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相似文献
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1.
吕天羽  王康  刘建军  何建凡  戴勇 《广东医学》2006,27(10):1454-1455
目的比较肾脏蛋白质双向电泳凝胶银染色法与考马斯亮蓝G-250染色方法的染色效果。方法利用蛋白质固相pH梯度双向电泳技术分离SD大鼠肾脏组织蛋白,应用银染色和考马斯亮蓝G-250染色两种染色方法,及ImageMaster 2D5.0凝胶分析软件对凝胶进行染色分析。结果银染后的可见蛋白点比考马斯亮蓝染色法多,银染色法与考马斯亮蓝染色法平均匹配率为49.42%。结论银染法比考马斯亮蓝染色法的灵敏度高。  相似文献   

2.
目的:探究 PEG 化学修饰对4种常用蛋白浓度测定方法的影响。方法采用福林-酚试剂法(Lowry 法)、二喹啉甲酸法(BCA 法)、考马斯亮蓝法(Bradford 法)和紫外分光光度法(UV 法)分别测定样品中α-苦瓜素和抗人类免疫缺陷病毒植物蛋白 MAP30经 PEG 修饰前、后的蛋白含量;并用 Lowry 法和 BCA 法对低浓度游离 PEG 修饰前、后的样品蛋白含量进行测定。结果发现考马斯亮蓝不与样品发生颜色反应,PEG 修饰后会使UV 法测定值变大,Lowry 法测定值略有变大,BCA 法基本不受影响;低浓度的游离 PEG 对测定方法无影响,但高浓度的 PEG 会吸附 Folin-酚,形成黄色絮状物。结论PEG 化学修饰对蛋白浓度测定方法影响最小的为 BCA 法, Lowry 法最灵敏,Bradford 法不适用;而 PEG 化学修饰会使 UV 法测定值增大20%~30%,可作为快速测定时的校准参考。  相似文献   

3.
目的观察抗衰I号方对小鼠血清GSH-PX活性及肝匀浆蛋白质含量的影响。方法分别采用DTNB(二硫代二硝基苯甲酸)直接比色法测定D-半乳糖胺致亚急性衰老小鼠血清GSH-PX活性,考马斯亮蓝测定衰老小鼠肝组织中蛋白含量。结果与模型组比较,抗衰I号方各给药组均能不同程度提高GSH-PX活性(P<0.05或P<0.01);明显增加肝匀浆中蛋白含量(P<0.05或P<0.01)。结论抗衰I号能提高血清中GSH-PX活性和肝组织中蛋白质含量,此作用可能与其抗衰老作用机理有关。  相似文献   

4.
目的观察抗衰Ⅰ号方对小鼠血清GSH—PX活性及肝匀浆蛋白质含量的影响。方法分别采用DTNB(二硫代二硝基苯甲酸)直接比色法测定D-半乳糖胺致亚急性衰老小鼠血清GSH—PX活性,考马斯亮蓝测定衰老小鼠肝组织中蛋白含量:结果与模型组比较,抗衰Ⅰ号方各给药组均能不同程度提高GSH—PX活性(P〈0.05或P〈0.01);明显增加肝匀浆中蛋白含量(P〈0.05或P〈0.01)。结论抗衰Ⅰ号能提高血清中GSH—PX活性和肝组织中蛋白质含量,此作用可能与其抗衰老作用机理有关。  相似文献   

5.
目的 寻找精确反映蚯蚓提取物中蛋白质含量的测定方法。方法 采用改良Lowry法和考马斯亮蓝染料结合法(Bradford法)测定蚯蚓提取物蛋白质含量;再使用两法测定标准牛血清白蛋白(BsA)水溶液在碱性蛋白酶水解前与后的蛋白质含量。结果 在测定蚯蚓提取物中蛋白质含量时,改良Lowry法的测定结果明显高于Bradford法。未进行酶解的BSA水溶液,两法测定的蛋白质含量相当;使用改良Lowry法,BSA水溶液酶解前与后的蛋白测定值相近;而使用Bradford法时,测定BSA水溶液酶解后蛋白质含量的测定值较酶解前出现大幅下降。结论 测定多肽含量多的生物样品中蛋白质含量时,改良Lowry法更为精确。由于蚯蚓提取物中大量多肽成分的存在,故对测定其蛋白质含量时,改良Lowry法能够更加精确、真实地反映蚯蚓提取物的蛋白质含量。  相似文献   

6.
人参中可溶性蛋白质含量测定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:研究人参中可溶性蛋白质含量测定方法。方法:以牛血清白蛋白为对照品,采用考马斯亮蓝比色法对可溶性蛋白质含量进行测定。结果:对照品浓度在33.4~167.0μg/mL范围内具良好的线性关系(r=0.9990),供试品溶液在60 min内稳定,平均回收率为99.74%,相对标准偏差为2.36%(n=5)。结论:本含量测定方法快速、准确,可为人参的品种选育、合理栽培和利用提供科学依据。  相似文献   

7.
培养神经元及肝细胞蛋白质样品制备方法的比较研究   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 :优化神经元和肝细胞蛋白样品的制备方法 ,以提高双向电泳分析结果的正确性和可靠性。方法 :采用不同的细胞裂解液在不同的裂解条件下提取培养神经元或肝细胞的全细胞蛋白质 ,考马斯亮蓝G - 2 5 0测定蛋白质含量 ,SDS -PAGE、双向电泳对蛋白质进行电泳分离。结果 :蛋白质含量测定及电泳图谱的对比分析可见 ,用酶消化法和机械收集法所得蛋白质样品含量均较直接裂解法低 ;蛋白质抽提液中还原剂及去污剂的不同选择对结果的影响较大。结论 :采用培养瓶中细胞直接裂解法较酶消化或机械收集法收集细胞再提取蛋白质更为有效 ,还原剂TBP有利于提高蛋白质双向电泳结果的质量 ,在去污剂的使用方面神经元裂解宜采用 4 %CHAPS ,而肝细胞裂解则宜采用 2 %TritonX - 10 0。  相似文献   

8.
PVDF膜吸附染色法检测中药注射剂微量蛋白   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:建立一种快速、灵敏的中药注射剂微量蛋白质检测方法。方法:将样品点在PVDF膜上,用甲醇脱去杂色,经0.25%考马斯亮蓝染色液染色,脱色液甲醇-水-冰醋酸(4.5∶4.5∶1)脱去背景色,通过斑点颜色深浅判断蛋白质限量。结果:当上样量为1μL时,可以检测出浓度为12μg/mL(12 ng)的蛋白质,灵敏度高于药典磺基水杨酸法。结论:本法操作简单、具有较强的抗干扰能力,灵敏度高于现行《中国药典》磺基水杨酸比浊法,可以用于中药注射剂蛋白质限量的控制。  相似文献   

9.
<正> 将考马斯亮蓝G-250(CBG)染料结合蛋白比色法,应用于尿蛋白和脑脊液蛋白定量,其优点为灵敏度高,能测出微克水平的蛋白质,标本用量少,染料与蛋白的结合反应快,显色稳定,重现性好,操作方便。用双缩脲法测定血清蛋白是公认的经典法。目前国内应用较广。为了探讨上述两种方法,在测定血清蛋白方面有无差异,本文进行了如下试验。方法:  相似文献   

10.
目的:建立全蝎商品药材中水溶性蛋白质含量测定方法,为评价全蝎药材质量通过依据。方法:冰箱低温水浸渍、提取,考马斯亮蓝G-250溶液显色,可见分光光度法测定,10批不同全蝎药材商品中水溶性蛋白质的含量。结果:各样品中水溶性蛋白质的含量,以牛血清蛋白计,在60~464μg范围内线性关系良好,其回归方程为Y=0.001 6X+0.0734,相关系数r=0.9997。结论:该方法适用于全蝎药材的水溶性蛋白质的含量测定,可作为控制全蝎药材质量的方法之一。  相似文献   

11.
目的 :建立快速、简便、准确的检测血清色氨酸的方法 ,以研究其对中枢性疲劳症候群的诊断价值。方法 :用高效毛细管电泳法检测了 10 0例健康人 ,6 7例临床症状符合中枢性疲劳症候群的患者血清中色氨酸。结果 :线性范围为 5~ 6 40umol/L ,最低检出限为 2 .5umol/L ,平均回收率为 98.35 % ,批内精密度为 5 .8% ,批间精密度为 8.1%。对 10 0例正常对照组与 6 7例中枢性疲劳症候群的患者血清色氨酸测定结果进行统计分析 ,两者差异有显著意义 (P <0 .0 1)。结论 :高效毛细管电泳法快速检测血清色氨酸为中枢性疲劳候群的诊断提供了一种有效的临床实验室依据。  相似文献   

12.
以PPD为抗原建立了检测尿液结核抗体的过氧化物酶金葡菌A蛋白-酶联免疫吸附试验(PPA-ELISA),并对最佳检测条件进行了探讨。90份尿液标本的检测结果表明,肾结核患者尿液特异性抗体水平非常明显地高于对照组(P<0.01)。吸收试验和交叉试验证明本法特异性良好,批内和批间变异系数均小于10%,灵敏度达0.01ng/ml。本法简便、灵敏、快速,可作为肾结核的辅助诊断方法。  相似文献   

13.
以2甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱(MPC)和甲基丙烯酸甲酯(MMA)为原料,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,乙醇为溶剂,通过溶液聚合法合成了MPC/MMA共聚物,并采用溶剂挥发法制得了共聚物膜。通过测定牛血清蛋白(BSA)吸附和血小板黏附考察了聚合物膜的血液相容性,结果表明:含磷酰胆碱基团的共聚物具有较好的血液相容性,并且BSA的吸附量和血小板的黏附量随着MPC单元含量的增加而减少。根据DSC测定的聚合物中水的降温曲线证实了结合在MPC/MMA共聚物中的水为自由水,并且高自由水含量是MPC/MMA共聚物具有较好血液相容性的原因。  相似文献   

14.
目的在体外探讨环丙沙星(CIP)、阿米卡星(AMK)、头孢他啶(CAZ)两两联合是否有利于减少铜绿假单胞菌耐药突变体的产生。方法分别应用琼脂平板稀释法和棋盘格法测定单独以及联合之后的最低抑菌浓度(MIC),采用琼脂平板稀释法测定单独及联合时对铜绿假单胞菌的防耐药突变浓度(MPC),并计算选择指数(SI)即MPC/MIC,根据SI下降的程度来判断防耐药突变能力。结果CIP、AMK、CAZ单药对铜绿假单胞菌的SI分别为16、16、>32。两两联合后各自单药的SI分别为:CIP+AMK (CIP 8,AMK 4); CIP+CAZ (CIP 4,CAZ 8);AMK+CAZ(AMK 8,CAZ 4)。结论以上3种药物任意两两联合均可以降低单独用药时对铜绿假单胞菌的SI,有利于防止铜绿假单胞菌耐药突变体的产生。  相似文献   

15.
Objective The assay of DNA mismatch repair (MMR) activity can be used as a biomarker for environmental condition detection and human disease diagnosis. Radioactive 32p-endlabeled DNA containing mismatch is extensively used as the substrate for MMR activity analyses. The aim of the present study is to develop a simple non-radioactive, but equally specific and sensitive method for the MMR activity assay. Methods A fluorescent label was chosen to replace the radioactive isotope label. Sensitive evaluation of the fluorescent label was carried out for the first time, and then the fluorescent label was compared with the isotope label in the MMR activity and DNA binding assays. Result LOD (limit of detection) of the fluorescent label was about 0.1 fmol and the relative signal strength displayed a pretty good linear relationship. Moreover, the fluorescent label method has equivalent sensitivity and performance as compared with the classical radioactive method in experiments. Conclusion In light of the sensitivity, reproducibility, safety, rapidity and long lifespan of the fluorescent label, this improved method can be applied to evaluation of biologic and toxic effects of environmental pollutants on man and other forms of life.  相似文献   

16.
4种氟喹诺酮类药物对金黄色葡萄球菌的防耐药变异浓度   总被引:19,自引:1,他引:18  
Cui JC  Liu YN  Wang R  Liang BB  Pei F  Zheng ZJ 《中华医学杂志》2004,84(22):1863-1866
目的 建立防耐药变异浓度(MPC)体外测定方法,并测定氟喹诺酮类(FQ)药物对金黄色葡萄球菌的MPC。方法 肉汤法富集10^10CFU/ml金黄色葡萄球菌ATCC25923和20株对环丙沙星敏感的金黄色葡萄球菌临床分离菌,采用平板稀释法测定莫西沙星、加替沙星、帕珠沙星和环丙沙星对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)、MIC。初测MPC(MPCpr)及MPC。结果 莫西沙星、加替沙星、帕珠沙星和环丙沙星对金黄色葡萄球菌ATCC25923的MPC分别为0.18、0.3、0.75l和1.8μg/ml,选择指数(MPC/MIC99)分别为9.0、7.5、8.0和10.6。而以上药物对20株临床分离菌的MPCpr90值分别为1、1、4和8μg/ml,MPCpr90/MIC90分别为8、8、16和16。结论 莫西沙星和加替沙星限制金黄色葡萄球菌耐药突变株选择的能力优于帕珠沙星和环丙沙星。结合药代动力学参数,莫西沙星和加替沙星对环丙沙星敏感的金黄色葡萄球菌临床分离菌能有效限制耐药突变株的选择,而环丙沙星则容易选择出耐药突变株。  相似文献   

17.
目的 建立逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测恶性疟原虫的新方法,并用于检测现场采集血样。方法 以恶性疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段,设计一对特异引物,采用RT—PCR技术,恶性疟原虫预期被扩增出359bp特定扩增带。结果 从培养的恶性疟血样和现场采集的恶性疟血样中扩增出359bp特定扩增带,而间日疟和健康人血样均未见扩增带。经限制性内切酶分析证实扩增产物为目的片段。本检测系统初步显示可检出0.34个疟原虫/出血样,37份现场采集经镜检确诊的恶性疟血样中,36份RT—PCR检测为阳性,1份RT—PCR检测为阴性,阳性符合率为97.35%。结论 RT—PCR检测恶性疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点,对疟疾诊断、镜检质量控制和流行病学研究具有较大的实用价值。  相似文献   

18.
Background p38 mitogen-activated protein kinases (MAPK) in ischemic preconditioning (IPC) may be essential to cardioprotection. We assessed whether protective effect of morphine-induced preconditioning (MPC) on myocardial ischemia and reperfusion injury in rat hearts involved p38 MAPK activation. Methods Male Spargue-Dawley rats (weighing 300-350 g) were randomly assigned to 1 of the following 8 groups: control (CON, saline vehicle, n=9), SB 203580 (SB, a p38 MAPK inhibitor, n=6), MPC (n=6), IPC (n=9), SB+MPC, SB+IPC, MPC+SB, and IPC+SB (n=6). Infarct sizes (IS), a percentage of the area at risk (AAR), were determined by triphenyltetrazolium (TTC) staining. Tissue samples were processed from the entire AAR of left ventricle for the determination of p38 MAPK protein expression (5 hearts/group). The bands representing the proteins were visualized using an enhanced chemiluminescence detection system. Results The IS/AAR was significantly reduced by IPC (12.9±1.6)% or MPC (25.3±2.9)% compared to the control (52.7±5.5)%. SB 203580 administered prior to preconditioning abolished the effect of IPC (SB+IPC: (43.8±2.6)%, P&gt;0.05 vs CON, P&lt;0.01 vs IPC), but not MPC (SB+MPC: (30.7±0.9)%, P&lt;0.01 vs CON, P&gt;0.05 vs MPC). Treatment with SB 203580 prior to sustained ischemia diminished the protective effect of both MPC (MPC+SB: (42.4±2.9)%, P&gt;0.05 vs CON) and IPC (IPC+SB: (52.0±2.5)%, P&gt;0.05 vs CON) on IS/AAR. In the IPC group, phospho-p38 MAPK protein increased significantly within 5 minutes into ischemia and remained elevated at 30 minutes into reperfusion, while phospho-p38 MAPK protein in the MPC group only increased significantly at 30 minutes into reperfusion. Conclusion The activation of p38 MAPK just acts as a mediator of MPC,whereas it acts as both a trigger and a mediator in IPC.  相似文献   

19.
目的:探讨医用聚乙烯表面接枝2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱(MPC)对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响.方法:利用紫外光接枝法将MPC接枝于医用聚乙烯薄片表面并用扫面电镜观察其表面形貌.以金黄色葡萄球菌(ATCC25923)标准菌株作为实验用菌,将已消毒的已接枝MPC聚乙烯薄片(观察组)及普通聚乙烯薄片(对照组)置入5 mL细菌浓度为1.5×107 cfu/mL的菌液中共同培养.分别于体外培养后24 h、48 h行膜内活菌计数和扫描电镜观察.结果:扫描电镜观察显示通过紫外光接枝法制备的MPC涂层聚乙烯薄片表面形貌光滑,原先的纹理消失.体外培养24 h、48 h观察组聚乙烯薄片表面活菌计数数量均显著少于对照组(P<0.01);扫描电镜观察下进行细菌数半定量评估显示24 h、48 h观察组聚乙烯薄片表面细菌黏附量亦均少于对照组(P<0.01).结论:医用聚乙烯表面接枝MPC可有效抑制细菌黏附,进而可预防聚乙烯表面细菌生物膜的形成.  相似文献   

20.
目的:建立检测逆转录酶活性的酶联免疫吸附实验方法,用于筛选人类免疫缺陷病毒(HIV-1)逆转录酶抑制剂.方法:利用DNA的固相固定技术将引物固定于96孔微量滴定板上,以poly(rA)· Oligo(dT)15为模板,在逆转录酶的作用下,将生物素标记的dUTP掺入,用碱性磷酯酶反应系统检测酶活性.结果: 建立了检测逆转录酶活性的酶联免疫(ELISA)法,并用ELISA法验证了已知阳性药物对逆转录酶的抑制作用,对ELISA法在动力学研究的应用做了初步探讨,评估ELISA法的重复性、稳定性、特异性和敏感性.结论: ELISA 法检测HIV-1 逆转录酶活性具有简单、快速、特异性强、重复性好、污染小等特点,适用于以HIV-1 逆转录酶为靶点的抑制剂的筛选及相关机制的研究.  相似文献   

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