丹参麦冬煎剂对过氧化氢所致血管内皮细胞凋亡保护机制的研究

目的研究丹参与麦冬的水提浓缩液1部位（MD-1）对过氧化氢H2O2损伤人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC凋亡的保护作用及机制。方at体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,以H2O2行内皮细胞凋亡造模后,再加入不同浓度的MD—1作用24h。用M1rr法检测细胞生长活力,流式细胞仪检测凋亡率,Westem Blot检测抗凋亡Bcl-2蛋白含量变化。结果H2O2造模后,细胞增殖明显受抑,流式细胞检测出明显凋亡峰,Bcl-2的表达量有明显的下降,而加药组的Bcl-2表达量一定程度回升与正常组相比P〈0．01,具有明显的统计学意义。结论丹参与麦冬的丹参与麦冬的水提浓缩液MD-1保护内皮细胞,抗内皮细胞凋亡。     

丹参药物血清对HUVEC黏附分子表达及胞内Ca^2＋的影响

目的探讨丹参药物血清抗血管内皮细胞凋亡的分子机制。方法取人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用脂多糖造成凋亡细胞模型,通过流式细胞仪、激光共聚焦显微镜观察丹参药物血清对ICAM-1表达及胞内Ca^2＋的影响。结果丹参药物血清可明显降低LPS所致的ICAM-1表达上升,并缓解其所致的钙超载。结论丹参抗HUVEC凋亡并有效防治血栓性疾病的机理与其调控黏附分子ICAM-1表达及缓解细胞钙超载有关。      

丹参麦冬配伍乙酸乙酯部位对血管内皮细胞（HUVEC）凋亡的保护机制研究

目的;探讨麦冬丹参配伍对过氧化氢(H₂O₂)引起的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）凋亡具有的保护作用。方法;取HUVEC,用过氧化氢造成凋亡模型,麦冬丹参配伍乙酸乙酯部位（MD4）对损伤细胞进行干预,通过MTT、Hoechst染色观察细胞凋亡,流式细胞仪测定细胞凋亡率及胞内Ca2+来观察过氧化氢对HUVEC的损伤情况及丹参有效成分对细胞的影响,通过Western Blotting法测定药物作用前后细胞内CREB表达量的变化。结果;100 μmol/L H₂O₂24 h对细胞有明显的损伤作用,丹参与麦冬的乙酸乙酯部位（MD4）对损伤细胞有保护作用,并对CREB的表达有显著影响。结论;麦冬丹参配伍有效部位MD4对H₂O₂造成的HUVEC凋亡有保护作用。      

内毒素诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 从内毒素(LPS)所致血管内皮细胞(VEC)凋亡的角度进行了实验研究，为进一步探讨血瘀证实质及药物保护VEC作用机理，建立可靠的细胞凋亡模型。方法 以不同剂量内毒素作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24h，通过荧光显微镜与流式细胞仪观察细胞凋亡程度，并测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果 不同浓度LPS作用HUVEC 24h后，与对照组相比，HUVEC有较典型的细胞凋亡，且LDH显著升高。结论1μg/mL LPS可用于建立HUVEC凋亡模型，对研究方药治疗血瘀证的作用机理奠定了基础。     

大蒜素对人脐静脉细胞抗氧化损伤保护作用

目的：研究大蒜素（Allicin）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的保护作用及其作用机理。方法建立H2O2诱导HUVEC细胞的氧化应激凋亡模型;采用MTT、RT-PCR、Western-blot等方法检测来探究大蒜素对其保护作用与可能作用机制。结果大蒜素能够减少H2O2诱导HUVEC的凋亡;使基因eNOS的表达显著增加;使凋亡相关PARP蛋白切割减弱、前体Caspase-3蛋白表达增加,Bax蛋白表达减弱。结论大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡具有较好的保护作用,对氧化应激状态下的HUVEC细胞起保护作用。     

复方薤白胶囊抗内皮细胞凋亡与信号转导通路的研究

目的 研究复方薤白胶囊提取液对过氧化氢(H2O2)诱导的凋亡内皮细胞的保护作用,及对凋亡相关基因及信号转导通路的影响,来探讨其作用的分子机制.方法 以过氧化氢(H2O2)行人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡造模,分别以不同浓度复方薤白胶囊提取液作用,运用MTT法检测细胞增殖情况、流式细胞检测凋亡率、Western Blot检测抗凋亡基因Bcl-2含量变化、罗丹明123(Rh123)染色检测线粒体膜电位、免疫组织化学检测信号转导通路NF-κB、Caspase-3的表达.结果 复方薤白胶囊组可明显促进HUVEC的增殖,减少内皮细胞凋亡,增加Bcl-2基因、线粒体跨膜电位的表达,下调NF-κB、Caspase-3的表达.结论 复方薤白胶囊可通过多条信号转导路径,促进Bcl-2基因的表达,抗内皮细胞凋亡.     

一氧化氮对血管内皮细胞凋亡的影响

目的：研究一氧化氮（NO）对人血管内皮细胞凋亡的影响。方法：TNF－α刺激培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）后，用流氏细胞术Annexin V方法检测细胞凋亡情况，用分光光度法检测细胞上清液中NO水平，结果：低浓度N抑制TNF－α诱导的内皮细胞凋亡，而高浓度NO能促进内皮细胞凋亡，结论：低浓度NO对HUVEC有抗凋亡作用而高浓度NO则有促凋亡作用。     

高半胱氨酸对血管内皮细胞的损伤作用及中药抗损伤的实验研究

目的：观察高半胱氨酸（Hcy)对血管内皮细胞（EC）的损伤和益肾活血化痰中药抗Hcy损伤作用。方法：培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,分为对照组和损伤组,观察Hcy对EC的影响;另将细胞分为正常组,损伤组和中药组,观察对乳酸脱氢酸（LDH）的影响。结果：Hcy可改变培养的HUVEC的形态并抑制EC的生长,LDH的释放明显增加,中药组LDH的释放明显减少。结论：血清Hcy对血管内皮有毒性损伤作用。益肾活血化痰中药可抗损伤,保护细胞能量代谢。     

加味小陷胸汤对氧化低密度脂蛋白致血管内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨加味小陷胸汤拮抗氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)对血管内皮细胞(ECV304)增殖和凋亡的影响。方法：采用10μg／ml的OX-LDL刺激培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304,诱导细胞凋亡;观察不同浓度小陷胸汤对抗细胞凋亡的作用。结果：10μg／ml的OX-LDL在作用一定时间后可明显抑制内皮细胞增殖并诱导其凋亡,加味小陷胸汤含药血清对该细胞毒性有明显拮抗作用,并显示了效果与药物浓度有关。结论：加味小陷胸汤可通过提高内皮细胞生长活性并抑制其凋亡、保护血管内皮细胞。     

三氧化二砷对肿瘤血管内皮细胞作用的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对肿瘤血管内皮细胞生长和功能的抑制作用及其相关的抗血管形成机制。方法：采用肝癌HepG2细胞上清诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）成为肿瘤血管内皮细胞（tumor-derived endothelial cells,Td-EC）,通过细胞迁徙实验流式细胞术、流式细胞术、血管形成实验检测As2O3对Td-EC细胞生物学特征的影响。结果：As2O3在体外对Td-EC有显著促进凋亡的作用,并能抑制其迁移和血管的形成,较在同样条件下对HUVEC的凋亡、迁移和血管形成作用显著。结论：As2O3在体外可特异地抑制Td-EC生长及功能。     

丹参药物血清对病理条件下VEC血管调节物质和自由基的调控作用

目的探讨丹参药物血清对血管内皮细胞分泌ET、SOD和MDA的影响及其治疗血瘀证的机理。方法经LPS和丹参药物血清作用于人脐静脉内皮细胞后,取上清培养液测定ET、NO、SOD和MDA水平。结果丹参药物血清可缓解LPS所致NO与ET的水平升高,并改善LPS所致SOD的活性降低和MDA的水平升高。结论丹参可以维持NO与ET的动态平衡,去除自由基,维持血管正常生理功能,从而能有效防治血瘀证。      

蜕皮甾酮对TNF所致脐静脉内皮细胞损伤的保护作用的初步观察

目的 观察肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对体外培养的脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）分泌功能及能量代谢的影响,及应用植物药物成分蜕皮甾酮（ＥＤＳ）进行防治的效果。方法 ①ＭＴＴ法对培养内皮细胞琥碧酸脱氢酶活必的影响。②内皮细胞培养上清液ＥＴ、ＮＯ、ＭＤＡ、ＬＤＨ、ＳＯＤ测定。③采用反相高效液相色谱分析法测定内皮细胞ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ及能荷。结果 ＴＮＦ与内皮细胞孵育后低浓度、早期内皮细胞被激活,随着ＴＮＦ     

补心软脉颗粒含药血清对AngⅡ诱导的HUVEC细胞抗氧化作用

目的?观察补心软脉颗粒含药血清对AngⅡ诱导HUVEC细胞所致氧化损伤的相关指标SOD、NADPH、MDA、p40phox、p47phox、p67phox的影响。方法?大鼠被随机分为正常组、缬沙坦组、补心软脉颗粒组,每组10只,灌胃6周,取动脉血制备药物血清。建立10-6mol/L AngⅡ诱导的HUVEC细胞凋亡损伤模型,并予各药物血清干预,采用黄嘌呤氧化酶法检测细胞上清液中总SOD活力,ELISA法检测NADPH氧化酶,TBA法检测MDA含量,Bradford法p40phox、p47phox、p67phox蛋白定量;Western blot法分别检测细胞膜与细胞质p40phox、p47phox、p67phox蛋白表达。结果?AngⅡ诱导HUVEC细胞损伤,模型组SOD活力下降,NADPH、MDA升高,p40phox、p47phox、p67phox向细胞膜转移,出现氧化损伤;补心软脉颗粒组SOD活力上升,MDA、NADPH下降,抑制p40phox、p47phox、p67phox向细胞膜转移,减轻氧化损伤。结论?补心软脉含药血清对AngⅡ诱导体外培养的HUVEC损伤有抑制氧化作用,防止动脉硬化。      

参麦注射液对淋巴管内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨参麦注射液对淋巴管内皮细胞（lymphatic endothelial cells,LECs）增殖和凋亡的影响。方法取健康猪的胸导管内皮细胞进行分离、培养;采用Ⅷ因子、血管内皮生长因子受体3（vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3）抗体联合对LECs进行鉴定;采用甲基噻唑基四唑（methyl thia-zolyl tetrazolium,MTT）染色法检测参麦注射液对LECs的生长抑制作用;采用Hoechst 33258荧光染色法检测LECs凋亡。结果形成了典型的LECs;当浓度为40~160μg/ml时,参麦注射液能明显抑制LECs的增殖,且抑制作用呈现剂量依赖关系;Hoechst 33258荧光染色检测证实,经参麦注射液处理后LECs,可观察到其核周围有凋亡小体。结论参麦注射液能抑制淋巴管生成和诱导LECs凋亡。     

精胺对内皮细胞损伤的作用机制初探

目的观察高浓度外源性精胺(Sp)对传代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的损伤作用,并初步探讨其可能机制。方法采用传代培养的方法,观察较高浓度精胺(5.0 mmol/L)作用2 h时引起HUVEC的损伤,分别给予一定的保护剂维拉帕米(VP)、超氧化物岐化酶(SOD)、维生素E(VE)进行预保护。观察指标:①倒置显微镜下观察HUVEC形态学变化;②透射电镜观察HUVEC超微结构改变;③细胞活力(MTT)测定;④MDA含量测定;⑤SOD活性测定;⑥过氧化氢酶活性(CAT)测定。结果通过检测各组细胞MTT活性,检测细胞培养液中SOD、MDA及CAT活性,以及借助倒置显微镜观察内皮细胞形态和透射电镜下对内皮细胞超微结构的观察,均证实3种保护剂可以明显减轻精胺引起的内皮细胞损伤。加入保护剂的3组细胞,其MTT、SOD、MDA及CAT活性值,与精胺组比较,差异显著(P<0.05),细胞损伤有所减轻。结论高浓度的外源性精胺引起HUVEC损伤,其作用机制可能与细胞内钙超载、氧自由基大量产生导致的细胞膜脂质过氧化有关。     

二酰胺对血管内皮细胞凋亡的作用

目的　观察巯基氧化剂二酰胺 (diamide)对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)凋亡的诱导作用。　方法　(1)光镜及电镜观察细胞形态 ;(2 )流式细胞仪分析细胞周期 ,计算凋亡峰值 ;(3)TUNEL原位检测细胞凋亡。　结果　 (1)二酰胺诱导HUVEC出现细胞凋亡的超微结构改变 ;(2 )二酰胺增加HUVEC细胞周期中凋亡峰值 (百分比 )及TUNEL检测阳性率 ;二者呈明显量效关系 (P <0 0 5 )。　结论　二酰胺可诱导内皮细胞凋亡。     

当归补血微囊促血管新生中JAK2/STAT3通路的作用研究

目的 探讨JAK2/STAT3信号传导通路在当归补血微囊促血管新生中的作用。方法 建立人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）模型,分别采用CCK-8和流式细胞术检测HUVEC细胞活力和细胞凋亡情况;采用Western blot检测各组中p-STAT3、VEGF的表达情况;采用荧光定量PCR,检测各组中VEGF基因和miRNA-21的表达情况。结果 20μg/mL当归补血微囊作用于HUVEC 24h,可有效促进HUVEC的增殖,并上调p-STAT3、VEGF及miRNA-21的表达;AG490能有效抑制当归补血微囊对HUVEC的促增殖作用,并减少p-STAT3、VEGF及miRNA-21的表达。结论 当归补血微囊促进血管生成的作用确实与JAK2/STAT3信号途径有关。      

HCMV对培养HUVEC凋亡的作用

目的 :探讨人巨细胞病毒 (HCMV)在动脉粥样硬化 (AS)发生和发展中的作用及可能的机制。方法和结果 :采用组织培养技术和流式细胞计数仪观察HCMV对离体培养的HUVEC凋亡的影响。实验发现无血清培养和TNF诱导的细胞凋亡率较正常对照组升高 ,而CMV感染组凋亡率明显降低。用流式细胞仪检测发现 ,在DNA直方图上 ,在G1峰左侧可呈现亚二倍体核峰型 (亚G1峰 ,即凋亡峰 )。而正常的细胞经流式细胞仪检测 ,没有亚二倍体细胞群的峰型 ;CMV可以抑制HUVEC的一氧化氮 (NO)的合成 ,并且呈浓度依赖性。结论 :HCMV感染HUVEC后能够抑制HUVEC的细胞凋亡 ,可能的介导因素为被HCMV感染的HUVEC其NO合成减少。     

重组人血管内皮抑素对多发性骨髓瘤血管新生的影响

目的观察重组人血管内皮抑素注射液对人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）和多发性骨髓瘤细胞株KM3增殖、凋亡及共培养体系中血管生成的影响。方法观察不同浓度的内皮抑素对HUVEC和KM3细胞株的增殖抑制作用;检测有效浓度的内皮抑素对HUVEC和KM3细胞株的凋亡作用;建立HUVEC和KM3的隔离共培养和混合共培养体系,检测共培养体系中不同浓度的内皮抑素作用后对于HUVEC血管生成的影响;检测经内皮抑素作用后对混合共培养、隔离共培养上清中VEGF浓度的影响。结果不同浓度的内皮抑素持续作用72 h,对HUVEC具有抑制增殖作用,且在50-200 ng/ml的剂量范围内呈现浓度依赖关系,而对KM3细胞未见明显作用;有效浓度的内皮抑素（100、200 ng/ml）可诱导HUVEC凋亡,而对KM3未见明显作用;共培养体系中,内皮抑素可抑制HUVEC的管状结构形成;经不同浓度内皮抑素作用后,细胞培养上清中VEGF的分泌量减少。结论内皮抑素能抑制HU-VEC的增殖;诱导HUVEC的凋亡;通过血管内皮抑制骨髓瘤细胞的促血管新生作用;抑制VEGF的分泌可能是其作用机制之一。     

温脉通对高脂致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究温脉通对高脂损伤血管内皮细胞的保护作用,以探讨其治疗动脉硬化闭塞症(ASO)的机制。方法用高脂血清造成人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤模型,以温脉通及其温经益气拆方和活血通脉拆方含药血清进行干预。光镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞活性;取细胞上清液,以分光光度计比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)含量,硝酸还原酶法测定NO含量;放射免疫测定法测定内皮素(ET)含量。结果温脉通及其拆方均能使高脂损伤的HUVEC形态趋于正常,活性增强,细胞膜损伤减轻;并能使HUVEC培养上清中NO含量增加而ET含量减少。两拆方单独的作用均比全方弱。结论温脉通对高脂损伤的血管内皮细胞有保护作用,这可能是其治疗ASO的机制之一。温脉通全方对内皮细胞损伤的保护作用比其温经益气拆方和活血通脉拆方强,说明组方具有合理性。