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相似文献
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1.
核酶在肿瘤基因治疗中的应用   总被引:1,自引:0,他引:1  
核酶(ribozyme)是一类具有核酸内切酶活性的RNA分子,可特异性地与靶RNA序列结合并加以切割,人工设计合适的核酶可实现对失控基因或有害基因表达的有效阻断,从而对疾病进行基因治疗。本文对核酶的结构与作用原理及核酶在肿瘤基因治疗中的应用作一综述。  相似文献   

2.
血管内皮生长因子165核酶的合成及其体外活性   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 探讨抗血管内皮生长因子165(VEGF165)核酶的设计合成及其生物学活性。方法 利用计算机辅助设计针对VEGF165的锤头状核酶,构建核酶的自剪切转录载体pGEMRz212,体外转录合成核酶Rz212及其相应的底物VEGF165mRNA,在无细胞体系中观察核酶对靶RNA的切割作用。结果 构建的自剪切转录载体在转录的过程中发生了自身剪切,并释放出目的核酶Rz212,该核酶具有切割VEGF165 mRNA的作用。结论 计算机辅助设计的VEGF165锤头状核酶体外可有效切割靶RNA,具有较高的生物活性。  相似文献   

3.
侯伟  沃健儿  刘克洲 《医学综述》2005,11(5):438-440
核酶 (ribozyme)是一类具有催化活性的RNA分子 ,可通过碱基配对特异地与相应的RNA底物结合 ,并在特定的位点切割底物RNA分子。自美国科学家Cech和Altman等发现核酶至今的 2 0多年来 ,人们利用核酶可以特异性地切割靶RNA序列的特点 ,通过设计合适的核酶阻断特定基因的表达 ,已相  相似文献   

4.
目的:构建特异性切割人组织金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases1,TIMP-1)的锤头状核酶的真核表达载体并在体外进行活性鉴定,为应用于瘢痕基因治疗奠定基础.方法:设计并合成针对人组织TIMP-1 mRNA的锤头状核酶基因Rz182、Rz358和Rz412及相应的点突变核酶基因,将核酶基因克隆于可在体内高表达核酶的载体pBSKneoU6中,制备嵌合于U6 snRNA分子的核酶基因克隆.逆转录聚合酶链式反应获得全长TIMP-1 mRNA基因片段并克隆至T载体.体外转录法大量制备以α-32P UTP 标记的核酶及靶RNA,进行体外切割实验.结果:核酶基因克隆制备正确,在体外成功转录出嵌合于U6 snRNA的核酶和靶RNA. 37℃的生理温度下,U6Rz182和U6Rz358成功切割了靶RNA,U6Rz182切割效率为49.23%,Km=29.7 nmol/L,Kcat=0.32 min-1.U6Rz358切割效率为55.21%.Km=39.6 nmol/L,Kcat=0.21 min-1.U6Rz412及突变核酶均未显示切割活性.结论:本研究中制备的U6Rz182和U6Rz358有良好的特异催化切割活性,有望在瘢痕成纤维细胞内抑制人TIMP-1的表达,成为新的抗瘢痕核酸药物.  相似文献   

5.
抗c—erbB—2 ribozyme的计算机设计   总被引:5,自引:2,他引:3  
设计能特异性切割人癌基因c-erbB-2mRNA的核酶。概据Symonx的“猛士锤头结构”,以人癌基因c-erbB-2mRNA为靶RNA,用计算机对其可能为核酶切割的位点进行分析以寻找最佳切点。对底物及核酶的二级结构进行预测。  相似文献   

6.
目的 探讨体外核酶对肿瘤多药抗性相关基因mdr1靶RNA分子的切割作用及其影响因素。方法 利用计算机软件设计能特异切割mdr1 mRNA的锤头状核酶(ribozyme),并构建抗mdr1-ribozyme和靶分子的体外转录质粒,进行体外切割实验。结果 发现抗mdr1-ribozyme能较好地切割mdr1 mRNA。 结论 抗肿瘤多药抗性核酶的体外研究为其体内应用提供了参考,ribozyme有可能成为逆转肿瘤多药抗性的新药物。  相似文献   

7.
锤头状核酶(hammerhead ribozyme)和发夹状核酶(hairpin ribozyme)能特异性定点剪切靶RNA分子,可用于抗病毒、抗肿瘤等基因治疗[1]。但假结样核酶(pseudoknot ribozyme),如丁型肝炎病毒(HDV)核酶,包括基因组核酶(genomic ribozyme)和抗基因组核酶(antigenomic ribozyme),是否具有抗病毒等活性,迄今研究鲜见[2]。本研究旨在评价基因组核酶对丙型肝炎病毒(HCV)RNA在分子水平的剪切活性。  相似文献   

8.
c-myc基因mRNA核酶对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用   总被引:4,自引:2,他引:2  
目的:构建特异性切割c-myc基因mRNA的锤头状核酶(Ribozyme)真核表达载体。探讨核酶对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响。方法:计算机分析大鼠c-myc基因mRNA的二级结构,选择第2029位点作为锤头状核酶的切割位点并设计相应的核酶。采用DNA合成仪合成核酶基因,以克隆技术将核酶基因构建人pGEM3Zf( )体外转录载体,以Sanger双脱氧末端终止法测定核酶基因的序列后,通过亚克隆将核酶基因构建入pcDNA3真核表达载体;核酶真核表达载体以阳离子脂质体LipofectAMINE作为介导,转染体外培养的第5代SD大鼠VSMCs,经G418筛选出细胞克隆,流式细胞仪测定VSMCs的细胞周期。结果:核酶基因准确克隆入pGEM3Zf( )载体,DNA序列测定表明所克隆入的核酶基因序列正确;经过亚克隆将核酶基因准确克隆入pcDNA3载体(pcDNA-Rz);pcDNA-Rz转染VSMCs经G418筛选出多个抗性细胞克隆,扩大培养获得转染细胞;细胞周期分析显示,pcDNA-Rz转染细胞的细胞周期有明显变化,S期和G2/M期比率明显减少,细胞生长阻滞于G0/G1期,细胞增殖指数明显降低。结论:特异性切割c-myc基因mRNA核酶对体外培养VSMCs的增殖具有明显的抑制作用。  相似文献   

9.
抗HIF-1αmRNA锤头状核酶设计及其基因克隆   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 设计一个抗缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA的锤头状核酶,并构建它的基因表达载体,以便用于肿瘤的基因治疗。方法 用RNA结构分析软件预测HIF-1α mRNA的二级结构并选择合适的核酶作用靶点,以选定的靶点设计相应的锤头状核酶,合成编码核酶的DNA并克隆到载体pSP72上,酶切及DNA测序鉴定核酶序列。结果 HIF-1α mRNA的72位含有GUC三联体,可以作为核酶的切割靶点,设计的核酶包括22nt的催化活性中心和16nt的侧翼序列。计算机辅助预测证明此位点为合适的靶点,限制性内切酶和DNA测序证实核酶基因正确插入载体pSP72上。结论 成功设计并构建抗HIF-1α mRNA锤头状核酶基因表达载体,为进一步运用核酶切割HIF-1α mRNA基因,从而抑制肿瘤生长提供了必要条件。  相似文献   

10.
目的:探讨c-myc脱氧核酶的切割作用及对白血病细胞端粒酶活性的影响.方法:合成针对c-myc mRNA的"10~23"型脱氧核酶DzMycI及其类似物DzMycI'提取总RNA在细胞外切割c-myc mRNA;转染白血病细胞系HL-60后,用RT-PCR扩增c-myc基因片段和端粒酶蛋白亚基hTERT的片段,用PCR-ELISA法测定端粒酶活性.结果:脱氧核酶DzMyel在细胞外和细胞内均能够有效地切割c-myc mRNA;在转染HL-60后,DzMycI显著抑制白血病细胞生长(P<0.05),下调端粒酶蛋白亚基hTERT的表达,显著降低HL-60细胞端粒酶活性(P<0.05).DzMycI催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzMycI'在胞外和胞内均不表现对c-myc mRNA的切割作用.结论:脱氧核酶DzMycI确实能够高效特异地切割c-myc mRNA,降低白血病细胞端粒酶活性,抑制白血病细胞生长,有可能作为c-myc抑制剂用于白血病的基因治疗领域中.  相似文献   

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