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相似文献
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1.
目的 探讨miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用.方法 采用实时荧光定量PCR检测8株乳腺癌细胞系(MCF7、BT474、SK-BR-3、MDA-MB-453、MDA-MB-468、HCC1937、BT549和MDA -MB -231)中miR-506的表达量,以正常乳腺上皮细胞MCF10A为对照.通过脂质体转染的方法在MDA-MB-231和BT549细胞系中瞬时过表达miR-606模拟物(设阴性对照),通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞运动能力的变化;观察MDA-MB-231和BT549细胞系转染miR-506前后细胞形态学变化;Western blotting法检测E-cadherin、Vimemin和Slug蛋白表达的变化.荧光素酶报告基因分析实验检测M DA-MB-231细胞中miR-506过表达对野生型荧光素酶活性的影响.结果 miR-506在各乳腺癌细胞中的表达量相对于正常乳腺上皮细胞MCF10A显著降低(P<0.01).miR-506过表达显著抑制MDA-MB-231和BT549细胞的迁移和侵袭能力,与阴性对照的差异有统计学意义(P<0.01).MDA-MB-231和BT549细胞瞬时转染miR-506 48 h后发生明显的形态学改变;Western blotting结果显示miR-506过表达在MDA-MB-231和BT549细胞中均上调E-cadherin的表达,下调Vimentin的表达.Western blotting检测结果显示MDA-MB-231细胞转染miR-506后Slug蛋白水平明显低于阴性对照;荧光素酶报告基因分析结果显示miR-506过表达显著抑制野生型荧光素酶的活性.结论 在乳腺癌中,miR-506可以通过靶向转录因子Slug诱导细胞发生上皮间充质转化,进而抑制细胞的侵袭和转移能力,这是miR-506参与乳腺癌发生和发展的可能途径之一.  相似文献   

2.
目的:探讨脂多糖(LPS)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞中上皮间质转化(EMT)标志物及β-连环素(β-catenin)表达的影响,阐明其可能机制。方法:人乳腺癌MDA-MB-231细胞分为对照组和不同浓度(5、10、20和40 mg·L-1)LPS组,倒置显微镜观察各组MDA-MB-231细胞的形态表现,免疫荧光实验检测各组MDA-MB-231细胞中β-catenin表达及定位,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组MDA-MB-231细胞中EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和β-catenin mRNA及蛋白表达水平。结果:对照组MDA-MB-231细胞形态表现为上皮细胞表型,不同浓度LPS组MDA-MB-231细胞形态表现为间质细胞表型。免疫荧光实验,β-catenin表达定位主要在细胞核。与对照组比较,不同浓度LPS组细胞中Vimentin和β-catenin mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),以20 mg·L-1LPS组升高最为明显;与对照组比较,不同浓度LPS组细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),以20 mg·L-1 LPS组降低最为明显。结论:LPS通过下调E-cadherin表达、上调Vimentin表达促进乳腺癌MDA-MB-231细胞发生EMT、侵袭和转移,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。  相似文献   

3.
目的探讨环状RNACdr1as/miR-7/SP1轴调控乳腺癌细胞发生侵袭和转移的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR技术检测乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞转染miR-7模拟物、sh-Cdr1as、转录因子SP1siRNA前后,正常乳腺MCF-10A细胞及乳腺癌组织中环状RNACdr1as、miR-7、SP1mRNA的表达水平;MDA-MB-231、MCF-7细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达水平;采用Transwell实验分析MDA-MB-231、MCF-7细胞的侵袭和迁移能力;Westernblot法检测MDA-MB-231、MCF-7细胞中E-cadherin及Vimentin蛋白的表达情况。结果与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231、MCF-7细胞环状RNACdr1as表达上调,miR-7表达下调,SP1mRNA表达上调(均P<0.05)。与转染前相比,MCF-7、MDA-MB-231细胞转染sh-Cdr1as后,miR-7表达上调(均P<0.05),SP1mRNA表达下调(均P<0.05);而转染miR-7mimics后,SP1mRNA表达下调(均P<0.05)。与转染前相比,MDA-MB-231、MCF-7细胞转染sh-Cdr1as后,侵袭细胞数明显减少(均P<0.05)。与乳腺导管原位癌患者相比,乳腺浸润性导管癌环状RNACdr1as表达上调(P<0.05);与无腋窝淋巴结转移患者相比,有腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者环状RNACdr1as表达上调(P<0.05);Pearson相关性分析显示环状RNACdr1as与miR-7的表达存在负相关(r=-0.541,P<0.05),miR-7与SP1mRNA的表达也存在负相关(r=-0.467,P<0.05)。MDA-MB-231、MCF-7细胞转染SP1siRNA后,E-cadherinmRNA、蛋白表达均上调(均P<0.05),VimentinmRNA、蛋白表达均下调(均P<0.05)。结论乳腺癌细胞环状RNACdr1as表达上调,通过环状RNACdr1as/miR-7/SP1调控轴促使癌细胞发生上皮间质转化,使乳腺癌细胞发生侵袭和转移。环状RNACdr1as可能成为乳腺癌治疗的新靶点。  相似文献   

4.
目的:探讨他莫昔芬(TAM)对雌激素受体(ER)阴性、G蛋白偶联雌激素受体(GPER)阳性乳腺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法:以ER阴性(ER-)、GPER阳性(GPER+)乳腺癌MDA-MB-468细胞为研究对象,用TAM处理细胞,GPER特异性抑制剂G15抑制胞内GPER活性,siRNA干扰GPER蛋白表达,侵袭小室实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测ERα、GPER、Vimentin、E-cadherin及N-cadherin蛋白表达变化。结果:TAM(5 μmol/L)可明显增强MDA-MB-468细胞的侵袭能力(P<0.01);G15(10 μmol/L)预处理能显著抑制TAM诱导的细胞侵袭活动(P<0.01);GPER-siRNA可明显干扰MDA-MB-468细胞GPER蛋白表达(P<0.01);干扰GPER蛋白表达能有效抑制TAM诱导的细胞侵袭活动(P<0.01)。TAM处理明显诱导Vimentin和N-cadherin蛋白表达上调(P<0.01),E-cadherin蛋白表达下调(P<0.01);G15预处理或干扰GPER蛋白表达均能抑制TAM的上述诱导作用(均P<0.05)。结论:TAM能诱导ER- GPER+乳腺癌MDA-MB-468细胞EMT,其作用与其激活GPER有关。  相似文献   

5.
乳腺癌耐药性中MAPK信号转导通路与EGR-1关系的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨乳腺癌细胞阿霉素耐药中p38MAPK通路与EGR-1活性的关系。方法用流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、RT—PCR及Western Blot等方法分别检测SB203580(15μmol/L)干预后细胞的凋亡、细胞内阿霉素浓度及细胞对阿霉素敏感性的改变;EGR-1 mRNA表达及P—gP、磷酸化p53蛋白及p38蛋白表达情况。结果经SB203580(15μmol/L)干预,流式细胞仪检测见MCF-7/Adr细胞发生显著凋亡,并呈一定时间依赖性;细胞内阿霉素浓度显著增加;MCF-7/Adr细胞对阿霉素药物的耐受性显著降低;伴随p38MAPK通路活性抑制和EGR—1mRNA表达增加,磷酸化p53蛋白表达显著上调,而P—gP蛋白显著下调。结论提示p38MAPK通路与乳腺癌细胞阿霉素耐药密切相关,p38MAPK通路调控的EGR—1激活参与乳腺癌细胞阿霉素耐药的形成。  相似文献   

6.
目的:使用小分子抑制物LY294002和PD98059分别抑制磷脂酰肌醇-3激酶( PI3K)通路和有丝分裂活化蛋白激酶(MAPK)通路的信号转导,给予胰岛素样生长因子-1(IGF-1)刺激,检测乳腺癌细胞的增殖和迁移能力的变化。方法使用CCK-8法和体外迁移实验分别检测IGF-1干预下细胞的增殖能力,并以信号通路抑制剂处理后细胞作为对照组,同样使用CCK-8法和体外迁移实验检测其增殖能力。结果 IGF-1干预第2~4天,不同浓度IGF-1(20,50,100mg/L)均显著促进MDA-MB-231细胞增殖,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);当IGF-1浓度为50mg/L时促进作用最明显;使用LY294002(25μM)或PD98059(50μM)分别阻断PI3K通路和MAPK通路后,不仅抑制MDA-MB-231细胞基础水平的增殖,而且抑制IGF-1刺激下的细胞增殖能力,与DMSO对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);在不同浓度IGF-1(20,50,100mg/L)作用下,MDA-MB-231细胞迁移能力均增强,与对照组比较,差异有统计学意义( P<0.01)。结论 IGF-1干预后MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力明显增强,PI3K通路和MAPK通路均参与了IGF-1促进乳腺癌细胞增殖和迁移的信号转导。  相似文献   

7.
杨莉  黄娇  彭媛  母立峰  刘福 《西部医学》2022,34(1):140-145,150
目的 探讨奈达铂对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭转移及凋亡的影响,并探讨相关作用机制。方法 体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,分为空白对照组、阳性对照组(1 μmol/L多西紫杉醇)及奈达铂低、中、高剂量组(15、30、45 μg/mL奈达铂)。MTT法检测MDA-MB-231细胞增殖能力;AnnexinV-FITC/PI双染法检测MDA-MB-231细胞细胞凋亡情况;Transwell实验、划痕实验分别检测细胞侵袭、迁移能力;蛋白免疫印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl0-2相关X蛋白(Bax)]、侵袭迁移相关蛋白[E-钙粘附蛋白(E-cadherin)、N-钙粘附蛋白(N-cadherin)]及通路相关蛋白[Toll样受体4(TLR4)、髓样细胞分化蛋白88(MyD88)、核转录因子kappa B(NF-κB)、白细胞介素(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]的表达变化。结果 与空白对照组相比,24、48 h时奈达铂低、中、高剂量组MDA-MB-231细胞增殖抑制率显著升高(均P<0.05),呈剂量依赖性,且高剂量组与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,奈达铂低、中、高剂量组MDA-MB-231细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著升高,侵袭细胞数、细胞迁移率及PCNA、Bcl-2、N-cadherin、TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β、TNF-α蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),呈剂量依赖性,且高剂量组与阳性对照组无显著差异(P>0.05)。结论 奈达铂可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及迁移并促进细胞凋亡,可能是通过抑制TLR4/NF-κB信号通路活化实现的。  相似文献   

8.
《中国现代医生》2020,58(36):32-35+封三
目的 探讨多能蛋白聚糖(VCAN)通过PI3K/AKT 信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖的影响。方法 利用Western Blot 和qRT-PCR 检测VCAN 在正常人乳腺细胞MCF-10A 和三株乳腺癌细胞中的表达水平。选取VCAN 高表达细胞株MDA-MB-231 为实验对象,实验分组为NC 组、siRNA1-VCAN 组和siRNA2-VCAN 组。采用MTT 法及克隆形成法检测转染后的乳腺癌细胞增殖变化。Western Blot 检测p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K 的蛋白相对表达水平。结果 与正常人乳腺细胞相比,VCAN 在乳腺癌细胞中的表达量显著上升(P<0.05)。下调VCAN 表达量,MDA-MB-231 细胞的增殖显著被抑制(P<0.05)。同时,下调VCAN 表达量,p-AKT、p-PI3K 蛋白水平显著下降(P<0.05)。结论VCAN 在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中,可能通过PI3K/AKT 信号通路调控细胞增殖能力。  相似文献   

9.
加味丹参饮预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:探讨加味丹参饮( JDSH )预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤( IRI )的保护作用及机制。方法采用结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min 后再灌注30/60 min 模型,将56只 SD 雄性大鼠随机分为7组:假手术组、缺血/再灌注( I/R )30 min 组、I/R 60 min 组、p38MAPK 阻断剂SB203580+I/R 30 min 组、SB203580+I/R 60 min 组、JDSH+I/R 30 min组、JDSH+I/R60 min 组。各组干预2 d 后, HE 染色心肌组织标本,全自动生化分析仪测定血清 CK、LDH ,免疫组化法检测p38MAPK、COX-2和 ICAM-1蛋白的表达。结果经 JDSH 预处理或 p38MAPK 阻断剂 SB203580处理后心肌细胞形态结构保持更好。与假手术组比较,I/R30 min 组和 I/R 60min 组大鼠血清中的 CK、LDH 明显升高(P<0.01);与 I/R 30/60 min 比较,SB203580+I/R 30/60 min 组和 JDSH+I/R 30/60 min 组均明显降低(P<0.01)。与假手术组比较,I/R 使大鼠心肌组织的 p38MAPK、COX-2、ICAM-1蛋白表达增加(P<0.01),且随再灌注时间的延长而增加;与 I/R 30/60 min 组比较,SB203580和JDSH 均能减少其蛋白表达(P<0.01)。结论大鼠心肌 IRI 时,激活了 p38MAPK 信号通路,且与再灌注时间(30~60 min )呈正相关。 JDSH 通过抑制 p38MAPK 信号通路,降低其下游基因 COX-2和 ICAM-1的表达,降低CK、LDH ,减轻心肌损伤,起到保护心肌作用。  相似文献   

10.
郭文利  黄建棋  陆建菊  陆凯 《浙江医学》2019,41(5):409-413,423
目的检测长链非编码RNAAC003973.4在人乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测20例乳腺癌组织及配对的癌旁组织,以及检测乳腺癌细胞株(BT-549、MDA-MB-231、MCF-7、T47D)和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A中AC003973.4的表达。取AC003973.4表达水平最低的乳腺癌细胞株转染过表达质粒以上调AC003973.4的表达,分别采用MTS法、Transwell迁移和侵袭实验检测AC003973.4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;生物信息学法预测AC003973.4互补结合的miRNA及下游靶基因,qRT-PCR法检测miRNA和下游靶基因mRNA的表达,Westernblot检测相关蛋白的表达。结果乳腺癌组织AC003973.4表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01)。乳腺癌细胞株AC003973.4表达水平明显低于人正常乳腺上皮细胞(均P<0.05),MCF-7细胞中AC003973.4的表达水平最低(P<0.01)。上调MCF-7细胞AC003973.4的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱(均P<0.05)。AC003973.4可互补结合miR-224-5p,miR-224-5p可互补结合PTEN。上调MCF-7细胞AC003973.4的表达后,miR-224-5p的表达均下调(P<0.01),PTENmRNA和蛋白的表达均上调(均P<0.01),细胞增殖相关蛋白CDK4、CyclinD1与细胞迁移相关蛋白Zeb-1、N-cadherin表达均下调(均P<0.01)。结论乳腺癌组织和细胞株中AC003973.4表达水平降低,上调AC003973.4表达可减弱乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与调节miR-224-5p与PTEN基因的表达有关。  相似文献   

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