氧化修饰的低密度和极低密度脂蛋白对巨噬细胞单核趋化蛋白表达的影响

探讨氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）是否能诱导巨噬细胞表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ和蛋白，以阐明二者在动脉粥样硬化发生中的作用。方法在巨噬细胞的培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）、ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ，３７℃下温育２４小时，收集巨噬细胞的条件培养基，同时用异硫氰酸胍法提取巨噬细胞总ＲＮＡ。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析的方法检测巨噬细胞ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达，用夹心ＥＬＩＳＡ检测其条件培养基中ＭＣＰ－１蛋白的含量。用微孔滤膜法进行单核细胞的趋化试验。结果当巨噬细胞分别暴露于ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ２４小时后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白的表达明显增加，同时单核细胞迁移距离的明显增加。而当巨噬细胞分别暴露于ＬＤＬ和ＶＬＤＬ２４小时，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白的表达只有轻微的增加，单核细胞迁移距离亦无明显的增加。结论巨噬细胞能表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白，ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ能诱导该细胞更强地表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白     

氧化修饰的低密度和极低密度脂蛋白对巨噬细胞单核趋化蛋白表…

探讨氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）是否能诱导巨噬细胞表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ和蛋白，以瘅二者在动脉粥样硬化发生中的作用，方法在巨噬细胞培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ，３７℃下温育２４小时，收集巨噬细胞的条件培养基，同时用异硫氰酸胍法提取巨噬细胞总ＲＮ     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋…

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及氧化修饰极低密度脂蛋白对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。     

天然和氧化修饰型脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞形态的影响

在建立人主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）体外培养方法的基础上，观察了各种天然和氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣ形态以及表型的影响。在氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ），氧化修饰高密度脂蛋白（Ｏｘ－ＨＤＬ）和氧化修饰极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）的作用下，ＳＭＣ形态发生以下变化：胞体变大，由梭形变为不规则多边形，突起细而长，而且“谷”、“峰”样生长方式也发生改变；ＬＤＬ和ｖＬＤＬ对ＳＭＣ的形态亦有影响，但不如氧化修饰脂蛋白明显；ＨＤＬ则无影响。电镜下观察，在ＯＸ－ＬＤＬ的诱导下，ＳＭＣ胞浆中的肌丝较对照组明显减少，而高氏器，内质网和线粒体则明显增多。上述结果说明，ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、ＯＸ－ＬＤＬ、ＯＸ－ＶＬＤＬ和ＯＸ－ＨＤＬ的致动脉粥样硬化作用可能与刺激ＳＭＣ表型由“收缩”型向“合成”型转化有关。     

天然及氧化型低密度和检低密度脂蛋白诱导培养的内皮细胞 …

为探讨天然及氧化修饰脂蛋白对培养的内皮细胞ＭＩＰ－１α及ＶＤＭ－１ｍＲＮＡ表达的作用，取正常人新鲜血液，用超速梯度离心法分离出ＬＤＬ和ＶＬＤＬ后，加Ｃｕ＾２＋使之氧化，成为ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ。培养人脐静脉内皮细胞（ＥＣ），待其汇合后分别加放ＬＤＬ、ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、ＯＸ－ＶＬＤＬ，使其终浓度为２５ｕｇ／ｍｌ，对照组不加脂蛋白。培养２４ｈ后，收集ＥＣ，用异硫氰酸胍法提取其总ＲＮＡ，用     

内皮素A受体在oxLDL促血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的：研究氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）对培养血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖中皮素受体Ａ亚型（ＥＴＲＡ）ｍＲＮＡ表达水平的影响。方法：Ｃｕ＾２＋氧化法制备ｏｘＬＤＬ,观察ｏｘＬＤＬ对大鼠主动脉ＶＳＭＣ增殖和ＥＴＲＡｍＲＮＡ表达的影响。将ＶＳＭＣ用非肽类ＥＴＲＡ拮抗剂ＢＭＳ－１８２８７４预处理生,加入１０μｇ／ｍｌ ｏｘＬＤＬ温育２４ｈ。采用非核素ＭＴＳ吸光度法测定细胞增殖,ＲＮＡ印迹法检测ＥＴＲｍ     

白细胞介素1β对兔主动脉平滑肌细胞MCP—1及VCAM—1蛋白及 …

白细胞介素１β（ＩＬ－１β）是一种参与动脉粥样硬化斑块形成的细胞因子。为了研究ＩＬ－１β在动脉粥样硬化斑块形成过程中的作用,采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ观察ＩＬ－１β对培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）单核细胞趋化蛋白（ＭＣＰ－１）和血管细胞粘附分子１（ＶＣＡＭ－１）蛋白分泌及ｍＲＮＡ表达的影响。结果表明,ＩＬ－１β对兔主动脉ＳＭＣ ＭＣＰ－１的蛋白分泌和ｍＲＮＡ     

两步超速离心法快速分离大量血浆极低密度脂蛋白及低密度脂蛋白

本法先使血浆中的脂蛋白快速富集浓缩，再将脂蛋白各组份分离纯化。即具备序列漂浮法分离样品量大的长处，又具有密度梯度法离心时间短的优点。使用ＢＥＣＫＭＡＮＬ８－８０Ｍ型超速离心机，Ｔｙｐｅ７０Ｔｉ转头，分离２８０ｍｌ血浆只需超速离心５ｈ。所得极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及低密度脂蛋白（ＬＤＬ）经琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺电泳（ＰＡＧＥ）及载脂蛋白ＳＤＳ－聚丙烯酰胺电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）鉴定纯度良好。本文为超速离心分离制备大量血浆ＶＬＤＬ、ＬＤＬ提供了一种快速、经济的新方法。     

反义寡核苷酸体外抑制丙型肝炎病毒的研究

研究反义寡核苷酸体外抑制丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的方法。方法以重组丙型肝炎病毒（ｐＣＤ－ＨＣＶ）转染的Ｈ９细胞为对象，通过半定量逆转录聚合酶链反应和ｄｏｔＥＬＩＳＡ检测ＨＣＶｍＲＮＡ和抗原表达的变化，观察与ＨＣＶ结构区（包括ＡＵＧ）互补和同源以及随机的硫代磷酸化寡核苷酸（ＰＳ－ＡＳＯＮ、ＰＳ－ＯＤＮ、ｒＰＳ－ＯＤＮ）对ＨＣＶ的抑制作用。结果ＰＳ－ＡＳＯＮ和ＰＳ－ＯＤＮ可有效地进入靶细胞并在体外与靶基因杂交结合，终浓度为１０μｍｏｌ／Ｌ的ＰＳ－ＯＤＮ、ｒＰＳ－ＯＤＮ对ＨＣＶ均无抑制作用，但ＰＳ－ＡＳＯＮ可明显降低ＨＣＶｍＲＮＡ和抗原表达水平，具有药物浓度和时间依赖效应，脂质体修饰可增强ＰＳ－ＡＳＯＮ的反义抑制作用，磷酸钙修饰却无此作用。结论与ＨＣＶ互补的ＰＳ－ＡＳＯＮ是ＨＣＶ的反义寡核苷酸，在翻译水平上具有反义抑制作用。     

氧化修饰低密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞周期及增殖细胞核抗原的影响

应用流式细胞仪对氧化修饰低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）刺激动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖、细胞周期及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、Ｐ５３、Ｐ２７及ｃ－ｅｒｂＢ蛋白表达的影响进行了观察。结果发现：Ｏｘ－ＬＤＬ和天然低密度脂蛋白（Ｎ－ＬＤＬ）刺激培养人动脉ＳＭＣ细胞增殖时其Ｓ期细胞百分率增加，且Ｏｘ－ＬＤＬ的作用比Ｎ－ＬＤＬ强，表明Ｏｘ－ＬＤＬ和Ｎ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ细胞增殖时与Ｓ期细胞的增加有关；Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖的同时ＰＣＮＡ蛋白阳性率增加，而与Ｐ５３、Ｐ２７和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的表达无关。提示ＰＣＮＡ可能参与了Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ的细胞增殖作用；特异性蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂ＧＦ１０９２０３Ｘ能降低Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖过程中ＰＣＮＡ的阳性率，表明该细胞增殖过程中ＰＣＮＡ表达的抑制可能与ＰＫＣ信号传递通路有关。     

天然及氧化型低密度和极低密度脂蛋白诱导培养的内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1 α和血管细胞粘附分子

为探讨天然及氧化修饰脂蛋白对培养的内皮细胞MIP-1α及VCAM-1mRNA表达的作用，取正常人新鲜血液，用超速梯度离心法分离出LDL和VLDL后，加Cu2+使之氧化，成为OX-LDL和OX-VLDL。培养人脐静脉内皮细胞(EC)，待其汇合后分别加入LDL、OX-LDL、VLDL、OX-VLDL，使其终浓度为25μg／m1，对照组不加脂蛋白。培养24h后，收集EC，用异硫氰酸胍法提取其总RNA，用地高辛标记的MIP-1α和VCAM-1cDNA探针进行斑点杂交。结果显示，培养的EC能表达MIP-1α和VCAM-1mRNA，当其暴露于LDL和VLDL后，其MIP-1α和VCAM-1mRNA表达轻度增加，而当EC暴露于OX-LDL和OX-VLDL后，其MIP-1αmRNA表达水平明显增高，分别为对照组的3．2倍和2．5倍；VCAM-1mRNA的表达分别为对照组的2．6倍和2．17倍。提示脂蛋白，特别是氧化修饰的脂蛋白，可促进EC表达MIP-1α和VCAM-1mRNA，在动脉内膜单核细胞的募集中起重要作用。     

Interleukin-1β,Tumor Necrosis Factor-α and Lipopolysaccharide Induce Expression of Monocyte Chemoattractant Protein-1 in Calf Aortic Smooth Muscle Cells

The focal influx and accumulation of lipoprotein at arterial lesion--prone sites and the recruitment of blood monocytes to those sites are two early key events in atherogenesis. After entering thesubendothelial space of the arterial wall, monocytes undergo activation--differentiation to becomemacrophages which subsequently internallze oxidatively modified lipoproteins through scavenger receptors and become foam cells. Therefore, tostudy the mechanism of the recruitment of bloodmonocytes to the…     

Interleukin-1β, tumor necrosis factor-α and lipopolysaccharide induce expression of monocyte chemoattractant protein-1 in calf aortic smooth muscle cells

Summary To investigate whether interleukin-1β(IL-1β), tumor necrosis factor-α (TNF-α) and lipopolysaccharide (LPS) induce expression of monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) mRNA and protein in calf aortic smooth muscle cells (SMCs), calf aortic SMCs were cultured by a substrate-attached expiant method. The cultured SMCs were used between the third to the fifth passage. After the cells became confluent, the SMCs were exposed to 2 ng/ml IL- 1β, 20 ng/ml TNF-1α and 100 ng/ml LPS respectively, and the total RNA of SMCs which were incubated for 4 h at 37 C were extracted from the cells by using guanidinium isothiocyanate method. The expression of MCP-1 mRNA in SMCs was detected by using dot blotting analysis using a probe of γ-³²P-end-labelled 35-mer oligonucleotide. After a 24-h incubation, the media conditioned by the cultured SMCs were collected. The MCP-1 protein content in the conditioned media was determined by using sandwich ELISA. The results were as follows: Dot blotting analysis showed that the cultured SMCs could express MCP-1 mRNA. After a 4-h exposure to IL-1β, TNF-α and LPS, the MCP-1 mRNA expression in SMCs was increased (3.6-fold, 2.3-fold and 1.6-fold, respectively). ELISA showed that the levels of MCP-1 protein in the conditioned media were also increased (2. 9-fold, 1.7-fold and 1.1-fold, respectively). The results suggest that calf aortic SMCs could express MCP-1 mRNA and protein. IL-1β and TNF-α can induce strong expression of MCP- 1 mRNA and protein, and the former is more effective than the latter. This project was supported by a grant from National Natural Science Foundation of China (No. 39470289).     

Expression of Monocyte Chemoattractant Protein-1 in Monocytes and Effects of Native and Oxidized Very Low Density Lipoproteins

Itiswellknownthattherearetwokindsoffoamcellsderivedfrommonocytemacrophagesandsmoothmusclecellsrespectivelyinatheroscleroticplaques.Thepenetrationandaccumulationofmonocytemacrophagesderivedfoamcellsunderanintactendotheliumisoneofearlylesions,thusinvestigationonmechanismformonocytemigratingintosubendothelialspacesisveryimportant.Previousstudieshaveshownthatendothelialcellsandsmoothmusclecellsincultureconstitutivelyexpressmonocytechemoattractantprotein1[l].Monocytechemoattractantprotein--1(MCP-l…     

Monocyte chemotactic factor produced from cell culture of rabbit aortic smooth muscle]

In the present studies conditioned media from cultured rabbit aortic smooth muscle cells (SMCs) were collected, and the chemotactic activity for rabbit peripheral blood monocytes was investigated by micropore filter assay. The results showed that the conditioned media were significantly chemotactic but not chemokinetic for monocytes. Chemotactic activity was heat stable at 80 degrees C for 30 min, but vanished upon boiling and after incubation with trypsin. It still existed after dialysis. Thus we believe that cultured rabbit aortic SMCs can secrete a protein which is chemotactic for peripheral blood monocytes.     

壳多糖抑制兔主动脉平滑肌细胞增殖机制的探讨

目的：探讨壳多糖抑制平滑肌细胞（SMC）增殖的作用机制。方法：通过随机引物法标记c-myc探针，应用Northern印迹技术，观察壳多糖对小牛血清（NBS）刺激的兔主动脉SMCc-mycmRNA表达的影响。结果：当NBS刺激血管SMC24h后，c-mycmRNA表达较对照组明显增高；当壳多糖与NBS合用时，c-mycmRNA表达较NBS组明显降低。结论：壳多糖有可能通过抑制NBS刺激的血管SMCc-mycmRNA表达而达到抑制血管SMC增殖的作用。     

胎兔动脉导管平滑肌细胞氧敏感性钾通道mRNA的表达

目的:建立胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养方法,并检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)mRNA的表达。方法:采用组织块改良贴壁法(玻片压迫组织块贴壁方法)进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外原代培养,并行免疫组织化学法对培养的细胞进行鉴定,用RT-PCR的方法检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)的表达。结果:经10-14 d培养后,培养皿底及盖玻片上铺满梭状细胞,免疫组织化学法鉴定确认为胎兔动脉导管平滑肌细胞,其细胞膜存在Kv1.5基因表达。结论:植块改良贴壁法可以成功的进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养,且本法简便、可靠,短时间内可以获得大量细胞,从而为动脉导管未闭发病机制的研究奠定了实验基础。同时,动脉导管平滑肌细胞膜上存在氧敏感性钾通道mRNA的表达,从而为从氧敏感性钾通道层面来研究动脉导管未闭的发生机制提供了实验基础。     

Caveolin-1在人类子宫肌瘤组织中的表达研究

目的:检测抑制血管平滑肌细胞增殖的caveolin-1( Cav-1)蛋白在人子宫肌瘤组织(HL)及原代培养细胞中的表达.方法:收集24例子宫肌瘤组织和与之配对的子宫肌组织(HM),进行原代细胞培养;Western Blotting和Real-time PCR的方法,检测Cav-1、Cav-2、Cav-3在HM和HL及原代培养细胞中蛋白及mRNA的表达.结果:Cav-1、Cav-2蛋白和mRNA在HL中表达降低,Cav-3蛋白在两种组织中均未检出;Cav-1蛋白和mRNA在培养的子宫肌瘤平滑肌细胞(HL-SMCs)中表达降低;17-β雌激素(E2)作用24 h后,培养的子宫平滑肌细胞(HM-SMCs)中Cav-1蛋白和mRNA的表达均增加,而HL-SMCs中其表达均降低.结论:Cav-1蛋白在HL及原代培养细胞中低表达,在培养的HL-SMCs中E2可以进一步降低Cav-1的表达.     

丹参素对牛主动脉平滑肌细胞氧化修饰LDL的抑制作用

用牛主动脉平滑肌细胞模型对丹参素的药理作用进行研究，发现其具有抑制细胞氧化修饰ＬＤＬ的作用，与对照组比较，ＬＤＬ中ＭＤＡ含量明显减少，其抗氧化能力与丹参素的量成正相关。提示丹参素可用于动脉粥样硬化的防治。     

早产、足月胎兔动脉导管平滑肌细胞中胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达及意义

目的:研究早产和足月胎兔动脉导管平滑肌细胞胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)mRNA的表达情况。方法:选取日本大耳白胎兔早产组(孕25 d)、足月组(孕30 d)各10只,分离动脉导管平滑肌组织,采用组织块改良贴壁法进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养,半定量逆转录集合酶链(RT-PCR)检测胱硫醚-γ-裂解酶mRNA的表达。结果:经10～15 d培养后,倒置显微镜下观察,动脉导管平滑肌细胞呈梭形或放射状生长,高低起伏形成典型的"峰-谷"样,早产组和足月组CSE mRNA的表达值分别为(29.67±6.7)和(10.35±4.5),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:早产及足月胎兔动脉导管平滑肌细胞均表达CSE mRNA,表达量可能与胎龄有关,提示动脉导管组织可能内源性生成H2S气体,且在宫内低氧环境中H2S可能是维持动脉导管开放状态的一个重要因素。