尼古丁对体外培养人外周血单个核细胞分泌TNF的影响

目的 :观察尼古丁对体外培养人外周血单个核细胞分泌肿瘤坏死因子 (TNF)的影响 ,探讨吸烟使血浆TNF水平升高的可能机制。方法 :分离 2 1名不吸烟与 19名吸烟健康志愿者的外周血单个核细胞 (PBMC)。每名志愿者的PBMC分成A ,B ,C三组 ,A组培养基中不加尼古丁 ,B和C组培养基中分别加入 5 0ng·ml- 1 和 5 0 0ng·ml- 1 浓度的尼古丁 ,体外培养 72h后检测上清液TNF水平 ,观察细胞增殖情况。结果 :吸烟A组TNF水平显著高于不吸烟A组 (P <0 .0 5 ) ,吸烟B组TNF水平显著高于不吸烟B组 (P <0 .0 5 ) ;不吸烟C组TNF水平显著高于不吸烟B组 (P <0 .0 5 ) ,且两组均显著高于不吸烟A组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;吸烟B组TNF水平显著高于吸烟A组 (P <0 .0 5 ) ;而吸烟C组TNF水平则显著低于吸烟A组和不吸烟C组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 ) ,且PBMC增殖也受到抑制 ,其增殖倍数显著低于吸烟A组和不吸烟C组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 ) ,TNF水平与细胞增殖倍数呈正相关 (r =0 .93,P <0 .0 5 ) ,直线回归方程式为 ^Y =2 .913X - 2 .95 5。结论 :尼古丁可以促进体外培养的人外周血单个核细胞分泌TNF ,且作用大小随剂量增大而增大 ,但高浓度尼古丁反而抑制TNF分泌 ,这可能是吸烟升高血浆TNF水平的机制之一。     

吸烟者血清内皮抑素水平的临床意义

目的 探讨吸烟者血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和内皮抑素(endostatin)水平的变化及其临床意义.方法 采用病例对照方法设计,对伴和不伴肺癌的164例吸烟者测定血清VEGF和endostatin水平,将20例不吸烟健康人作为正常对照组.结果 吸烟伴肺癌组(82例)血清VEGF水平明显高于吸烟无肺癌组(82例)及正常对照组(均P＜0.01);吸烟无肺癌组高于正常对照组(P＜0.05).吸烟伴肺癌组血清endostatin水平明显高于正常对照组(P＜0.01),但与吸烟无肺癌组比较差异无统计学意义(P＞0.05);吸烟无肺癌组高于正常对照组(P＜0.05).吸烟伴肺癌组血清endostatin/VEGF比值明显低于吸烟无肺癌组和正常对照组(均P＜0.01),但吸烟无肺癌组与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).吸烟伴肺癌组和吸烟无肺癌组VEGF与endostatin均呈正相关(均P＜0.01).结论 吸烟可能导致endostatin/VEGF失衡而致癌.endostatin/VEGF比值可能是吸烟者早期诊断肺癌的指标之一,吸烟者应定期检测血清VEGF、endostatin水平及endostatin/VEGF比值.     

慢性心力衰竭患者血浆肿瘤坏死因子浓度变化

The plasma levels of tumor necrosis factor (TNF) were measured by enzyme-linked immunoabsorbent assay in 109 patients who were grouped as "non-heart failure" (n = 36), "heart failure" (n = 36) and "cachexia" (n = 37). The results showed that there was no obvious difference in caloric intake among the three groups. Mean plasma levels of TNF were increased in patients with heart failure (0.51 +/- 0.2 ng.ml-1, P < 0.05) and even higher in patients with cachexia (6.19 +/- 2.76 ng.ml-1, P < 0.01) than in patients with non-heart failure (0.085 +/- 0.025 ng.ml-1). In the group with enhanced plasma levels of TNF (TNF > 100 pg.ml-1), the incidence of cachexia (61.0%) was obviously greater than that in the group with normal levels of TNF (17.6%). These findings indicate that plasma levels of TNF are elevated in patients with heart failure; high levels of TNF may play an important role in the pathogenesis of cardiac cachexia.     

FK506对d-BSA超载的NRK-52E细胞增殖的影响

目的:探讨他克莫司(tacrolimus,FK506)对去脂牛血清白蛋白(denatured bovine serum albumin,d-BSA)超载的大鼠肾小管上皮细胞(normal rat kidney proximal tubular epithelial cell line,NRK-52E)增殖的影响。方法:(1)以不同终质量浓度(1、5、10、20、50 mg·ml-1)d-BSA超载NRK-52E,以正常培养的NRK-52E细胞为对照组,观察不同浓度d-BSA对细胞增殖的影响及d-BSA(20 mg·ml-1)超载不同时间(6、12、24 h)对NRK-52E增殖的影响。(2)以不同浓度(0.1、1、10、20 ng·ml-1)FK506预处理NRK-52E 4 h后加入终质量浓度为20 mg·ml-1d-BSA共孵育24 h,观察不同浓度FK506预处理对d-BSA超载细胞增殖的影响。(3)以10 ng·ml-1的FK506预处理4 h后加入终质量浓度为20 mg·ml-1d-BSA共孵育NRK-52E,观察不同时间(6、12、24 h)对细胞增殖影响。以上细胞增殖测定均采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)。结果:(1)终质量浓度为1 mg·ml-1的d-BSA超载NRK-52E 24 h后无明显促进细胞增殖的作用(P>0.05);终质量浓度为5 mg·ml-1的d-BSA能够促进细胞增殖(P<0.05),终质量浓度为10、20、50 mg·ml-1的d-BSA能够显著促进细胞增殖(P<0.01)。(2)以终质量浓度为0.1 ng·ml-1的FK506预处理NRK-52E,细胞增殖与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);终质量浓度为1 ng·ml-1的FK506具有抑制d-BSA诱导的细胞增殖的作用(P<0.05);10、20 ng·ml-1FK506能够显著抑制-d-BSA诱导的细胞增殖(P<0.01)。(3)终质量浓度为10 ng·ml-1的FK506预处理4 h后加入终质量浓度为20 mg·ml-1d-BSA共孵育NRK-52E,6 h后,具有抑制细胞增殖的作用(P<0.05),共孵育12、24 h后,抑制细胞增殖的作用更加显著(P<0.01)。结论:d-BSA超载NRK-52E可以诱导细胞增殖,FK506具有抑制d-BSA促进NRK-52E细胞增殖的作用。     

乙型肝炎患者血清和PBMC培养上清IL-2与IL-10的检测及意义

目的　探讨Th1/Th2细胞因子在乙型肝炎发病机制中的意义。方法　采集 7例急性病毒性肝炎、12例慢性乙型肝炎、10例慢性重型乙型肝炎患者和 10例健康献血员血清 ;分离 15例慢性乙型肝炎、14例慢性重型乙型肝炎和 10例健康献血员PBMC ,在PHA P刺激下培养 72h ,收取培养上清。采用双抗体夹心ELISA法检测血清和PBMC培养上清IL 2与IL 10水平。结果　急性肝炎血清IL 2高于正常对照 (P <0 .0 1)、高于慢性乙型肝炎 (P <0 .0 5 )、高于慢性重型乙型肝炎 (P <0 .0 5 )。慢性重型乙型肝炎血清IL 2高于正常对照 (P <0 .0 1) ,慢性重型乙型肝炎PBMC培养上清IL 2高于正常对照 (P <0 .0 5 )。血清IL 2与ALT呈正相关 (P <0 .0 1) ,PBMC培养上清IL 2与ALT呈正相关 (P <0 .0 5 )。血清IL 10与PBMC培养上清IL 10与ALT无相关性 ,血清IL 2与IL 10呈正相关 (P <0 .0 1)。结论　Th1型细胞因子IL 2上调与乙型肝炎肝脏的炎症活动相关 ,IL 2的分泌低下可能造成细胞免疫力低下 ,与HBV的持续感染有关。IL 10可能作为IL 2的拮抗因子随IL 2分泌增加而升高。     

慢性阻塞性肺病外周血单个核细胞中的组蛋白去乙酰化酶活性与全身炎症的关系

目的:观察慢性阻塞性肺病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的活性及其与全身炎症的关系。方法:募集COPD患者及吸烟和非吸烟健康志愿者并检测其肺功能。抽取所有被研究者外周静脉血,以密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞。提取组蛋白并测定HDAC活性。测定所有被研究者外周血清的IL-8及IL-10水平,并观察其与HDAC的关系。结果:外周血单个核细胞中HDAC活性与外周血清中IL-8水平呈负相关(在COPD患者中,r=-0.693,P=0.000;在所有被研究者中,r=-0.598,P=0.000)。外周血IL-8水平在健康吸烟者高于健康不吸烟者2倍以上[(106.87±69.94)比(44.23±27.52)ng/L,P=0.000]。外周血IL-8水平在COPD患者高于健康不吸烟者2倍以上[(103.98±82.39)比(44.23±27.52)ng/L,P=0.000]。外周血IL-10水平在健康吸烟者低于健康不吸烟者10%左右[(10.04±0.54)比(11.78±0.45)ng/L,P<0.05]。外周血IL-10水平在COPD患者低于健康不吸烟者10%左右[(10.12±0.56)比(11.78±0.45)ng/L,P<0.05]。外周血清IL-8水平与吸烟量呈线性正相关。IL-10水平与吸烟量零相关。吸烟量超过35包-年的COPD患者与吸烟量少于35包-年者相比,血清IL-8水平前者较后者较升高约3倍以上。结论:至少在轻中度COPD患者的全身炎症与吸烟密切相关。吸烟引起支气管-肺的炎症反应同时,可能通过抑制外周血单个核细胞中的HDAC活性造成全身炎症反应。     

血清抵抗素与吸烟者动脉弹性的相关性研究

目的测定吸烟者血清抵抗素水平,并行颈动脉ET技术（血管回声跟踪技术）检测,探讨血清抵抗素水平与动脉弹性的关系。方法选择非吸烟者38例,吸烟者45例,检测血压、身高、体重、体重指数（BMI）、生化指标、血清抵抗素水平,并应用ET技术检测颈动脉压力应变弹性系数（Ep）、僵硬度（β）、顺应性（AC）、增大指数（AI）及脉搏波传导速度（PWVβ）。结果（1）吸烟组Ep、β、AI及PWVβ均高于非吸烟组,差异有统计学意义（P〈0．05）;AC低于非吸烟组,差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）血清抵抗素水平与β、P、PWVβ呈正相关关系（r=0．346,P=0．003;r=0．305,P=-0．009）。结论吸烟者血清抵抗素水平与β、PWVβ有相关性,三者均是早期发现动脉弹性病变的敏感指标。     

高龄非甲状腺性病态综合征患者外周血单核细胞的功能变化

目的：探讨高龄非甲状腺性病态综合征（ NTIS）患者外周血单核细胞（ PBMCs）功能的变化。方法根据临床症状、实验室检查和甲状腺激素变化情况,排除原发性或继发性甲状腺疾病后,将住院高龄患者分为甲状腺功能正常组（ A组,40例）、NTIS组（ B组,33例）、NTIS并全身炎症反应综合征（ SIRS）组（ C组,36例）、NTIS并脓毒症组（D组,54例）。用流式细胞仪检测患者PBMCs表面人白细胞抗原－DR（HLA－DR）的表达;用MTT方法检测PBMCs刺激同种异体T淋巴细胞的增殖实验,用ELISA方法检测经内毒素（ LPS）刺激前后PBMCs分泌肿瘤坏死因子－α（TNF－α）、白细胞介素－6（IL－6）、白细胞介素－10（IL－10）等细胞因子的水平。结果与A组比较,B组患者PBMCs表面HLA－DR的表达、刺激同种异体T淋巴细胞的增殖能力、经LPS刺激后分泌TNF－α、IL－6、IL－10细胞因子的水平差异均无统计学意义（ P＞0.05）;与B组比较,C、D两组患者PBMCs表面HLA－DR的表达、刺激T细胞增殖能力以及分泌细胞因子的水平均显著性减低（ P＜0.05）。 D组上述免疫功能指标较C组有下降趋势,但C、D两组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论甲状腺激素水平减低本身不引起PBMCs功能的变化;SIRS或脓毒症所致NTIS的患者PBMCs功能减低。     

TNF-α信号通路主要受体衔接蛋白在SLE患者外周血单个核细胞中的表达及其意义

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）α信号通路主要受体衔接蛋白-肿瘤坏死因子相关死亡结构域蛋白（TRADD）、Fas相关死亡结构域蛋白（FADD）、受体相互作用蛋白1（RIP-1）和肿瘤坏死因子受体相关因子2（TRAF-2）在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中的表达变化及意义。方法收集本院确诊的SLE住院患者（51例）和健康志愿者（17例）外周静脉血,分离PBMC,采用实时荧光定量PCR检测上述4种受体衔接蛋白及半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）3和白细胞介素（IL）-1β的表达水平,比较SLE患者与健康志愿者之间以及不同狼疮活动度SLE患者中上述4种受体衔接蛋白的表达差异,以及与狼疮活动指数之间的相关关系。结果正常对照组PBMC中可表达TRADD、FADD、RIP-1和TRAF-2。SLE患者PBMC中TRADD、FADD、RIP-1和TRAF-2表达分别为正常对照组的0．38,0．69,0．59和0.55倍（P〈0．05）;SLE高活动度组4种受体衔接蛋白的表达分别为正常对照组的0．31,0．59,0.52和0．49倍（P〈0．05）,但低活动度组与正常对照组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。SLE患者PBMC中Caspase 3表达明显升高（P〈0．01）,而IL-1β表达与正常对照组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。SLE患者PBMC中TRADD、FADD、RIP-1和TRAF-2的表达与狼疮活动指数（SLEDAI）均呈负相关关系,相关系数分别为-0．285,-0．280,-0．307和-0．298（P〈0．05）。结论TNF-α信号通路中主要的4种受体衔接蛋白TRADD、FADD、RIP-1和TRAF-2在SLE患者PBMC中的表达均降低,且与狼疮活动指数呈负相关关系,其异常表达可能参与了TNF—α信号网络紊乱所介导的SLE免疫病理损伤。