FAP-α在乳腺癌中的表达及作用机制研究进展

成纤维细胞活化蛋白-α(FAP-α)属于丝氨酸蛋白酶,具有特殊的生物学特性,是肿瘤微环境中肿瘤相关成纤维细胞的特异性标志物之一,常常在恶性肿瘤基质成纤维细胞和肿瘤细胞中选择性表达,在正常组织几乎不表达,在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。FAP-α具有蛋白酶活性,与其他表面蛋白分子形成分子复合物作用于细胞信号通路,调节多种肿瘤细胞的生长、浸润、转移和复发。表达FAP-α的成纤维细胞在乳腺癌细胞的浸润转移中起重要作用。     

人正常卵巢组织中成纤维细胞的培养

目的:通过分离?纯化?培养及鉴定,获得典型人卵巢成纤维细胞?方法:采用酶消化+反复贴壁法,获得纯化成纤维细胞,通过形态学观察和免疫细胞化学染色,对所得细胞进行特征性标志及生物学特性的检测,进一步阐述细胞特征,并绘制细胞生长曲线?结果:形态学上,正常卵巢成纤维细胞形态多样,大部分为梭形?条索形,还有三角形?多角形和不规则形等,并具有伪足样外形;其生长潜伏期较长,12~14 d可传代;免疫细胞化学上,波形蛋白(vimentin)表达强阳性,结蛋白(desmin)?成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)表达弱阳性;在较早期传代的细胞中,CK-7及CK-P呈少量阳性,随着细胞的纯化,其阳性表达渐行减少直至完全消失;肌动蛋白α(α-SMA)部分细胞表达阳性?而卵巢黏液性细胞标志CK-20?血管内皮细胞标志CD31?间充质细胞标志CD90?雌?孕激素受体(ER?PR)以及基质金属蛋白酶(MMP-2? MMP-3?MMP-9)?肿瘤标志物CA125?CA19-9?癌胚抗原(CEA)?成纤维细胞激活蛋白α(FAP-α)?血小板衍生生长因子受体α(PDGFR-α)均阴性?结论:成功获得人卵巢成纤维细胞,为研究卵巢癌及其相关成纤维细胞提供了必要的细胞学工具?     

乳腺浸润性导管癌间质成纤维细胞α-SMA、Ki-67的表达

目的:研究不同类型浸润性导管癌间质成纤维细胞是否存在生物学特性上的差异。方法:用免疫组化的方法研究了58例乳腺浸润性导管癌间质成纤维细胞α-SMA、Ki-67的表达情况,分析表达率与临床分期和肿瘤类型之间的关系。结果:Ⅲ期、Ⅳ期浸润性导管癌间质成纤维细胞α-SMA表达率为78.9%(15/19),高于Ⅱ期(13/27)Ⅰ期(5/12)表达率(P<0.05);硬癌间质成纤维细胞α-SMA表达率最高,为84.2%(16/19),高于单纯癌(11/21)和不典型髓样癌(6/16)表达率(P<0.05)。结论:不同病理类型、分期的乳腺浸润性导管癌间质成纤维细胞的α-SMA表达存在差异。     

肿瘤相关成纤维细胞在垂体腺瘤侵袭性行为中的作用研究

目的 初步研究肿瘤相关成纤维细胞在垂体腺瘤侵袭性行为中的作用。方法 依据术前磁共振（MRI）检查和术中观察,收集典型侵袭性（IPA组,n=7）和非侵袭性（nIPA组,n=8）垂体腺瘤新鲜组织,进行原代培养肿瘤相关成纤维细胞,并用肌动蛋白α（α-SMA）染色鉴定;利用Transwell迁移和侵袭性试验比较两组细胞的迁移和侵袭能力,并用免疫细胞化学、Western blot比较两组肿瘤相关成纤维细胞α-SMA、基质金属蛋白酶（MMP）-9的表达差异。结果 新鲜垂体腺瘤组织中培养出α-SMA阳性的肿瘤相关成纤维细胞,两组细胞的迁移能力无明显差异,侵袭能力IPA组强于nIPA组（ P=0.010）;IPA组细胞MMP-9表达高于nIPA组（ P=0.025）,α-SMA的表达在两组之间差异无统计学意义。结论 肿瘤相关成纤维细胞可能通过分泌更多的MMP-9增强自身侵袭能力,为肿瘤细胞侵袭周围组织提供条件。     

成纤维细胞激活蛋白在小鼠肺纤维化模型中的表达

目的探讨成纤维细胞激活蛋白（FAP）在实验性小鼠肺纤维化组织中的表达,及其与α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1（TGF-β1）之间的相互关系。方法气管内滴入博莱霉素（7mg/kg）制备肺纤维化模型,采用免疫组化技术检测小鼠肺纤维化组织中FAP、α-SMA和TGF-β1的表达。结果正常肺组织无FAP表达;纤维化组FAP表达于细支气管和大血管周围的成纤维细胞,成纤维细胞灶中FAP、α-SMA和TGF-β1表达部位相似,但FAP比α-SMA的表达更广泛,比TGF-β1的表达更强。FAP、α-SMA和TGF-β1与小鼠肺纤维化程度均呈正相关（r值分别为0.795、0.766和0.628,P〈0.01）,且FAP与TGF-β1的表达呈正相关（r=0.706,P〈0.01）。结论 FAP特异性表达在小鼠肺纤维化组织的成纤维细胞灶中,与肺纤维化程度有关。FAP与TGF-β1可能在肺纤维化形成中起协同作用。     

COX-2介导肿瘤相关成纤维细胞在乳腺癌进展中的作用研究

目的 探讨COX-2介导肿瘤相关成纤维细胞在乳腺癌进展中的作用,以提高乳腺癌的诊治水平.方法 随机选取2005年12月~2015年12月乳腺病变微创手术或者外科手术标本:癌旁正常乳腺组织50例,标本均取自乳腺癌术后标本,同时距肿物5cm外的正常乳腺组织;良性病变组织80例,导管原位癌54例及浸润性导管癌135例,标本均取自于乳腺病变微创手术及外科手术术后标本,检测标本α-SMA和COX-2在乳腺各病变组织中的表达.结果 与癌旁正常乳腺组织、良性病变组织相比,导管原位癌组织α-SMA阳性30例(阳性率55.55%)、浸润性导管癌组织α-SMA阳性70例(阳性率51.85%),肿瘤相关成纤维细胞阳性率相对较高,表明肿瘤相关成纤维细胞在后两者中活化、累积.与癌旁正常乳腺组织、良性病变组织相比,导管原位癌组织COX-2阳性28例(阳性率51.85%)、浸润性导管癌组织中COX-2阳性73例(阳性率54.07%),COX-2阳性率相对较高,表明COX-2在后两者中过表达.COX-2在乳腺癌过表达与肿瘤相关成纤维细胞活化、累积相关.结论 COX-2介导肿瘤相关成纤维细胞的过表达能够提示乳腺癌进展情况,在未来研究诊断和治疗乳腺癌具有十分重要的临床价值     

MiR-30a-5p靶向成纤维蛋白-1抑制胰腺导管腺癌增殖和迁移作用

目的 探讨microRNA-30a-5p (miR-30a-5p)对胰腺导管腺癌（PDAC）细胞增殖和迁移的影响及对成纤维细胞活化蛋白-1 (FAP-1)的调控作用。方法 反转录聚合酶链反应、免疫印迹法分别检测PDAC细胞及胰腺正常细胞中miR-30a-5p和FAP-1的表达。生物信息学网站预测miR-30a-5p、FAP-1基因存在结合位点,FAP-1在正常细胞与癌细胞表达存在差异;miR-30a-5p模拟物、抑制物,阴性对照物转染PDAC细胞系,反转录聚合酶链反应检测转染效率,蛋白质印迹法检测FAP-1的蛋白表达水平;CCK-8法检测PDAC细胞的增殖;划痕实验、细胞迁移实验检测PDAC细胞的迁移作用。结果 MiR-30a-5p在胰腺正常细胞系中的表达高于PDAC细胞系（P<0.05）;FAP-1在胰腺正常细胞系中的表达低于PDAC细胞系（P <0.05）。MiR-30a-5p、FAP-1基因有连接位点,转染miR-30a-5p模拟物后miR-30a-5p表达量增高,FAP-1的表达量显著降低（P <0.05）,PDAC细胞的增殖和迁移能力下降（P <0.0...     

成纤维细胞激活蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的:探索胃癌组织中成纤维细胞激活蛋白(FAP)的表达与肿瘤恶性生物学行为和预后的关系。方法:收集2009年2月至2011年4月在我院手术的胃癌患者60例,采用免疫组化法检测胃癌组织和正常胃组织中FAP的表达水平,并分析其与临床病理特征、预后的相关性。结果:FAP在肿瘤间质成纤维细胞胞质内阳性表达,胃癌组织与正常胃组织中FAP阳性细胞数平均值分别为32.80±19.3和0.41±0.21(P<0.01)。胃癌组织中FAP的表达水平与肿瘤的大小、分化程度及临床分期明显相关(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示FAP低表达组胃癌患者术后的生存时间明显高于高表达组,差异有显著统计学意义(P<0.05)。结论:FAP在胃癌的生长、侵袭和转移中发挥着重要作用,可能作为胃癌预后判断和治疗的一个的潜在靶点。     

SiRNA靶向沉默成纤维细胞激活蛋白仅对胶质瘤细胞U87增殖的影响

目的：探讨小分子干扰RNA（siRNA）靶向沉默成纤维细胞激活蛋白仅（FAP-α）表达对神经胶质瘤细胞株U87增殖的影响。方法：实验分为空白对照组（Blank组）、阴性对照组（NC组）和siRNA组,通过脂质体将siRNA转染至胶质瘤细胞株U87,使用Westernblot法检测FAP-α基因的蛋白水平,同时检测NC组和siRNA组Bcl-2、caspase-3的表达变化,使用Real-timePCR法检测FAP-α和增殖核抗原（PCNA）的mRNA水平,CCK-8法评价转染后NC组和siRNA组细胞的增殖能力。结果：①转染48h后,siRNA组细胞FAP-α mRNA、蛋白的表达明显低于NC组和Blank组,差异有统计学意义（P〈0．01）,siRNA组较Nc组caspase-3蛋白表达增加（P〈0．05）;Bcl-2蛋白表达明显降低（P〈0．01）,siRNA组较NC组PCNAmRNA表达明显下降（P〈0．01）。②转染后48、72和96hsiRNA组U87细胞吸光度值低于NC组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：应用siRNA沉默FAP-α基因的表达,可以抑制胶质瘤细胞U87的增殖,诱导胶质瘤细胞的凋亡。     

PDGF-AB对成纤维细胞表达α-SM actin的影响

目的:研究PDGF-AB对成纤维细胞表达α-SM actin的影响,探讨PDGF-AB促进伤口愈合的作用机制. 方法:取体外培养的人正常皮肤成纤维细胞,用免疫组化(SABC)观察PDGF-AB对成纤维细胞表达α-SM actin的影响. 结果:PDGF-AB能诱导成纤维细胞表达α-SM actin,且呈剂量依赖性关系. 结论:PDGF-AB可能通过刺激成纤维细胞表达α-SM actin,促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,增加伤口收缩,促进伤口愈合.     

RegIα蛋白表达与原发性胃癌发展过程的病理特性和相关性研究

目的探讨RegIα蛋白表达与原发性胃癌发展过程的病理特性和相关性。方法收集本院胃癌标本138例，设胃癌组和癌旁正常黏膜组，采用免疫组化观察RegIα蛋白在原发胃癌的表达，并对2年原发性胃癌患者生存率进行分析。结果与对照组比，胃癌RegIα阳性率为64．1％；早期胃癌和进展期胃癌RegIα表达无差异，但Borrmann IV RegIα阳性表达强于其他分期；阳性主要集中在胃窦；印戒细胞癌阳性表达较高；淋巴细胞转移与血行转移RegIα阳性表达较高；临床分期、分化程度与RegIα表达有关，与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小无关。胃癌患者RegIα蛋白表达阴性的2年生存率为84．9％。结论Reg1α可作为评价胃癌预后的参考指标。     

HIF-1α、Survivin与乳腺癌

缺氧诱导因子1α(HIF-1α)是细胞缺氧适应与应答调节的关键因子,在机体生理及病理过程中起关键作用。HIF-1α对肿瘤生物学特性改变的调控成为近年来肿瘤研究的热点之一。生存素Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,参与调控细胞的增殖和凋亡。在人类多种恶性肿瘤中,Survivin高表达并提示预后不良。本文HIF-1α和Survivin与乳腺癌的关系研究进展加以综述。     

FAP-1在肺癌中的表达及其临床意义

目的:观察肺癌患者癌组织中Fas相关磷酸酯酶(FAP-1)的表达,初步探讨FAP-1表达在肿瘤发生发展中的作用,并分析其意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测60例肺癌及15例肺良性病变标本中FAP-1蛋白的表达水平,设置10例正常肺组织为对照组。结果:FAP-1蛋白的阳性表达主要定位在细胞质内,少数也可见胞膜着色。FAP-1蛋白在正常肺组织中未见表达,良性病变中的表达率为6.7%,而在恶性肿瘤中的阳性表达率为78.3%,与前两者相比差异有显著性(P<0.01)。FAP-1的表达与肿瘤的分化程度和转移呈显著相关(P<0.05),与年龄和肿瘤大小无明显相关性(P>0.05)。结论:FAP-1在肺癌组织中有广泛表达,在临床有转移、分期晚和病理分级低的组织中表达增高,可能对于肺癌的发病机制及恶变程度具有重要意义。     

FAP-1在乳腺癌中的表达及意义

目的:研究Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)在乳腺癌组织中的表达及其与临床分期、病理分级、淋巴结转移和患者年龄的关系。方法:SP法检测正常乳腺组织、乳腺癌及乳腺良性肿瘤组织中FAP-1蛋白的表达水平。结果:FAP-1蛋白在正常乳腺组织中未见表达,在良性肿瘤中的表达率为26%,在交界性肿瘤与恶性肿瘤中的阳性表达率分别为69%和80%;FAP-1蛋白的表达与乳腺癌的临床分期、病理分级和淋巴结转移状况有关,而与年龄无关。结论:FAP-1在乳腺癌组织中广泛表达,可能成为判断乳腺癌恶变程度及预后的重要指标。     

结直肠癌组织中HIF-1α和VEGF表达及其意义

目的探讨低氧诱导因子HIF-1α和鼻管内皮生长因子VEGF在结直肠癌中的表达及其意义。方法用免疫组化法检测43例结直肠癌和10例正常结肠组织中低氧诱导因子HIF-1α和血管内皮生长因子VEGF的表达。结果HIF-1α在大多数结直肠癌细胞中表达,HIF-1α的表达和结直肠癌的浸润深度以及远处转移呈正相关（P〈O．01）,与结直肠癌组织的分化程度呈负相关（P〈O．01）。结直肠癌组织中HIF-1α的表达与VEGF表达呈正相关（r：n5,P〈Q05）。结论HIF-1α与结直肠癌的分化、浸润及淋巴结转移有关,其机制可能与上调VEGF表达促进肿瘤血管生成相关。     

结缔组织生长因子、血管内皮生长因子、缺氧诱导因子-1α在胰腺癌中的表达及临床意义

目的：检测胰腺癌中CTGF、VEGF、HIF-1α的表达情况,探讨三者在胰腺癌缺氧微环境中对胰腺癌发生、发展的作用。方法：采用免疫组化Envision二步法对46例胰腺癌组织和10例癌旁胰腺组织中CTGF、VEGF、HIF-1α的表达进行检测。结果：CTGF、VEGF和HIF-1α在胰腺癌组织中均高表达,阳性率分别为45.7%、71.7%、76.1%,显著高于三者在癌旁胰腺组织的表达（0）（P〈0.01）。CTGF在胰腺癌组织中的表达水平与性别、肿瘤部位无关,与年龄、临床分期、病理分级、淋巴结转移情况有关（P〈0.05）。VEGF和HIF-1α在胰腺癌组织中的表达水平只与临床分期有关（P〈0.05）,与其他肿瘤生物学行为无关。CTGF与VEGF、HIF-1α,VEGF与HIF-1α之间的Spearman相关系数分别为r=0.575、r=0.483、r=0.082,即三者两两间均存在正相关关系（均P〈0.01）。结论：胰腺癌组织中CTGF、VEGF、HIF-1α的表达与在癌旁胰腺组织中的表达有显著差异,三者对胰腺癌在肿瘤缺氧微环境下的发生、发展有重要作用。     

酪蛋白激酶Ⅰα在肺癌中的表达及其意义

目的 检测酪蛋白激酶Ⅰα(casein kinase 1α,CK1α)在正常肺组织、肺腺癌组织、肺鳞癌组织和小细胞肺癌组织中的表达并分析其病理意义。方法 采用组织芯片技术和免疫组化SP法检测104例肺癌组织CK1α蛋白的表达,12例远端正常肺组织做对照;RT-PCR法检测30例新鲜肺癌组织及配对远端正常肺组织CK1α mRNA的表达。结果 CK1α蛋白主要表达于细胞质,且在远端正常肺组织、肺腺癌组织、肺鳞癌组织和小细胞肺癌组织中的阳性表达率依次降低,为100﹪（12/12）、85.7﹪（30/35）、68.3﹪（41/60）、11.1﹪（1/9）,差异有显著性（P＜0.001）。在高、中、低分化程度的肺腺癌和肺鳞癌组织中,CK1α蛋白的阳性表达率分别为100﹪（10/10）、76.9﹪（50/65）和55﹪（11/20）,差异有显著性（P＜0.005）。CK1α在肺癌组织及配对远端正常肺组织的mRNA产物以拼接变异体CK1αS为主,且其在46.7﹪（14/30）的肺癌组织中低表达。结论 CK1α在部分肺癌组织中低表达,且与肺癌组织学类型及肺癌组织分化程度密切相关。CK1α有望成为判断肺癌发生发展的候选标志物及治疗的新靶点。     

乙酰肝素酶与GA结合蛋白α在乳腺癌组织中的表达及意义

 目的 分析正常乳腺组织和浸润性导管癌中乙酰肝素酶（HPA）和GA结合蛋白α（GABPα）的表达及临床意义,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用及相关性。方法 免疫组织化学方法检测HPA及GABPα的表达,并分析二者的相关性及与临床病理因素的关系;Western blot检测HPA和GABPα蛋白的表达。结果 免疫组化显示HPA和GABPα在浸润性导管癌中阳性表达率明显高于正常乳腺组织（P＜0.05）,且HPA和GABPα的表达与乳腺癌组织学分级、TNM分期、及淋巴结有无转移有关（P＜0.05）。Western blot检测显示HPA和GABPα蛋白表达在浸润性导管癌中明显高于正常乳腺组织（P＜0.05）,与免疫组化的结果一致。统计分析两者在乳腺癌中的表达呈正相关（P＜0.05）。结论 在乳腺癌组织中,HPA与GABPα的表达均存在异常,提示HPA和GABPα在乳腺癌的发生发展、浸润转移中可能存在重要的协同作用。     

NSCLC 组织中 Hsp90α的表达及其临床意义

目的：探讨热休克蛋白90α（ Hsp90α）在非小细胞肺癌（ NSCLC ）中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学S-P方法检测50例非小细胞肺癌组织中Hsp90α的表达,分析其表达与临床病理特征及放疗预后的关系。结果：Hsp90α主要表达于细胞浆,阳性表达为78％（39/50）, Hsp90α的表达与TNM分期、远处转移、淋巴结转移有关（P＜0．05）,与组织学分级、病理类型及年龄、性别无关。 Hsp90α阳性和阴性表达组放疗有效率、1、2、3年生存率分别为65．8％（25/39）、71．8％、34．2％、3．1％和81．8％（9/11）、76．2％、45．7％、30．5％, Log-Rank 检验两组生存曲线有非常显著差异（P＝0．009）。结论：Hsp90α在非小细胞肺癌组织中高表达,其高表达与NSCLC的放射抗拒性密切相关。