冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562/A02凋亡、逆转耐药性的研究

目的:探讨冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562/A02凋亡、逆转耐药性的作用.方法:以不同浓度的冬凌草甲素处理K562/A02及敏感株K562/S细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测半数抑制率(IC50),分析冬凌草甲素对两种细胞柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)敏感性的影响,流式细胞仪检测冬凌草甲素对两种细胞内DNR浓度的影响.结果:冬凌草甲素可诱导两种细胞凋亡,两者在各浓度、各时点无显著差异;可显著逆转K562/A02细胞对DNR、HHT的耐药性,提高该细胞内DNR的浓度.结论:冬凌草甲素对K562/A02细胞有诱导凋亡、逆转耐药性的作用,是一种很有希望的抗白血病中药.     

环孢菌素A、汉防己甲素及两者联合逆转K562／A02细胞的多药耐药

目的：探讨环孢菌素A（CsA）、汉防己甲素（Tet）及两者联合应用对人白血病耐药细胞系K562／A02多药耐药的逆转作用。方法：采用M1Tr法测定柔红霉素（DNR）对细胞的半数抑制量（IC50），流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内DNR浓度。结果：DNR对K562细胞和K562／A02细胞IC50分别为0．27和21．22mg·L^-1；CsA（1mg·L^-1）及Tet（0．1mg·L^-1）单独和联合处理K562／A02后，DNR的IC50分别为7．83、5．32和2．32mg·L^-1；CsA和Tet对DNR作用K562的IC50无明显影响；K562／A02细胞48h凋亡率为2．19％，DNR（1mg·L^-1）作用K562／A02细胞凋亡率为2．70％，CsA和Tet单独及联合处理后凋亡率分别为10．27％、17．64％和52．79％；两药处理后细胞内化疗药物DNR浓度亦明显增加。结论：CsA及Tet均可逆转耐药，且联合作用逆转效果更强。     

人参皂苷单体Rb1对多药耐药细胞系K562／HHT细胞内柔红霉素浓度的影响

目的：探讨中药钙离子通道拮抗剂人参皂甙单体Rb1对白血病多药耐药细胞系（K562／HHT）细胞内柔红霉素浓度的影响。方法：细胞内柔红霉素浓度荧光测定法、细胞P－GP表达常规APAAP测定法、mdrl基因表达RT－PCR测定法等实验方法,探讨Rb1的逆转机理。结果：Rb1作用后K562／HHT细胞内DNR浓度增加（P＜0．01）。结论：K562／HHT是一种以P－GP介导的多药耐药细胞系,检测显示K562／HHT P－GP表达阳性率100％,并有很强的mdrl基因表达,提示Rb1通过抑制PGP外排药物功能,提高细胞内药物浓度,是Rbl逆转耐药作用的主要机理。     

环孢菌素A、汉防己甲素及两者联合逆转K562/A02 细胞的多药耐药

目的:探讨环孢菌素A(CsA)、汉防己甲素(Tet)及两者联合应用对人白血病耐药细胞系K562/A02多药耐药的逆转作用。方法:采用MTT法测定柔红霉素(DNR)对细胞的半数抑制量(IC50),流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内DNR浓度。结果:DNR对K562细胞和K562/A02细胞IC50分别为0.27和21.22 mg.L-1;CsA(1 mg.L-1)及Tet(0.1 mg.L-1)单独和联合处理K562/A02后,DNR的IC50分别为7.83、5.32和2.32 mg.L-1;CsA和Tet对DNR作用K562的IC50无明显影响;K562/A02细胞48 h凋亡率为2.19%,DNR(1 mg.L-1)作用K562/A02细胞凋亡率为2.70%,CsA和Tet单独及联合处理后凋亡率分别为10.27%、17.64%和52.79%;两药处理后细胞内化疗药物DNR浓度亦明显增加。结论:CsA及Tet均可逆转耐药,且联合作用逆转效果更强。     

Thapsigargin逆转K562/A02细胞多药耐药性的实验研究

目的 探讨内质网Ca^2 -ATP酶抑制剂thapsigargin对白血病多药耐药细胞株K562／A02化疗敏感性的影响。方法 用MTT比色法检测K562／A02细胞耐药性、thapsigargin的增殖抑制活性及其对K562／A02细胞化疗敏感性的影响；丫啶橙(AO)／溴化乙锭(EB)染色荧光显微镜观察thapsigargin处理后K562／A02细胞形态改变；流式细胞仪(FCM)检测P-糖蛋白(P-gp)表达；荧光显微镜检测Pgp功能。结果 ①thapsigargin对K562和K562／A02细胞的增殖抑制活性呈剂量和时间依赖性，K562／A02细胞较K562细胞对thapsigargin更敏感，thapsigargin诱导K562／A02细胞呈现典型的凋亡细胞形态学改变。②K562／A02细胞对阿霉素(ADM)、柔红霉素(DNR)、长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)、高三尖杉酯碱(HHT)和米托蒽醌(MXT)均出现不同程度的耐药性；thapsigargin抑制K562／A02细胞P-gP功能而对其表达无影响，thapsigargin能增加K562／A02细胞对ADM、DNR、VCR、VP-16、HHT和MXT的化疗敏感性。结论 Thapsigargin能诱导白血病多药耐药细胞株K562／A02细胞凋亡并能部分逆转K562／A02的多药耐药性；thapsigargin的多药耐药逆转功能可能与其凋亡诱导作用和抑制PgP功能有关。     

冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562／A02凋亡,逆转耐药性？…

目的：探讨冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２凋亡、逆转耐药性的作用。方法：以不同浓度的冬凌草甲素处理Ｋ５６２／Ａ０２及敏感株Ｋ５６２／Ｓ细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法检测半数抑制率（ＩＣ５０）,分析冬凌草甲素对两种细胞柔红霉素（ＤＮＲ）、高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）敏感性的影响,流式细胞仪检测冬凌草甲素对两种细胞内ＤＮＲ浓度的影响。结果：冬凌草甲素可诱导两种细胞     

人参皂甙单体Rb1对多药耐药细胞系K562/HHT细胞内柔红霉素浓度的影响

目的探讨中药钙离子通道拮抗剂人参皂甙单体Rb1对白血病多药耐药细胞系(K562/HHT)细胞内柔红霉素浓度的影响.方法细胞内柔红霉素浓度荧光测定法、细胞P-GP表达常规APAAP 测定法、mdr1基因表达RT-PCR测定法等实验方法,探讨Rb1的逆转机理.结果 Rb1 作用后K562/HHT细胞内DNR浓度增加(P<0.01).结论 K562/HHT是一种以P-GP 介导的多药耐药细胞系,检测显示K562/HHT P-GP表达阳性率100%,并有很强的mdr1基因表达,提示Rb1通过抑制P-GP 外排药物功能,提高细胞内药物浓度,是Rb1逆转耐药作用的主要机理.     

苦瓜蛋白对K562／A02耐药逆转作用的研究

[目的]观察苦瓜蛋白对K562／A02细胞多药耐药的逆转及对PgP表达、功能的影响。[方法]采用CCK-8法测IC50,用流式细胞仪测定苦瓜蛋白对K562／A02细胞上P-gp表达及细胞内ADM潴留的影响。[结果]苦瓜蛋白能提高K562／A02对多种化疗药物敏感性,使P-gP蛋白表达下降,提高细胞内ADM的浓度。[结论]苦瓜蛋白能部分逆转K562／A02的耐药性,逆转机制与下调P-gP蛋白的表达有关。     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/A02耐药的机制

目的:研究汉防己甲素（TTD）对白血病细胞株K562/A02多药耐药(MDR)逆转的机理。方法：以白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02为TTD作用的靶细胞。细胞水平检测实验分5组（K562组、K562/A02组、K562+ADM组、K562/A02+ADM组和K562/A02+TTD+ADM组）,采用MTT法检测TTD对K562和K562/A02细胞的非细胞毒性剂量,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADM)的浓度,基因、酶学、蛋白水平检测实验分3组（K562组、K562/A02组和K562/A02+TTD组）,采用RT-PCR法检测mdr1 mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）和拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）的表达水平,Western-blotting法检测P-糖蛋白（P-gp）和bcl-2表达。结果：1.562 5 mg•L^-1的TTD处理K562/A02细胞后,细胞内ADM的浓度较单用ADM组明显提高（P<0.01）;与空白对照组比较,K562/A02细胞内mdr1 mRNA/P-gp的表达量减少（P<0.01）;GST-π和TopoⅡ表达无明显变化;凋亡抑制基因bcl-2的表达量减少（P<0.01）。结论:TTD主要通过增加细胞内ADM浓度,下调mdr1/P-gp和bcl-2表达逆转耐药。     

磁性纳米四氧化三铁及纳米金协同柔红霉素作用于K562/A02细胞的初步研究

目的：研究磁性纳米四氧化三铁（Nano-Fe3O4）及纳米金（Nano-Au）是否具有逆转K562/A02细胞耐药的作用。方法：用MTT法测定盐酸柔红霉素（DNR）对K562/A02和K562细胞的毒性,并观察DNR与Nano-Fe3O4或Nano-Au的联合作用。结果：体积分数为25%的Nano-Fe3O4及Nano-Au能有效增强DNR的细胞毒作用,提高细胞的凋亡率,差异具有显著性。结论：Nano-Fe3O4及Nano-Au结合DNR后均能有效逆转K562/A02细胞的耐药性。     

环孢菌素A与细胞因子联合逆转白血病多药耐药性的体外研究

目的 探讨环孢菌素Ａ（ＣｓＡ）联合细胞因子对耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２的逆转作用,方法 以甲基四唑蓝法测定柔红霉素（ＤＮＲ）的细胞毒性,用流式细胞仪技术测定细胞内罗丹明（Ｒｈ１２３）浓度,用ＲＴ－ＰＣＲ及ＪＳＢ－１抗体分别检测多药耐药（ＭＤＲ１）ｍＲＮＡ及其Ｐ糖蛋白的表达。结果 １μｍｏｌ／ＬＣｓＡ,５００Ｕ／ｍｌ干扰素２００Ｕ／ｍｌ白介素２（ＩＬ－２）均能增加ＤＮＲ对耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２的     

异搏定对白血病K562细胞耐药性的逆转作用

目的 :研究异搏定对 P-糖蛋白 (Pgp)介导的人类白血病 K 5 6 2细胞多药耐药作用。方法 :用台盼蓝拒染法检测药物敏感性及异搏定对细胞耐药性的影响 ,用免疫组织化学法检测 Pgp的表达 ,用流式细胞仪检测细胞内柔红霉素 (DNR)积聚。结果 :DNR诱导的耐药细胞 K5 6 2 / D对 DNR、长春新碱 (VCR)、高三尖杉脂碱 (HHT)、鬼臼乙叉甙 (VP16 )、米托恩醌 (MIT)交叉耐药。 DNR诱导了 K5 6 2 / D细胞的 Pgp过度表达。异搏定使 K 5 6 2 / D细胞内药物积聚增加 ,明显地逆转了 K5 6 2 / D细胞对 DNR、VCR、MIT、HHT、VP- 16的耐药性 ,而对敏感细胞 K5 6 2 / S的耐药性无影响。结论 :DNR诱导了 K5 6 2 / D细胞的 Pgp过度表达 ,异搏定通过抑制 Pgp功能逆转了 Pgp介导的K5 6 2 / D细胞的多药耐药性     

槲皮素逆转柔红霉素在耐药细胞株K562/ADR内的异常分布

目的 研究槲皮素处理前后柔红霉素(DNR)在耐药细胞株K562／ADR亚细胞结构的不同分布。方法 利用蒽环类抗生素固有的荧光，通过共聚焦激光扫描显微镜观察槲皮素作用后DNR在耐药细胞株K562／ADR内亚细胞结构分布的改变。结果 与DNR在敏感细胞株K562／S细胞核、胞浆均匀分布不同，在K562/ADR细胞，DNR主要集中在核周及周边胞浆，核内DNR荧光很少；经槲皮素处理后，可恢复DNR在K562／ADR内细胞核、胞浆中的弥漫分布。结论 DNR在耐药细胞中的异常分布与肿瘤细胞耐药的形成有关，槲皮素能逆转DNR的这种异常分布。     

汉防己甲素对白血病耐药细胞株K562/A02核因子κB表达的影响

目的：通过研究汉防己甲素（tetrandrine，Tet）对白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562／A02核因子kB（nuclear factor-kaPPaB，NF-kB）表达的影响，探讨Tet逆转多药耐药的作用机制。方法：采用免疫细胞化学及蛋白印迹法分别检测1umol／L Tet作用K562和K562／A02细胞6h和12h舌，细胞NF-kB核转位水平和胞核NF—kB蛋白表达的变化。结果：Tet作用6h和12h后，对K562细胞的NF-kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）；K562／A02细胞NF—kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达明显高于K562细胞对照组（P〈0．01）；Tet作用6h和12h后，可明显降低K562／A02细胞NF-kB蛋白核转位（P〈0．05）和胞核NF—kB蛋白表达水平（P〈0．01）。作用12h较作用6h效果更显著（P〈0．05）。结论：1umol／L Tet可能通过抑制NF—kB活化逆转K562／A02细胞多药耐药性。     

甲基莲心碱、红霉素对K562/A02细胞内谷胱甘肽含量的影响

目的：探讨甲基莲心碱（Nef）、红霉素（EM）对K562/A02细胞内谷胱甘肽（GSH）含量的影响，及其对白血病细胞代谢解毒系统介导的多药耐药（MDR）的逆转作用。方法：采用生物化学DTNB法测定细胞内GSH含量。结果：K562/A02细胞内GSH含量为（137.34±33.10）mg/mgprot，高于K562细胞内GSH含量（73.38±10.02）mg/mgprot（P<0.05），且为K562细胞的1.87倍；Nef 10 mg/L，EM 100 mg/L，Nef 10 mg/L+EM 100 mg/L，维拉帕米（VRP）5 mg/L处理2 d后K562/A02细胞内GSH含量分别为（69.01±15.99）mg/mgprot,（70.57±11.93）mg/mgprot,（65.74±13.37）mg/mgprot, （70.86±16.16） mg/mgprot,均较无药组含量(137.34±33.10)减低（P<0.05）。结论：细胞内GSH含量增高是K562/A02细胞产生MDR的机制之一；Nef，EM能使K562/A02细胞内GSH含量下降可能是其逆转耐药白血病细胞MDR的机制之一。     

K_（562）和L_（210）耐高三尖杉酯碱细胞系的建立及其耐药机制的初步研究

通过逐渐递增高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）剂量的方法，分别克隆筛选出两株耐ＨＨＴ１６．７和１３．４倍的Ｋ５６２和Ｌ１２１０白血病细胞系。各命名为Ｋ５６２ＨＨＴ和Ｌ１２１０ＨＨＴ。二者对阿霉素、长春新碱、柔红霉索和马法兰等抗肿瘸药物均呈不同程度的交叉耐药。斑点杂交的结果表明二者的多药耐药基因（ＭＤＲ－１）表达明显增强，且用ＭＤＲ－１基因表达产物Ｐ１７０糖蛋白特异性的ＪＳＢ－１单克隆抗体检测Ｋ５６２ＨＨＴ细胞，结果呈强阳件反应，而敏感株为阴性。此外，二者的谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）α和π基因ｍＲＮＡ水平均有提高，而ＧＳＴμ无明显改变。     

脉冲磁场对多药耐药细胞K562/ADR的逆转作用

目的:研究脉冲磁场(PMF)对多药耐药(MDR)肿瘤细胞K562/ADR的逆转作用及机制。方法:MTT法测定敏感株K562/S和耐药株K562/ADR对多柔比星(ADR)的IC50,观察PMF对肿瘤细胞增殖的影响。测定不同频率PMF照射的K562/ADR耐药细胞株对ADR的IC50,分析PMF的逆转效果。用流式细胞术(FCM)检测细胞内ADR的浓度。结果:K562/ADR细胞的耐药倍数为29.36,PMF对耐药株肿瘤细胞增殖无影响。相同磁场强度、不同频率的PMF对耐药株K562/ADR的IC50影响不同,在相同的时间里,70 Hz的PMF影响作用最明显。70 HzPMF处理的K562/ADR细胞中药物浓度高于对照组。结论:PMF可通过提高细胞内的药物浓度,对肿瘤细胞K562/ADR的MDR具有逆转作用;逆转作用的大小与脉冲磁场的频率有关,低频率的PMF比高频率的PMF的逆转效果更明显。