柚皮苷对H_2O_2处理小鼠前成骨细胞MC3T3-E1骨形成的影响

目的 :研究柚皮苷对体外培养过氧化氢(H_2O_2)处理的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1骨形成的作用及抗氧化机制。方法:在体外培养的MC3T3-E1s细胞培养基中分别加入不同浓度(0.01 mmol·L-1、0.02 mmol·L-1、0.04 mmol·L-1)的柚皮苷作用48 h,接着加入0.5 mmol·L-1H_2O_2作用4 h,采用CCK-8法检测柚皮苷对成骨细胞活力的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)、细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测MC3T3-E1成骨细胞内ALP、SOD活性和MDA、GSH含量及细胞上清LDH活性;用茜素红S染色法检测矿化结节数目;用Real time RT-PCR的方法检测成骨细胞内I型胶原(COL-I)、骨钙素(OCN)、转录因子Osterix和骨形态发生蛋白2(BMP-2)m RNA表达。结果:柚皮苷可增加H_2O_2损伤后MC3T3-E1细胞ALP活力(P0.05,P0.01)和矿化结节数目(P0.05,P0.01),促进骨形成相关指标COL-I、Osterix、BMP-2和OCN m RNA表达(P0.01);柚皮苷提高H_2O_2损伤后MC3T3-E1细胞活力(P0.05,P0.01),上调细胞内SOD活性和GSH含量并降低细胞中MDA含量和上清中LDH活性(P0.01)。结论:一定浓度(0.01,0.02,0.04 mmol·L-1)的柚皮苷可以促进H_2O_2处理后MC3T3-E1细胞的骨形成,这种促进作用可能是通过降低氧化应激发挥抗氧化作用实现的。     

骨碎补、续断、西洋参对成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖的影响

骨碎补、续断是中医骨伤科中常用药物,具有促进骨折愈合、强骨补肾的功效,但其作用机制不明。西洋参为补气血常用药,对骨细胞增殖也有一定的促进作用,但对此研究较少。本文以小鼠成骨细胞MC3T3-E1为细胞模型,用体外实验方法,研究了骨碎补、续断、西洋参水提液对成骨细胞增殖的作用,同时了解骨碎补、续断联合用药对成骨细胞增殖的影响,报道如下。     

骨碎补中柚皮苷治疗股骨头坏死研究进展

柚皮苷(Naringin,NG)为中药骨碎补主要活性单体成分,是一种双氢睾酮类黄酮化合物,具有愈骨折、强筋骨、温肾阳之功用,可调节骨质代谢。股骨头坏死是一种多因素骨病,治疗方式多样,早期治疗旨在延缓病程,防治塌陷,最大限度保留髋部功能。柚皮苷可用于股骨头坏死的治疗,既可促进成骨细胞增殖、分化益于骨形成,又可抑制破骨细胞对骨质的吸收,抑制成脂分化、炎症反应,抑制血管内皮细胞凋亡,促进内皮祖细胞增殖及血管形成,增加血管形成的长度和面积,利于骨坏死修复,降低股骨头坏死率。     

柚皮苷防治骨质疏松症的研究进展

骨质疏松症是老年人常见的慢性全身代谢性骨病,骨组织显微结构破坏,骨量减少,导致骨密度和骨强度下降,增加骨折的发生风险,严重影响老年人的生活质量,也为社会带来沉重的医疗负担。目前西医治疗骨质疏松症主要是应用抑制骨吸收的药物,但存在不同程度的毒性不良反应,且治疗周期长,费用较高。随着现代生物医学的不断发展,柚皮苷被证实具有较强的抗骨质疏松症活性。笔者对近年来柚皮苷防治骨质疏松症的机制及信号通路方面的文章进行总结,从柚皮苷对成骨细胞、破骨细胞、骨髓间充质干细胞影响方面进行综述,探讨柚皮苷防治骨质疏松症的研究进展。     

骨碎补中柚皮苷含量测定方法的优化研究

目的探讨骨碎补不同溶液制备中柚皮苷含量的最佳测定方法。方法供试品溶液分别采用回流3 h与6 h、称质量回流3 h、索氏回流3 h与6 h等5种方法制备。HPLC法测定含量,以Hypersil C18色谱柱为固定相;甲醇-醋酸-水(40∶3∶60)为流动相;流速1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长283 nm。结果柚皮苷在0.15~1.22μg范围线性关系良好(r=0.999 6),加样回收率为98.5%,RSD=1.8%(n=6);5种不同制备方法所得供试液中柚皮苷的含量分别是1.19%、1.11%、1.29%、1.18%、1.15%。结论该法操作简单,结果更准确,重复性好,可用于柚皮苷的含量测定。     

柚皮苷抑制钛颗粒诱导糖尿病小鼠颅骨骨溶解的疗效观察

目的观察柚皮苷抑制钛颗粒诱导糖尿病小鼠颅骨骨溶解的疗效。方法将60只小鼠随机分为糖尿病组和非糖尿病组（各30只）。糖尿病组以链脲佐菌素诱导方案制备糖尿病大鼠模型。糖尿病和非糖尿病组小鼠再随机分为3个亚组（各10只）,分别为对照组、纯钛颗粒注射组、纯钛颗粒加柚皮苷注射组。通过酶联免疫吸附法测量血清骨钙素（OCN）及I型末端胶联肽（NTx）水平。μCT检测骨容积／组织容积比率及骨表面积／骨容积比率,组织形态学观测颅骨新骨形成面积、颅骨厚度、颅骨中缝面积改变。结果应用柚皮苷的糖尿病小鼠在新骨形成面积、颅骨厚度、骨容积、中缝面积、OCN水平方面与非糖尿病小鼠比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论柚皮苷可抑制糖尿病小鼠骨溶解,促进骨愈合,对临床治疗有辅助作用。     

柚皮中柚皮苷的乙醇提取工艺研究

目的 探讨柚皮中柚皮苷的乙醇提取最佳工艺条件。方法 运用正交试验法考察乙醇浓度，提取温度，提取时间和乙醇用量对提取率的影响，采用两步结晶法对提取物中的柚皮苷进行精制。结果 柚皮中柚皮苷的乙醇提取最佳工艺条件为25倍原料重的70%乙醇，60℃条件下保温浸提1h；两步结晶法所得柚皮苷精制品的纯度为90.01%。结论 采用本实验所确定的提取及精制方法可使柚皮中柚皮苷得到有效提取和分离。     

柚苷皮苷含量测定方法的研究进展

目的 综述柚苷皮苷含量测定的方法.方法 对近年来的用于柚皮苷提取,分离纯化,含量测定的一些方法进行汇总,并分析.结果 用于柚皮苷提取,分离及纯化,含量测定的方法有多种,各有优缺点.结论 近年来用于柚皮苷提取最常用的为溶剂提取法,分离纯化常用的吸附剂为聚酰胺和硅胶,含量测定常用高效液相色谱法.     

木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3 T3-E1增殖、分化、矿化和Wnt通路的影响

目的:探讨木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化及Wnt通路的影响.方法:在体外培养的MC3T3-E1s培养基中加入木犀草素0.25~8.00μmol/L培养12、24和48 h,以洛伐他汀0.04μmol/L作为阳性对照,采用细胞计数试剂盒法检测细胞增殖情况;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞内ALP的活性;茜素红S染色法检测细胞矿化能力;采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞Ⅰ型胶原、骨钙素、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(Lrp5)、β-连环素、护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达水平.结果:木犀草素可以剂量依赖性和时间依赖性地促进成骨细胞MC3T3-E1增殖(P<0.05~P<0.01);木犀草素(2.00、4.00和8.00μmol/L)可以剂量依赖性地促进MC3T3-E1成骨细胞ALP活性,增强MC3T3-E1成骨细胞矿化能力并上调MC3T3-E1成骨细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素、Lrp5、β-连环素和护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达.结论:木犀草素2.00、4.00和8.00μmol/L可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化及Wnt通路中Lrp5和β-连环素mRNA的表达.     

玉米紫色植株色素对染氟MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度的玉米紫色植株色素（Maize Purple Plant Pigment,MPPP）对体外染氟的MC3T3-E1成骨细胞的增殖作用。方法：通过MTT法分别观察浓度范围均为10-10~10-2mol/L的MPPP和NaF对细胞增殖情况的影响,根据上述结果选择两者适宜浓度,再进行联合培养,最终观察MPPP对染氟的MC3T3-E1细胞增殖的影响。结果：氟对MC3T3-E1细胞增殖无促进作用,较高浓度的氟可抑制细胞增殖（P〈0.05）;培养48 h,终浓度为10-5mol/L的MPPP可促进染氟（10-3mol/L）MC3T3-E1细胞增殖（P〈0.05）。结论：MPPP可增强染氟MC3T3-E1细胞的增殖能力。     

三七三醇皂苷对MC3T3-E1细胞分化和凋亡的影响

观察了三七三醇皂苷（PTS）对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1成骨功能、间质矿化及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。MTT法显示PTS对成骨细胞增殖没有明显的影响;对硝基苯磷酸盐法(PNPP)显示,成骨细胞分化早期,高浓度PTS可使碱性磷酸酶活性增高,其中10 μg/mL组效应最强,且这一作用可被雌激素受体阻断剂ICI 182780所阻断;RT-PCR实验证实,较高浓度PTS可显著增强骨钙素的基因表达;Von Kossa染色法显示,连续给药处理细胞28 d,PTS各组矿化结节形成数量均有增多趋势;用流式细胞仪检测PTS对血清饥饿诱导的成骨细胞凋亡的影响,1,10 μg/mL的PTS凋亡细胞百分率明显下降。结果表明,PTS具有促进成骨细胞分化、矿化和抑制凋亡的活性,且其促分化作用可能与雌激素样作用有关,提示PTS具有潜在的抗骨质疏松作用。     

miRNA expression profile during fluid shear stress-induced osteogenic differentiation in MC3T3-E1 cells

Background Mechanical stress plays an important role in the maintenance of bone homeostasis.Current hypotheses suggest that interstitial fluid flow is an important component of the system by which tissue level strains are amplified in bone.This study aimed to test the hypothesis that the short-term and appropriate fluid shear stress (FSS) is expected to promote the terminal differentiation of pre-osteoblasts and detect the expression profile of microRNAs in the FSS-induced osteogenic differentiation in MC3T3-E1 cells.Methods MC3T3-E1 cells were subjected to 1 hour of FSS at 12 dyn/cm2 using a parallel plate flow system.After FSS treatment,cytoskeleton immunohistochemical staining and microRNAs (miRNAs) were detected immediately.Osteogenic gene expression and immunohistochemical staining for collagen type Ⅰ were tested at the 24th hour after treatment,alkaline phosphatase (ALP) activity assay was performed at 24th,48th,and 72th hours after FSS treatment,and Alizarin Red Staining was checked at day 12.Results One hour of FSS at 12 dyn/cm2 induced actin stress fiber formation and rearrangement,up-regulated osteogenic gene expression,increased ALP activity,promoted synthesis and secretion of type Ⅰ collagen,enhanced nodule formation,and promoted terminal differentiation in MC3T3-E1 cells.During osteogenic differentiation,expression levels of miR-20a,-21,-19b,-34a,-34c,-140,and-200b in FSS-induced cells were significantly down-regulated.Conclusion The short-term and appropriate FSS is sufficient to promote terminal differentiation of pre-osteoblasts and a group of miRNAs may be invovled in FSS-induced pre-osteoblast differentiation.     

miRNA expression profile during fluid shear stress-induced osteogenic differentiation in MC3T3-E1 cells

Objective: To test the hypothesis that the short-term and appropriate fluid shear stress is expected to promote the terminal differentiation of pre-osteoblasts and detect the expression profile of microRNAs in the fluid shear stress-induced osteogenic differentiation in MC3T3-E1. Materials and Methods: MC3T3-E1 cells were subjected to 1 hour of FSS at 12 dyn/cm2 using a parallel plate flow system. After FSS treatment, cytoskeleton immunohistochemical staining and microRNAs were detected immediately, osteogenic genes expression and immunohistochemical staining for collagen type I were tested at the 24th hour, ALP activity assay was measured at the 24th, 48th and 72th hour, alizarin Red Staining was checked at day 12. Results: 1 hour of FSS at 12 dyn/cm2 induced actin stress fiber formation and rearrangement, up-regulated of osteogenic gene expression, increased ALP activity, promoted synthesis and secretion of collagen type I, enhanced nodule formation and promoted the terminal differentiation in MC3T3-E1 cells. During osteogenic differentiation, expression levels of miR-20a, -21, -19b, -34a, -34c, -140 and -200b in FSS-induced cells were significantly down-regulated. Conclusions: The short-term and appropriate fluid shear stress is sufficient to promote the terminal differentiation of pre-osteoblasts and that a group of miRNAs that may play an important role in the FSS-induced pre-osteoblast differentiation.     

罗格列酮对小鼠胚胎成骨细胞增殖和成骨分化的影响

目的 体外观察罗格列酮对小鼠胚胎成骨细胞增殖和成骨分化的影响.方法 于中国科学院上海细胞库购买小鼠胚胎成骨细胞并传代,使用不同浓度下的罗格列酮（1、5 μmol/L）处理细胞,对照组用等量二甲亚砜（DMSO）;观察不同浓度罗格列酮下小鼠胚胎成骨细胞的细胞增殖状况;使用不同浓度罗格列酮的细胞培养基,培养7、14 d,行碱性磷酸酶染色;细胞培养7 d,Real-time PCR检测转录因子Runx2、成骨标志物碱性磷酸酶、骨钙素基因的表达.结果 实验组和对照组相比,小鼠胚胎成骨细胞的细胞增殖能力减弱.随着罗格列酮浓度的升高,碱性磷酸酶染色颜色逐渐变浅.聚合酶链式反应结果显示Runx2 mRNA表达分别下降了（54.7＆#177;8.2）%和（52.3＆#177;7.2）%,碱性磷酸酶 mRNA表达分别下降了（18.7＆#177;5.1）%和（37.8＆#177;8.5）% ,骨钙素 mRNA表达分别下降了（43.4＆#177;5.6）%和（60.4＆#177;4.3）%;差异均有统计学意义（P＆lt;0.05）.结论 罗格列酮能抑制小鼠胚胎成骨细胞的细胞增殖和成骨细胞分化,这可能就是2型糖尿病患者服用噻唑烷二酮类药物后并发骨质疏松的原因之一.     

HU-308与nHA/PCL电纺丝膜对小鼠前成骨细胞生物学性能的影响

目的 探讨不同浓度HU-308与纳米羟基磷灰石与聚己内酯(nHA/PCL)电纺丝膜对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1生物学性能的影响。方法 将静电纺丝膜制成圆形薄膜置于细胞培养板底部,使用含不同浓度HU-308(0、10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6 mol/L)的培养液培养MC3T3-E1细胞;培养1、4、7 d,进行CCK-8检测增殖检测及碱性磷酸酶(ALP)活性的检测;Real Time-PCR检测培养7 d时细胞成骨相关基因OPG mRNA表达,观察培养24 h细胞骨架的形态。结果 培育1、4、7 d后,与对照组相比,各实验组间细胞增殖活性增强,P<0.05;随着培育时间的延长,同一实验组细胞增殖活性逐渐增强,P<0.05。随着培育时间的延长,同一实验组MC3T3-E1细胞中的ALP活性增加,P＜0.05。在相同时间点,与对照组比较,低浓度HU-308(10^-10 mol/L、10^-9 mol/L)促进OPG mRNA的表达,P＜0.05 ;高浓度HU-308对OPG mRNA的表达起抑制作用,且浓度越高抑制作用越明显,P＜0.05。成骨细胞随药物浓度的加大,细胞铺展面积有增大趋势且细胞骨架结构更加清晰,尤以10^-6 mol/L浓度组成骨细胞伸展范围最广。结论 HU-308和nHA/PCL电纺丝膜可促进MC3T3-E1细胞的黏附、增殖和分化。     

静电纺丝薄膜支架对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

目的 观察静电纺丝薄膜支架对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。方法 通过静电纺丝法制备薄膜支架,扫描电镜观察薄膜网状结构,通过薄膜支架作为载体,观察其对成骨细胞的增殖、分化并观察细胞骨架的形态变化。结果 扫描电镜显示:静电纺丝薄膜网状结构有利于细胞的黏附;CCK-8细胞增殖检测与碱性磷酸酶活性检测结果显示,培养1 d、4 d、7 d对照组与实验组相比差异均有统计学意义(P<0.05);细胞骨架染色显示静电纺丝组细胞铺展面积增大且数目增多。结论 静电纺丝薄膜支架对成骨细胞增殖、分化以及细胞黏附具有促进作用。     

不同浓度葡萄糖对成骨细胞凋亡的影响

目的:观察不同浓度葡萄糖对体外培养的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响.方法:不同浓度的葡萄糖、甘露醇分别刺激体外培养的MC3T3-E1成骨细胞1、3、7、12 d,用流式细胞术检测成骨细胞的凋亡.结果:甘露醇组MC3T3-E1成骨细胞凋亡较正常对照组有一定的增加,但无统计学差异(P＞0.05);而葡萄糖呈浓度、时间依赖性诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡(P＜0.05,P＜0.01).结论:高糖状态下,MC3T3-E1成骨细胞凋亡显著增加.