人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及耐药机制研究

目的：建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP,探讨其耐药的机制。方法：采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导卵巢癌细胞系COC1,建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP;CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）检测各种抗癌药对COC1和COC1／DDP细胞增殖的抑制作用,并计算耐药指数;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）的水平;高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果：历时5个月建立COC1／DDP,对顺铂耐药性稳定,耐药指数为9．44;与COC1比较,COC1／DDP细胞内GSH的水平增高,顺铂含量下降（P〈0．01）。结论：入卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP耐药性稳定,耐药机制可能与GSH／GST-π解毒系统活性增强,减少细胞内顺铂含量有关。     

放疗对卵巢癌顺铂耐药细胞的影响

目的 探究放疗对卵巢癌顺铂(cisplatin, CDDP)耐药细胞耐药性的影响,并探讨相关机制。方法 取对数期卵巢癌SKOV3细胞株、SKOV3/CDDP耐药细胞株,二甲基噻唑(dimethythiazole, MTT)法检测SKOV3、SKOV3/CDDP对CDDP敏感性,以及放疗对SKOV3/CDDP的杀伤作用;取对数期SKOV3/CDDP耐药细胞株,采用0.5 Gy×4次低剂量分割放疗干预,设为低剂量分割放疗组,取不处理SKOV3/CDDP耐药细胞株为空白组,平板克隆实验测定2组的克隆形成能力;流式细胞术测定凋亡率;碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色测定细胞周期;Western blot检测细胞周期蛋白-D1(cyclin-D1)、骨髓细胞瘤病毒癌基因(cellular-myelocytomatosis viral oucogene, c-myc)、β-链蛋白(β-catenin)、p-β-catenin蛋白表达。结果 CDDP对SKOV3、SKOV3/CDDP细胞的半数抑制剂量(half inhibitory concentration, IC_...     

晚期卵巢癌顺铂腹腔内化疗的临床观察

目的：为了探索对对晚期卵巢癌理想的治疗方法。对４０例晚期卵巢癌患采用了单一顺铂腹腔内给药（１５例）及顺铂联合５－氟脲嘧啶腹腔给药（２５例）的方法进行治疗２￣４个疗程。结果：２５例完全缓解（占６３％）,１０例好转（占２５％）,５例恶化（１２％）,有铲率为８８％）。结论：（１）顺铂是卵巢癌化疗的有效药物;（２）腹腔内给药比静脉给药局部药物浓度高,全身反应轻,治疗效果好。     

人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及其耐药机制的研究

目的 通过建立人卵巢癌体外耐药模型，研究卵巢癌对顺铂的耐药机制。方法应用顺铂连续作用并逐步提高药量的递增压力选择法，从人卵巢腺癌细胞ＣＯＣ１中分离出对顺铂耐药的细胞亚株（ＣＯＣ１／ＤＤＰ），并比较耐药细胞和亲代细胞某些生物学特性差异。结果ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞对顺铂的耐药性是ＣＯＣ１的６．５倍，群体倍增时间较亲代细胞缩短了１２．９％。对卡铂和丝裂霉素Ｃ有不同程度的交叉耐药性，对阿霉素和５－氟尿嘧啶则保持敏感。并且耐药细胞内铂离子含量及ＤＮＡ链间交联指数均明显低于ＣＯＣ１细胞，但免疫细胞化学显示ＣＯＣ１及ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞内均无Ｐ糖蛋白表达。结论ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞对顺铂耐药的主要原因是细胞内药物浓度降低及ＤＮＡ链间交联形成减少，与Ｐ糖蛋白关系不大。     

促卵泡激素对顺铂诱导卵巢癌细胞株凋亡的保护作用

目的 探讨促卵泡激素(FSH)对顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的保护作用。方法 MTT比色法检测人卵巢上皮性癌细胞系OVCAR3转染FSH受体(OVCAR3-FSHR)细胞活性,流式细胞术分析细胞周期变化及细胞凋亡率。结果 促卵泡激素能降低顺铂对细胞生长的抑制作用,同时降低S期的比例和凋亡率。结论 促卵泡激素对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡有保护作用。     

卵巢癌顺铂耐药机制的研究进展

卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤之一,近几年卵巢癌的发病率有增高的趋势,据报道,美国2007年有22430例卵巢癌新发病例。由于卵巢癌发病隐匿和缺乏完善的早期诊断方法,约70％患者确诊时已为晚期（FIGO分期,Ⅲ期和Ⅳ期）,其死亡率居妇科恶性肿瘤的首位。在细胞减灭术的基础上施以以顺铂为主的联合化疗方案已成为卵巢癌的常规治疗方案。但由于卵巢癌患者对顺铂的原发性（primary drug resistance）和（或）获得性（acquired resistance）多药耐药（multiple drug resistance,MDR）的存在,     

高海拔地区吉西他滨联合顺铂治疗复发性卵巢癌的临床观察

目的:研究吉西他滨联合顺铂治疗复发性卵巢癌的疗效及毒性.方法:对32例复发性卵巢癌患者应用吉西他滨1 000mg/m2 ,第1天、第8天静注,联合顺铂75 mg/m2,分为第1天、第2天、第3天静注,每21天为1疗程.结果:32例患者有效率为53.1%.其中完全有效7例(21.8%),部分有效10例(31.3%),无进展生存期平均为3.5个月,毒副反应主要为白细胞减少,但均为可逆性.结论: 吉西他滨加顺铂是高海拔地区治疗复发性卵巢癌的有效方案,其毒副反应均可耐受.     

20例晚期卵巢癌顺铂联合化疗

卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤,尤其是晚期病人死亡率很高。因此,如何提高这些患者的疗效已成为当前妇科肿瘤治疗中的重要课题。近年不少报道用顺铂联合化疗治疗卵巢癌取得一定疗效。我们对20例晚期卵巢癌采用顺铂联合化疗,初步总结如下。     

抑制miR-23a表达增强卵巢癌顺铂敏感性的分子机制

目的分析抑制miR-23a表达后,耐药卵巢癌A2780细胞对化疗药物顺铂的敏感性变化及其分子机制。方法选择顺铂耐
药卵巢癌A2780细胞株为研究样本,并分为两组,其中对照组仅加入顺铂,实验组加入顺铂及antagomir-23a。应用MTT法检测
antagomir-23a抑制miR-23a并经顺铂处理后细胞增殖抑制率;应用流式细胞仪分析细胞周期分布情况;应用Hoechst33258染色
分析细胞凋亡形态学变化;应用Western blot法分析耐药糖蛋白P-gp的表达变化。结果抑制miR-23a并经顺铂处理后,细胞增
殖抑制率显著上升（P<0.01）,顺铂中效浓度（IC50）为17.89 μmol/L,比对照组IC50 110.18 μmol/L降低了83.76%（P<0.01）,细胞被
阻滞于G0/G1期且凋亡率增加（P<0.01）;Hoechst33258染色见细胞核浓缩、染色增强。Western blot检测提示细胞P-gp蛋白表
达随着顺铂浓度加大而逐渐减低（P<0.01）。结论抑制耐药卵巢癌A2780细胞内miR-23a表达后,细胞对顺铂的敏感性显著增
加,这可能miR-23a靶基因负性调控因素得以缓解,并由此引发P-gp蛋白表达受抑有关。
     

卵巢癌顺铂耐药细胞系的建立

目的 :建立人卵巢癌体外耐药模型 ,研究卵巢癌对顺铂的耐药特征。方法 :模仿临床卵巢癌化疗模型 ,采用中等浓度、间歇作用法 ,从人卵巢癌细胞株SKOV3培养出对顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP ;倒置显微镜下观察细胞形态 ;MTT法、单克隆形成法检测耐药细胞的耐药指数 ;流式细胞仪检测两种细胞的细胞周期分布。结果 :SKOV3/DDP细胞形态无明显改变 ;耐药指数用MTT法检测为 1 8,单克隆形成法检测为 8;SKOV3主要分布于G0 -G1期 ,SKOV3/DDP主要分布于S期及G2 -M期。结论 :中等剂量、间歇作用法可以诱导出卵巢癌细胞株SKOV3对顺铂耐药性。此项研究结果可为临床卵巢癌化疗方案的制定、复发癌二线化疗药物的选择提供理论依据     

染料木黄酮与顺铂联用对耐药卵巢癌细胞SKOV-3的影响

目的:探讨染料木黄酮与顺铂联用对耐药卵巢癌细胞系SKOV-3增殖与凋亡的影响. 方法:采用MTT比色法检测染料木黄酮和顺铂联用对SKOV-3细胞增殖的影响,Hoechst染色荧光显微镜下观察联合用药后细胞形态的改变,流式细胞仪分析细胞周期并检测凋亡率. 结果:联用不同浓度的染料木黄酮后顺铂对SKOV-3细胞IC50降低率为32.3%～79.8%,两药联合作用系数在0.586～0.869之间,为轻度至高度协同作用. 染料木黄酮与顺铂联用可显著提高凋亡率,两药联用诱导SKOV-3细胞凋亡和阻滞G2/M期、干扰S期进程,凋亡率与G1期细胞比例呈负相关(rs=-0.953, P<0.05). 结论: 染料木黄酮可以增强顺铂对SKOV-3细胞的增殖抑制作用和杀伤作用,两种药物具有协同作用. 染料木黄酮阻滞细胞于G2/M期并同时干扰S期进程可能是两药发挥协同作用的重要机制.     

粒细胞集落刺激因子对顺铂对卵巢癌细胞的细胞毒作用的影响

目的　了解粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ ＣＳＦ）对顺铂对卵巢癌细胞的细胞毒作用的影响;方法　采用ＸＴＴ 比色法检测不同浓度顺铂对卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３、３ＡＯ 细胞生长影响;以及５０ ｍｇ／Ｌ 顺铂分别与不同浓度Ｇ－ ＣＳＦ 共同使用对ＳＫＯＶ３、３ＡＯ细胞生长的影响。结果　５０ ｍｇ／Ｌ 顺铂单独使用和与不同浓度Ｇ－ ＣＳＦ 共同使用２４ ｈ 对ＳＫＯＶ３、３ＡＯ 细胞生长的影响无显著性差异。结论　Ｇ－ ＣＳＦ 对顺铂对ＳＫＯＶ３、３ＡＯ 细胞的细胞毒作用无显著影响。     

卵巢癌紫杉醇耐药的蛋白质组学研究

目的：研究与卵巢癌紫杉醇耐药相关的蛋白质。方法：应用双向凝胶电泳（2-DE）和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）寻找紫杉醇耐药细胞和敏感细胞的差异表达蛋白质。使用Western印迹技术对其中2个蛋白质进行验证。结果：通过对2组细胞总蛋白质双向凝胶电脉图谱进行分析,找到差异蛋白质点40个;通过质谱分析,24个蛋白质得到鉴定。这些蛋白质包括增殖细胞核抗原（PCNA）、nm23蛋白、prohibitin（PHB）分子伴侣蛋白、脂皮质素（annexin）、α-烯醇化酶（α-enolase）以及热休克蛋白（HSP）等。结论：通过蛋白质组学技术,发现了卵巢癌紫杉醇耐药细胞系和敏感细胞系之间差异表达蛋白质24个,这些差异蛋白质可能参与卵巢癌细胞紫杉醇耐药过程。     

miR-141-3p表达与卵巢癌细胞顺铂化疗敏感性的相关性研究

［摘要］ 目的 探讨miR-141-3p在卵巢癌细胞对顺铂耐药中的表达和作用。 方法 采用实时荧光定量PCR法检测A2780/DDP细胞中miR-141-3p的表达水平;下调/过表达miR-141-3p后,采用CCK-8法检测卵巢癌细胞对顺铂的增殖率并计算药物IC50;采用Western blot法检测增殖相关蛋白（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达水平。 结果 miR-141-3p在顺铂耐药的卵巢癌细胞株A2780/DDP中的表达显著高于顺铂敏感的卵巢癌细胞株A2780（P＜0.05）。与对照组比较,A2780细胞中过表达miR-141-3p后可显著增加细胞对顺铂的IC50,增殖相关蛋白PCNA表达亦增加（P＜0.05）。与对照组比较,A2780/DDP细胞中下调miR-141-3p表达后,细胞对顺铂的IC50显著下降,增殖相关蛋白PCNA表达下降（P＜0.05）。 结论 miR-141-3p在顺铂耐药卵巢癌细胞的耐药机制中表达增加,下调miR-141-3p可增加顺铂耐药的卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。     

Gab2在卵巢癌中的表达及其与铂类药物化疗耐药的相关性研究

目的 通过检测Gab2在卵巢癌中的表达,探讨其与卵巢癌铂类化疗耐药的相关性.方法 利用免疫组织化学及蛋白质印迹法(Western blotting)对该院妇产科2011年1月至2015年6月手术切除的107例患者浆液性卵巢癌组织、12例膀胱癌根治术中切除正常卵巢组织中Gab2的表达进行检测,分析Gab2表达与临床分期,以及与以铂类药物为基础的联合化疗疗效的相关性.结果 卵巢癌组织中Gab2表达水平明显高于正常卵巢组织,且与肿瘤的国际妇产科联盟(FIGO)临床分期有关,分期越晚表达越高,差异均有统计学意义(P<0.05);61例卵巢癌患者化疗敏感,46例发生耐药,化疗耐药患者Gab2表达水平明显高于化疗敏感者,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Gab2可能成为预测铂类药物化疗敏感性的有效指标之一.     

单细胞凝胶电泳评价顺铂致人卵巢癌细胞DNA损伤修复的实验研究

目的：采用单细胞凝胶电泳(彗星实验)研究顺铂致人类卵巢癌H08910细胞DNA的损伤及修复，为彗星实验应用于临床检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性奠定基础。方法细胞采用0．02 EC50、0．03 ECS0及O．05 EC50三种浓度顺铂处理1h，更换培养基后，继续培养3h、24h和48h进行彗星电泳实验。结果：顺铂处理后造成H08910细胞产生明显的DNA损伤，呈现不同彗尾长度的彗星。顺铂浓度增加，平均彗尾长度增加；一定顺铂浓度下，彗尾长度随培养时间的延长逐渐减小，较低浓度(0．02 EC50)处理的细胞在培养48h后彗尾长度可恢复至接近对照组的水平；在顺铂处理0．02 EC50浓度下随培养时间延长，彗星出现比率逐渐下降，而0．05 EC50浓度处理的细胞彗星比率则呈上升趋势。结论彗星实验检测DNA损伤及修复的敏感度较高，H08910细胞可修复一定浓度的顺铂引起的DNA损伤。     

米非司酮对卵巢癌细胞的增敏作用及其机制的研究

目的研究米非司酮对卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP的增敏作用及其作用机制。方法用卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP和敏感细胞系COC1为实验对象,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测米非司酮对COC1/DDP细胞的增敏作用,流式细胞仪检测米非司酮对凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。结果1.25μmol/L的米非司酮能够增强COC1/DDP对顺铂的敏感性,并使Bcl-2的阳性率从(23.80±0.44)%下降至(19.40±0.69)%(P=0.000),Bax从(12.75±0.25)%上升至(25.60±0.88)%(P=0.000),其逆转作用有剂量依赖性。结论米非司酮逆转卵巢癌COC1/DDP细胞对顺铂的耐药可能与下调Bcl-2的表达、上调Bax的表达、降低Bcl-2/Bax的比率有关。