彗星试验检测武汉市氯化饮水有机提取物对HepG2 DNA的损伤

目的 研究武汉市主要水源C江、D湖、H水的氯化饮水有机提取物对HepG2 DNA的损伤。方法 氯化饮水有机提取物染毒HepG2后，用单细胞凝胶电泳(亦称彗星试验)检测DNA损伤。结果 氯化饮水有机提取物诱导DNA损伤的最低浓度，C江、D湖、H水丰水期(8月份)均为1．67ml/ml培养液，平水期(3月份)分别为167、16．7、1．67ml/ml培养液；最高浓度(167ml/ml培养液)氯化饮水有机提取物诱导的HepG2 DNA迁移度，C江、D湖的丰水期均明显高于平水期(均P＜0．05)；最高浓度氯化饮水有机提取物诱导HepG2DNA损伤的强度，H水＞D湖和C江(均P＜0．01)。结论 武汉市主要水源C江、D湖、H水的氯化饮水有机提取物对HepG2 DNA有损伤作用，损伤作用的严重程度H水＞D湖＞C江，丰水期＞平水期。     

碳纳米管对小鼠肝和肺细胞DNA损伤的彗星实验研究

目的检测碳纳米管进入小鼠体内后对小鼠肝细胞和肺细胞DNA的损伤作用。方法将小鼠分别用不同剂量多壁碳纳米管(0.1、0.2、0.4mg/ml)暴露14天,每次0.2ml,每隔24h暴露1次,用单细胞凝胶电泳技术检测肝细胞和肺细胞DNA的损伤程度。结果0.1mg/ml剂量大小的碳纳米管可造成小鼠肝细胞和肺细胞DNA的严重断裂(P<0.01),而0.2、0.4mg/ml剂量则引起了明显的交联作用。结论碳纳米管可造成机体内肝细胞和肺细胞DNA的断裂和交联。     

甲氨蝶呤对小鼠4种组织器官细胞DNA损伤作用

目的了解甲氨蝶呤(MTX)的作用机制,探测其作用的遗传毒性靶器官。方法用单细胞凝胶电泳技术检测了MTX染毒后脾、骨髓、胸腺和外周血淋巴细胞的DNA损伤情况及其与MTX剂量间的关系。结果腹腔注射1.25～5mg/kgMTX可诱发小鼠4种细胞的DNA单链断裂,核DNA损伤程度与用药剂量呈正相关关系。结论不同脏器细胞对MTX的易感性不同,脾、骨髓、胸腺、外周血淋巴细胞可能是MTX的遗传毒性靶细胞。外周血淋巴细胞在SCGE分析中的拖尾现象可作为用药后组织器官对药物敏感性反映的生物标志。     

单细胞凝胶电泳法检测双酚A对小鼠睾丸细胞DNA损伤

目的 采用单细胞凝胶电泳法研究双酚A对小鼠睾丸细胞DNA的影响.方法 制备小鼠生殖细胞悬液,用不同浓度的双酚A染毒1 h后,应用单细胞凝胶电泳法检测睾丸细胞DNA损伤情况.结果 与对照组比较,除10-10 mol/L组外,其他各染毒组拖尾率均明显高于对照组(P＜0.05).随着双酚A染毒浓度的增加,小鼠睾丸细胞DNA损伤程度也逐渐增加(P＜0.05),在10-5 mol/L和10-6 mol/L组均出现了Ⅳ级损伤.结论 双酚A体外染毒可造成小鼠睾丸细胞DNA损伤,且随着剂量的增加有加重的趋势.     

氯化汞对离体小鼠骨髓细胞和睾丸生殖细胞DNA的损伤作用

目的:探讨氯化汞对小鼠骨髓细胞和生殖细胞DNA的损伤作用.方法:利用彗星试验(SCGE)技术检测0.01、0.1、1.0mmol/L氯化汞对离体小鼠骨髓细胞和睾丸细胞的DNA损伤.结果:0.01 mmol/L、0.1mmol/L、1.0 mmol/L氯化汞处理组骨髓细胞DNA损伤率分别为12.8%、57.2%和100%,与阴性对照组(5.5%)相比差异有显著性(P＜0.01);睾丸细胞DNA损伤率分别为26.7%、45.5%和98.0%;这与阴性对照组(6.0%)相比差异有显著性(P＜0.01).其相应的彗星细胞DNA迁移长度分别为:骨髓细胞(20.38±2.98)、(51.72±5.15)、(92.91±3.28);睾丸细胞(19.29±1.63)、(27.77±3.01)、(66.31±3.11);分别与阴性对照组[(12.32±0.61),(15.15±1.35)]相比差异有显著(P＜0.01).结论:氯化汞可引起DNA链损伤,且损伤随着氯化汞剂量增加而加重.     

蒺藜提取物对小鼠损伤睾丸间质细胞超微结构的影响

目的 观察蒺藜提取物对小鼠损伤睾丸间质细胞超微结构的影响,探讨蒺藜对小鼠损伤睾丸的保护修复作用.方法 健康雄性小鼠60只,随机分为对照组、模型组和给药组,再分热处理后6 d和14 d两个时间组,每组10只;建立睾丸热损伤模型,给予治疗剂量的蒺藜提取物,透射电镜标本制备,镜下观察.结果 模型组与对照组相比胞质内脂滴较多,...     

二氧化硫衍生物对小鼠肝细胞DNA损伤的研究

目的研究SO2衍生物对小鼠肝细胞DNA的影响。方法运用单细胞凝胶电泳技术(又称彗星试验)对小鼠进行腹腔注射,三个染毒组SO2衍生物剂量为125,250,500mg/kg体重,对照组注射生理盐水,并测量SO2衍生物引起小鼠肝细胞DNA损伤的尾矩(OTM)。结果雄性小鼠肝细胞DNA的OTM值分别为0.95,4.99,9.83,15.50,雌性小鼠肝细胞DNA的OTM值分别为0.81,3.85,6.82,12.87,这提示SO2衍生物可引起小鼠肝细胞DNA损伤,且随SO2衍生物注射剂量的增加DNA损伤加重,并有明确的剂量效应关系(r=0.993～0.996,P<0.001)。另外SO2体内衍生物对雄性小鼠肝细胞DNA损伤比雌性小鼠严重。结论这些结果意味着SO2体内衍生物具有引起哺乳动物肝细胞DNA突变的潜在危险。     

外源核苷酸对受损小鼠胸腺细胞DNA修复的影响

目的:探讨外源核苷酸对受损小鼠胸腺细胞DNA修复的影响.方法:采用10 μmol/L的N-甲基-N-硝基-N亚硝基胍(MNNG)诱导小鼠胸腺细胞DNA损伤后,在终浓度分别为0,0.1,1和10 mmol/L核苷酸的RPMI-1640基础培养基或完全培养基中培养,在培养的第2,5 h采用单细胞凝胶电泳技术分析细胞DNA损伤和修复情况.结果:培养2 h时,基础培养基中各组间的拖尾细胞百分率差异无统计学意义(P＞0.05);完全培养基中核苷酸能降低拖尾率(P＜0.01).5 h时,随着核苷酸添加浓度的升高,拖尾率均降低(P＜0.01).在相同的培养基中,各组的彗星尾长在2 h差异无统计学意义(P＞0.05),5 h后,在基础培养基中添加1,10 mmol/L的核苷酸使得彗星尾长降低(P＜0.05);在完全培养基中添加1,10 mmol/L的核苷酸也使得彗星尾长降低(P＜0.01).在培养的2～5 h内,补充核苷酸均能提高基础培养基(P＜0.05)和完全培养基(P＜0.01)中DNA修复细胞的百分率.结论:外源核苷酸能明显促进受损小鼠胸腺细胞DNA的修复,且核苷酸的作用与其添加水平有关.     

自来水有机浓集物对小鼠染色体的损伤及对肝脏细胞色素P4…

本研究采用普通自来水，经ＸＡＤ－２树脂柱吸附获得自来水中有机浓集物。在相当一２００Ｌ／ｋｇ自来水的有机浓集物染毒条件下，小鼠骨髓ＰＣＥ微核率明显增高，而在小鼠睾刃染色体畸变分析中，５０Ｌ／ｋｇ剂量下即出现阳性结果，表明生殖细胞比体细胞对自来水中有机污染物更为敏感，在相同剂量下可能首先受到损害。本试验结果还表明，自来水中有机浓集物可诱导哺乳动物肝脏乙氧基异吩恶唑Ｏ－脱乙基酶活性，即对细胞色素Ｐ４４８     

彗星试验检测大鼠死后肾脏细胞DNA含量与死亡时间的关系

 【目的】 探讨特定条件下,利用彗星试验测定SD大鼠死后6 ~ 48 h肾脏细胞DNA含量与死亡时间的关系&#65377;【方法】 健康成年雌性SD大鼠,按取材时间随机分为6组,每组3只&#65377;颈椎脱臼法处死动物,置于25.1 ℃(广州地区近5年10月份平均气温)培养箱中,分别于0&#65380;6&#65380;12&#65380;24&#65380;36&#65380;48&#65380;60 h取大鼠肾脏组织,制备单细胞悬液,进行彗星试验,荧光显微成像系统采集图像,采集相关参数(Comet 4.0)并进行Kruskal-Wallis检验&#65377; 【结果】 死后6 ~ 48 h, SD大鼠肾脏细胞DNA碎片随死亡时间延长而增加,尾长在死后各时间点依次呈明显的增长趋势,Oliver尾矩和尾DNA随死亡时间的延长,亦有一定的增长趋势,60 h未能测出&#65377;Kruskal-Wallis检验显示:各时间点彗星尾长均数的差异有高度显著性(P < 0.01);彗星尾矩均数在死后6 h和12 h差异无统计学意义(P > 0.05),24 h和36 h彗星尾矩均数差异有显著性(P < 0.05);尾DNA均数在6 h,12 h,24 h三个时间点差异无显著性(P > 0.05),但与36 h,48 h尾DNA均数的差异均有显著性(P < 0.05)&#65377;【结论】 SD大鼠肾脏细胞DNA降解随死亡时间延长而增加,彗星试验技术为死亡时间推断提供了重要的实验依据&#65377;     

C市枯水期饮用水中有机污染物分析及对肝细胞DNA损伤的研究

目的　了解城市饮用水环境中有机污染物状况及其对肝细胞的遗传毒性。方法　用气 质联用仪毛细管色谱柱分离分析技术 (GC MS)定性分析C市以嘉陵江和长江为水源的A、B、C、D、E 5个水厂枯水期的水源水与出厂水中有机提取物并用单细胞凝胶电泳实验检测了其对原代大鼠肝细胞DNA的损伤 ,观察比较DNA迁移长度与拖尾细胞百分率。结果　定性分析共检出有机物 98种 ,其中水源水为 60种 ,出厂水为 5 8种 ,污染物主要包括 :酯类、酮类、酚类、杂环和苯及其衍生物等。水源水样品中以长江为水源的C、D、E厂在 2 5 0ml时肝细胞DNA迁移长度和细胞拖尾百分率与对照相差显著 (P <0 .0 1) ,以嘉陵江为水源的A、B厂在 5 0ml即可相差显著 (P <0 .0 1)。而全部出厂水样品诱导的DNA损伤在 5 0ml均与对照相差显著 (P <0 .0 1)。结论　C市主城区各水厂水源水与出厂水均已受到有机物的污染 ,嘉陵江的污染重于长江。且各水样的有机提取物在一定范围内均可诱导原代大鼠肝细胞DNA损伤 ,出厂水引起的DNA迁移长度大于水源水 ,提示氯化消毒可以使有机提取物的DNA损伤作用增强     

晶状体上皮细胞DNA损伤的SCGE测定法

目的 研究晶状体上皮细胞DNA的损伤.方法 应用单细胞凝胶电泳(SCGE)法测定氧化、辐射及细胞外高糖、高钙环境对晶状体上皮细胞DNA的损伤.结果 对照组中晶状体上皮细胞呈圆形无拖尾,表明其DNA未受损伤.各处理组细胞呈不同程度的典型彗星图像,头尾分明,与对照组相比差异具有显著性(P＜0.001).结论 以SCGE法测定出多种因素均可导致体外培养的晶状体上皮细胞DNA损伤,考虑其可能与白内障的形成有关.     

久效磷对小鼠DNA损伤的研究

目的探讨久效磷对小鼠的遗传毒性。方法50只小鼠,随机分成5组,设4个久效磷染毒组(0.25 mg.kg-1、0.50 mg.kg-1、1.00 mg.kg-1和2.00 mg.kg-1)和对照组。4个染毒组分别给予0.25 mg.kg-1、0.50 mg.kg-1、1.00 mg.kg-1和2.00 mg.kg-1的久效磷灌胃,对照组给予生理盐水灌胃,每日1次,连续14 d。采用微核试验和单细胞凝胶电泳实验检测久效磷的遗传毒性。结果久效磷染毒小鼠14 d后,与对照组相比,随着染毒浓度的升高,小鼠骨髓细胞微核率显著升高(P<0.05,P<0.01)),小鼠外周血淋巴细胞DNA损伤程度显著增加(P<0.05,P<0.01),并具有良好的剂量-效应关系。结论久效磷对小鼠具有遗传毒性。     

应用单细胞凝胶电泳技术检测K562细胞 DNA损伤的研究

目的用单细胞凝胶电泳技术来探讨一种能方便检测细胞DNA损伤的方法。方法在Singh等人的方法的基础上，加入过氧化氢作为DNA致突变剂来观察K562细胞的DNA损伤。结果在培养K562细胞的过程中，加入了下同浓度的过氧化氢，我们发现了DNA损伤与过氧化氢剂量之间存在着线性相关关系。结论这种在本实验室建立起来的用于检测细胞DNA损伤的方法易于操作，结果令人满意，并更具实用性。     

煤焦沥青烟提取物致大鼠肺泡巨噬细胞DNA损伤作用

目的　研究煤焦沥青烟提取物致大鼠肺泡巨噬细胞 (AM )DNA损伤作用。方法　将大鼠肺泡巨噬细胞分 4组与不同浓度的煤焦沥青烟提取物共育 1h后 ,采用单细胞凝胶电泳技术检测大鼠肺泡巨噬细胞DNA断裂情况。结果　单细胞凝胶电泳后 ,对照组肺泡巨噬细胞无明显细胞拖尾现象 ,而经不同浓度的煤焦沥青烟提取物处理后 ,AM细胞有明显的拖尾现象 ,且随煤焦沥青烟提取物浓度增加 ,AM细胞彗星率上升 ,各组间差异有高度显著性 (P <0 .0 0 1) ,而且损伤的严重程度与作用物浓度呈相关关系 (Spearman相关系数为 0 .6 73,P <0 .0 0 1)。结论　煤焦沥青烟提取物作用于大鼠肺泡巨噬细胞可引起DNA链的断裂 ,单细胞凝胶电泳适于检测肺泡巨噬细胞的DNA链断裂     

镉对小鼠睾丸精子生成的影响及其分子机制

目的:研究镉暴露对雄性小鼠精子生成的影响及其分子机制.方法:分别以1、5、10 μ mol/kg浓度氯化镉腹腔连续暴露小鼠,每天1次,连续5 d,测定睾丸指数和精子相对计数;同时应用单细胞凝胶电泳(single-cell gel electrophoresis,SCGE)技术检测睾丸生精细胞DNA损伤率和迁移长度.结果:三种剂量氯化镉处理组睾丸指数显著低于对照组(P＜0.001),睾丸精子相对计数也显著低于对照组(P＜0.05、P＜0.001),生精细胞DNA损伤率和慧星细胞迁移长度显著高于对照组(P＜0.001),且随剂量增加DNA损伤率和慧星细胞迁移长度也显著增加.结论:DNA链断裂可能是镉引起生精障碍的机制之一.     

预防非典型肺炎方剂对小鼠外周血液淋巴细胞DNA损伤的影响

目的　研究预防非典型肺炎方剂对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA的损伤作用。方法　应用单细胞凝胶电泳方法测定 6个预防非典型肺炎方剂体内给药对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤的作用。结果　ig给予预防非典型肺炎方剂 、 、 (1/ 3临床等效剂量、临床等效剂量、3倍临床等效剂量× 3 d)对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA有明显的损伤作用 ,并呈剂量依赖关系。预防非典型肺炎方剂 、 、 (1/ 3临床等效剂量、临床等效剂量、3倍临床等效剂量× 3 d)对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA没有明显的损伤作用。结论　预防非典型肺炎方剂 、 、 具有潜在的遗传毒性     

硫酸锌对UVB致HaCaT细胞损伤的拮抗作用

目的：探讨中波紫外线（UVB）造成HaCaT细胞损伤的机制及硫酸锌能否拮抗UVB对细胞的损害作用,为开发预防UVB损伤的药物提供理论依据。方法：将HaCaT细胞随机分为对照组、UVB组、加锌（Zn）组和Zn+UVB组。对照组不施加任何处理因素;UVB组细胞进行UVB照射;Zn组只加入终浓度为50 μmol·L^-1的硫酸锌;Zn+UVB组,加入硫酸锌24　h后,进行UVB照射。UVB照射时间为6 min,照射后24　h,收集各组细胞,用台盼蓝拒染法检测细胞存活率,TBA显色法检测细胞内丙二醛（MDA）水平,单细胞凝胶电泳技术检测各组细胞DNA的损伤情况。结果：与对照组比较,UVB组和Zn+UVB组HaCaT细胞存活率显著降低（P<0.05）,MDA水平显著升高（P<0.05）;与UVB组比较,Zn+UVB组细胞存活率显著升高（P<0.05）,MDA水平显著降低（P<0.05）。单细胞凝胶电泳检测结果显示,UVB组和Zn+UVB组HaCaT细胞均出现彗星样拖尾现象。与对照组比较,UVB组和Zn+UVB组细胞尾部DNA尾距、Olive尾距显著增大（P<0.05）;与UVB组比较,Zn+UVB组尾距、Olive尾
距显著减小,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：UVB　能够导致HaCaT细胞存活率下降和MDA水平提高以及DNA损伤,而硫酸锌能够拮抗UVB对HaCaT细胞的损伤作用。