联合转染p21基因及反义C-Fos核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

①目的　探讨联合转染p2 1基因及反义C Fos核酸对自体移植静脉内膜增生的影响 ,探索一种理想的预防血管再狭窄的基因疗法。②方法　选用 2 0只新西兰家兔 ,实验组 10只 ,对照组 10只 ,均行自体颈静脉、颈总动脉移植手术 ,实验组行腺病毒介导的p2 1cDNA溶液浸泡和反义C Fos寡聚核酸凝胶涂布 ;对照组仅行空载腺病毒溶液浸泡和凝胶涂布。术后 2周取出移植血管 ,分别检测移植血管内膜厚度、内膜平滑肌细胞数 (VSMC)及内膜平滑肌细胞增殖细胞抗原 (PCNA)阳性表达情况。③结果　实验组移植血管内膜厚度、管腔狭窄度、VSMC数及PCNA阳性表达情况较对照组均有明显差异 (t=2 8.30～ 38.5 2 ,P <0 .0 1)。④结论　联合转染p2 1基因及反义C Fos核酸可有效地抑制移植静脉内膜的增生 ,是一种有效防治移植静脉再狭窄的基因疗法。     

反义c-myb寡核苷酸对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的研究反义c-myb寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxy-nucleotides,ODN)对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响.方法移植静脉外周涂加有反义c-mybODN的F127凝胶,于术后1周及2周测量平均厚度、观察血管内膜内c-myb蛋白表达情况.结果手术后1周和2周,移植静脉内膜的平均厚度、内膜中c-myb蛋白的表达在反义c-mybODN组均减少,并存在量效关系(P<0.01).而只用F127胶组及正义ODN组均无抑制作用.结论反义c-mybODN对移植静脉内膜增生有抑制作用,并存在量效关系.此作用可能是通过抑制血管内膜内细胞c-myb蛋白的表达来实现的.     

卡托普利对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的观察卡托普利(captopril,CAP)对移植静脉内膜增生的影响,探讨其作用机理.方法建立大鼠颈总静脉移植于颈总动脉模型.分为CAP组及对照组各10只.CAP组于术前7d开始用CAP灌胃(100mg*kg-1*d-1),对照组用等容量生理盐水灌胃.二组均灌胃到术后2周.采用HE、弹力纤维VG染色,利用计算机图像分析仪计算内膜面积/中膜面积比率(I/M)来表示内膜增生程度;测定给药前、给药后7d、给药2周时动脉血清NO含量.结果CAP组I/M为(9.73±0.67)%,对照组为(19.01±0.70)%,实验组显著低于对照组(P<0.01).给药7d即可引起动脉血清中NO升高,2周时升高更加明显.结论卡托普利通过提高大鼠动脉血中NO含量抑制移植静脉内膜增生.     

自体血管移植后内膜增生与eNOS mRNA表达关系的实验研究

目的探讨自体血管移植后内膜增生的机制以及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和内膜增生的关系。方法建立自体动脉静脉血管搭桥模型,分成静脉组、游离动脉组和非游离动脉组,分别于移植后1-10周切取移植段血管,进行组织形态学检查观察内膜增生情况,以及运用原位杂交分子生物学方法检测血管壁eNOS mRNA的表达。结果静脉组内膜增生最为明显,而非游离动脉组无明显内膜增生。同一时间点静脉组eNOS mRNA表达信号明显低于游离动脉组（6周内）（P〈0.01）,而非游离动脉组eNOS mRNA表达信号与正常血管无差别。静脉组和游离动脉组血管壁eNOS mRNA表达与血管搭桥后内膜增生显著相关。结论静脉桥eNOS mRNA表达比动脉桥弱是静脉桥内膜增生明显的重要机制。     

eNOS基因转移对山羊移植血管内膜增生的抑制作用

目的探讨eNOS基因转移防治移植静脉血管桥再狭窄的可行性.方法构建带有eNOS基因的复制缺陷型重组腺病毒载体(AdCMVeNOS)和腺病毒空载体(AdCMV).取山羊颈静脉作血管桥,在体外转染AdCMVeNOS(实验组)和AdCMV(对照组),然后旁路移植到自体颈动脉上.术后30d免疫组化染色,测定静脉桥3H-TDR的掺入量和静脉桥内膜厚度及管腔狭窄面积百分比,观察eNOS基因在静脉桥中的功能表达和静脉桥新生内膜的增生情况.结果转染后30d,实验组静脉桥中外源性eNOS仍有功能表达;静脉桥3H-TDR掺入置与对照组相比明显减少(P＜0.01);静脉桥平均内膜增生厚度和管腔狭窄面积百分比明显低于对照组(P＜0.01).结论eNOs基因转移可以有效抑制移植血管新生内膜的增生,对预防移植血管的狭窄有一定作用.     

卡托普利对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

自体静脉移植被广泛应用于治疗动脉闭塞性疾病 ,但血管内膜增生及粥样硬化导致的再狭窄严重影响了远期疗效。已有资料[1,2 ] 证明 ,平滑肌细胞 (ＳＭＣ)过度增殖与移行是导致内膜增生的主要因素。而血管紧张素转换酶抑制剂 (Ａ ＣＥＩ)对血管ＳＭＣ增殖有抑制作用[3 ] 。我们通过建立大鼠自体静脉移植模型 ,应用卡托普利 (ｃａｐｔｏｐｒｉｌ)观察其对内膜增殖的影响 ,现报告如下。1　材料与方法1.1　动物模型的建立　取ｗｉｓｔａｒ大鼠 (中国医科大学实验动物中心提供 ) 30只 ,体重 35 0～ 4 0 0ｇ ,随机分成 6组 ,每组 5只。 3组为观察组…     

反义mTOR基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响

目的:观察反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型,随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组转染纳米粒子包载的反义mTOR基因,空载体组转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。分别于术后3、7、14、28d取材,常规HE、弹力纤维VG染色,RT-PCR、免疫组织化学染色、Western blot检测mTOR基因的mRNA及蛋白的变化,TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果:转基因组内膜中mTOR蛋白产物表达较其他组明显减少(P<0.05);转基因组内膜增生程度在术后7、14、28d较其他组明显减少(P<0.01);转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:反义mTOR基因的表达能够有效抑制自体移植静脉内膜的增生,促进VSMC的凋亡。     

自体移植静脉内膜增生与内皮细胞vWf抗原表达

血管移植术后除内皮细胞外，中膜和外膜均可合成释放前列环素（ＰＧＩ２），这给特异研究内皮细胞功能带来一定的局限性。自８０年代以来，人们发现正常血管内皮细胞能合成Ⅷ因子，后被称之为ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄｆａｃｔｏｒ（ｖＷｆ）。迄今为止，有研究认为ｖＷｆ...     

超声联合反义c-myc寡核苷酸对移植静脉内膜增生的影响

目的 观察超声辐照联合局部应用反义c-myc寡核苷酸对移植静脉内膜增生的影响,以期寻找防治内膜增生的新方法.方法 将24只兔随机分为4组,对照组、超声辐照组、反义核苷酸组、超声辐照加反义核苷酸组,每组6只,建立兔自体颈内静脉移植替代颈总动脉模型.超声辐照组术后当天至第7天使用超声(2.190 W/cm2,0.8 MH...     

转染人诱导型一氧化氮合酶基因对鼠颈动脉新生内膜增生的抑制作用

目的 研究腺病毒介导的人诱导型NO合酶基因经内膜转染对球囊损伤后鼠颈动脉新生内膜的抑制作用及对血一氧化氮(NO)浓度的影响。方法 建立鼠颈动脉球囊损伤模型，将LacZ重组腺病毒(AdLacZ)和人诱导型一氧化氮合酶基因重组腺病毒(Adinos)在体内分别转染损伤动脉节段，以HE染色、计算机图像处理方法观察转染动脉节段新生内膜增生情况；用硝酸还原酶法测定动脉血中NO浓度。结果 与AdLacZ转染组及未转染组比较，Adinos基因转染组鼠颈动脉血中NO浓度在转染后7天和14天都显著提高；转染4周后未转染组、AdLacZ转染组、Adinos基因转染组的新生内膜面积分别为0．78mm^2、0．75mm^2及0．17mm^2；管腔狭窄率分别为74．9％、79．5％及24。6％。结论 转染Adinos基因可显著提高NO浓度并显著抑制损伤动脉节段新生内膜增生及管腔狭窄。     

左旋精氨酸对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的　观察左旋精氨酸 (L Arg)对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响 ,探讨其作用机制。方法　建立大鼠自体静脉移植模型。分L Arg组和对照组。L Arg组于术前 7天开始用L Arg灌胃 (每天 1.0g kg)直至取材 ;对照组用等量生理盐水灌胃 ,于术后 1、2、4、6周及 8周取材。观测新生内膜与中膜面积比 (I M)、细胞间黏附分子 (ICAM 1)及细胞周期素A(CyclinA)的表达。结果　术后 2、4、6周及 8周I ML Arg组均显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,术后不同时相ICAM 1及CyclinA表达水平较术前正常静脉均有明显增加 ,L Arg组ICAM 1及CyclinA蛋白阳性细胞百分比显著低于对照组 (P <0 .0 1)。结论　L Arg可以抑制移植静脉内膜增生病变 ,其机制与增加一氧化氮释放 ,减少单核细胞与内皮细胞的黏附 ,抑制血管平滑肌细胞增殖有关。     

反义寡核苷酸防治血管吻合口内膜增生性再狭窄的机制探讨

目的　探讨医用生物蛋白胶携载c myc反义寡核苷酸防治血管吻合口内膜增生性再狭窄的机制。方法　将 8只新西兰大白兔颈外静脉间置于同侧颈总动脉后 ,随机分成实验组及对照组。对照组静脉间置后即缝合伤口 ;实验组将 30 0 μg反义c myc涂于2 .5ml医用生物蛋白胶中 ,并均匀涂于血管吻合口外周。术后 7d取材 ,提取组织总RNA ,进行RT PCR和NorthernBlot分析 ,图像扫描后进行计算机分析。结果　RT PCR显示实验组的c myc扩增产物量明显低于对照组 ,产物半定量分析提示两者差异有显著性 (P <0 .0 1) ;NorthernBlot图像扫描分析显示实验组的积分密度值 (2 .2 5± 0 .16 )明显低于对照组 (4.6 3± 0 .4 8) (P <0 .0 5 )。结论　反义c myc可通过碱基互补与其相应基因结合 ,封闭该基因的表达 ,使其促细胞增殖作用减弱 ,最终达到防治血管吻合口内膜增生性再狭窄的目的     

可降解外套管抑制自体移植静脉内膜增生的研究

目的:研究可降解的外套管束缚自体移植静脉对减轻桥静脉内膜、中层增厚的作用,探讨其防止或延缓桥静脉再狭窄的机制。方法:建立犬自体股静脉至股动脉的端-端静脉移植模型,其中一侧桥静脉外加聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)做成的圆柱形外套管(外套管组),对侧单纯静脉移植作为对照组。超声多普勒观察在体移植血管的通畅性。术后2、4、6、8、24周再次手术取桥静脉。光镜观察移植静脉中段内膜、中层厚度,胶原、弹力纤维变化;透射电镜观察静脉壁基底膜、细胞排列、细胞增殖、凋亡,细胞骨架结构,细胞外基质(ECM)变化等;免疫组化观察静脉壁细胞增殖、凋亡及分布。结果:术后40条静脉均通畅,吻合口无狭窄。对照组术后2周见内膜、中层增厚;随时间延长,增厚更加明显。外套管组术后2周内膜、中层稍增厚;4~24周持续增厚,但各时间点均明显小于对照组(P<0.05,P<0.01);对照组术后2周见中层平滑肌、外膜弹力纤维断裂严重,而外套管组无明显断裂。新生静脉内膜由平滑肌细胞(SMCs)和大量ECM构成,中层主要为SMCs和ECM;术后2周,静脉壁细胞增殖和凋亡率都较高,主要分布在内膜和中层,外套管组明显低于对照组(P<0.01),4周以后两者显著下降,凋亡率高于增殖率(P<0.05)。结论:可降解外套管在术后早期可保持静脉结构的完整性,减轻管壁结构破     

不同浓度的纤维蛋白原对移植静脉内膜增生的作用

目的：研究不同浓度的纤维蛋白原（fibrinogen,FG）对移植静脉内膜增生（intimal hyperplasia,IH )的作用。方法：建立移植静脉IH模型,在9例血管移植术中取正常人大隐静脉(human saphenous vein,HSV）行体外培养,培养液中施加不同浓度的FG。培养14d后,应用组织学、5′－BrdU免疫组化染色,计算机图像分析,测量内膜与中膜厚度、面积比,计数5′－BrdU阳性细胞比,观察不同浓度的FG对IH的影响。结果：（1）FG浓度在2.5mg/ml时：培养静脉片的内膜与中膜厚度比为0.387;内膜与中膜面积比为0.396;5′－BrdU阳性细胞比为0.544。（2）FG浓度在5.0mg/ml时：其内膜与中膜厚度比为0.421;内膜与中膜面积比为0.382;5′－BrdU阳性细胞比为0.501。（3）二者与对照组（不含FG）的内膜与中膜厚度比0.215;内膜与中膜面积比0.229;5′－BrdU阳性细胞比0.363,比较差异均在显著性（P＜0.05）。2.5mg/ml和5.0mg/ml两组之间相比差异无显著性（P＞0.05）。（4）FG浓度在0.5mg/ml时,上述项检测指标与对照组相比,差异无显著性9P＞0.05）。结论：高浓度的FG对IH有直接促进作用,提示血管移植术后局部高浓度FG可导致再狭窄和闭塞;低浓度的FG对IH无明显影响,提示临床上降 治疗对再狭窄可能有一定的防治作用。     

曲匹地尔对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的 观察不同剂量曲匹地尔对大鼠自体移植静脉内膜增生的抑制作用,探讨其作用机制. 方法 以大鼠自体颈外静脉-颈动脉移植为研究模型,SD大鼠120只,根据静脉移植后给药情况随机分为三组:A组为空白对照组,B组为曲匹地尔低剂量组,C组为曲匹地尔高剂量组.每组大鼠分别于术前、术后第1天测血清中TxB2及6-K-PGF1含量;并分别于术后2.4.6.8周取标本行病理组织学检查;应用免疫组化检测术后2.4.6.8周PDGF-A(血小板源性生长因子-A)表达情况. 结果 C组移植静脉内膜厚度、中膜厚度及管腔狭窄百分比均明显低于A组(P<0.05)及B组(P<0.05).C组血清中TxB2含量明显低于A组(P<0.05)及B组(P<0.05),而6-K-PGF1含量明显高于A组(P<0.05)及B组(P<0.05),TxB2/6-K-PGF1比值明显低于A组(P<0.05)及B组(P<0.05).C组术后第2.4.6.8周PDGF- A的表达明显低于A组(P<0.05)及曲B组(P<0.05).结论 曲匹地尔可降低移植静脉内膜的增厚程度,抑制血管平滑肌细胞向内膜迁徙和中膜血管平滑肌细胞增殖, 减轻细胞外基质沉积和炎症细胞浸润.其机制可能是曲匹地尔阻抑TxA2的合成和活性、促进PGI2的生成,并可以高度选择性抑制PDGF,从而抑制血管平滑肌细胞增殖及合成分泌细胞外基质,减少细胞间黏附,降低相关炎症因子表达.     

腺病毒载体携外源基因转染人培养静脉的实验研究

目的 :探讨经腺病毒载体介导的标记基因转染人培养大隐静脉后 ,标记基因表达的效率、转染靶细胞表达时相。方法 :从临床手术患者取得大隐静脉后 ,浸于含AdCMV/LacZ或AdCMV的病毒液中 (5× 10 9pfu) ,孵育 1h ,将静脉剪成静脉片 ,分别培养 2 ,7,14d。对转基因静脉片进行组织学检查。结果 :腺病毒载体可有效地将标记基因 (LacZ基因 )转入培养大隐静脉。转染后 2d内皮细胞和外膜细胞即有表达 ,β 半乳糖苷酶组织化学染色可见胞核蓝染阳性细胞 ,7d时表达最高 ,持续表达到第 14d。对照大隐静脉无β 半乳糖苷酶表达。 结论 :腺病毒载体能高效转染人大隐静脉 ,其靶细胞以内皮细胞为主 ,外源性基因的表达至少维持 2周左右     

联合转染p21基因及反义c-fos核酸对移植静脉血管平滑肌细胞增殖的影响

①目的观察联合转染p^21基因及反义c—fos核酸对自体静脉移植后移植血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响，探讨预防移植血管再狭窄的基因疗法。②方法选择20只新西兰家兔，随机分为实验组和对照组，每组各10只。用显微外科技术建立自体颈静脉一颈总动脉移植模型；实验组移植静脉进行p^21基因和反义c-fos核酸转染，而对照组未进行转染。术后2周取出移植血管，用电子显微镜及计算机图像分析仪观察血管中段内膜厚度、管腔狭窄度、平滑肌细胞增殖指数，用免疫组织化学方法对移植血管c—fos、c—myc、移植血管VSMC的增殖细胞核抗原（PCNA）阳性表达进行检测。③结果实验组血管中段内膜厚度、管腔狭窄度、平滑肌细胞增殖指数及c-fos、c—myc、PCNA阳性表达率均明显低于对照组（t=8．19～25．19，t′=6．14、7．36，P〈0．01）。④结论移植静脉联合转染p^21基因及c-fos反义核苷酸可有效地抑制移植血管VSMC增殖。     

反义c-myc寡脱氧核苷酸对大鼠腹主动脉损伤后内膜增生的影响

目的观察大鼠腹主动脉损伤后内膜增生的影响,为采用反义ｃｍｙｃ战略防治再狭窄的早期临床试验奠定基础。方法将反义ｃｍｙｃ反义寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）通过ｐｌｕｒｏｎｉｃｇｅｌ缓释系统和Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染导入系统,将其作用于大鼠腹主动脉损伤后的血管外膜,饲养三周后,处死动物,对所取的血管节段进行组织切片和弹力纤维染色,在显微镜下进行形态观察和采用图像分析系统进行图像分析,计算出内膜／中膜（Ｉ／Ｍ）面积之比和Ｉ／Ｍ厚度之比,并进行统计学分析。结果通过形态观察和Ｉ／Ｍ面积和Ｉ／Ｍ厚度之比,发现反义ｃｍｙｃＯＤＮ明显抑制了内膜增生,而且随着反义ｃｍｙｃＯＤＮ剂量的增加,其对内膜增生的抑制作用更加明显,而正义ｃｍｙｃＯＤＮ和错配ｃｍｙｃＯＤＮ与对照组相比,对内膜增生无影响。结论反义ｃｍｙｃＯＤＮ以剂量依赖性和序列特异性方式抑制了新生内膜的形成。为采用反义ｃｍｙｃ途径防治再狭窄的早期临床试验奠定了基础     

成纤维细胞生长因子基因表达及对大鼠自体移植静脉内膜增厚的影响

了解自体静脉移植后平滑肌细胞（ＳＭＣ）过度增殖造成内膜增厚的原因。方法以８０只大鼠建立自体静脉移植动物模型，分别于移植早期（２，６，２４小时），移植中期（１，２，４周），利用组织切片原位杂交及反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达的动态变化，以及与ＳＭＣ增殖移行及内膜增厚间关系。结果自体静脉移植后ｂＦＧＦ基因表达水平较移植前不断下降，术后１周达最低水平（Ｐ＜０．０５），２周后重新回升。结论ｂＦＧＦ由损伤及濒死的ＳＭＣ释放，其主要生物学作用是通过自分泌及旁分泌促进ＳＭＣ大量增殖，同时也可加速移植静脉内皮重新再生     

PLGA纳米载体介导的端粒酶hTERT反义核酸对裸鼠肝癌移植瘤的影响

目的通过以PLGA纳米粒作为端粒酶hTERT反义核酸的载体，促进反义核酸对肝癌瘸组织的抑制。方法以HepG-2肝癌细胞和裸鼠建立肝癌移植瘤实验模型；观测瘸重和成瘤率；流式细胞仪检侧肿瘤细胞凋亡及细胞周期的特点。结果与对照组相比，治疗组肿瘤细胞凋亡数明显增加，细胞增殖受到抑制，肿瘤生长缓慢，出瘤时间推迟。结论以PLGA纳米粒作为端粒酶反义核酸的栽体，能显著延缓裸鼠肝癌移植瘤的发展，产生明显的疗效。