角膜内皮层培养及后板层移植的实验研究

目的探讨体外构建角膜内皮层并进行移植的可能性.方法体外培养的兔角膜内皮细胞种植于羊膜基底膜上,形成单层角膜内皮层,并进行形态学、组织学及超微结构的观察.将构建的角膜内皮层对切除后板层的兔角膜进行移植,同时以无培养内皮细胞的羊膜移植作为对照,术后观察角膜透明度及厚度,对内皮层进行形态学和组织学观察.结果角膜内皮细胞在羊膜上生长呈单层,细胞为多角形,排列紧密,其形态及结构与正常兔角膜内皮组织相似.培养内皮层移植后,角膜维持相对透明及薄度;而对照眼角膜严重水肿、混浊,厚度明显大于实验眼角膜(P<0.01).培养内皮移植后具正常内皮层的结构和功能.结论羊膜是培养角膜内皮细胞移植的良好载体,培养角膜内皮移植有望治疗角膜内皮失偿疾病.     

羊膜移植后碱烧伤兔眼角膜PEDF和VEGF的表达

目的探讨羊膜移植对兔眼碱烧伤角膜色素上皮衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法新西兰白兔角膜碱烧伤模型被建立,左眼行羊膜移植,右眼作为对照。照相法观察兔眼碱烧伤角膜CNV及免疫印迹法检测不同时间点碱烧伤兔眼角膜中PEDF和VEGF的表达水平。结果羊膜移植组与对照组比较:羊膜移植组兔眼角膜碱烧伤后新生血管的生长速度较对照组慢(P<0.05);羊膜移植组兔眼角膜PEDF的表达水平较对照组高,而VEGF的表达水平较对照组低。结论羊膜移植上调PEDF的表达、下调VEGF的表达抑制兔眼角膜碱烧伤后CNV的形成。     

Fuchs角膜内皮营养不良患者的共焦显微镜特征

目的：探讨共焦显微镜下Fuchs角膜内皮营养不良患者角膜各层的活体形态学特征。方法：对16眼Fuchs角膜内皮营养不良患者的中央部角膜进行活体共焦显微镜检查,应用NAVIS软件测量、分析角膜各层组织细胞形态和密度、以及滴状赘疣和角膜神经的直径。结果：①有症状组：9眼的角膜内皮层均见到滴状赘疣,直径20～60μm,内皮细胞密度低;4眼后弹力膜增厚;6眼角膜后基质层有长条形暗区结构;9眼角膜基质反光普遍增强;7眼Bowman膜有局灶性高反光区域;5眼显示正常的角膜神经结构;②无症状组：7眼的角膜内皮层均见到滴状赘疣,数目较有症状组者少,直径15～40μm;内皮细胞密度正常;角膜其余各层未见异常。结论：本研究初步揭示了Fuchs内皮营养不良患者共焦显微镜下的形态学特征;活体共焦显微镜检查有助于Fuchs角膜内皮营养不良患者的诊断,特别适用于角膜水肿、角膜内皮镜无法成像的患者。     

激光共焦显微镜下Fuchs角膜内皮营养不良患者的角膜观察

目的:探讨运用激光共焦显微镜观察Fuchs角膜内皮营养不良患者角膜各层形态。方法:收集2014年12月-2015年8月在我院就诊的Fuchs角膜内皮营养不良患者8例16眼,全部患者行激光共焦显微镜检查,对比双眼上皮、基质及内皮细胞形态图像。结果:8例16眼角膜内皮均可见滴状赘疣;10眼内皮细胞结构不清,7例14眼存在双眼内皮损害程度不一;8眼角膜前部基质层细胞肿胀;6眼角膜观察到上皮基底细胞肿胀。结论:激光共焦显微镜能够清楚观察到Fuchs角膜内皮营养不良患者角膜各层细胞变化,尤其是内皮层细胞改变。特别适用于角膜水肿患者。     

兔角膜缘上皮细胞培养联合羊膜行自体移植的实验研究

目的：用体外培养的角膜缘上皮细胞联合人羊膜的方法，行自体移植治疗角膜缘干细胞完全缺乏的兔眼。方法：制作10只兔右眼于细胞缺乏的模型，取其中7只兔的左眼上方角膜缘取一小块组织进行体外培养，并传代在无上皮细胞的人羊膜上。1个月后，手术切除10只兔受伤眼角膜表面被覆的新生血管膜和结膜上皮，7眼接受了含自体培养上皮细胞的羊膜移植，另3眼仅移植无上皮细胞的羊膜。结果：1周后原代培养的角膜缘上皮细胞融合，传代至无上皮细胞的人羊膜上继续生长2～3周，角膜上皮细胞可牢固的附着于羊膜上。移植了含有角膜上皮细胞的羊膜的兔子，术后早期都形成了角膜上皮化，并明显抑制了新生血管的再生，而接受羊膜移植的兔子，术后又出现明显的新生血管。结论：利用无上皮细胞的羊膜作为载体，培养角膜缘上皮细胞并自体移植可以恢复角膜上皮化、抑制新生血管生长。     

保存人羊膜用于兔眼表面重建的印痕细胞学研究

目的：观察羊膜移植术在角膜缘缺陷兔眼表层重建中的作用,并探讨印痕细胞学检查法随访的价值。　方法：建立兔全角膜缘缺陷的动物模型,实验眼早期应用保存的人羊膜移植于受损区域,对照眼常规保守治疗,观察其角膜新生血管及上皮层愈合情况。上皮层愈合后,采用印痕细胞学检查,定期对角膜区上皮进行表层细胞学检查。　结果：对照眼角膜上皮层愈合较慢,新生血管粗大丰富,上皮细胞层不稳定,含有杯状细胞。羊膜移植的眼表面上皮层愈合快,新生血管细小,上皮层光滑、稳定,周边部在上皮愈合１ 个月后仍含有丰富的杯状细胞。　结论：羊膜移植能促进上皮细胞移行,抑制上皮细胞凋亡,获得稳定的眼表层。羊膜移植后,上皮仍表现为结膜型上皮。印痕细胞学检查简便、无创,可满意地用于随访眼球表面情况     

兔角膜内皮细胞移植治疗角膜内皮损伤

目的 研究兔角膜内皮细胞（CECs）移植的可行性和移植后细胞的形态和功能。方法 体外培养兔CECs并用Brdu标记后接种在Gelatin膜载体上;采用α-氰基丙烯酸脘基酯作为组织黏合剂,将接种有兔CECs的载体与机械去除了内皮细胞的自体兔角膜植片相黏合,原位缝合对21只新西兰白兔的右眼进行CECs移植;另外17只兔的右眼作为对照仅移植没有接种任何细胞的载体膜。术后1、2、4、8、12周观察兔眼角膜移植片的透明情况、眼压和植片厚度,并利用共焦显微镜进行移植细胞的形态观察和计数。观察12周后处死动物,角膜标本分别进行组织切片、免疫组织化学染色和电镜观察。结果 CECs在Gelatin膜载体上生长良好,体外培养3—5d后细胞汇合,细胞密度可以达到约2700个／mm^2。术后2周,所有植片均发生了水肿,并逐渐浑浊。CECs组植片在术后4周左右逐渐水肿减退,开始恢复透明;而对照组角膜植片则持续水肿,逐渐浑浊。术后移植细胞的密度随时间推移逐渐降低,术后12周时,移植细胞的平均密度为（2023±330）个／mm^2。Brdu单克隆抗体免疫组织化学染色显示,植片上的细胞为移植细胞。结论 Gelatin膜作为内皮细胞培养载体并进行内皮细胞移植是一种可行的方法。     

培养角膜上皮和自体角膜缘移植治疗眼表损伤的比较

目的比较培养角膜上皮移植和自体角膜缘移植治疗严重眼表损伤的效果.方法对去除全角膜缘的新西兰大白兔行培养自体角膜上皮和自体角膜缘联合羊膜移植,观察术后角膜形态改变,并进行组织学和免疫细胞化学检测.结果培养角膜上皮移植后兔眼表面平整稳定,角膜中央无新生血管生长,自体角膜缘联合羊膜移植后兔眼表面不同程度结膜上皮化,两者治疗效果有显著性差异.结论培养角膜上皮移植能有效治疗以角膜缘干细胞受损为特征的严重眼表损伤.     

培养角膜上皮和自体角膜缘移植治疗眼表损伤的比较

目的比较培养角膜上皮移植和自体角膜缘移植治疗严重眼表损伤的效果。方法对去除全角膜缘的新西兰大白兔行培养自体角膜上皮和自体角膜缘联合羊膜移植，观察术后角膜形态改变，并进行组织学和免疫细胞化学检测。结果培养角膜上皮移植后兔眼表面平整稳定，角膜中央无新生血管生长，自体角膜缘联合羊膜移植后兔眼表面不同程度结膜上皮化，两者治疗效果有显著性差异。结论培养角膜上皮移植能有效治疗以角膜缘干细胞受损为特征的严重眼表损伤。     

培养兔角膜缘干细胞自体移植治疗眼表碱烧伤研究

目的：探讨培养兔角膜缘干细胞，自体移值治疗眼表碱烧伤的可行性。方法：体外培养兔角膜缘干细胞，传代于去上皮羊膜，自体移植治疗眼表碱烧伤；术后应用裂隙灯观察、免疫组化、透视电镜等方法，与单纯羊膜移植组疗效进行对比。结果：体外培养细胞既有角膜上皮特性，又具有强的增殖潜力。培养细胞移植组术后角膜上皮完整，炎症化、血管化减轻，与单纯羊膜移植组各项指标差异有显著性意义。结论：培养角膜缘干细胞移植术可有效重建眼表。     

兔角膜内皮细胞的原代培养

目的:探讨兔角膜内皮细胞的培养方法.方法:显微分离兔角膜后弹力层-内皮细胞层,采用贴壁法、贴壁消化法及两种消化法培养,观察每种方法细胞生长的特点.结果:4种方法培养的兔角膜内皮细胞均呈单层密集生长,形态为六角形或多边形,具有活体细胞的形态特征.培养周期最短约为1周.结论:将揭取的附有内皮细胞的后弹力层预培养1天后再进行消化培养的方法,可为实验研究提供有效的角膜内皮细胞培养方法.     

Lymphangiogenesis Occurring in Transplanted Corneas

Immunological rejection is the major cause ofcorneal allograft failure .Corneal newblood vessels(hemangiogenesis) and lymphatic vessels (lym-phangiogenesis) are well-known high-risk factorsin corneal transplantation. Although i mmunosup-pressive-agents have been used systematically andlocally ,survival rate of corneal grafts placed intovascularized recipient beds is only 51 %[1].In con-trast to the studies with respect to processes ofblood vessel proliferation,the reports on corneallymphangiog…     

Transplantation of corneal stem cells cultured on amniotic membrane for cornea l burn: experimental and clinical study

目的：探讨离体培养的角膜干细胞增殖分化特性,观察干细胞羊膜移植片治疗角膜缘功能障碍的效果。方法：用克隆形成率（colony-forming efficiency,CFE）、免疫组织化学染色等方法观察培养角膜干细胞的增殖力和分化表达状况。角膜干细胞培养后接种生长于羊膜上进行干细胞羊膜片移植,观察角膜上皮、组织浸润和新生血管情况。结果：原代和传第1代角膜干细胞具有高增殖力,部分表达角质蛋白K3,角膜干细胞在羊膜上能够继续增殖分化为多层细胞结构的角膜上皮细胞层;角膜干细胞移植术后可以在角膜比存活,角膜比移植片紧密贴附,角膜上皮完整,经度基质炎性浸润,浅层新生血管减少,深层新生血管充盈减轻,睑球粘连得到松解。结论：角膜缘干细胞羊膜片移植治疗角膜缘功能障碍能够使患获得进一步进行角膜移植的条件。     

利用膜片钳技术对体外培养的兔角膜内皮细胞膜电位的研究

目的利用膜片钳技术测定体外培养的兔角膜内皮细胞（RCECs）的膜电位。方法运用接膜法联合组织块法获得原代及传代培养的RCECs,利用免疫组织化学方法对其鉴定,采用全细胞膜片钳方法,测定培养RCECs的膜电位。结果原代RCECs的平均膜电位水平为（-20.9±1.7）mV（n=6）,而传二代细胞为（-15.1±1.8）mV（n=6）。2组间差异具有统计学意义。结论利用膜片钳技术成功记录到体外培养的RCECs膜电位且原代RCECs的平均膜电位水平高于传二代RCECs。     

细胞粘附分子在炎症角膜中的表达

目的：研究细胞粘附分子（ｃｅｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓ,ＣＡＭｓ）在炎症角膜中的表达,探讨其在角膜炎症发生机制中的作用。方法：采用冰冻切片免疫组织化学染色方法检测了１８只炎症角膜、３只正常角膜和２只圆锥角膜组织中细胞间粘附分子１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ１,ＩＣＡＭ１）、人类白细胞抗原ＤＲ（ｈｕｍａｎｌｅｕｋｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎＤＲ,ＨＬＡＤＲ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１８、ＣＤ２和ＣＤ２０的表达及变化。结果：正常角膜中,ＩＣＡＭ１主要表达于角膜缘血管内皮细胞,基质细胞、角膜内皮细胞中仅有微弱表达或不表达。炎症角膜中,基质细胞、内皮细胞和血管内皮细胞的ＩＣＡＭ１表达增强,尤其在炎症细胞浸润处最为显著;原不表达ＩＣＡＭ１的上皮细胞亦出现异常表达;ＩＣＡＭ１和ＨＬＡＤＲ常共同表达于同一部位,炎症明显组角膜ＩＣＡＭ１和ＨＬＡＤＲ的表达水平明显高于炎症轻微组;炎症浸润细胞中表达ＬＦＡ１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）的细胞较表达Ｍａｃ１（ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８）的细胞多;浸润淋巴细胞以Ｔ（ＣＤ２）淋巴细胞为主;属非炎症性病变的圆锥角膜中Ｉ     

Morphological Characteristics of the Endothelial Ceils of Corneas of Rabbits Preserved by Desiccation

The endothelial cells of the corneas of rabbits preserved by desiccation for vari-ous duration showed no hexagonal form of normal cells but broad bean-like nuclci afterdouble staining with alizarin red and trypan blue.Scanning electron microscopic examina-tion revealed interdigitation at the intercellular junction together with intercellularvacuoles and cellular edema.Transmission electron microscopic examination showedincomplete nuclear membrane,karyopyknosis,vacuoles and remnant organellae in thecytoplasm.Partial penetrating keratoplasties were done in 37 rabbits(37 eyes)with pre-served corneas.The grafts remained transparent for a minimum of 4 days to a maximumof over 1 year,and 7 grafts remained transparent for more than 30 days.Staining ofthe transparent grafts revealed normal hexagonal endothelial cells in mosaic arrange-ment.We assumed that after transplantation of the preserved cornea the endothelial cellsregained their activities owing to the nutrient effect of the aqueous humor.     

不同浓度牛磺酸对兔角膜内皮细胞的影响

目的 探讨牛磺酸对兔眼角膜内皮细胞的毒副作用。方法 取家兔6只（共12眼）,每只眼制取6片组织片,用组织块培养法培养兔角膜内皮细胞,细胞接种于12孔培养板,分别加入2%、4%、6%、8%、10%的牛磺酸液（同一动物的左右眼加同一浓度牛磺酸溶液）,设立空白对照。倒置显微镜观察角膜内皮细胞的生长情况;在培养的第1、2、4、6、8天,将部分培养细胞用Wright染色后观察细胞形态。结果 空白对照和加入2%、4%、6%牛磺酸溶液培养的角膜内皮细胞,1周后均形成内皮细胞层,细胞形态呈六角形或类圆形。加入8%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第4天时生长不良,细胞胞体小;第8天时培养细胞死亡。加入10%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第2天时出现生长不良,细胞胞体小,部分细胞已死亡。同一动物的左右眼角膜内皮细胞生长速度和细胞形态相似。结论 2%~6%牛磺酸对兔角膜内皮细胞的生长无不良影响,提示该浓度范围的牛磺酸对角膜内皮细胞无毒副作用。