脐血浆中硫化氢与羊水污染的相关性研究

目的 研究脐血浆中硫化氢(H2S)和羊水污染的相关性.方法 收集孕产妇脐血浆60份,根据分娩时羊水是否污染分为2组.用敏感硫电极检测脐血浆中硫离子的浓度,并换算出H2S的含量;免疫组织化学方法检测胎盘中胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)的表达程度.结果 羊水污染组中H2S含量高于羊水清组,差异有显著性.免疫组化显示:CSE表达于胎盘绒毛的细胞滋养层胞浆中,羊水污染组CSE呈现高表达.CBS在任何组中均未见有表达.结论 胎盘绒毛的细胞滋养层胞浆中含有CSE,不舍CBS;脐血浆中H2S由细胞滋养层细胞参与调控生成;孕产妇脐血浆中H2S与羊水污染有密切关系.     

糖尿病大鼠肾脏胱硫醚-β-合成酶和胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达初步研究

目的研究糖尿病大鼠肾脏内源性硫化氢(H2S)的两种合成酶胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase CSE)mRNA表达.方法采用腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病模型,大鼠随机分为两组:正常对照组(C组)和糖尿病组(D组).建模后第8周,测定24 h尿蛋白、血糖及肌酐清除率[1],应用RT-PCR技术检测大鼠肾皮质CBS、CSE mRNA表达.结果糖尿病组大鼠尿蛋白、血糖及肌酐清除率均较正常对照组明显升高(P＜0.05),但肾皮质CBS、CSE mRNA表达较正常对照组无显著性差异(P＞0.05).结论CBS、CSE/H2S系统不能通过两种合成酶mRNA水平的改变而参与糖尿病肾病中血流动力学紊乱发生,其作用通路中的其他环节改变是否参与糖尿病肾病的发生发展尚需进一步证实.     

人胎盘滋养层细胞表达白细胞介素-3

目的:确定脐血中高含量白细胞介素3(IL-3)的主要来源,进一步了解脐血造血微环境.方法:应用抗IL-3多克隆抗体对7例人工流产的绒毛标本和10例健康产妇足月分娩的胎盘组织及脐带标本进行免疫组织化学染色.结果:足月胎盘的滋养层细胞呈现阳性表达,绒毛标本的滋养层细胞未见阳性表达,在其他细胞和脐血管内皮细胞上未见阳性表达.结论:胎盘滋养层细胞是脐血和胎盘表面的IL-3的主要来源.滋养层细胞分泌这种细胞因子的功能是随着胚胎的发育而逐渐完善的.     

第三种气体信号分子硫化氢的神经保护作用研究进展

气体分子家族在人、大鼠等生物种属的体内(gaso-molecular family)主要包括一氧化氮(nitric oxide,NO)、一氧化碳(carbon monoxide,CO)以及硫化氢( hydrogen sulfide,H2S).按被发现的次序,H2S被称为是第三种气体信号分子.胱硫醚-β-合成酶(cytathiohine-β -synthase,CBS),胱硫醚-γ-裂解酶(cytathiohine-γ-lyase,CSE)及3-硫基丙酮酸硫基转移酶(3 -mercaptopyruvate sulfurtransferase,3-MST)可利用半胱氨酸生成H2S［１-3].CBS和CSE的分布呈组织特异性,CBS主要存在于中枢神经系统[1,4],而CSE则主要存在于心血管系统.在溶液中H2S分解为H+和HS-.     

气体信号分子硫化氢对心血管系统的调节作用

近期研究发现,硫化氢(H2S)为一种新型气体信号分子[1-3],它在体内持续产生,并且对多种病理生理过程发挥重要的调节作用. 一、内源性H2S的生成及代谢 内源性H2S在体内是由半胱氨酸作为底物,主要通过胱硫醚-β-古成酶(CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)催化生成.这两种酶在哺乳动物的组织和细胞中广泛分布[4],其中CBS主要分布在脑组织[5],而CSE在外周组织活性最高,主要包括肝、肾、心脏和血管[6].     

浒苔多糖对非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢及多器官H2S生成的影响

目的 探讨浒苔多糖(EP)对高脂饲料诱导非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂质代谢及多器官内源性硫化氢(H2S)生成的影响.方法 50只成年雌性SD大鼠随机分为5组,每组10只.空白对照组(Normal diet+H2O)、EP对照组[Normal diet+200 mg/(kg·bw·d)EP]、模型组(High-fat diet+ H2O)、EP干预组[High-fat diet+200 mg/(kg·bw·d)EP]、硫氢化钠组[High fat diet+56 μmol/(kg·bw·d)NaHS],持续干预35 d.比较各组大鼠体重、肝脏以及血脂、H2S、CSE、CBS的差异.结果 与模型组比较,EP可显著改善NAFLD大鼠肝细胞脂肪变,降低高脂饲料喂养大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平(P＜0.05),升高血清H2S水平(P＜0.05),增加多个脏器中胱硫醚-β-合成酶(CBS)/胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性(P＜0.05).Western blot分析显示,与模型组比较,EP干预后,NAFLD大鼠大脑中CBS和CSE蛋白表达水平、脾脏和肝脏中CBS蛋白表达水平、心脏和肾脏中CSE蛋白表达水平增高(P＜0.05).结论 EP可能通过促进大鼠多器官生成内源性H2S,改善脂质代谢.     

CSEsiRNA对EAhy926细胞的CSE及H2S的表达影响

目的观察胱硫醚γ裂解酶(CSE)siRNA转染人脐静脉内皮EAhy926细胞后CSE的表达及对H2S的影响。方法体外培养EAhy926细胞,经siRNA转染以沉默CSE基因表达,分为5组进行培养:正常对照组(A组):只加入转染试剂;阴性对照组(B组):转染Neg-siRNA;转染CSEsiRNA1组(C组);转染CSEsiRNA2组(D组);转染CSEsiRNA3组(E组)。采用Lipofectamine 2000介导转染EAhy926细胞,在荧光显微镜下观察细胞以检测转染效率;Western blot法检测CSE蛋白表达;收集细胞检测H2S含量。结果观察转染效率为60%左右;A组CSE蛋白表达为(153.41±23.43),B组24 h CSE蛋白表达为(150.22±17.56),而D组24 h CSE蛋白表达降至(59.43±21.81),差异有统计学意义(P<0.01);并且A组H2S含量为(0.96±0.05),B组24 h H2S含量为(0.95±0.06),D组24 h H2S含量降至(0.54±0.08),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CSE-siRNA能够有效地抑制EAhy926中CSE的表达,并且CSE-siRNA2沉默作用最强。     

The effects of CSEsiRNA on the expression of CSE and H2 S in EAhy926 cells

目的 观察胱硫醚γ裂解酶(CSE)siRNA转染人脐静脉内皮EAhy926细胞后CSE的表达及对H2S的影响.方法 体外培养EAhy926细胞,经siRNA转染以沉默CSE基因表达,分为5组进行培养:正常对照组(A组):只加入转染试剂;阴性对照组(B组):转染Neg-siRNA;转染CSEsiRNA1组(C组);转染CSEsiRNA2组(D组);转染CSEsiRNA3组(E组).采用Lipofectamine 2000介导转染EAhy926细胞,在荧光显微镜下观察细胞以检测转染效率;Western blot法检测CSE蛋白表达;收集细胞检测H2S含量.结果 观察转染效率为60%左右;A组CSE蛋白表达为(153.41±23.43),B组24 h CSE蛋白表达为(150.22±17.56),而D组24 h CSE蛋白表达降至(59.43±21.81),差异有统计学意义(P<0.01);并且A组H2S含量为(0.96±0.05),B组24 h H2S含量为(0.95±0.06),D组24 h H2S含量降至(0.54±0.08),差异有统计学意义(P<0.01).结论 CSEsiRNA能够有效地抑制EAhy926中CSE的表达,并且CSEsiRNA2沉默作用最强.     

胰岛素样生长因子1对PC12细胞胱硫醚-β-合成酶和硫化氢的影响及机制

\[摘要\]目的观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)胱硫醚-β-合成酶(CBS)及硫化氢(H2S)表达的影响以及可能的细胞信号通路机制。方法用不同剂量IGF-1(20、 40、80 ng/ml)作用体外培养的PC12细胞24 h,荧光定量PCR检测CBS基因表达,蛋白质印迹分析检测CBS、细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)相关蛋白表达,敏感硫电极法检测H2S气体含量。之后选取最佳剂量的IGF-1(80 ng/ml) 作用于30 min前已加入ERK/MAPK抑制剂PD98059的PC12细胞再次检测CBS、ERK/MAPK相关蛋白及H2S气体表达水平。结果IGF-1增加CBS的表达和H2S的含量,上调pERK1/2的表达;而PD98059能够抑制IGF-1的上述作用。结论IGF-1及其调控的ERK/MAPK信号通路参与调节CBS及H2S的表达。     

内源性硫化氢在糖尿病大鼠肾脏的变化及作用（英文）

新型内源性气体信号分子-硫化氢(内源性H_2S)具有类似氧化亚氮(nitric oxide,NO)的某些特征,如松弛血管、抑制血管平滑肌细胞增生、调节血管平滑肌细胞张力等作用。本系列研究观察了糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏内源性H2S的变化以及与H2S合成酶-半胱氨酸胱硫醚2β2合成酶(cystathionine 2β2 synthase,CBS)、胱硫醚2γ2裂解酶(cystathionine 2γ2 lyase,CSE)的关系,对DN大鼠肾脏病理改变的影响,对成肌纤维细胞特征性标志物-a平滑肌肌动蛋白(asmooth muscle actin,α-SMA)和细胞外基质成分-纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)在大鼠肾组织分布和表达的影响,来探讨内源性H_2S在糖尿病肾病发病机制中的作用。结果显示:①DN大鼠内源性H_2S量明显减少,肾脏CSE的表达亦明显减少。②内源性H_2S的减少与DN大鼠临床表现和肾脏病理改变密切相关。③DN组大鼠肾组织中α-SMA和肾小球基质中FN均增加,分布增多,补充外源性H_2S后,α-SMA和FN明显下降。DN大鼠肾脏内源性H_2S降低。肾脏CSE的减少可能是导致DN大鼠肾脏内源性H_22S降低的直接因素。外源性补充H_2S可抑制糖尿病肾病大鼠肾脏中成肌纤维细胞的生成和细胞外基质的过度积聚。提示,内源性H_2S的减少与糖尿病肾病的发生有关。     

硫化氢及其合成酶在膀胱癌细胞株中的表达及其作用

目的：探讨正常膀胱和膀胱癌细胞株中硫化氢（H₂S）及其合成酶胱硫醚β合成酶（CBS）和胱硫醚γ裂解酶（CSE）的表达,阐明其在膀胱癌发生发展中的作用。方法：选取膀胱癌5637、T24、EJ、UM-UC-3细胞株和人膀胱永生化上皮SV-HUC-1细胞株,Western blotting检测CBS和CSE蛋白酶表达水平,敏感硫电极法检测H₂S产率;选取EJ细胞株进行药物处理,实验分组为,① 10 μmol·L^-1硫酸氢钠（NaHS）组、50 μmol·L^-1NaHS组、100 μmol·L^-1NaHS组和对照组,MTT法检测24和48 h细胞生存率;②顺铂组（5 μg·L^-1）、顺铂（5 μg·L^-1）+NaHS（100 μmol·L^-1）组,另设无药物处理为对照组,药物处理48 h,MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖活性和凋亡率。结果：与SV-HUC-1细胞株比较,膀胱癌5637、T24、EJ和UM-UC-3细胞中CBS和CSE表达及H₂S产率均明显增加（P<0.05或P<0.01）;外源性H₂S可促进EJ细胞增殖,细胞增殖活性随药物剂量增加而升高（P<0.05）,且随着药物作用时间的延长而增加（P<0.05）。与顺铂组比较,顺铂联合NaHS组细胞增殖活性明显升高（P<0.05）,细胞凋亡率明显下降（P<0.05）。结论：H₂S及其合成酶CBS和CSE在膀胱癌细胞株中有表达且高于膀胱正常上皮细胞,H₂S促进膀胱癌细胞增殖并降低顺铂的促细胞凋亡作用。     

外源性硫化氢通过抑制阴茎海绵体平滑肌细胞凋亡改善海绵体神经损伤大鼠勃起功能障碍

目的 观察外源性硫化氢对双侧海绵体神经损伤（BCNI）大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞（CCSMC）凋亡及勃起功能障碍的影响。方法 将24只SD雄性大鼠随机分为3组（n=8只/组）：假手术组、双侧海绵体神经损伤组（BCNI组）、硫化氢干预组（BCNI+NaHS组）。通过钳夹损伤双侧海绵体神经构建BCNI模型。BCNI+NaHS组每天腹腔注射100 μmol/kg的NaHS溶液;BCNI组每日腹腔注射等量生理盐水。治疗4周后检测海绵体内压（ICP）和平均动脉压（MAP）,并通过Western blot检测胱硫醚-β-合成酶（CBS）和胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）,α-SMA,Collagen-Ⅰ,Caspase-3、Bax、Bcl-2表达水平,通过免疫组化检测CBS、CSE表达情况,Masson’s Trichrome染色检测海绵体平滑肌/胶原比值,以及 TUNEL+α-SMA组织免疫荧光双染检测CCSMC凋亡水平。结果 治疗4周后,BCNI+NaHS组ICP/MAP比值高于BCNI组（P<0.05）;Masson’s Trichrome染色结果显示,BCNI+NaHS组海绵体平滑肌/胶原比值较 BCNI 组显著升高（P<0.05）;Western blot 结果显示 BCNI+NaHS 组α-SMA 蛋白表达高于 BCNI 组（P<0.05）,同时 Collagen-Ⅰ蛋白表达低于 BCNI组（P<0.05）;TUNEL+α-SMA组织免疫荧光双染结果显示,BCNI+NaHS组CCSMC凋亡数较BCNI组降低（P<0.05）。与BCNI组相比,BCNI+NaHS组Caspase-3、Bax蛋白表达降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值升高（P<0.05）。BCNI组CBS、CSE表达较其余两组显著降低（P<0.05）。结论 外源性硫化氢可提高经典的抗凋亡蛋白Bcl-2及抑制CCSMC凋亡,进而改善BCNI大鼠勃起功能。     

FABP7在小鼠胎盘组织及人滋养层细胞HTR-8/Svneo中的表达

目的 探讨FABP7在正常妊娠小鼠胎盘组织及HTR-8/Svneo细胞中的表达.方法 用Realtime-PCR及原位杂交的方法检测Fabp7 mRNA在妊娠小鼠7.5～10.5 d和14.5、18.5 d子宫和胎盘组织中的表达,用冰冻切片免疫荧光的方法检测FABP7蛋白的表达.培养HTR-8/Svneo细胞系,用细胞免疫荧光方法检测FABP7蛋白表达.17β-雌二醇(E2)、孕酮(P4)和E2+P4分别处理小鼠6h和24h后,用Realtime-PCR的方法检测小鼠子宫组织中Fabp7 mRNA的表达.结果 Fabp7 mRNA在妊娠小鼠7.5～10.5 d子宫及胎盘组织中均有表达,FABP7蛋白在妊娠小鼠子宫组织蜕膜化细胞及胎盘部位滋养层巨细胞核中有表达;在HTR-8/Svneo细胞中可以检测到mRNA和细胞核中蛋白的表达.P4和E2+P4联合处理6h及24 h后,nbp7mRNA在小鼠子宫组织中的表达上调(P＜0.05),而E2处理6h后Fabp7 mRNA表达变化不明显,但24 h后其表达上调(P＜0.05).结论 FABP7在妊娠小鼠子宫蜕膜化细胞、滋养层巨细胞及HTR-8/Svneo细胞中有表达,说明其参与胎盘发育过程,与妊娠的维持有关,且在子宫中的表达量受E2、P4激素的调节.     

体外受精-胚胎移植对早期胎盘黏着斑激酶信号通路的影响

目的:研究辅助生殖中体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)技术对早期胎盘滋养层细胞黏着斑激酶(focal adhension kinase,FAK)信号通路基因表达的影响,探讨IVF-ET技术对早期胎盘发育和功能的影响。方法:收集IVF-ET来源的于7~8周经超声引导下减胎获得的胎盘绒毛组织作为研究组,对照组采用自然妊娠双胎7~8周人工流产术中获得的胎盘绒毛组织。利用美国Affymetrix HG-U133 Plus 2.0基因芯片对两组胎盘绒毛组织进行芯片杂交分析,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)验证其中8个差异表达基因,选取差异表达基因进行无监督聚类分析和生物信息学分析。结果:获得4例IVF-ET减胎绒毛组织和4例自然妊娠人工流产绒毛组织进行基因芯片检测。与自然妊娠组相比,IVF-ET组FAK信号通路中有32个基因差异表达,差异表达倍数≥2,其中12个基因上调,20个基因下调。经qRT-PCR验证,IVF-ET与自然妊娠早期胎盘绒毛中的8个FAK信号通路基因表达确实存在差异,与基因芯片检测结果一致。FAK信号通路基因定位显示,IVF-ET来源胎盘绒毛组织FAK信号通路上游基因表达受到影响,胎盘滋养层细胞通过基因表达代偿维持FAK信号通路功能基本正常。结论:IVF-ET来源和自然妊娠来源的早期胎盘FAK信号通路存在基因表达差异,差异表达基因涉及多种FAK信号通路关键功能,影响IVF-ET胎盘绒毛早期发育和功能,同时胎盘滋养层细胞通过改变相关基因表达来代偿IVF-ET技术本身的干扰,以维持FAK信号通路正常功能,满足胎盘绒毛和胎儿发育需要。     

特发性胎儿生长受限中TLR2和TNF-α的表达及意义

目的:探讨特发性胎儿生长受限(IFGR)胎盘组织中Toll样受体2(TLR2)和母血、脐血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的意义.方法:选取郑州大学第三附属医院2009年10月至2010年8月剖宫产分娩的IFGR孕妇30例为实验组,同期因社会因素剖宫产分娩的正常足月孕妇30例为对照组.免疫组化法检测两组胎盘组织TLR2...     

Biphasic regulation of hydrogen sulfide in inflammation

Hydrogen sulfide (H2S),which was formerly recognized as a colorless,toxic gas,was recently reported to be a novel gasotransmitter.Cystathionine β-synthase (CBS) and cystathionine γ-lyase (CSE) are the two main H2S-generating enzymes characterized by tissue-specific expression.CSE is predominantly located in the heart.1 Like its two cousins nitric oxide (NO) and carbon monoxide (CO),H2S is a simple inorganic molecule with similar properties,such as rapid diffusion and a short life span.H2S is involved in the multi functional regulation of vasodilation,inflammation,cellular cycle,ischemia/reperfusion,oxidative stress and neuromodulation.Duet al firstly described H2S as a messenger molecule in cardiovascular system.Meanwhile,the role of H2S in inflammation has attracted growing interest in recent years as a large number of experiments have been performed to identify its effect in different animal models with multi-target approaches.Further studies have explored the molecular mechanism of action for H2S including the reaction with disulfide groups and metal ions in proteins to regulate enzymatic functions3 and the interplay between H2S and NO.4,5 To date,DL-propargylglycine (PAG) and NaHS are the two principal chemical entities used in related investigations.PAG,an irreversible inhibitor of the H2S-synthesizing enzyme CSE,is permeable to biomembrane and inhibits CSE activity by blocking substrate cysteine from binding to the active site.NaHS produces H2S in vivo and serves as exogenous H2S donor.     

米索前列醇用于中、晚期妊娠引产对胎盘的影响

为了评价米索前列醇阴道给药用于中、晚期妊娠（简称中孕及晚孕）促宫颈成熟及引产对胎儿的安全性,采用随机双育法,比较试验组与对照组（晚孕对照组用安慰剂,中孕对照组用利凡诺）终止妊娠后胎盘大体解剖、光镜结构变化,观察米索前列醇用于晚孕促宫颈成熟及引产对胎盘结构的影响;同时也观察比较米索前列醇和利凡诺终止中孕时对胎盘结构的影响。结果表明,米索前列醇能较快地促进宫颈成熟并在短时间促发临产,也可较快地致中孕引产而分娩有生机儿。所娩出胎盘胎膜完整,胎盘组织无明显出血灶。光镜观察,该药不致绒毛水肿、滋养细胞及蜕膜组织变性坏死,绒毛无明显结节形成细胞出芽。但见绒毛干及绒毛血管不同程度扩张、绒毛膜板有不同程度炎性细胞浸润,此种改变属正常生理反应及（或）良性药理效应.不影响胎盘生理功能,对胎儿是安全的。     

胰岛素抵抗大鼠硫化氢/胱硫醚γ-裂解酶体系的实验观察

目的：探讨硫化氢/胱硫醚γ-裂解酶(H2S/CSE)体系在胰岛素抵抗大鼠体内的变化,与高血压和胰岛素抵抗状态的关系。方法:随机将雄性健康Wistar大鼠30只分为正常对照组(NC组)、胰岛素抵抗对照组(IR组)、胰岛素抵抗加外源性H2S供体NaHS组(NaHS组)，每组各10只。IR组及NaHS组给予高糖饲料喂养6周建立代谢综合征模型，NC组给予普通饲料喂养。成模后NaHS组每日腹腔注射NaHS(56μmol／kg)，IR组及NC组腹腔注射同等剂量生理盐水，继续喂养6周后，检测其体重、血压、血脂、血糖、血胰岛素，血浆H2S水平和胸主动脉CSE mRNA转录水平, 计算胰岛素敏感指数。结果：IR组及NaHS组体重、血脂、血压、血胰岛素显著高于NC组(P＜0.01), 胰岛素敏感指数显著低于NC组(P＜0.01), CSE mRNA 转录水平及H2S水平均低于NC组大鼠(P＜0.01)。NaHS组CSE mRNA转录水平(P＜0.05)及H2S水平(P＜0.01)均高于IR组, 血压显著低于IR对照组(P＜0.01)，但体重、血脂、血压、血糖、血胰岛素、胰岛素敏感指数与IR组无显著差异。结论：胰岛素抵抗大鼠硫化氢/胱硫醚γ-裂解酶体系受到抑制，是其高血压形成的重要因素，外源性给予H2S有助于缓解高血压，但对于胰岛素敏感性无明显改善作用。     

Immunohistochemical study of substance P receptor (SPR) in early human placenta

SP,oneoftheneuropeptidesthatwerediscoveredearliest,playsanimportantroleinregulatingbloodcirculation[lj.PreviousstudieshavefoundthathumanplacentalvilliarecapableofexpressingSPandSP--mRNA,suggestingthathumanplacentacansynthesizeSP[ZJ.WeconductthisexperimentofSPreceptorlocalizationinplacentalvillitoinvestigatewhetherSP--targetingcellsexistintheplacentas,andtoprovidefurthermorphologicalevidenceforthefunctionalsignificanceofSPinplacentalandfetaldevelopment.MATERIALSANDMETHODSReagents…