细胞诱导的特异性肿瘤杀伤细胞(dendritic cell induced killer.DCIK)的增殖活性及其对K562、Namalwa细胞株的杀伤活性。方法采集健康供者的外周血单个核细胞(PMNC),先诱导培养CIK细胞及两组DC细胞(K562-DC和Namalwa-DC),然后将两组DC细胞分别和CIK细胞按1∶10的比例分别混合培养,并以CIK细胞单独培养组为对照。计数细胞扩增倍数,并于共培养6d MTT法测定各组细胞对K562、Namalwa细胞杀伤活性。结果两组DCIK细胞增殖速度明显快于单纯CIK细胞组(P0.05);共培养6d,相同的效靶比情况下,两组DCIK细胞对两种肿瘤细胞的杀伤活性都比单纯CIK细胞明显增强,而用相应肿瘤抗原致敏得到的DCIK细胞对该种肿瘤细胞的杀伤活性最强。结论 DCIK细胞的增殖能力、抗肿瘤活性均高于CIK细胞,致敏的DCIK细胞对相同肿瘤靶细胞有杀伤特异性。  相似文献   

15.
目的探讨OK432-肿瘤疫苗对小鼠外周血T细胞亚群的影响。方法将36只DBA/2小鼠随机分为OK432-肿瘤疫苗组、OK432组及正常组,每组12只。培养细胞,制作疫苗后,对三组小鼠分别腹腔注射OK432-肿瘤疫苗、OK432及磷酸盐缓冲液(PBS),每周1次,连续3周。然后分别在1、3、7 d时眼球采血,利用流式细胞术检测外周血中的T细胞亚群的含量,采用SPSS 17.0软件进行数据处理。结果免疫后第3天,OK432-肿瘤疫苗组、正常组、OK432组CD3+T细胞平均值分别为(55.31±2.06)%、(48.81±3.60)%、(47.21±3.51)%;CD4+T细胞平均值分别为(40.55±2.32)%、(34.91±1.04)%、(34.24±0.95)%;OK432-肿瘤疫苗组与正常组及OK432组CD3+、CD4+T细胞差异均有统计学差异(P〈0.05)。免疫后第7天,OK432-肿瘤疫苗组、正常组CD3+T细胞平均值分别为(36.26±1.98)%、(23.72±1.90)%;CD4+T细胞平均值分别为(27.11±0.87)%、(15.42±2.87)%;CD4+/CD8+的平均值分别为(3.47±0.33)%、(2.91±0.52)%,差异均有统计学差异(P〈0.05);OK432-肿瘤疫苗组、OK432组CD8+T细胞的平均值为(7.85±0.98﹚%、(5.48±0.40)%,两组间差异有统计学意义(P〈0.05)。结论 OK432-肿瘤疫苗能够有效增强小鼠的细胞特异性免疫能力。  相似文献   

16.
目的研究肝素酶(heparanase,Hpa)细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位多抗原肽(multi-ple antigen peptides,MAP)疫苗能否诱导更强的Hpa特异性CTL反应。方法 HLA-A2.1限制性肝素酶CTL表位多抗原肽负载正常人外周血来源(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)树突状细胞(dendritic cell,DC),诱导CTL,采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT实验检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的CTL对Hpa阳性且HLA-A2.1匹配的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大效应细胞/靶细胞(effector/target,E/T)时高出率均大于16%;其对HLA-A2.1阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但是对MCF-7/Hpa乳腺癌细胞和HepG2/HLA-A2肝癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大E/T时高出率均大于18%;其对自体淋巴细胞和DC不具有杀伤效应。另一方面人肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的IFN-γ分泌水平强于相应的单肽。结论肝素酶CTL表位MAP疫苗能激发较相应单肽更强的特异性和非特异性抗肿瘤效应。  相似文献   

17.
目的:探讨TACE术后应用免疫调节剂胸腺肽α1对患者T淋巴细胞亚群的影响。方法:收集2005年3月至2009年1月收治的36例HCC患者作为研究对象,根据治疗方法不同将研究对象随机分为胸腺肽α1治疗组(17例)和肝癌对照组(19例),另选择同期12例门诊健康体检者作为正常对照组。比较T细胞亚群变化及AFP、ALT、总胆红素、淋巴细胞总数等指标。结果:行TACE治疗后l、7d,肝癌对照组患者体内CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+比值与TACE治疗前比较,差异有统计学意义(P〈0.05):胸腺肽α1治疗组在TACE术后应用胸腺肽α1治疗7d后,CD4+T、CD4+/CD8+、淋巴细胞的比值明显增加,与治疗前及肝癌对照组术后7d比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:TACE术后应用胸腺肽α1可明显提高患者的细胞免疫水平,改善肝功能。  相似文献   

18.
目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIKcells)的体外扩增特性及其在抗肿瘤免疫治疗中的作用。方法通过提取健康供血者的PBMNC,培养诱导CIK细胞,显微镜下观察其扩增倍数、增殖速率,流式细胞仪分析细胞免疫表型,用MTT法观察其对K562细胞的体外杀伤效应,并通过流式细胞仪进一步分析30例实体瘤患者CIK细胞输注前后外周血免疫活性细胞表型的改变。结果经2周培养,CIK细胞平均增加了30倍,总数达(4.8~5.0)×109,活性细胞比例〉90%;体外杀伤率约50%,表型检测效应细胞CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+亚群比例显著升高,差异有高度统计学意义(P〈0.01)。实体瘤患者CIK细胞输注后外周血中免疫活性细胞比例也明显升高,差异也有统计学意义(P〈0.05)。结论CIK细胞在体内外能明显抑制肿瘤生长,有效改善患者的免疫功能,为晚期肿瘤治疗提供了新的方法。  相似文献   

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