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相似文献
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1.
目的建立敏感的SARS小动物模型。方法通过显微注射技术,将编码SARS-CoV细胞受体的人血管紧张素转换酶(hACE2)基因导入小鼠的基因组中制备了hACE2转基因小鼠,在小鼠ACE2(mACE2)启动子的调控下,hACE2蛋白在转基因小鼠的肺脏、心脏、肾脏和小肠表达。我们观察了野生型和转基因小鼠在SARS冠状病毒接种后病原学和病理学方面的反应。结果在接种后第3天和第7天,病毒能够更有效地在转基因小鼠的肺脏复制,而且转基因小鼠出现更严重的肺损伤。肺组织的损伤包括肺间质充血、出血,单核细胞、淋巴细胞浸润及血浆蛋白的渗出,肺泡上皮细胞增生、脱落,此外,在转基因小鼠的某些器官还发现了血管炎、变性和坏死等病理变化。在转基因小鼠的肺上皮细胞、血管内皮细胞和脑神经细胞检测到病毒抗原。结论转基因小鼠比野生型小鼠对SARS病毒更易感,而且表现出更接近SARS患者的病理变化。  相似文献   

2.
目的利用人血管紧张素转换酶2(ACE2)转基因小鼠模型研究一氧化氮(NO)在严重急性呼吸综合症(SARS)发病中的作用。方法用PUMC01株SARS-CoV感染野生型及人ACE2转基因小鼠,免疫印迹、免疫组化及分光光度法观察两组动物在感染后3、7d肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血清NO的变化。结果免疫印迹显示,在接种病毒后3d和7d的转基因小鼠肺组织iNOS蛋白密度明显增高。免疫组化显示,接种病毒后3d和7d转基因小鼠肺组织巨噬细胞增多,iNOS表达呈明显的阳性反应。生化测定血清NO结果显示,接种病毒后3d,与攻毒前及相同时间的野生型小鼠相比,NO水平明显升高。结论NO在SARS发病的病理生理过程中可能发挥重要的作用。  相似文献   

3.
目的研究了实验感染产生中和抗体以及输入SARS-CoV中和抗体对SARS-CoV感染恒河猴的保护作用。方法动物分3组,分别为SARS感染恢复动物组,输入抗SARS阳性血清动物组和SARS模型对照组,分别接种病毒,1—7d进行病毒检测和血清学检测,7d后安乐处死动物,进行病理检测。结果实验感染产生中和抗体,输入SARS-CoV中和抗体的恒河猴体内SARS-CoV复制得到一定程度的抑制,病理变化也比模型组轻。结论SARS—CoV中和抗体(包括被动免疫)是一种有潜力的SARS治疗方法。  相似文献   

4.
目的血管紧张素转换酶是肾素-血管紧张素系统的重要组成部分。血管紧张素转换酶主要功能是通过把血管紧张素Ⅰ转换成血管紧张素Ⅱ来调节血压,最新的研究显示它也是SARS冠状病毒的一种受体。建立血管紧张素转换酶2基因剔除小鼠,为进一步的SARS机理研究提供工具。方法通过将D3小鼠胚胎干细胞DNA进行同源重组,用反向表达的新霉素基因替代ACE2基因-2000bp至+489bp的DNA片段,并用Western blot检测纯合体小鼠ACE2基因的表达。结果血管紧张素转换酶2基因剔除小鼠ACE2基因的表达被完全阻遏。结论建立了ACE2基因剔除小鼠。  相似文献   

5.
目的检测SARS冠状病毒(SARS-CoV)S蛋白的功能性受体血管紧张素转换酶2(ACE2)在小鼠胰腺内、外分泌腺的表达。方法①RT-PCR:麻醉小鼠后取胰腺和肺组织,采用RT-PCR方法检测各组织ACE2的表达。②免疫电镜:麻醉小鼠后取胰尾,采用免疫电镜方法检测胰腺组织ACE2的表达。结果胰腺和肺脏组织均表达ACE2mRNA,且胰腺内、外分泌腺均表达ACE2。结论 ACE2在小鼠胰腺内、外分泌腺的表达可介导SARS-CoV侵入并损害胰腺,使胰岛素耗竭。  相似文献   

6.
目的研究SARS-CoV实验感染恢复猴,以及灭活疫苗免疫猴对SARS—CoV再次感染的疾病状况。方法动物分四组,分别为SARS感染恢复动物组,灭活疫苗免疫不同时间2组和SARS模型对照组。动物分别接种病毒,1~7d进行病毒检测和血清学检测,7d后安乐处死动物,进行病理检测。结果实验感染SARS-CoV猴和灭活疫苗免疫猴均产生了中和抗体,猴体内SARS-CoV复制得到一定程度的抑制,病理变化也比SARS-CoV模型组轻。结论SARS-CoV感染恢复猴对SARS-CoV再次感染有一定抵抗作用;灭活疫苗免疫是预防实验猴感染SARS—CoV的有效方法。  相似文献   

7.
建立SARS-CoV病毒分离培养方法,确定SARS-CoV病毒感染动物后在不同时间和不同组织病毒的复制和存活时间,并比较中国恒河猴和食蟹猴对病毒的敏感性,筛选出对SARS冠状病毒敏感的动物,完善SARS冠状病毒感染猴模型的病毒学指标。方法:SARS-CoV经鼻腔接种实验用猴,定期采集动物的鼻咽拭子、血浆和组织标本进行病毒分离培养,分离出来的病毒用免疫荧光方法和中和试验等方法进行测定。结果:SARS冠状病毒均可感染恒河猴和食蟹猴,在鼻咽拭子、血浆和组织中可以分离到病毒。结论恒河猴和食蟹猴均可作为SARS感染动物模型,而病毒分离培养可以作为感染模型的重要指标。  相似文献   

8.
目的 探讨SARS-CoV Spike蛋白来源的B细胞表位多肽及其产生的单克隆抗体在SARS-CoV感染Vero-E6细胞系及h-ACE2ICR转基因小鼠过程中的作用,为SARS-CoV疫苗的筛选奠定初步工作基础.方法 将Vero-E6细胞接种于96孔板上,首先应用两种B细胞表位多肽制备而成的单克隆抗体S471-5034A-10及S604-62511B1进行中和实验,随后在相同的实验中加入相关(S471-503,S604-625)或无关多肽干扰抗体的中和作用,当病毒对照空中70%细胞出现细胞病变时,对活细胞进行中性红染色并计算中和指数以分析抗体的中和水平.应用鉴定有中和保护作用的抗体来源的多肽进行h-ACE2ICR转基因小鼠病毒感染后的治疗实验,进一步确定多肽在SARS-CoV体内感染过程中的保护性作用.结果 两种B细胞表位多肽来源的单克隆抗体均可以在一定程度上中和SARS-CoV对Vero-E6细胞的感染,而且这种中和作用可以被加入的其来源多肽所阻滞,这种阻滞作用的强弱与加入多肽的剂量具有相关性.多肽小鼠体内感染治疗实验表明随着体内注射多肽剂量的增加,受感染小鼠肺组织表现出的急性间质性肺炎程度随之减轻,肺组织内检测的病毒载量也有所下降.结论 目前尚无安全有效的治疗SARS的药物,而疫苗是有效抵抗各种感染的工具之一,表位疫苗是新近发展起来的疫苗形式,安全性好,诱导的免疫针对性强.我们的研究表明,S471-5034A-10及S604-62511B1两种单克隆抗体可以中和SARS-CoV对Vero-E6细胞的感染,同时Spike蛋白来源的S471-503多肽在小鼠的感染治疗实验中也表现出保护性作用,可以作为防治SARS-CoV感染的表位疫苗研制候选肽段.  相似文献   

9.
目的综合对比SARS-CoV感染的恒河猴、布氏田鼠及Lewis大鼠的病理学、免疫学以及病毒的复制与外排情况的变化,来探讨此三种动物在建立SARS模型上的特点。方法SARS病毒感染8只恒河猴、9只Lewis大鼠和20只布氏田鼠,在感染后不同时间安乐死动物,应用光镜对动物的各脏器进行病理观察研究;用病毒分离和RT-PCR方法检测病毒外排与复制的情况;用ELISA法检测动物产生特异性抗体情况。结果在SARS-CoV感染恒河猴、Lewis大鼠和布氏田鼠后,肺组织均出现一定的与人类SARS疾病相似的病理改变,在动物体内均可检测到活病毒或病毒核酸,并可检测到特异性IgG抗体的存在。在病死率上布氏田鼠最高;在病毒的复制与外排方面恒河猴的检出率最高,持续时间最长;在抗体产生情况上恒河猴与Lewis大鼠基本相似;在病理变化上恒河猴病变最重且最为复杂,与人类SARS疾病的病理变化最为接近。结论布氏田鼠,Lewis大鼠,特别是恒河猴动物模型可以用于SARS发病机制、疫苗和药物的研发,恒河猴动物模型是目前研究SARS疾病最理想的动物模型。  相似文献   

10.
质粒表达型siRNA对SARS-CoV复制与感染干扰的初步研究   总被引:3,自引:2,他引:3  
目的构建针对SARS-CoV的特异性siRNA质粒,利用RNA干扰技术抑制该病毒复制与感染.方法根据SARS-CoV的全长基因序列,以4个不同的部位为靶点,分别设计、合成含有19 nt干扰序列的一段寡核苷酸,将两两互补的寡核苷酸经退火后所形成的序列克隆到pSilencer 3.1-H1载体中,构建表达siRNA的质粒.采用脂质体法将质粒转染Vero E6细胞,经潮霉素抗性筛选后,再对稳定表达的细胞进行细胞病变、病毒空斑形成和MTT实验,以观察干扰效应.结果对所构建的质粒分别测序,确定其含有siRNA的序列与预期的特异性干扰序列一致.用不同浓度的SARS-CoV感染转染质粒后的细胞,与阴性对照相比,其细胞病变减轻、活细胞显著增加,病毒空斑明显减少.结论利用RNA干扰能有效的抑制SARS-CoV在细胞中的复制,并对细胞有保护作用,为预防、治疗SARS提供了新的思路和方法.  相似文献   

11.
12.
老龄ICR小鼠对SARS-CoV的易感性   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的掌握SPF动物繁育设施内空气落下菌数的实际情况。方法采用常规方法对SPF动物繁育设施空气落下菌数进行了定期测定。结果近3年的检测结果表明,SPF动物繁育设施在动物进入以后其净化级别很难达到万级,其空气落下菌数反映的只是各动物间的卫生状况,结论建议动物饲养间空气落下菌数可控制在100个/皿以下,清洁走道和清洁物品准备间则可控制在10个/皿以下。  相似文献   

13.
1. A SARS vaccine was produced based on recombinant native full-length Spike-protein trimers (triSpike) and efficient establishment of a vaccination procedure in rodents. 2. Antibody-mediated enhancement of SARS-CoV infection with anti-SARS-CoV Spike immune-serum was observed in vitro. 3. Antibody-mediated infection of SARS-CoV triggers entry into human haematopoietic cells via an FcγR-dependent and ACE2-, pH-, cysteine-protease-independent pathways. 4. The antibody-mediated enhancement phenomenon is not a mandatory component of the humoral immune response elicited by SARS vaccines, as pure neutralising antibody only could be obtained. 5. Occurrence of immune-mediated enhancement of SARS-CoV infection raises safety concerns regarding the use of SARS-CoV vaccine in humans and enables new ways to investigate SARS pathogenesis (tropism and immune response deregulation).  相似文献   

14.
[目的]阐明SARS病毒感染后能否再次感染,疫苗产生的抗体中长期保护效果,被动免疫是否真正安全有效等,为防治SARS提供实验依据。[方法]实验分4组,分别为一组(SARS恒河猴恢复组):用感染SARS-CoV发病12月后的4只恒河猴,均有中和抗体产生。二组(SARS食蟹猴恢复组):用感染SARS-CoV发病12月后的3只食蟹猴,均有中和抗体产生。三组(SARS血清输入恒河猴组):3只恒河猴,病毒接种时中和抗体阴性。病毒接种两天后输入抗体阳性血清(恒河猴血清,感染获得,效价为:1:128),用量10ml/只,分别经肌肉和静脉输入,各5ml。四组(恒河猴SARS-CoV感染组):2只恒河猴,病毒接种时中和抗体阴性。SARSCo-V经鼻腔接种,在感染的第1天开始到7天安乐死时,不同时间取咽拭子、血液和脏器,进行病毒分离,RT-PCR检测和中和抗体测定。[结果]一组(SARS恒河猴恢复组):接种SARS-CoV后未见发热等异常临床表现。血清生化无ALT、LDH、CK、总蛋白和血清白蛋白异常。3只猴在接种病毒后的咽拭子中,RT-PCR分别未检出、第1天检出、第1-3天中检出病毒。第2、5、7天咽拭子中、7天安乐死时血、肺、肝、脾和淋巴结等组织中病毒分离均为阴性。2只猴肺组织病理学检查见轻度肺炎。二组(SARS食蟹猴恢复组):接种3只未见任何不良临床表现,血清生化5项正常。3只猴在接种病毒后的咽拭子标本中,RT-PCR分别未检出SARS病毒、在第1-2天检出、在第1-3天中检出病毒。第2、5、7天咽拭子中、7天安乐死时血、肺、肝、脾和淋巴结等组织中病毒分离均为阴性。3只猴肺组织病理学检查见轻度肺炎等。三组(SARS血清输入恒河猴组):3只恒河猴在病毒接种的第2-5天时有一过性的体温升高,3940℃。血清生化5项正常。3只猴在接种病毒后的咽拭子标本中,RT-PCR分别在第1-3、第1-4天和第1-2天检出SARS病毒。2只猴第7天咽拭子中病毒分离阳性。另外1只在第2、5、7天咽拭子中、7天安乐死时血、肺、肝、脾和淋巴结等组织中病毒分离均为阴性。3只猴肺组织病理学检查见轻度肺炎等。四组(SARS恒河猴SARS-CoV感染组):2只猴病毒接种后,第2-4天时有一过性的体温升高,3940℃。2只进行接种病毒后1-7天安乐死时,RT-PCR在恒河猴的咽拭子标本中连续检出SARS病毒。在第2、5天咽拭子中、7天安乐死时肺组织中病毒分离阳性。2只猴肺等组织病理学检查发现肺组织表面局部有轻度发灰实变现象,可见到间质性肺炎病变,内皮细胞受损,出血和水肿。大多数肺泡没有完整的内衬细胞残留,肺泡间隔变宽并被以吞噬细胞为主的单核炎症细胞浸润,同SARS肺炎改变。实验表明,前期感染产生中和抗体的恒河猴、食蟹猴再次感染病毒,和模型对照猴比较,动物肺组织等只出现轻微或无病理变化,RT-PCR检出时间大大缩短,病毒培养未能分离出病毒,所有这些指标,均证实中和抗体有明显的保护作用,是有效的。被动免疫从结果来看,有一定的作用,但保护作用弱。  相似文献   

15.
目的近几年发现的血管紧张素转化酶相关性羧肽酶(ACE2),是血管紧张素转化酶(ACE)的相关酶,新近被证实是SARS相关冠状病毒的一个功能性受体。我们的先前实验发现SARS患者的血糖水平比对照组显著升高,提示SARS冠状病毒可能侵袭胰腺并导致胰腺损伤。本文研究ACE2在人、大鼠和小鼠内外分泌腺的表达,为探讨糖尿病及SARS病毒感染后血糖升高的机制提供依据。方法通过免疫组化的方法检测ACE2在人、大鼠和小鼠胰腺的表达。分别提取人和大鼠胰腺组织的RNA,通过RT-PCR的方法检测ACE2在人、大鼠的表达。结果免疫组化:ACE2在人、大鼠、小鼠的胰腺内外分泌腺均有表达,ACE2在内分泌腺的表达均强于外分泌腺。RT-PCR:在人和大鼠的胰腺RNA经逆转录后均扩增出ACE2基因片段,提示ACE2在人和大鼠胰腺中均有表达。结论ACE2在胰腺内分泌腺表达,提示SARS病毒能通过胰岛细胞膜上的ACE2受体侵入胰岛细胞,引起胰岛细胞损伤。  相似文献   

16.
目的:了解肺组织内被严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome -associated coronavirus, SARS-CoV)感染的靶细胞类型, 并对SARS诱发的肺损伤发病机制进行探讨.方法: 运用SARS-CoV基因组序列合成的地高辛标记cDNA探针,对北京市7例及安徽省1例确诊的SARS死亡病例的肺组织进行原位杂交检测,在原位杂交基础上,进一步运用免疫组织化学方法显示SARS-CoV感染的靶细胞类型,如Cytokeratin(CK)标记上皮细胞,CD34标记血管内皮细胞,CD68标记巨噬细胞,Vimentin标记纤维母细胞, CD3标记全T细胞. 结果:原位杂交检测显示,8例患者肺组织中都表达SARS-CoV RNA,阳性信号位于靶细胞胞浆内,呈紫蓝色(NBT-BCIP).原位杂交和免疫组化结果显示:支气管上皮细胞、Ⅱ型肺泡上皮细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞、纤维母细胞及T淋巴细胞在所有SARS病例中都受到了病毒感染.原位杂交阳性(紫蓝色,NBT-BCIP)和免疫组化阳性(红棕色,AEC)信号同时表达于靶细胞胞浆中而呈紫红色.结论:通过对SARS患者肺组织原位杂交和免疫组织化学双重标记研究表明,肺组织内支气管上皮细胞、Ⅱ型肺泡上皮细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞及纤维母细胞等多种细胞成分广泛受到了SARS-CoV攻击,肺组织内多种细胞成分弥漫性受损以及所释放的炎性介质在肺损伤的发病过程中起着重要作用.  相似文献   

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