咪喹莫特对小鼠哮喘模型气道炎症和STAT6表达的影响

目的：观察咪喹莫特对小鼠哮喘模型气道炎症和肺组织信号转导与转录激活因子1（STAT1）和STAT6表达的影响．方法：建立哮喘模型，自14d时雾化吸入OVA前0．5h，干预组分别雾化吸入咪喹莫特30min及ip地塞米松．OVA雾化结束后24h取左上叶肺组织做HE染色观察肺组织炎症改变；收集肺泡灌洗液进行细胞计数和分类；用免疫组化和West blot方法检测肺组织STAT1和STAT6的表达；用逆转录-聚合酶链反应半定量检测肺组织STAT1，STAT6，IL-4，eotaxin和IFN-1 mRNA表达水平．结果：①HE染色示地塞米松组和咪喹莫特组小鼠肺组织炎症程度较哮喘小鼠减轻．②哮喘组小鼠BALF中细胞总数及各种炎症细胞较正常组显著增加，咪喹莫特治疗组嗜酸性粒细胞、淋巴细胞比哮喘组明显减少（P〈0．01）．③STAT1和STAT6均在气道上皮细胞表达，哮喘组肺组织STAT1和STAT6表达较正常组增强，咪喹莫特组STAT1表达与哮喘组无明显区别，较正常组增加．④哮喘组小鼠肺组织STAT1，STAT6，eotaxin，IL-4 mRNA表达较正常组增强（P〈0．01），IFN-γ mRNA表达减少，咪喹莫特组STAT1 mRNA表达与哮喘组无明显区别，STAT6，eotaxin和IL-4 mRNA的表达较哮喘组降低，较正常组增加，IFN-γ mRNA表达较哮喘组增加，但低于正常组．结论：雾化吸入咪喹莫特可在一定程度上减轻哮喘小鼠的气道炎症，抑制肺组织STAT6蛋白和mRNA的过度表达．     

三氧化二砷对实验性小鼠支气管哮喘气道重塑及TGF-β1、VEGF表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对支气管哮喘气道重塑的影响。方法将实验BALB/c小鼠40只随机分为正常对照组、模型组、地塞米松治疗组和As2O3治疗组,模型组通过腹腔注射卵白蛋白(OVA)致敏及反复雾化OVA吸入激发8周,建立支气管哮喘气道重塑动物模型,地塞米松和As2O3治疗组每次雾化吸入前分别给予地塞米松2 mg/kg和As2O34 mg/kg腹腔内注射。应用HE染色,观察支气管、肺组织的病理形态改变,应用图像分析系统测定气道重塑指标,应用免疫组化法检测各组小鼠肺组织中的转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组肺组织中的TGF-β1和VEGF mRNA表达水平。结果模型组小鼠经过8周过敏原激发后,肺组织病理学发生了较典型的哮喘样改变;地塞米松组和As2O3组小鼠的肺部组织病理学改变较模型组为轻,两组之间无显著差异。模型组小鼠肺组织中TGF-β1、VEGF的蛋白和mRNA表达均增强;与模型组相比,地塞米松组和As2O3组肺组织中TGF-β1、VEGF的蛋白和mRNA的表达均较弱,但仍强于正常对照组。结论致敏后给予8周过敏原激发可成功建立小鼠哮喘气道重塑模型;地塞米松和As2O3治疗均可抑制哮喘的气道重塑过程,其作用机制可能与抑制TGF-β1、VEGF的表达有关。     

组蛋白去甲基化酶KDM2A在支气管哮喘大鼠气道炎症和气道重塑中的作用

目的 研究组蛋白去甲基化酶—赖氨酸特异性的去甲基化酶2A(KDM2A)在支气管哮喘大鼠气道炎症及气道重塑中的作用。方法 通过腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)致敏雾化激发哮喘大鼠模型。将18只6～8周龄SPF级SD雌性大鼠随机分为3组：对照组、哮喘4周组、哮喘8周组。哮喘模型成功后,通过HE染色观察肺组织气管及血管周围炎性细胞浸润;PAS染色观察杯状细胞增生及黏液分泌;Masson染色观察气道壁纤维化;荧光免疫组织化学法观察气道平滑肌增殖情况;Western blot法检测KDM2A蛋白表达水平。结果 哮喘4周组、哮喘8周组大鼠炎症评分、炎症细胞计数均高于对照组(P<0.01)。与对照组相比,哮喘组气道上皮中杯状细胞增生和黏液分泌、肺组织中胶原纤维沉积及气道平滑肌细胞增生均增加(P<0.01),随着OVA致敏时间延长,哮喘8周组较哮喘4周组气道炎症及气道重塑改变更严重。Western blot结果显示,哮喘4周组、哮喘8周组大鼠肺组织KDM2A表达高于对照组,哮喘8周组KDM2A表达亦高于哮喘4周组,差异均有统计学意义(P<0.01);各组大鼠肺组织KDM2A蛋白表达与气道...     

地塞米松对哮喘小鼠气道血管生成及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨地塞米松对哮喘小鼠气道血管生成及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法用鸡卵清蛋白(OVA)致敏和雾化激发建立慢性哮喘小鼠模型,实验分为对照组、哮喘组和地塞米松组。测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞和嗜酸粒细胞(EOS)及活性VEGF表达的变化;行HE染色及VEGF、抗Ⅷ因子免疫组化染色,在显微镜下计数气管黏膜固有层、黏膜下层血管密度,采用医学图像分析软件测定支气管管壁厚度(WAt/Pbm)及肺组织切片中的血管数。结果哮喘组EOS计数明显升高,气管血管密度、WAt/Pbm及肺组织切片中的血管数明显增加,与VEGF的表达呈正相关。地塞米松组与哮喘组比较炎性反应减轻,气管血管密度、WAt/Pbm及肺组织切片中的血管数减少,VEGF表达减弱,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 VEGF在哮喘小鼠模型气道及肺组织内过度表达,在气道血管生成过程中可能具有重要作用。早期地塞米松干预可降低哮喘模型的气道炎症,减缓气道血管生成的过程。     

咪喹莫特治疗哮喘作用机制的实验研究

目的：观察咪喹莫特对小鼠哮喘模型气道炎症和肺组织n2型胸腺和活化调节趋化因子（thymus and activation regulated chemokine，TARC）和其受体CCR4表达的影响。方法：建立哮喘模型．自第14天雾化吸入OVA前0．5h．干预组分别雾化吸入咪喹莫特30min及腹腔注射地塞米松。OVA雾化结束后24h，每组小鼠眼球摘除采血收集血清，采用酶联免疫吸附法测定血清中TARC水平；收集肺泡灌洗液进行细胞计数和分类；HE染色观察肺组织炎症改变；用免疫组化方法检测肺组织CCR4和TARC的表达；用逆转录．聚合酶链反应半定量检测肺组织IL-4、IFN-γ、CCR4和TARC mRNA表达水平。结果：①哮喘小鼠HE染色可见气道上皮不完整，黏膜下有大量的炎细胞浸润，以淋巴细胞为主。地塞米松组和咪喹莫特组炎症程度减轻。②哮喘组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及各种炎症细胞较正常组显著增加。眯喹莫特治疗组的嗜酸性粒细胞、单核细胞租淋巴细胞比哮喘组明显减少。③哮喘组小鼠血清TARC水平较正常组升高，咪喹莫特治疗组小鼠血TARC水平较哮喘组降低，与正常组比较差异无显著性。④CR4和TARC均在气道上皮细胞表达．咪喹莫特和地塞米松治疗组能减少CCR4和TARC的表达。⑤哮喘组小鼠肺组织IL-4、CCR4和TARC mRNA表达较正常组增强。咪喹莫特和地塞米松治疗组小鼠肺组织IL-4、CCR4和TARCmRNA表达较哮喘组降低，比正常组表达增加。结论：雾化吸入咪喹莫特可在一定程度上减轻哮喘小鼠的气道炎症。抑制肺组织CCR4和TARC蛋白和mRNA的过度表达。     

薄荷醇下调肺组织P物质改善哮喘气道炎症及气道高反应性的研究

目的 探讨雾化吸入薄荷醇对哮喘小鼠气道炎症及气道高反应性的作用及其对肺组织P物质(substance P,SP)含量的影响.方法 按随机数字表法将30只6～8周龄BALB/c雌鼠分为对照组、哮喘组及薄荷醇治疗组,哮喘组和薄荷醇治疗组用鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏激发建立哮喘模型,薄荷醇治疗组于每次雾化激发前给予1.6％薄荷醇溶液5 mL雾化吸人30 min,连续10 d,对照组用PBS替代.于末次雾化24 h内行肺功能检测小鼠气道高反应性;48 h内灌取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)计数细胞总数及细胞分类;肺组织HE染色观察肺部病理改变;ELISA检测血清总免疫球蛋白E(IgE)水平及肺匀浆SP含量;免疫组化染色检测肺组织SP的表达.结果 哮喘组气道高反应性明显高于对照组(P＜0.05),而薄荷醇治疗组较哮喘组显著降低(P＜0.05);哮喘组BALF细胞总数及嗜酸性粒细胞绝对计数均较对照组明显增加(P＜0.01),薄荷醇治疗组较哮喘组显著减少(P＜0.01);HE染色显示,哮喘组支气管和血管周围炎症细胞浸润明显,薄荷醇治疗组较哮喘组明显减轻;ELISA结果显示,哮喘组血清总IgE水平及肺匀浆SP含量均较对照组升高(P＜0.01),薄荷醇治疗组较哮喘组减轻(P＜0.05);免疫组化染色结果显示,哮喘组肺组织SP在气道上皮细胞及血管周围强阳性表达,薄荷醇治疗组中度阳性表达.结论 雾化吸入薄荷醇能减轻哮喘小鼠气道炎症及降低气道高反应性,可能与减少SP含量进而减轻肺部神经源性炎症相关.     

布地奈德对哮喘气道重塑大鼠骨桥蛋白和mRNA表达的影响

目的探讨布地奈德对气道重塑模型大鼠肺组织骨桥蛋白(OPN)表达的影响及其在哮喘气道重塑中的作用。方法大鼠于第1天和第8天腹腔注射卵清蛋白(OVA)/AI(OH)3,第15天起雾化吸入OVA激发,隔天1次,制备哮喘气道重塑幼年大鼠模型。布地奈德组在雾化吸入OVA前30 min,给予雾化布地奈德混悬液(2ml:1mg)。正常对照组以生理盐水代替OVA。运用彩色医学图像分析系统测量大鼠支气管壁总面积和平滑肌面积,计算平滑肌厚度(Wam)和支气管壁厚度(Wat),通过反转录-聚合酶链(RT-PCR)测定各组大鼠肺组织中OPN的mRNA,运用免疫组化法测定各组大鼠OPN蛋白的表达,并对Wat、Wam与OPN的蛋白和mRNA表达进行相关性分析。结果哮喘组Wat及Wam显著高于对照组,布地奈德组较哮喘组显著降低(P均<0.01)。免疫组化检测结果提示,布地奈德组OPN蛋白的表达高于正常对照组,但显著低于哮喘组,差异具有统计学意义(P均<0.01)。RT-PCR检测结果显示,哮喘组OPN mRNA表达均高于正常对照组,布地奈德组组较哮喘组显著减弱,差异具有统计学意义(P均<0.01)。肺组织中Wat、Wam与OPN的蛋白、mRNA表达均呈正相关。结论布地奈德能显著抑制哮喘大鼠OPN的表达,缓解气道重塑。     

银杏叶提取物对哮喘小鼠气道重塑的影响及机制

目的:探讨哮喘小鼠气道重塑与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的关系以及银杏叶的干预作用.方法:建立哮喘小鼠气道重塑模型,40只BALB/c小鼠按随机数字法分为4组:对照组,哮喘组,银杏叶干预组,地塞米松干预组.以鸡卵清蛋白(OVA)致敏并激发制备小鼠慢性哮喘模型.对肺组织切片行苏木精-伊红染色观察气道重塑情况.RT-PCR检测各组小鼠肺组织MMP-9 mRNA表达.结果:哮喘组动物出现管壁增厚、平滑肌增生、黏液分泌增加等气道重塑的特征性改变,MMP-9 mRNA水平增高.地塞米松干预组和银杏叶干预组与哮喘组比较,炎症反应轻微,平滑肌增生、粘液分泌不明显,MMP-9 mRNA水平表达降低,与对照组比较差异有统计学意义.结论:长期吸入变应原可导致气道重塑,MMP-9在气道重塑中发挥了作用,银杏叶的干预作用说明在血小板活化因子(PAF)和MMP-9之间可能存在某种联系.     

地塞米松对致敏性哮喘小鼠肺组织CCR3和Eotaxin表达的影响

目的观察地塞米松对小鼠哮喘模型气道炎症和肺组织CC型趋化因子Eotaxin和受体CCR3表达的影响.方法建立哮喘模型,自第14天雾化吸入OVA前0.5 h,干预组分别雾化吸入咪喹莫特30 min及ip地塞米松.OVA雾化结束后24 h,每组小鼠眼球摘除采血收集血清.采用酶联免疫吸附法测定血清、支气管肺泡灌洗液及肺组织匀浆中Eotaxin水平:收集肺泡灌洗液进行细胞计数和分类;H-E染色观察肺组织炎症改变;用免疫组化方法检测肺组织Eotaxin和CCR3的表达;用Western blot方法测定肺组织CCR3表达;用逆转录-聚合酶链反应半定量检测肺组织IL-4、IFN-γ、Eotaxin、和CCR3 mRNA表达水平.结果H-E染色可见地塞米松组小鼠气道炎症程度减轻;地塞米松治疗组嗜酸性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞比哮喘组明显减少;哮喘组小鼠血清和肺组织匀浆Eotaxin水平较正常组升高,地塞米松治疗组小鼠较哮喘组下降;Eotaxin、CCR3均在气道上皮细胞表达,哮喘组小鼠气道上皮细胞Eotaxin、CCR3较正常组增加,地塞米松治疗组较哮喘组减轻;哮喘组小鼠肺组织Eotaxin CCR3和IL-4 mRNA表达较正常组增强,地塞米松治疗组小鼠肺组织Eotaxin、CCR3和IL-4 mRNA表达较哮喘组降低.结论地塞米松减轻哮喘小鼠的气道炎症与抑制哮喘小鼠肺组织Eotaxin、CCR3蛋白和mRNA的过度表达有关.     

斯钙素-1改善哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的机制

目的探讨斯钙素-1(STC-1)减轻哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的机制。方法采用腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)与氢氧化铝凝胶[Al(OH)3]的混合物致敏、OVA雾化激发成功诱导构建哮喘小鼠模型。随机将40只雌性C57BL/6J小鼠分为正常对照组、哮喘组、哮喘+低剂量重组人斯钙素-1(rhSTC-1,1.25μg/L)组、哮喘+高剂量rhSTC-1(5.0μg/L)组和哮喘+地塞米松(5 mg/kg)组。收集右肺支气管肺泡灌洗液(BALF)检测炎性细胞分类及计数,左肺进行HE染色和Masson染色观察肺组织病理改变、气道重塑变化,右肺行Western blot、免疫组化检测STC-1、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化NF-κB p65(p-p65)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,qPCR检测STC-1、NF-κB p65、α-SMA mRNA表达。结果与正常对照组比较,哮喘组BALF中的白细胞(WBC)总数、嗜酸性粒细胞数(EOS)以及中性粒细胞数(NEU)均升高,肺组织STC-1、NF-κB p65、p-p65、α-SMA蛋白表达升高,STC-1、NF-κB p65、α-SMA mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P均0.05)。与哮喘组比较,哮喘+低、高剂量rhSTC-1组和哮喘+地塞米松组BALF白细胞总数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数降低,肺组织NF-κB p65、p-p65、α-SMA蛋白表达降低,NF-κB p65、α-SMA mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论 rhSTC-1可减少哮喘小鼠气道炎症、胶原纤维沉积。STC-1作为一种应激性保护蛋白,起到抗炎作用,STC-1可能通过抑制NF-κB活化减轻气道炎症和气道重塑。     

CpG ODN对哮喘小鼠气道炎症及GATA-3的影响

目的观察CpGODN对支气管哮喘小鼠气道炎症及肺组织GATA-3mRNA表达的影响。方法将40只雌性BALB/C小鼠随机分为4组(每组10只):生理盐水对照组(A组);哮喘组(B组);CpGODN干预组(C组);GpCODN对照组(D组)。以鸡卵白蛋白(OVA)致敏小鼠建立哮喘模型,C组和D组在OVA激发前分别予CpGODN及对照GpCODN腹腔注射。在末次激发后24h收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液行白细胞计数及EOS分类计数,ELISA法检测各组小鼠BALF中IL-4、IL-5及IFN-γ水平,肺组织HE染色观察其病理变化以及用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织中GATA-3mRNA的表达。结果各组BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比、IL-4、IL-5和IFN-γ浓度分别为:A组为(7.46±1.77)×105个/mL、(0.75±0.48)%、(26.9±4.6)pg/mL、(41.7±5.1)pg/mL和(110.4±12.1)pg/mL,B组为(21.68±4.40)×105个/mL、(9.50±1.13)%、(267.6±24.5)pg/mL、(218.2±15.2)pg/mL和...     

VEGF Ang-1与支气管哮喘气道重塑的关系

目的制备慢性支气管哮喘（简称哮喘）小鼠模型以观察VEGF、Ang-1的改变及其与气道血管生成的关系,初步探讨气道血管生成机制及在气道重塑中的意义。方法BALB-c小鼠随机数字表分为正常对照组（A组）、慢性哮喘组（B组）、地塞米松治疗组（C组）,每组10只,采用腹腔注射OVA致敏,长期吸入OVA悬液激发制备模型。A组以生理盐水代替OVA,C组每次激发前地塞米松腹腔注射干预。末次激发后24h内处死,随即行右肺盥洗留取BALF,左肺及气管固定、包埋制备病理切片,行HE染色和抗VEGF、Ang-1免疫组化染色,观察气道形态学改变。ELISA法检测BALF中VEGF的浓度。结果气道血管密度、WAt/Pbm、BALF中VEGF浓度B组明显高于A组（P均〈0.01）,C组低于B组（P均〈0.01）,高于A组（P均〈0.05）;气道血管密度与WAt/Pbm、VEGF的浓度呈正相关。结论慢性哮喘小鼠模型气道血管生长在气道重塑中具有重要意义,气道血管生长可能与气道血管生长因子失调有关,糖皮质激素能部分抑制气道血管生长,进而改善慢性哮喘气道结构的重塑。     

不同剂量致敏原对小鼠哮喘模型气道反应性的影响

目的:探讨不同剂量致敏原鸡卵蛋白(OVA)制备哮喘模型时对哮喘小鼠气道反应性的影响。方法:将30只BALB/c小鼠随机分为哮喘组和正常对照组(C组),哮喘组又分为小剂量OVA致敏组(A组)和大剂量OVA致敏组(B组),每组各10只。A、B组在开始和第14天时给予含OVA的致敏液200μl(A组含10μg OVA,B组含2 mg OVA,两者含同样的氢氧化铝及生理盐水),21 d开始雾化吸入OVA,连续雾化6 d,操作时观察小鼠活动及呼吸情况;各组分别于末次雾化激发24 h后测定小鼠的无创肺功能中的增强呼气间歇(Penh)值以评价气道反应性;对支气管肺泡灌洗液(BALF)行细胞总数、嗜酸粒细胞计数;取肺组织作HE染色病理切片;ELISA方法测外周血、BALF上清液中的IgE、IFN-γ含量。结果:哮喘B组在第二次致敏后可见喘息、呼吸困难、口唇和尾巴黏膜发紫表现,并在雾化时出现扭体、燥动、呼吸加快等症状。哮喘A、B组的Penh值明显高于C组(P<0.01);从乙酰甲胆碱(Mch)6.25 mg.m l-1开始时哮喘B组的Penh值明显高于哮喘A组(P<0.01)。哮喘A组的BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞数(2.41±0.90,0.93±0.18)较正常对照组明显增高(0.65±0.34,0.30±0.16,均P<0.05);哮喘B组中BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞数(4.89±3.49,1.74±0.76)较正常对照组增高(均P<0.05);哮喘B组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞数与哮喘A组比较差异无统计学意义。哮喘A、B组的支气管、血管周围,肺间质及肺泡腔内可见嗜酸粒细胞、淋巴细胞浸润,气道上皮损伤,结构紊乱,气道内杯状细胞肥大增生,气道内分泌大量黏液并有黏液栓形成;正常对照组肺组织气道结构清晰,气道纤毛上皮排列整齐,无明显的炎症改变。哮喘A、B组中外周血和BALF的IgE含量均较正常组的增多(P<0.01);哮喘B组中外周血及BALF的IgE含量(37.47±6.18,26.10±7.18)较哮喘A组(26.09±3.76,12.47±3.02,均P<0.01)明显增多。哮喘A、B组中外周血和BALF中的IFN-γ含量均较正常组减少(P<0.01);哮喘B组中外周血及BALF的IFN-γ含量(35.29±10.92,37.44±21.01)与哮喘A组比较差异无统计学意义(32.22±10.04,36.89±22.00,均P>0.05)。结论:哮喘小鼠组模型制备成功。在观察气道高反应方面,较高剂量OVA致敏哮喘模型较低剂量OVA致敏的气道高反应性更敏感。     

吸入脂多糖对哮喘小鼠气道炎症和气道黏液分泌的影响

目的 观察哮喘小鼠吸入脂多糖 （LPS,作为刺激原）其气道炎症和气道黏液分泌的变化 。 方法 30只清洁级BALB/c小鼠随机分为哮喘组 (AST组)、LPS哮喘组 （LAS组）和正常组 (NS组),每组10只。哮喘组用卵清白蛋白 （OVA）致敏和激发制作哮喘模型,LPS哮喘组在哮喘模型的基础上加用LPS (50 μg/mL)雾化吸入30 min,正常组用生理盐水代替OVA。检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)细胞总数和细胞分类计数,采用ELISA检测BALF中的白细胞介素4 (IL-4)和肿瘤坏死因子-α （TNF-α）水平,HE染色观察肺部病理学改变,用阿尔辛蓝-过碘酸雪夫 (AB-PAS)染色气道杯状细胞,免疫组织化学法检测肺组织中黏蛋白5ac (Muc5ac)的表达,荧光定量RT-PCR检测Muc5ac mRNA在肺内的表达。并分析Muc5ac蛋白表达与各指标的相关性。 结果 AST及LAS组小鼠较NS组在BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞百分比,IL-4和TNF-α水平、肺组织AB-PAS阳染面积, Muc5ac蛋白和mRNA表达明显升高,其差异均有统计学意义 (P均<0.05)。LAS组较AST组上述气道炎症（除单核细胞数外）和气道黏液高分泌指标明显增高,差异均有统计学意义 (P<0.05)。气道Muc5ac蛋白表达与BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞数、IL-4、TNF-α水平、气道AB-PAS染色阳性着色面积均呈正相关（P均<0.05）。 结论 OVA致敏和激发的哮喘小鼠出现以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润为主的气道炎症及杯状细胞增生的气道黏液高分泌,且气道炎症和气道黏液高分泌关系密切。LPS可使气道炎症和气道黏液高分泌加重,可能与LPS激发了体内炎症介质的生成、活化有关。     

姜黄素对哮喘大鼠肺内转录因子T-bet和IFN-γ表达及气道炎症的影响

[摘要] 目的　通过观察姜黄素对哮喘大鼠肺泡灌洗液总细胞数及嗜酸性粒细胞计数、肺组织转录因子T-bet、IFN-γ表达的影响,探讨姜黄素对哮喘的治疗作用。方法　36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、姜黄素治疗组(C组)各12只,采用卵蛋白(OVA)致敏大鼠哮喘模型,观察3组动物哮喘发作症状、肺泡灌洗液总细胞数及嗜酸性粒细胞计数情况及免疫印迹法(Western blot)测定肺组织中T-bet蛋白表达,ELISA法测定IFN-γ含量变化。结果 B组大鼠哮喘发作症状最明显,C组大鼠症状轻,A组无症状。B组肺泡灌洗液总细胞数及嗜酸性粒细胞计数均明显高于其余两组; C组明显少于B组; A组最少。肺组织中T-bet蛋白表达B组微弱表达, C组较强, A组表达最强。IFN-γ表达B组较弱， C组表达较强，A组最强。结论 姜黄素可抑制哮喘大鼠的气道炎症,其作用机制可能是通过增强转录因子T-bet的表达而导致IFN-γ表达增加来实现。 　　[关键词] 姜黄素 哮喘 转录因子T-bet IFN-γ 气道炎症     

哮喘豚鼠血浆类胰蛋白酶水平测定及与气道高反应相关性分析

目的:探讨豚鼠哮喘模型血浆类胰蛋白酶与气道高反应性的相关性。方法:将30只健康豚鼠随机分为哮喘组(A组)和生理盐水组(B组)。用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立哮喘豚鼠模型,三通管做气管插管进行机械通气,测定气道内压力(IP)以反映气道反应性,用UniCAP100全自动体外变应原检测仪测定血浆类胰蛋白酶。结果:哮喘组豚鼠血浆类胰蛋白酶含量为119.78±12.50,与生理盐水组(88.78±4.74)比较明显升高(P<0.01);哮喘组气道反应性为0.013±0.014g/L,与生理盐水组(0.168±0.186g/L)比较有显著性差异(P<0.01)。血浆类胰蛋白酶含量与气道反应性之间存在正相关性(r=0.6,P=0.06)。结论:肥大细胞类胰蛋白酶直接或间接在哮喘的慢性气道炎症中起作用,可通过提高气道反应性而参与哮喘的发生、发展。     

CD69 expression on airway eosinophils and airway inflammation in a murine model of asthma

Background Asthma is a chronic airway disease with inflammation characterized by physiological changes （airway hyper-responsiveness, AHR） and pathological changes （inflammatory cells infiltration and mucus production）. Eosinophils play a key role in the allergic inflammation. But the causative relationship between eosinophils and airway inflammation is hard to prove. One of the reasons is lack of activation marker of murine eosinophils. We investigated the expression of CD69 on murine eosinophils in vitro, the relationship between the expression of CD69 on eosinophils from peripheral blood and bronchoalveolar lavage fluid and on airway inflammation in asthmatic mice. Methods Eosinophils from peripheral blood of IL-5 transgenic mice （NJ.1638） were purified. Mice were divided into five groups： wild type mice sensitized and challenged with saline （WS group）, wild type mice sensitized and challenged with ovalbumin （WO group）, IL-5^-/- mice sensitized and challenged with saline and transferred with purified eosinophils （ISE group）, IL-5^-/- mice sensitized and challenged with OVA and transferred with purified eosinophils （IOE group）, IL-5^-/- mice sensitized and challenged with OVA and transferred with purified eosinophils, pretreated with anti CD4 monoclonal antibody （IOE＋antiCD4mAb group）. IL-5^-/- mice were sensitized with OVA at day 0 and day 14, then challenged with OVA aerosol. On days 24, 25, 26 and 27 purified eosinophils were transferred intratracheally to IL-5^-/- mice. On day 28, blood and BALF were collected and CD69 expression on eosinophils measured by flowcytometry. Results Purified eosinophils did not express CD69. But eosinophils cultured with PMA＋MA, IFN- T, IL-5 or GM-CSF expressed CD69 strongly. Eosinophils from blood of WO, WS group did not express CD69 at all. The numbers of eosinophils in BALF of WO group, IOE group, ISE group and IOE＋antiCD4mAb group were significantly higher than in mice of WS group which did not have eosinophils at all. CD69 expression on eosinophils in BALF of IOE and WO groups was strong. Eosinophils in BALF of ISE and IOE＋antiCDmAb groups did not express CD69. The mucus production result was similar to CD69 expression. There were eosinophils infiltration in lung slides of all groups except WS group. Conclusion Activation in airway of eosinophils could directly lead to airway inflammation.     

白细胞介素18对豚鼠哮喘模型气道炎症作用的实验观察

目的观察白细胞介素18(IL-18)对豚鼠哮喘模型气道炎症的作用。方法采用卵蛋白(OVA)腹腔注射致敏加雾化吸入激发的方法复制豚鼠哮喘模型。30只豚鼠按随机数字法分成3组(每组10只)进行处理,分别为哮喘模型组(A组)、模型对照组(B组)和IL-18干预组(C组)。光镜下检测各组豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞计数及分类,用酶联免疫吸附法测定BALF中Th1细胞因子IFN-γ、IL-2和Th2细胞因子IL-4、IL-5浓度,并进行3组之间的比较。结果豚鼠BALF中嗜酸粒细胞(EOS)个数A组、B组、C组分别为(98±58)×106/L、(12±10)×106/L、(29±10)×106/L,A组与B组、C组比较差异有统计学意义(P<0.01);中性粒细胞个数A组与B组、C组比较差异有统计学意义(P均<0.05)。IFN-γ和IL-2浓度A组与B组比较差异有统计学意义(P<0.05),与C组比较差异亦有统计学意义(P均<0.01)。IL-4浓度A组与B组、C组比较差异有统计学意义(P均<0.05);IL-5浓度A组与B组、C组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论IL-18可通过调节Th1/Th2细胞因子的平衡而达到控制哮喘气道炎症的作用。     

姜黄素对哮喘大鼠肺内粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子表达及气道炎症的影响

目的 通过观察姜黄素对哮喘大鼠肺泡灌洗液总细胞数及嗜酸性粒细胞（Eos）计数、肺组织粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）表达的影响,探讨姜黄素对哮喘的治疗作用。方法 36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）、姜黄素治疗组（C组）各12只,采用卵蛋白（OVA）致敏大鼠哮喘模型,观察三组动物哮喘发作症状、肺泡灌洗液总细胞数及嗜酸性粒细胞计数情况及原位杂交方法检测肺组织中GM-CSF mRNA含量变化。结果 B组大鼠哮喘发作症状最明显,C组大鼠症状轻,A组无症状。B组肺泡灌洗液总细胞数及嗜酸性粒细胞计数均明显高于其余两组;C组明显少于B组;A组最少。肺组织中GM-CSF mRNA表达A组微弱表达,C组较强,B组表达最强。结论 姜黄素可抑制哮喘大鼠的气道炎症,其作用机制可能是通过抑制GM-CSF的表达而导致嗜酸性粒细胞生成减少及存活时间缩短来实现。