甘草酸对大鼠肝纤维化过程中肝组织基因表达的影响（摘要）

目的研究甘草酸抗肝纤维化作用的分子机制。方法建立四氯化碳诱导肝纤维化和甘草酸治疗大鼠模型;选取正常组、造模组、治疗组大鼠肝脏各1只进行cl)NA微阵列研究;从cl)NA微阵列结果中选取一个在造模大鼠肝脏中表达明显异常,但经甘草酸治疗后表达正常的基因(~澄),用半定量RT-代二R检测此基因在不同实验阶段(第1、2、4、8周)3组大鼠中的表达变化。结果通过eDNA微阵列发现snlurfZ、PT八卫R、CYI理既、FGG等多种与炎症、代谢有关的基因在造模大鼠肝脏中表达上调,甘草酸治疗后恢复正常表达。通过半定量RT~PCR研究发现,经四氯化碳处理第1周时smu川2在3组大鼠肝脏中表达无异常变化,第2周时在造模和治疗组中表达均下调,第4周时在造模组中表达上调、治疗组中表达下调,第8周时在造模组表达下调,治疗组上调。结论调控snlurfZ基因转录水平可能是甘草酸抗肝纤维化作用的分子机制之一。〔全文刊登于中华医学杂志,2003,83(13):1122」     

食用白酒对实验性肝脏纤维化TGF-β1信号转导影响的研究

目的:研究食用白酒(贵州茅台酒)对实验性大鼠肝纤维化TGF-β1信号转导影响的研究,来探讨食用白酒(贵州茅台酒)对肝脏纤维化的影响。方法:79只雄性Wistar大鼠,随机分为:(1)正常对照组(n=9);(2)茅台酒四氯化碳组(n=12);(3)乙醇四氯化碳组(n=13);(4)茅台酒组(n=14);(5)乙醇组(n=16);(6)四氯化碳造模组(n=15);实验第四周和第八周末分批处死动物40只、37只,取血和肝脏,分别行血清肝功能、肝纤维化检测、HE染色评估肝纤维化程度、免疫组化法检测肝组织中TGFβ1水平。结果:乙醇四氯化碳组和茅台酒四氯化碳组间LN差别有显著性意义(P<0.05);在第八周末,茅台酒四氯化碳组的PCⅢ与四氯化碳造模组差别有显著性意义(P<0.05)。对血清LN、PCⅢ、肝脏TGF-β1表达的影响,茅台酒组和乙醇组相比较,P<0.05。结论:茅台酒没有显著增加TGF-β1的表达,对肝脏纤维化的发展有一定的抑制作用,同乙醇相比,茅台酒可以延缓四氯化碳造成的纤维化损伤。     

免疫性肝纤维化大鼠肝组织G蛋白偶联受体激酶2的表达

目的 探讨G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)在猪血清诱导的免疫性肝纤维化模型中表达的变化及其意义.方法 Wistar大鼠腹腔注射猪血清建立免疫性肝纤维化模型,在造模的第0、3、6、9、12、16周不同时间点采用Masson染色对肝脏组织作病理检查;免疫组化染色法、蛋白免疫印迹法检测肝脏中GRK2表达水平的变化.结果 大鼠腹腔注射猪血清在16周时可以成功建立免疫性肝纤维化模型.与正常大鼠相比,免疫性肝纤维化大鼠肝脏中GRK2的表达量随造模时间的延长而明显降低.结论 免疫性肝纤维化大鼠肝脏中GRK2表达水平下调,提示GRK2可能在免疫性肝纤维化过程中发挥重要作用.     

中药肝力克对实验性大鼠肝纤维化的影响

目的：观察中药肝力克对实验性肝纤维化大鼠肝组织炎症活动度和肝纤维化的影响。方法：大鼠随机分成正常对照组和遣模组。造模组大鼠予40％CCl4皮下注射。造模结束后，将造模组大鼠随机分为肝纤维化模型组，肝力克大、中、小剂量组及秋水仙碱组，并给予不同剂量的药物灌胃治疗，实验结束后处死大鼠，取肝组织常规HE染色，观察大鼠肝组织炎症活动度和肝纤维化程度。结果：肝纤维化模型组大鼠肝组织炎症活动度计分及肝纤维化程度计分均较正常对照组明显升高，差异有非常显著性意叉；用肝力克各剂量及秋水仙碱治疗后，大鼠肝组织炎症活动度及肝纤维化程度均明显降低，与肝纤维化模型组相比，差异有非常显著性和显著性意叉，其中尤以肝力克大剂量组炎症活动度降低最明显。结论：肝力克有明显减轻实验性肝维化大鼠肝组织炎症活动度及改善纤维化程度的作用。     

中药肝心宁对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的：研究中药肝心宁对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGF-β1及Smad-3表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法：采用四氯化碳皮下注射并饲以高脂低蛋白饲料和30%酒精诱导大鼠肝纤维化模型,68只雄性SD大鼠随机分成5组：正常组（11只）、模型组（15只）、阳性对照组（14只）、肝心宁高剂量组（14只）和肝心宁低剂量组（14只）,6周末处死所有动物,行HE染色,光镜下观察肝组织肝纤维化程度,并采用RT-PCR半定量方法,检测大鼠肝组织TGF-β1 mRNA、Smad-3mRNA的表达水平。结果：与正常对照组相比,模型组TGF-β1 mRNA、Smad-3 mRNA表达明显增强。经肝心宁治疗后大鼠肝脏TGF-β1表达比模型组减弱,肝心宁同时下调Smad3的表达。另外,肝心宁组大鼠肝脏病理变化显著改善。结论：肝心宁可下调TGF-β1 mRNA、Smad-3 mRNA蛋白的表达,从而抑制或减轻肝纤维化的形成。     

中药软肝饮对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TGF-1/Smad信号通路的影响

[目的]研究中药软肝饮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGF-1及Smad3,Smad7表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。[方法]Wistar大鼠40只,随机分成正常对照组,模型对照组,软肝饮治疗组,鳖甲软肝片对照组,采用CCl4背部皮下注射构建肝纤维化模型,行HE和VG染色,光镜下观察肝组织肝纤维化程度。同时免疫组化SABC方法检测各组TGF-1、Smad3和Smad7的表达。[结果]与正常对照组相比,模型组TGF-1、Smad3表达明显增强,Smad7表达明显下降。经软肝饮治疗后大鼠肝脏TGF-1表达比模型组减弱。软肝饮同时下调Smad3的表达,上调Smad7的表达。另外,软肝饮组大鼠肝脏病理变化显著改善。[结论]肝炎平对大鼠肝纤维化肝脏TGF-1/Smad信号通路有明显的影响,能抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能为抑制TGF-1表达,下调Smad3及上调Smad7的表达。     

肝复康对肝纤维化大鼠肝组织TIMP-1表达的影响

目的 通过观察中药肝复康对肝纤维化大鼠肝组织金属蛋白酶组织抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）表达的影响,探讨肝复康抗肝纤维化的可能机制。方法采用10％四氯化碳皮下注射制备肝纤维化模型,于造模第9周给予肝复康治疗12周。通过测定血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性及白蛋白和总蛋白的含量来反映肝脏功能,HE染色法观察肝组织病理学变化,免疫组化方法观察肝组织TIMP-1的表达。结果经肝复康治疗后,中剂量治疗组与模型组相比较,肝脏的组织学和血清学指标均明显改善,肝组织TIMP-1蛋白的表达显著减少（P〈0．01）。结论肝复康对肝纤维化有疗效,其作用机制可能与降低肝组织TIMP-1蛋白的表达有关。     

应用抑制性消减杂交筛选大鼠不同程度肝纤维化的上调基因

目的应用抑制消减杂交技术,筛选大鼠正常肝脏组织、轻度肝纤维化和重度肝纤维化组织中差异表达的上调基因。方法利用抑制消减杂交技术,构建大鼠轻度肝纤维化和重度肝纤维化2个差异cDNA文库,并挑选36条上调显著的基因进行测序鉴定。结果获得1152个克隆,其中有1036个含有插入片段。挑选32个克隆测序,与GenBank数据库进行初步比较,其中28条与已知基因的部分序列高度同源。结论应用抑制消减杂交技术成功构建了轻度肝纤维化和重度肝纤维化差异表达基因的cDNA削减文库,为进一步研究肝纤维化发生、发展和逆转的机制奠定了理论基础。     

CCl4诱导大鼠纤维化肝组织 microRNA 差异表达及其初步分析

目的：探索 microRNA 在四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠纤维化肝组织中的差异表达及其意义。方法采用 microR-NA 高通量测序分析技术检测对照组(n=10)与模型组(n=10)肝脏组织 microRNA 表达,对差异 microRNA 进行靶基因预测,对靶基因进行基因本(GO)分析、pathway 分析。结果对照组与模型组间筛选出37个差异 microRNA,上调29个,下调8个;从microRNA-基因网络图中发现关键上调为 miR-184、miR-10b-5p、miR-199a-3p 等;关键下调为 miR-200b-3p、miR-199a-5p、miR-125b-5p 等。结论模型组 microRNA 表达谱变化明显,肝纤维化的形成与 microRNA 调控细胞增殖、凋亡、细胞周期等有关。     

不同剂量虫草对肝纤维化小鼠肝脏TGF-β1、Smad3的影响

目的明确不同剂量冬虫夏草对四氯化碳小鼠肝纤维化的作用及对TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达的影响。方法四氯化碳(CCl4)皮下注射复制BALB/c小鼠肝纤维化模型,虫草组在造模同时予以不同剂量虫草煎剂,直至造模结束。HE染色观察肝组织炎症,天狼猩红染色观察肝脏胶原沉积,生化法测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组化测定Smad3在肝脏内的表达,RT-PCR测定TGF-β1mRNA在肝脏内的表达。结果与正常小鼠比较,肝纤维化小鼠肝脏肝静脉与汇管区周围肝细胞明显脂肪变性,肝脏胶原沉积,可见纤维间隔形成,肝脏Hyp含量、TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达量均显著增加。与模型组比较,虫草组肝脏炎症与胶原沉积减轻,TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达量明显降低,以虫草高剂量组为明显。结论肝纤维化BALB/c小鼠的肝脏TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达明显上升,虫草制剂有良好的抗肝纤维化作用,高剂量虫草有着更好的抗肝纤维化作用,其作用机制与下调Smad3蛋白及TGF-β1mRNA表达有关。     

重组人肝再生增强因子对肝纤维化大鼠金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达的影响

目的　了解重组人肝再生增强因子 (hALR)对实验性肝纤维化大鼠肝组织金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP1)基因表达的影响。方法　我们建立了四氯化碳中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型 ,在造模的同时给予不同剂量的hALR。在不同的时间点留取大鼠肝组织标本 ,提取总RNA ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定TIMP1的基因表达水平。结果　在两种模型中大鼠肝组织TIMP1的基因表达水平在模型形成过程中逐渐升高 ;低剂量hALR组大鼠肝组织TIMP1的基因表达水平与模型组及阴性对照组差异无显著意义 ;高剂量hALR组大鼠肝组织TIMP1的基因表达水平 (四氯化碳模型第 2、4、6、8周分别为 0 6 3± 0 10、1 18± 0 2 0、1 89± 0 30、2 6 3± 0 33;人血白蛋白模型尾静脉攻击中、攻击后分别为 2 33± 0 36、4 0 2± 0 5 3)均明显低于模型组 (四氯化碳模型第 2、4、6、8周分别为 0 99± 0 14、2 0 3± 0 30、2 99± 0 4 3、4 13± 0 4 4 ;人血白蛋白模型尾静脉攻击中、攻击后分别为 4 13± 0 6 0、5 99± 0 83)及阴性对照组。结论　大剂量hALR可能有抑制实验性肝纤维化大鼠肝组织TIMP1基因表达的作用     

纤溶酶原激活物抑制剂-1在大鼠肝纤维化模型及自发逆转肝组织中的动态变化及意义

目的 :探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)在肝纤维化发生、发展及消退过程中的表达变化及意义。方法:采用皮下注射四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)方法制备大鼠肝纤维化模型,在注射及停止注射后不同时间,取组织标本,HE和Van Gieson氏(简称VG)染色。明确纤维化分期后,利用免疫组化及RT-PCR方法,观察PAI-1在肝纤维化进程及逆转中表达变化情况。结果:在正常大鼠肝脏中,PAI-1仅在汇管区细胞浆有少量表达;在纤维化肝脏,PAI-1主要分布于肝血窦壁及细胞浆。随着纤维化的进展,PAI-1表达量进行性增加(正常对照组为0.142±0.030,模型组注射CCl42、6和8周组分别为0.361±0.048、0.757±0.068和0.838±0.048);肝纤维化自然消退过程中又逐渐减弱(自发逆转2、4和6周组分别为0.613±0.054、0.524±0.060和0.210±0.044)。RT-PCR检测,模型组注射CCl42、6和8周后,PAI-1 m RNA在肝脏组织中的表达分别是正常肝组织的(6.83±2.60)倍、(12.43±2.65)倍和(26.32±5.17)倍,停止注射CCl4后,在自发逆转2、4和6周时,PAI-1 m RNA在肝脏组织中的表达只是正常肝组织中的(17.86±4.60)倍、(14.62±5.99)倍和(11.21±1.98)倍。结论:PAI-1在肝纤维化进程中持续上调,在肝纤维化逆转过程中表达下调,可能在肝纤维化发生发展中起重要作用。     

锌指结构9、结缔组织生长因子在大鼠肝星状细胞中的表达

目的:通过研究肝纤维化大鼠原代肝星状细胞锌指结构9(ZF9)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达及其动态变化,初步探讨CTGF、ZF9在肝星状细胞活化中的作用。方法:32只雄性SD大鼠皮下注射40%植物油CCl4,每周2次,并分别于注射1,4,8周后作大鼠肝原位灌注,分离肝星状细胞,Western blot法检测CTGF蛋白,RT-PCR检测ZF9 mRNA水平。结果:正常大鼠肝星状细胞ZF9基因可见弱表达,注射CCl41周后其表达增强,注射CCl44周后转录明显增强,8周时仍高表达。正常大鼠肝星状细胞CTGF蛋白无明显表达,模型组大鼠皮下注射CCl41周后,蛋白出现少量表达,注射CCl44周后,表达进一步增加,第8周CTGF蛋白表达更强。结论:ZF9、CT-GF基因随着肝损伤的加重,在肝星状细胞中的表达逐渐增加,共同促进肝纤维化的发生。     

培哚普利和氯沙坦抗实验性肝纤维化的研究

目的 探讨血管紧张素转化酶抑制剂(ACE-I)培哚普利和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT-1受体)阻滞剂氯沙坦对实验性肝纤维化的影响。方法 Wistar大鼠60只,随机分为4组,模型组：40％ CCl4油0．25mL／100mg皮下注射,每周2次;培哚普利治疗组：培哚普利2mg／kg灌胃,每日1次。氯沙坦治疗组：氯沙坦50mg／kg灌胃,每日1次。对照组：橄榄油皮下注射。于第4、6周取材。光镜下动态观察组织学改变;RT-PCR检测AT-1受体的表达;免疫蛋白质印迹检测AT-1受体、转化生长因子β1(TGF-β1)和血小板衍生生长因-BB(PDGF-BB)蛋白的表达;明胶酶法测定金属蛋白酶-2(MMP-2)的活性;放免检测血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)的含量。结果 培哚普利组和氯沙坦组肝纤维化程度和血清HA、LN含量低于模型组;培哚普利组和氯沙坦组AT-1受体mRNA和蛋白质表达水平、TGF-β1和PDGF-BB蛋白质的表达低于模型组;模型组MMP-2活性高于培哚普利组和氯沙坦组。结论 培哚普利和氯沙坦对实验性大鼠肝纤维化具有抑制作用。     

姜黄素对实验性肝纤维化大鼠结缔组织生长因子表达的影响

目的观察中药姜黄素抗四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。方法将50只Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、中药治疗1组及2组,于造模第1周及第4周开始用姜黄素治疗。免疫组织化学技术检测结缔组织生长因子(CTGF)在肝内表达及其在细胞中的定位含量。结果经中药姜黄素治疗后肝纤维化大鼠肝组织内CTGF表达降低,CTGF的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞质。结论中药姜黄素能有效地减轻CCl4诱导肝纤维化大鼠的损伤及纤维化程度,其机制可能是抑制肝内CTGF表达。     

实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2和组织型金属蛋白酶抑制剂-1mRNA表达及姜黄素的作用

目的探讨大鼠肝纤维化过程中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、组织型金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）mRNA表达及姜黄素汤对其的影响。方法复制大鼠四氯化碳（CCl4）肝纤维化模型,分别以高、中、低剂量姜黄素处理,检测血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、三型前胶原（PCⅢ）和四型胶原（IVC）水平,检测肝组织纤维化程度和MMP-2及其抑制因子TIMP-1mRNA表达。结果CCl4成功诱导肝纤维化大鼠模型,姜黄素治疗能够降低血清肝纤维化指标及肝组织纤维化程度,姜黄素可以抑制CCl4诱导的MMP-2和TIMP-1mRNA表达,并能恢复MMP-2／TIMP-1的动态平衡。结论姜黄素可以通过减少MMP-2及其TIMP-1表达抑制肝纤维化。     

磷酸化肌球蛋白轻链在大鼠非酒精性脂肪性肝纤维化中的表达

目的探讨运用高脂饮食联合小剂量四氯化碳(CCl4)复制大鼠肝纤维化模型的特点,以及磷酸化肌球蛋白轻链[P-MLC(Thr18/Ser19)]在该纤维化模型中的作用。方法 70只SD大鼠随机分为正常对照组(N)、CCl4组(M1)和高脂饮食联合小剂量CCl4组(M2)。N组皮下注射花生油3 ml/kg,2次/周;M1组采用400 ml/L CCl4花生油混合液,3 ml/kg,2次/周皮下注射;M2组采用高脂饮食联合小剂量CCl4造模,其CCl4用量2 ml/kg,浓度和频次同M1组。造模后8周末、10周末分批处死,检测肝功能、血脂、光镜观察大鼠肝脏脂肪变性及肝纤维化程度。免疫组化法检测肝脏P-MLC的表达。结果与N组比较,8周和10周末,M1组血浆球蛋白(GLO)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,P-MLC的表达及肝脂肪变性,纤维化程度均升高,但白球比(A/G)下降。与M1组比较,8周末,M2组ALT、AST下降,但脂肪变性增强;10周末,M2组白蛋白(ALB)、A/G下降,而ALT、AST上升明显;8周和10周末M2组P-MLC的表达及肝纤维化程度均强于M1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高脂饮食联合小剂量CCl4皮下注射复制大鼠肝纤维化模型,具有造模时间短,成功率高的优点。P-MLC的表达随着肝纤维化的进展而增加,P-MLC在非酒精性脂肪性肝纤维化中起着一定的作用。     

外源性硫化氢对大鼠肝纤维化的影响

目的探讨外源性硫化氢对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化的预防作用。方法将24只Wistar雄性大鼠随机分为3组,每组8只,即正常对照组、模型组、硫化氢(H2S)预防组。H2S预防组除腹腔注射40%CCl4外,还给予NaHS腹腔注射,1次/d,至第8周,所有大鼠均被处死,收集大鼠血液,检测肝纤维化指标;取肝组织检测脂质过氧化指标及观察肝脏病理变化;应用RT-PCR和Western blot方法检测肝组织NF-κB的表达。结果外源性H2S能降低血清HA、LN、PCⅢ及肝组织MDA含量(P<0.01或P<0.05),增加肝组织SOD、GSH-Px活性(P<0.01),减轻肝纤维化程度(P<0.05),而且能使NF-κB表达明显减少。结论外源性硫化氢对CCl4诱导的大鼠肝纤维化具有保护作用,其机制可能与硫化氢抑制NF-κB表达有关。     

一贯煎对CCl4诱导肝纤维化大鼠肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响

目的:研究一贯煎对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响。方法:用50%CCl4橄榄油溶液(1 ml/kg)大鼠腹腔注射造模,每周2次,共9w。于造模3w和6w末,随机抽取正常及模型大鼠处死作动态观察。从第7w始模型大鼠随机分为模型对照组和药物干预组,药物干预组给予一贯煎灌胃,共计3w。9w末检测肝组织Fas、Bax、Bcl-xL、细胞色素(Cyt)C、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡情况。结果:①与正常组大鼠比较,3w、6w及9w时模型大鼠肝组织Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达逐渐升高(P<0.05,P<0.01)。与9w模型组比较,一贯煎组Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达显著降低(P<0.01),而Cyt C和Bcl-xl蛋白表达在各组之间无显著差异(P>0.05)。②与正常组比较,造模3w时肝组织Caspase-3蛋白表达达到高峰(P<0.01),肝细胞凋亡数量亦达到高峰;6w、9w模型组大鼠Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡较3w有降低的趋势。与9w模型组大鼠比较,一贯煎组大鼠Caspase-3蛋白表达显著降低,肝细胞凋亡显著减少。结论:一贯煎抑制CCl4诱导大鼠肝纤维化肝细胞凋亡的作用机制可能与干预Fas和内质网凋亡通路有关。     

维生素D联合葛根素对四氯化碳致大鼠肝纤维化的作用及机制

目的 探究维生素D联合葛根素对肝纤维化的保护作用及机制.方法 将大鼠分为正常对照组(C组)、四氯化碳组(CCl4组)及CCl4外加维生素D组(V组)、葛根素组(P组)及维生素D联合葛根素组(V+P组)治疗组,8周后处死,检测透明质酸(HA);测量羟脯氨酸(Hyp);制作肝脏石蜡切片并行天狼星红染色检查;反转录PCR检测肝组织中胶原蛋白(Collagen)I、ⅢmRNA水平;Western blot检测肝脏NF-κB和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平.结果 CCl4组出现明显肝脏纤维化,V组、P组及V+P组均明显改善了纤维化程度,降低了血中HA水平及肝脏中的Hyp水平,肝脏Collagen Ⅰ、ⅢmRNA及NF-κB和TNF-α蛋白水平明显降低.其中V+P组肝纤维化程度改善最为明显(P＜0.05).结论 维生素D联合葛根素可以保护CCl4引起的大鼠肝脏纤维化,其机制可能与降低肝脏星状细胞活化、减少胶原纤维分泌有关.