树突状细胞诱导小肠移植免疫耐受的研究进展

目前,对于小肠功能衰竭合并全胃肠外营养(total parenteral nutrition,TPN)并发症的患者,小肠移植已成为公认的唯一能够挽救生命的治疗手段。随着新型免疫抑制剂的应用和外科技术的改进,临床小肠移植疗效得到很大改善。根据第十二届世界小肠移植大会报告(www.isbts2011.org)显示,1985年4月-2011年8月,全球共有79个移植中心完成     

供者未成熟树突状细胞对大鼠皮肤移植免疫耐受的诱导

目的探讨供者未成熟树突状细胞 (dendritic cells,DC)对同种异体皮肤移植免疫耐受的诱导效果 ,为抗排斥反应治疗提供依据。方法以供者未成熟树突状细胞术前预处理受者 ,或术后联用环孢霉素 (CSA)。根据实验分组对皮肤移植术后移植皮片存活情况观察。结果对照组、未成熟 DC组、未成熟DC联用环孢霉素组 ,其受体存活时间分别为 6 .86± 1.34d、7.5 7± 1.99d、2 2 .4 3± 4 .4 6 d。未成熟 DC组与对照组之间差别无显著性差异 ,而与未成熟 DC联用环孢霉素组有显著性差异 (P<0 .0 0 1)。结论供者未成熟树突状细胞术前预处理移植受体 ,可明显延长移植物存活时间。     

未成熟树突状细胞与肝脏移植免疫耐受

肝脏移植免疫耐受具有其独特性,诱导免疫耐受是延长肝移植患者的生存期以及提高生存质量的重要手段。目前,人们通过多种方法诱导肝移植免疫耐受,其中未成熟树突状细胞诱导免疫耐受被普遍认为是一种有效的方法。但供体来源的未成熟树突状细胞在受者体内受刺激因子作用,不可避免的会发育成熟,同时会被宿主体内的同种异体反应被清除,使已经产生的免疫耐受作用消失,而使用受体来源的未成熟树突状细胞则可避免以上不利因素。     

不成熟树突状细胞诱导移植免疫耐受的分歧

树突状细胞(DCs)不仅是免疫应答的启动者,而且是免疫应答的调节者。不成熟树突状细胞(iDCs)因其低表达主要组织相容性复合体和共刺激分子而在诱导和维持机体免疫耐受中发挥了关键作用。在器官移植前将供体来源的或负载供体抗原的受体iDC输入受体体内可以诱导抗原特异性的移植免疫耐受。然而,有关iDC诱导移植免疫耐受的结果并不一致,甚至出现相反的报道,而其中的原因目前尚无定论。本文对iDC诱导移植免疫耐受研究的热点、难点以及存在的分歧进行综述。     

雷帕霉素联合未成熟树突状细胞诱导小鼠皮肤移植免疫耐受

目的 研究雷帕霉素联合供者骨髓来源的未成熟树突状细胞在诱导小鼠同种异基因皮肤移植免疫耐受中的协同作用.方法 健康雄性C57BL/6小鼠和BALB/C小鼠分别为供者、受者,建立同种异基因皮肤移植模型.对照组术前术后未给予任何免疫干预措施;雷帕霉素组术后第0天至第6天给予雷帕霉素灌胃;未成熟树突状细胞组将供者骨髓来源的未成熟树突状细胞于术前第7天经尾静脉输注给受者;联合组将供者骨髓来源的未成熟树突状细胞于术前第7d经尾静脉输注给受者,并在术后第0天至第6天给予雷帕霉素灌胃.结果 对照组、雷帕霉素组、未成熟树突状细胞组、联合组的皮肤移植物存活时间分别为(6.9±1.9)、(12.3±3.0)、(17.0±3.4)、(20.8±3.6)d.方差分析提示组间差异有显著性意义(P<0.05);SNK检验提示各组之间的差异均有显著意义.结论 雷帕霉素能延长小鼠皮肤移植物的存活时间;联合供者骨髓来源的未成熟树突状细胞可延长免疫耐受的持续时间.     

树突状细胞诱导移植免疫耐受的研究进展

树突状细胞（dendritic cell,DC）在移植排斥反应过程中起着至关键性的作用,利用未成熟树突状细胞（immature dendriticcells,imDC）诱导供体特异性免疫耐受已经展现出诱人的前景,有可能成为防治器官移植排斥反应的重要途径,对imDC诱导移植免疫耐受机制及如何有效维持其耐受状态成为当前移植免疫耐受的研究热点,本文主要就近年来国内外DC的体外诱导、培养方法及其诱导移植免疫耐受的相关机制研究作一简要综述。     

IL-10基因修饰树突状细胞对大鼠皮肤移植免疫耐受的诱导

目的:探讨白介素10(IL-10)修饰的供体树突状细胞(dendriticcells,DC)对大鼠同种异体皮肤移植术后免疫耐受的诱导效果,为该基因治疗方法在皮肤移植的临床应用提供依据。方法:供体DC以humanIL-10基因修饰后,通过外周静脉输入受体体内,一周后行大鼠同种异体皮肤移植,根据实验分组观察受体移植皮肤存活情况。结果:对照组、未修饰DC组、hIL-10修饰DC组大鼠移植皮肤存活时间分别为(6.86±1.34)d、(7.57±2.45)d、(13.71±4.04)d,经统计学处理,未修饰DC组与对照组之间无显著性差异,而hIL-10修饰DC组与对照组之间有显著性差异(P<0.01)。结论:hIL-10修饰的供体DC预处理受体,可明显延长移植皮肤存活时间。     

CCR7基因修饰未成熟树突状细胞诱导小鼠皮肤移植免疫耐受的研究

目的 研究CCR7基因重组腺病毒体外转染未成熟树突状细胞(imDCs)对小鼠同种异体皮肤移植免疫耐受的影响.方法 小鼠骨髓细胞经梯度离心及rmIL-4、rmGM-CSF诱导培养未成熟树突状细胞;CCR7重组腺病毒经增强离心法转染未成熟树突状细胞;体外观察转染细胞混合淋巴细胞反应;取CCR7修饰imDCs于皮肤移植前2d、移植后第5天,经腹部注入受体小鼠,观察皮肤移植物存活时间和病理变化.结果 CCR7基因成功转染入imDCs;腺病毒转染后imDCs刺激T细胞增殖的能力较imDCs组增强但弱于mDCs组,IL-10可以明显降低刺激能力;CCR7腺病毒转染组皮肤存活时间长于转染前,IL-10能显著延长皮肤存活时间.结论 CCR7重组腺病毒转染imDCs后,imDCs刺激T细胞增殖的能力部分增强,皮肤移植物存活时间明显延长.     

调节性树突状细胞与移植免疫耐受的研究进展

树突状细胞(dendritic cells,DCs)具有强大的捕捉、处理和递呈抗原的能力,在病原微生物或炎性因子的刺激下逐渐成熟,并由外周组织迁徙至次级淋巴器官,活化、调节效应T细胞,在调控先天性和适应性免疫反应中扮演着重要的角色。近年来越来越多的研究表明,DCs中存在一类负向免疫调节的细胞亚群,它们通过对自身抗原或无害的外源性抗原产生免疫耐受来维持自身免疫的稳态,这部分具有负向免疫调节功能的DCs被称为调节性树突状细胞(regulatory dendritic cells,DCreg)。DCreg具有负向免疫调节功能,能够诱导免疫耐受,且随着对其研究的不断深入,DCreg有望成为临床上治疗移植排斥反应的新工具。本文就DCreg的生物学特性,DCreg与移植免疫耐受及诱导免疫耐受的机制综述如下。     

未成熟树突状细胞联合骨髓移植诱导肾移植大鼠免疫耐受及其机制

目的 供体来源未成熟树突状细胞输注联合骨髓移植,诱导异体肾移植大鼠产生免疫耐受,并探讨其 机制。方法 肾移植大鼠分为5组:阴性对照组、未成熟树突状细胞组、骨髓移植组、联合诱导组、环磷酰胺组。 51Cr释放实验测定大鼠细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞毒效应;ELISA检测脾细胞培养上清IL-4、IFN-γ、TGP- β水平。结果 阴性对照组肾移植大鼠的平均存活时间(MST)为(7.12±1.25)d,未成熟树突状细胞组为(24.38 ±3.20)d,骨髓移植组为(7.87±2.1)d,环磷酰胺组为(18.13±2.36)d,而联合诱导组延长到(80.75±16.88)d, 与上述4组比较,均存在显著性差异(P<0.01)。耐受组大鼠(CTL)杀伤率低于排斥组(4.3±1.0)υs(39.6± 4.4),(P<0.01)。耐受组大鼠脾细胞培养上清IL-4和TGF-β水平为(185.44±32.17)ng／L和(716.82± 197.62)ng／L,高于排斥组(P<0.01);而IFN-γ水平为(532.78±34.54)ng／L,低于排斥组(P<0.01)。结论 术前供体来源未成熟树突状细胞输注联合骨髓移植,可成功诱导受体大鼠产生免疫耐受,其机制可能与特异性 CTL无能及TH1／TH2/TH3细胞因子网络的免疫偏离有关。     

同种移植激活的宿主树突状细胞能介导免疫耐受

目的 依据T细胞的发育机制理论。诱导针对移植物特抗原的异性免疫耐受。方法 先用致死剂量的γ射线，将受者的T细胞及干细胞去除，形成了一个不具干细胞、前T细胞和T细胞的受者模型，称受者模型Ⅰ。同时经同种皮肤移植制造正常的受者对供者器官的免疫排斥反应的模型，称模型Ⅱ。从模型Ⅱ中经免疫磁珠分选取得被供者抗原所激活的、具有抗原提呈功能的树突状细胞，与正常的事先准备好的受者骨髓细胞在体外混合后回输至受者模型Ⅰ中。受者Ⅰ完成免疫造血功能重建后。再对其行同种皮肤移植。分5组，分别观察移植皮片的存活时间。并常规病理组织切片和流式细胞分析检测。结果 由T细胞发育的上游诱导产生特异性的免疫移植耐受，比较对照组，实验组皮片存活时间显著延长（P〈0．005），流式细胞分析和病理组织学分析差异也有显著性。结论 在所建立的模型和系统中，能诱导移植物特异性的免疫耐受，也进一步验证了胸腺的阴性选择理论。     

用地塞米松体内处理大鼠的脾细胞诱导成年大鼠同种异体免疫耐受

目的 探讨免疫健全的成年动物能否诱导供者同种异体心脏移植物的特异性免疫耐受。方法 以成年BN和DA雄性大鼠为供鼠,成年Lewis雄性大鼠为受鼠,给供鼠在切除脾脏或摘取心脏前腹腔注射地塞米松（Dex）。受鼠在手术前两周输注经Dex处理的供鼠脾脏细胞细胞（Dex-SpC）或者移植经Dex体内处理的供鼠心脏（Dex-Gr）,或者联合进行上述两种处理（Dex-SpC+Dex-Gr）。另一组受鼠在输注Dex-SpC的前后3 d和围手术期间也用Dex进行了处理(Dex-SpC+Dex-Gr+Reci-Dex)。结果Dex-SpC组供者特异性移植物存活时间延长,而Dex-SpC+Dex-Gr组移植物存活时间更长。但是,Dex-SpC+Dex-Gr+Reci-Dex组移植物存活时间没有两联处理组长。结论 本研究证实了经Dex体内处理的供者脾细胞能够诱导师未经免疫抑制的成年动物的同种异体免疫耐受,提示耐受或排斥并非决定于抗原性质的"自我非我",动物是新生还是成年。其机制可能是经Dex处理后脾细胞中的树突状细胞数量减少或功能降低,从而不能提供共刺激信号。     

供体来源半成熟树突状细胞诱导大鼠肝移植术后免疫低反应的实验研究

研究供体来源半成熟树突状细胞（smDC）诱导大鼠肝移植术后免疫低反应的效果,初步分析其作用机制。方法该实验在成功完成大鼠树突状细胞（DC）培养和鉴定的基础上,进行大鼠肝移植术前输注供体来源DC、术后使用雷帕霉素灌胃,观察大鼠术后血清白细胞介素10（IL-10）和γ 干扰素（IFN-γ）、CD4+CD25+Treg 的变化,并评估急性免疫排斥病理改变。结果使用雷帕霉素后,可以改变血清细胞因子的分泌水平、促进Lewis→BN 大鼠肝移植术后CD4+CD25+Treg 的增殖,减轻术后免疫排斥反应,从而延长Lewis→BN 大鼠肝移植术后生存时间。结合术前输注未成熟树突状细胞（imDC）或smDC,可以增强雷帕霉素的相应作用,进一步诱导大鼠肝移植术后免疫低反应,且smDC 的作用强于imDC。结论smDC 可以诱导Lewis→BN大鼠肝移植术后免疫低反应。     

造血干细胞诱导大鼠肾脏移植免疫耐受

目的：以供体造血干细胞（HSC）诱导异基因大鼠肾脏移植免疫耐受,探讨免疫耐受的形成机制。方法：建立大鼠肾脏移植模型,通过免疫磁珠法负筛选系统提取供者骨髓中的造血干细胞。给低剂量放射线全身照射的Wistar大鼠管饲CsA,接着经尾静脉推注SD大鼠的造血干细胞,并当天完成肾移植。观察各组大鼠的存活时间,监测血清肌酐浓度,并进行移植肾彩色多普勒超声。采用体外混合淋巴细胞反应（MLR）法检测长期存活大鼠的免疫耐受状态。结果：实验组大鼠存活时间与对照组比较有显著差异。混合淋巴细胞培养提示,长期存活的受者脾细胞对供者脾细胞的刺激不表现出明显细胞增殖反应,而对无关大鼠脾细胞产生较明显的增殖反应。结论：应用造血干细胞能够成功地诱导出针对供者特异性的免疫耐受。     

Tolerance induction in immunologically intact adult rats with allogeneic spleen cell transfusion from dexamethasone-treated rats

Recentfindingssuggestthatneonatalsarenotspe-ciallypronetoimmunologicaltoleranceinduction,butequallycompetentintheinductionofaprimaryim-muneresponse,challengingthe"selfandnon-self"discriminationmodelinimmunerecognitionthathasbeenconsideredoverfortyyearsthetheoremofim-munesystem[1,2].Thus,themysterybehindthehightoleranceinductivityinneonatalsmaynotbeduetothedifferentquality,butalowquantityofimmunolog-icallycompetentcellsascomparedwiththoseinadults.Asaresult,theconsequenceofanimmunerecognition,be…     

门静脉注射供体脾细胞诱导免疫耐受机制的研究

目的：利用大鼠异心脏移植模型,探讨门静脉注射供体脾细胞诱导免疫耐受的机制。方法：受体鼠移植术前经门静脉注射供体脾细胞并联合短期应用环孢菌素A。采用MTT法检测术后受体鼠脾淋巴细胞白细胞介绍2（IL－2）产生水平及NK细胞活性,采用ELISA法检测受体鼠γ-干扰素（γ-IFN）表达水平。结果：门静脉注射供体脾细胞显著抑制受体脾淋巴细胞IL－2、γ-IFN的表达及NK细胞活性,联合应用环孢菌素A抑制效应更显著。结论：抑制IL-－NK－γ－IFN免疫网络功能可能是门静脉注射供体脾细胞诱导免疫耐受的机制之一。     

小剂量FK506作用下同种脾组织移植诱导大鼠原位肝移植术后免疫耐受的机制

目的:观察小剂量FK506作用下同种脾组织移植对大鼠肝移植术后免疫耐受的影响,探讨其可能的机制.方法:实验分5组(每组大鼠8只),同种肝移植组(A组)以纯系雄性Lewis大鼠为供体、雌性BN大鼠为受体进行同种原位肝移植;同种肝移植 小剂量FK506治疗组(B组)于肝移植术后口服途径给予小剂量FK506(0.25 mg/kg);同种肝脾联合移植组(C组)于肝移植同时移植供体脾脏;同种肝脾联合移植 小剂量FK506治疗组(D组)于肝脾联合移植后口服途径给予小剂量FK506;异体脾组织移植组(E组)于同种原位肝移植同时移植第三品系大鼠脾脏组织,术后进行小剂量FK506治疗.观察各组的存活期,并分析受体脾脏T淋巴细胞对同种抗原的反应性、嵌合体的形成情况以及肝脏病理变化.结果:与其他各组相比,C组大鼠的存活期明显延长;其受体T细胞同种抗原反应性明显降低;受体脾脏中供体阳性细胞明显升高(P＜0.01),且在60 d后受体脾脏中供体阳性细胞仍然较高;肝脏病理分析也未见明显排斥反应.结论:小剂量FK506作用下同种脾脏移植能明显诱导受体大鼠原位肝移植术后嵌合体的形成,降低受体T细胞对同种抗原的反应性,促进免疫耐受.     

用负载供体抗原的致耐受性树突状细胞延长大鼠移植肾存活

目的 研究负载供体抗原的致耐受性受体树突状细胞(Dendritic cells,DC)对移植肾存活的影响。方法 以BN、Lewis大鼠为肾移植供、受体;受体骨髓源性DC负载供体淋巴细胞抗原并与共刺激阻断剂CTLA4Ig共孵育;将上述DC于肾移植前24 h经股静脉注入受体(治疗组),未注射DC的受体为对照组;观察各组移植肾存活时间,术后第20天,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应。结果移植肾存活时间:与对照组相比,治疗组移植肾存活时间显著延长[(54.6±9.5)d vs(8.3±0.8)d,P<0.01]。术后第20天,治疗组脾细胞对供体抗原刺激的反应明显低于正常对照[(0.17±0.04)vs(0.74±0.06),P<0.01],而受体对无关抗原刺激的反应与正常对照无显著差异[(0.72±0.04)vs(0.69±0.07),P>0.05]。结论 负载供体抗原的致耐受性受体DC可以特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应、明显延长大鼠移植肾存活时间。     

Semi-mature MyD88-silenced bone marrow dendritic cells prolong the allograft survival in a rat model of intestinal transplantation

Background  Semi-mature dendritic cells (DCs) may induce tolerance rather than immunity. However, little is known about the regulatory mechanism by which these DCs induce transplant tolerance. Myeloid differentiation factor 88 (MyD88) is a key adaptor of Toll-like receptor signaling, which plays a critical role in DC maturation. Activation of MyD88-silenced immature DCs results in the generation of semi-mature DCs. We explored the possibility of using these DCs to induce intestinal transplant tolerance in rats.

Methods  MyD88 expression was silenced in bone marrow DCs (F344 rats) using small interfering RNAs for 24 hours, at which point, lipopolysaccharide (LPS) was added to the culture for another 48 hours. These cells were analyzed for their in vitro and in vivo tolerizing capacities.

Results  Semi-mature DCs expressing moderate levels of MHC class II and low levels of co-stimulatory molecules were found to produce interleukin (IL)-10, while IL-12 production was decreased. In vitro co-culture with completely allogeneic T cells from Wistar rats led to a significant decrease in alloreactive T-cell responses. In vivo, the transfer of semi-mature DCs (1×10⁶ cells) followed by the transplantation of fully mismatched intestinal grafts (F344 rats) led to significantly prolonged survival compared to rats receiving immature and mature DCs. Serum from semi-mature DC-treated rats contained lower concentrations of the pro-inflammatory cytokines IL-2 and interferon-γ 5 days after transplantation.

Conclusion  Semi-mature DCs may promote inducible allograft tolerance and this study suggests a new strategy by which to facilitate the induction of transplant tolerance.