柚皮素通过抑制NLRP3炎症小体激活改善糖尿病小鼠心肌重构

目的：研究柚皮素（naringenin,NAR）对糖尿病小鼠心肌重构的作用及对NLRP3炎症小体的影响。方法：将雄性C57BL/6小鼠35只随机分为正常（N）组（7只）和糖尿病模型组（28只）,糖尿病模型组连续腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）3 d,正常组腹腔注射相应溶剂,1周后断尾取血测随机血糖,以随机血糖大于16.7 mmol/L作为1型糖尿病小鼠成模标准。最终28只模型组小鼠均造模成功,并随机分为糖尿病（DM）组、柚皮素低剂量（DM+LN）组、柚皮素中剂量（DM+MN）组、柚皮素高剂量（DM+HN）组,每组7只。各组连续灌胃给药8周后处死小鼠,观察柚皮素对小鼠体质量及血糖的影响;HE及Masson染色观察心脏形态改变,并测量心肌胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）;TUNEL荧光染色观察心肌细胞凋亡;Western blot测定心肌组织NLRP3、ASC、Caspase-1、白介素（interleukin,IL）-1β、Ⅰ型胶原蛋白、纤连蛋白（fibronectin,FN）水平;PCR检测NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β mRNA表达。结果：Masson染色结果分析显示,DM组[（37.68±1.14）%]的CVF较DM+LN组[（13.58±0.86）%]、DM+MN组[（9.50±0.59）%]、DM+HN组[（6.38±1.41）%]明显增加（P=0.000）;TUNEL荧光染色结果分析显示,DM组[（64.94±5.25）%]心肌细胞凋亡较DM+LN组[（48.80±6.11）%]、DM+MN组[（31.85±4.44）%]、DM+HN组[（13.64±1.79）%]明显增加（P=0.000）;Western blot结果显示,DM组（0.52±0.03）心肌NLRP3蛋白表达量较DM+LN组（0.33±0.07）、DM+MN组（0.23±0.06）、DM+HN组（0.15±0.04）增加（P=0.000）;同时DM组（0.69±0.09）心肌IL-1β蛋白表达也较DM+LN组（0.42±0.09）、DM+MN组（0.25±0.04）、DM+HN组（0.09±0.03）增加（P=0.000）。结论：NAR可以改善糖尿病小鼠心肌纤维化、减少心肌细胞凋亡,从而抑制心肌重构,其机制之一可能是抑制了NLRP3炎症小体激活,降低了炎症水平。     

黄芪葛根联用对KKAy小鼠心脏组织GRP78、CHOP和PUMA表达的影响

目的 探讨黄芪注射液联合葛根素注射液通过缓解内质网应激(ERS)、抑制心肌细胞凋亡,改善2型糖尿病(T2DM)动物KKAy小鼠心脏损害,防治糖尿病心肌病的机制.方法 11周龄的KKAy糖尿病模型小鼠按血糖随机分为模型组和黄芪葛根组(黄芪注射液3 mL/kg联合葛根素注射液1.3 mL/kg进行治疗),同周龄雄性C57 BL/6 J小鼠作为正常对照组,适应性饲养1周后,于12周龄开始实验干预,在20、24和28周龄分批处理小鼠.电镜观察心肌形态改变,RT-PCR及West-ern Blot检测心脏组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous Protein,CHOP)、p53凋亡上调基因(p53 up-regulate modulator of apoptosis,PUMA)基因和蛋白的表达.结果 透射电镜显示,模型组小鼠心肌细胞细胞核、内质网和线粒体肿胀,黄芪葛根组较模型组情况显著改善;RT-PCR和Western Blot结果显示,与正常组相比,3个周龄段模型组GRP78的基因和蛋白表达水平均明显升高,黄芪葛根组GRP78的基因和蛋白表达较模型组均显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05).CHOP和PUMA的基因和蛋白表达,3个周龄段模型组较正常组均增加(P<0.05),24、28周龄黄芪葛根组较模型组均下降((P<0.05).结论 黄芪注射液与葛根素注射液联用对糖尿病小鼠心肌细胞超微结构具有保护作用,可缓解内质网应激,抑制心肌细胞凋亡,这可能是其防治糖尿病心肌病的机制之一.     

卡托普利对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)卡托普利对糖尿病(DM)大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠30只,随机分为正常对照组(NC组)、DM组、卡托普利治疗组(Cap组),每组10只。应用链脲佐菌素(STZ)诱导构建DM大鼠模型,Cap组每日灌胃给予卡托普利50 mg/kg,其余两组给予等容积的0.9%氯化钠溶液。用药12周后,原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测计算心肌细胞凋亡指数(AI),Western blot法检测心肌Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,透射电镜观察心肌超微结构变化。给药期间动态观察测定大鼠行为、体质量及血糖水平的改变。结果:与NC组相比,DM组大鼠心肌细胞AI明显升高,Bcl-2蛋白表达减少,Bax、Caspase-3蛋白表达增加;电镜示心肌细胞超微结构呈明显损伤性变化。与DM组相比,Cap组心肌细胞AI明显降低,Bcl-2蛋白表达增加,Bax、Caspase-3蛋白表达减少;超微结构损伤不同程度减轻。结论:卡托普利可能通过上调Bcl-2表达,下调Bax表达,减少Caspase-3依赖性的心肌细胞凋亡,从而起到保护DM大鼠心肌细胞的作用。     

黄芪多糖对2型糖尿病大鼠心肌UCP2表达和AMPK活性的影响

目的:研究高脂加链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病心肌病大鼠心肌组织中解偶联蛋白2(UCP2)与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的表达变化,并探讨黄芪多糖(APS)的治疗作用及可能机制。方法:雄性SPF级SD大鼠随机分为:正常对照组(C组,n=8),黄芪多糖对照组(C+APS组,n=8),饲以正常饲料;通过高脂饮食+小剂量STZ(25 mg/kg,尾静脉注射)复制2型糖尿病大鼠模型,将血糖>13.9 mmol/L者随机分为糖尿病组(DM组,n=8)及黄芪多糖治疗组(DM+APS组,n=8);DM+APS组行黄芪多糖灌胃治疗8周[700 mg/(kg.d)]。进行口服葡萄糖耐量(OGTT)试验,检测动物血糖、血浆胰岛素,并计算胰岛素敏感指数(ISI);取心室肌组织提取蛋白,Western blot-ting检测UCP2、总AMPK和pAMPKα1的表达。结果:DM组出现高血糖、糖耐量降低、低胰岛素敏感性等2型糖尿病特征;DM+APS组UCP2水平较DM组明显增高,伴随pAMPK表达增高(P<0.05),而在C与C+APS组两种结果无明显差异。结论:APS治疗可以显著改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗,主要表现为降低血糖、升高ISI指数,其作用机制可能与增强AMPK活性,增加UCP2表达,改善2型糖尿病大鼠能量代谢等途径有关。     

Pax-8基因抑制后心肌细胞中UCP2的表达

目的 建立Pax-8基因敲除模型及Pax -8基因的体外干扰实验,探索心肌细胞中Pax-8基因抑制后解偶联蛋白2(uncouplingprotein 2,UCP2)基因表达的变化.方法 Pax-8基因敲除纯合子小鼠(Pax-8 KO-/-)为实验组,Pax-8基因敲除小鼠杂合子(Pax -8 KO+/-)和野生型(Pax-8KO+/+)为对照组;同时在体外实验的大鼠心肌细胞株中,加入Pax -8基因的小干扰RNA(Pax-8siRNA)为实验组,非特异性siRNA(NC siRNA)组和空白组为对照组.采用RT-PCR和Westernblotting技术测定UCP2的mRNA和蛋白质表达.结果 在Pax-8基因敲除动物模型中,与Pax-8基因敲除小鼠杂合子组和野生型组相比,实验组Pax-8基因敲除小鼠纯合子心脏组织UCP2的mRNA和蛋白表达均上调( P<0.05),而对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);在体外干扰实验中的结果显示,与NC siRNA组和空白对照组比较,Pax-8siRNA组UCP2的mRNA表达和蛋白表达均上调(P<0.05),而NC siRNA组与空白对照组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 Pax-8基因被抑制后,心肌细胞凋亡增加,UCP2基因表达上调,提示UCP2参与了心肌细胞凋亡的调控.     

压力超负荷时bcl-2蛋白表达对兔心肌细胞凋亡的影响

目的 :探讨压力超负荷时兔左室心肌细胞bcl- 2蛋白表达对兔左室心肌细胞凋亡的影响。方法 :采取末端脱氧核苷酸转移酶介导的DUTP -生物素平移末端标记 (TUNEL)技术和链酶亲和素 -生物素 -过氧化物酶复合物 (SABC)免疫组化方法 ,观察持续压力超负荷下兔左室心肌细胞凋亡的动态变化和bcl- 2蛋白的表达。结果 :对照组罕见凋亡细胞 ,表达bcl- 2蛋白的心肌细胞少而散在。术后凋亡阳性心肌细胞数和bcl- 2蛋白阳性表达心肌细胞数迅速增加 ,两者在心衰组最高。凋亡阳性心肌细胞数在术后第 3天与术后第 7天之间存在一个峰值。凋亡阳性心肌细胞和bcl- 2蛋白阳性心肌细胞主要分布在心肌深层、乳头肌和中层心肌。结论 :慢性压力超负荷持续存在时 ,bcl- 2蛋白阳性表达心肌细胞数存在动态变化 ,其分布与凋亡心肌细胞分布相似 ,是机体重要的抗凋亡作用     

Chymase抑制对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨Chymase抑制对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响机制。方法 24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,n=7)、糖尿病组(DM组,n=7)、应用糜酶(Chymase)抑制剂的糖尿病组(DM+Chy-I组,n=10)。采用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)单次腹腔注射方法建立糖尿病大鼠模型。其中DM+Chy-I组给予糜酶抑制剂[Suc-Val-Pro-Phe P-(OPh)2,1mg/(kg·d)],12周后处死,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞的凋亡指数(AI),Western blot法检测心肌caspase-3蛋白的表达,免疫组化检测心肌组织Chymase蛋白表达,采用黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)测定心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活力,TBA(thiobarbituric acid)法测定丙二醛(MDA)含量。结果与NC组相比,DM组大鼠心肌细胞AI明显升高;caspase-3蛋白表达明显增加;MDA含量升高,SOD活力降低(P<0.05);与DM组相比,Chymase抑制剂使心肌细胞AI明显降低;caspase-3蛋白表达减少;MDA含量降低,SOD活力升高(P<0.05)。结论 Chymase抑制剂减少了糖尿病心肌病大鼠心肌细胞的凋亡可能是通过抑制caspase-3的表达和氧化应激损伤。     

FGF-2上调Survivin蛋白的表达拮抗心肌细胞凋亡

目的探讨成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)拮抗心肌细胞凋亡的作用机制。方法以H9c2大鼠心肌细胞作为实验对象,用无血清培养基同步化培养24小时,心肌细胞随机分为正常组(Control)、缺氧/复氧(H/R)组和H/R+FGF-2组。采用CCK-8比色法检测心肌细胞存活率,Hoechst染色和流式细胞术检测心肌细胞凋亡。采用Western blot检测生存素(Survivin)蛋白的表达。结果与正常组相比,H/R明显抑制心肌细胞活力,诱导心肌细胞凋亡(均P<0.01);与H/R组相比,FGF-2显著改善H/R心肌细胞活力,拮抗H/R心肌细胞凋亡,同时上调Survivin蛋白的表达(均P<0.05)。结论 FGF-2拮抗心肌细胞凋亡的作用与其上调Survivin蛋白表达有关。     

沙棘总黄酮对糖尿病心脏病大鼠心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨沙棘总黄酮对糖尿病心脏病心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法以腹腔注射链脲佐菌素法造成糖尿病心脏病大鼠为研究对象。观察沙棘总黄酮对糖尿病心脏病大鼠心肌细胞Bax、bcl-2蛋白表达的影响，探讨沙棘总黄酮对糖尿病心脏病的治疗作用及其作用机制。结果模型组大鼠心肌Bax蛋白表达增强，Bc1-2表达减弱的。沙棘总黄酮组大鼠与模型组比较Bax蛋白表达减弱，Bcl-2表达较模型组增强，差异显著。结论沙棘总黄酮具有调节Bax/BCL-2蛋白表达，抑制心肌细胞凋亡作用。     

APP5肽对糖尿病小鼠学习记忆功能与海马神经元蛋白表达的影响

目的 研究APP5肽对糖尿病模型小鼠学习记忆能力及海马神经元蛋白表达的影响.方法用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型,应用APP5肽(0.0014 mg/kg)皮下注射治疗,5周后进行Morris水迷宫试验;小鼠脑组织海马做Akt、PI3K、P-CREB、Bcl-2、Bax、CytoC免疫组织化学染色;另一部分鼠脑海马,做Bcl-2、Bax抗体蛋白免疫印记.结果(1)水迷宫试验:糖尿病模型小鼠到达站台游动时间比正常对照组延长(P<0.01);而APP5肽皮下注射治疗组较DM组动物分别缩短(P<0.01).(2) 神经免疫组织化学实验和Western blot:给予APP5肽糖尿病小鼠与对照组小鼠海马组织内神经元表达细胞存活相关蛋白及抗凋亡相关蛋白PI3K、Akt、P-CREB、Bcl-2阳性细胞数相似,明显高于糖尿病小鼠(P<0.01); APP5肽给予糖尿病小鼠与对照组小鼠表达凋亡蛋白Bax、cytoC阳性细胞数相似,明显少于糖尿病小鼠 (P<0.01).Western blot 结果相同.结论糖尿病小鼠海马神经元表达细胞存活相关蛋白下降,神经元表达细胞凋亡相关蛋白增加,导致其学习记忆能力下降.APP5肽应用可以使上述蛋白恢复到接近正常,从而改善糖尿病小鼠学习记忆能力.     

GDF11对II型糖尿病小鼠心肌损伤的保护作用

目的 观察GDF11对Ⅱ型糖尿病C57BL/6J小鼠心肌损伤的保护作用及心肌凋亡水平的变化情况。方法 60只体重20~25 g的雄性C57BL/6J小鼠,随机分为3个组：正常对照组（control）、Ⅱ型糖尿病模型组（DM）和GDF11干预组（DM+GDF11）。高脂高糖饲料饲养4周后,连续3次腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素（STZ）,建立Ⅱ型糖尿病小鼠模型,持续高脂高糖饲料饲养4周后,小动物超声检测心功能,取心肌组织,TUNEL染色检测心肌组织凋亡比例,Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。结果 糖尿病损伤显著下调左室射血分数和左室短轴缩短率,增加心肌凋亡率,而给予重组GDF11蛋白能够明显改善心功能并减轻心肌凋亡。结论 外源性的GDF11可以显著减轻糖尿病损伤后心肌凋亡水平,改善心功能。     

核仁素对糖尿病性心肌病小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨核仁素对糖尿病性小鼠心肌病心肌细胞凋亡的影响。方法：小鼠给予高脂高糖饲料喂养,第 5,6周分别予链脲佐菌素60 mg/kg腹腔注射,构建2型糖尿病模型;实验分为4组：野生型小鼠对照组、核仁素转基 因小鼠对照组、野生型小鼠糖尿病组、核仁素转基因小鼠糖尿病组;第8周末检测糖尿病相关指标;第20周末,采用 HE染色观察心肌形态学改变;TUNEL染色和caspase-3活性检测心肌细胞凋亡程度。结果：糖尿病组小鼠空腹血糖值 较野生型对照组明显升高;与野生型对照组相比,野生型糖尿病组小鼠心肌HE染色显示细胞排列紊乱,部分肌纤维 出现断裂及溶解,TUNEL染色和caspase-3活性检测显示心肌细胞凋亡明显增加。与野生型糖尿病组小鼠相比,转基 因糖尿病组小鼠心肌形态学改变明显减轻,心肌细胞凋亡明显减少。结论：核仁素过表达可抑制糖尿病性心肌病中 心肌细胞凋亡的发生。     

慢性应激对大鼠海马线粒体解偶联蛋白4及Bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨慢性应激对抑郁模型大鼠海马线粒体解偶联蛋白4（UCP4）及Bcl-2蛋白表达的影响.方法 应用慢性轻度不可预见性的应激制作抑郁症大鼠模型,随机分成2组：对照组、模型组.用流式细胞术分别检测海马组织细胞凋亡率、线粒体膜电位;用酶标仪检测乳酸脱氢酶（LDH）含量;用免疫组化检测神经细胞数目;用Western blot法检测UCP4及Bcl-2蛋白表达水平.结果 慢性应激干预后,模型组中海马神经细胞凋亡率[（4.35±0.19）％]和LDH含量[（445.5±91.70）U/mg）]明显升高,与正常对照组[（0.34±0.06）％,（167.2±63.40） U/mg）]相比,差异有统计学意义（P＜0.01）.与对照组相比[（72.50±4.25）个],模型组中海马组织神经细胞数目[（45.30±2.54）个]和线粒体膜电位有所下降.模型组中UCP4及Bcl-2蛋白水平表达下调.结论 抑郁症大鼠海马组织存在明显的神经元凋亡坏死,这可能与线粒体膜电位下降,UCP4及Bcl-2蛋白表达下调有关.     

黄芪总苷对实验性糖尿病小鼠心肌保护作用的研究

目的探讨黄芪总苷(AST)对链脲霉素(STZ)诱导实验性糖尿病(DM)小鼠心肌的保护作用以及其可能作用机制。方法 STZ(100 mg/kg)一次性腹腔注射建立DM小鼠模型,随机分为正常组,模型组,AST(30、60、120 mg/kg)组及四甲基哌啶(90 mg/kg)组。6周后检测各组小鼠体重、心脏指数、血糖浓度、血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量的变化,HE染色观察心肌组织病理形态学变化,TUNEL法观察心肌细胞凋亡情况,免疫组化法、RT-PCR法观察心肌组织中转化生长因子(TGF-β1)的表达情况。结果与正常组比较,模型组小鼠血糖、心脏指数明显升高,血清SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量升高,心肌纤维紊乱,心肌细胞凋亡增加,心肌组织中TGF-β1和TGF-β1 mRNA表达增加。与模型组比较,AST(30、60、120 mg/kg)组明显降低DM小鼠血糖、心脏指数;提高DM小鼠血清SOD和GSH-Px活性,降低MDA含量;改善心肌纤维、心肌细胞异常;降低心肌组织中TGF-β1的表达。结论 AST能抑制DM小鼠心肌纤维化病变以及心肌细胞凋亡,对DM小鼠心肌起保护作用,其作用机制可能与其提高血清抗氧化能力、降低心肌组织中TGF-β1的表达水平有关。     

Akt在FGF21预防糖尿病心肌病中的作用研究

目的：探索成纤维细胞生长因子21（FGF21）对糖尿病心肌病（DCM）的预防作用;解析Akt信号途径是否是介导FGF21心肌保护作用的分子机制。方法：在雄性C57BL/6J小鼠中构建2型糖尿病模型,成模后给予FGF21腹腔注射干预6个月。检测心脏功能后处死小鼠收集小鼠心脏组织。对各组小鼠心肌肥大、心脏纤维化及细胞凋亡等损伤指标进行检测。随后分离小鼠原代心肌细胞,利用高糖/高脂（HG/Pal）处理细胞模拟2型糖尿病内环境,同时给予FGF21干预及Akt2-siRNA干预39 h,检测FGF21对心肌细胞肥大、凋亡及纤维化改变的影响。结果：体内实验显示FGF21干预能显著改善糖尿病诱导的心脏功能紊乱,抑制心脏病理损伤,改善心肌肥大、心脏纤维化改变（P＜0.05）。体外研究成功模拟了2型糖尿病诱导的心肌细胞损伤,同时验证了FGF21对HG/Pal环境下心肌细胞的保护作用,证实了抑制Akt的表达及活性能完全阻断FGF21对心肌细胞的保护作用。结论：FGF21对糖尿病诱导的心肌损伤具有保护作用,而Akt信号途径是介导FGF21心肌保护作用的关键机制。     

β-淀粉样肽（25-35）对PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响

目的：观察β-淀粉样肽25-35（β-amyloid peptide 25-35,Aβ25-35）诱导PC12细胞凋亡和对bax及bcl-2基因表达的影响。方法：采用MTT法检测PC12细胞的存活率;DNA电泳法观察细胞凋亡时特异性梯状条带;Hochest33258-PI荧光染色观察细胞核形态学改变;RT-PCR检测bax和bcl-2基因mRNA表达变化,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达变化。结果：随着Aβ25-35浓度的增加,PC12细胞存活率逐渐降低;DNA电泳呈凋亡特异性梯状条带;荧光染色可见细胞核碎裂、核固缩等凋亡特征;bax mRNA及Bax蛋白表达增加,bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达降低。结论：在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,Bax和Bcl-2可能起重要作用。     

PAQR9对棕色脂肪产热及UCP1表达的影响

目的 初步探究孕激素和脂联素受体家族成员9（progestin and adipoQ receptor family member 9,PAQR9）对棕色脂肪产热及解偶联蛋白1（uncoupling protein 1,UCP1）表达的影响。方法 选取C57BL/6J小鼠的白色脂肪组织（white adipose tissue,WAT）、棕色脂肪组织（brown adipose tissue,BAT）及前棕色脂肪细胞系DE2-3和间充质干细胞C3H10T1/2细胞系进行研究。实时荧光定量PCR技术检测不同条件下PAQR9及UCP1的mRNA水平,蛋白免疫印迹法检测UCP1的蛋白质水平。实时荧光定量PCR技术和油红O染色法检测脂肪细胞的成脂分化情况。结果 C57BL/6J小鼠BAT中PAQR9的mRNA水平显著高于WAT。冷刺激诱导下,BAT和腹股沟皮下WAT中PAQR9的mRNA水平显著升高。DE2-3细胞诱导分化成熟即第6天时,PAQR9的mRNA水平显著高表达。在DE2-3细胞中过表达PAQR9,UCP1的mRNA水平显著上调,细胞耗氧量显著增加,而DE2-3细胞成脂分化功能无显著性差异。在DE2-3细胞中敲低PAQR9,UCP1的mRNA水平显著下调。在C3H10T1/2细胞第4~6天脂肪细胞分化成熟时,PAQR9的mRNA水平显著上调,在敲低PAQR9后UCP1蛋白质水平下调,而C3H10T1/2细胞成脂分化功能无显著性差异。结论 PAQR9能够促进棕色脂肪细胞产热,调控产热基因UCP1的表达。     

原花青素促进三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用机制研究

目的 研究原花青素(Procyanidins,PC)对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖及细胞凋亡的作用及其机制.方法 常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、 对照组和PC10、20、40、80、160、320μg/mL组.MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测FoxA1蛋白及抗凋亡蛋白bcl2、UCP2表达.结果 PC各剂量组均可显著抑制抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05);PC(10-160μg/mL)组剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05),PC(40-320μg/mL)可以时间依赖性抑制细胞增殖(P<0.05);PC320μg/mL组各时间点细胞抑制率与PC160μg/mL组差异无显著性(P>0.05);160μg/mL PC可以时间依赖性促进MDA-MB-231细胞凋亡(P<0.05);160μg/mL PC作用24 h后,FoxA1蛋白表达显著上升(P<0.05),同时bcl2及UCP2表达降低(P<0.05).结论 PC抑制MDA-MB-231细胞,促进MDA-MB-231细胞凋亡,升高其FoxA1表达,同时降低bcl2及UCP2表达,表明PC可能通过促进FoxA1表达发挥促进MDA-MB-231细胞凋亡的作用.     

Bax抑制因子1通过促进视神经萎缩蛋白1表达抑制小鼠动脉血管钙化

目的 探讨Bax抑制因子1（BI-1）和视神经萎缩蛋白1（OPA1）蛋白对血管钙化的影响。方法 ApoE-/-糖尿病小鼠高脂喂养12周后予以腹腔注射Nε（- 1-羧甲基）-L-赖氨酸16周建立血管钙化模型,实验将小鼠分为4组,6只/组：对照组（ApoE-/-小鼠普通饲料喂养）、钙化组（ApoE-/-小鼠建立钙化模型）、钙化+BI-1TG组（血管特异性过表达BI-1的ApoE-/-小鼠建立钙化模型）和钙化＋BI-1TG＋OPA1-/-组（血管特异性过表达BI-1和基因敲除OPA1的ApoE-/-小鼠建立钙化模型）。另β磷酸甘油诱导血管平滑肌细胞建立细胞钙化模型。使用von Kossa染色检测血管钙化程度,使用ELISA检测主动脉钙含量,使用免疫组织化学方法检测Runt相关转录因子2和骨形态发生蛋白2表达、使用TUNEL检测细胞凋亡率,使用Western blot检测BI-1、OPA1、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3水平的表达。结果 血管钙化后,BI-1和OPA1蛋白表达均下降（P=0.0044）,钙沉积、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达增加（P=0.0041）。过表达BI-1促进OPA1蛋白表达,钙沉积、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达均减少（P=0.0006）。基因敲除OPA1蛋白后,钙沉积、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3又明显增多（P=0.0007）。结论 BI-1可能通过促进OPA1表达,减轻钙沉积、细胞骨型分化和细胞凋亡,继而抑制血管钙化。