双向电泳技术分析大鼠感觉神经施万细胞与运动神经施万细胞蛋白表达差异

目的:建立正常大鼠感觉神经施万细胞(sensory nerve Schwann cell,snSc)与运动神经施万细胞(mo-tor nerve Schwann cell,mnSc)蛋白质分离的双向电泳(2-DE)技术体系,探讨运动神经施万细胞与感觉神经施万细胞存在的蛋白表达差异。方法:正常SD大鼠(180±20g)深度麻醉后打开椎管,取出运动神经和感觉神经,分别分离感觉与运动的施万细胞总蛋白,进行二维电泳和PDQuest软件分析。对其中表达有差异的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间-串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定。结果:建立了正常大鼠感觉神经施万细胞与运动神经施万细胞的蛋白质二维凝胶电泳图像,通过PD Quest软件分析发现有12个表达差异的蛋白质点,利用MALDI-TOF/TOF-MS成功鉴定了其中3个蛋白质。     

施万细胞与脊髓损伤修复的研究进展

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后再髓鞘化障碍是导致患者神经功能缺失的主要原因。作为周围神经系统(peripheral nervous system,PNS)的神经胶质细胞,施万细胞(Schwann cells,SC)参与PNS髓鞘的形成与修复。越来越多的研究显示,SCI发生后可在损伤部位观察到SC。本文就SC参与SCI修复过程的细胞来源、修复机制及受到的调控因素进行综述。     

miRNA-338促进施万细胞成髓鞘

目的:探讨在周围神经损伤后miR-338对大鼠施万细胞髓鞘形成的调控作用及机制.方法:采用实时荧光定量PCR检测损伤后坐骨神经中miR-338的表达变化;采用体外背根节神经元与施万细胞共培养实验,MBP染色检测miR-338模拟物对施万细胞再分化和成髓鞘的作用;芯片检测过表达miR-338对体外培养的施万细胞转录组的影...     

过表达KLF4对RAW264.7巨噬细胞ABCA1表达和胆固醇蓄积的影响

目的观察KLF4过表达对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)胆固醇蓄积的影响及对ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达的影响。方法构建KLF4过表达的RAW264.7细胞株。将细胞分为三组:对照组、ox-LDL组、KLF4过表达+ox-LDL组,后两组加入终浓度为30 μg/mL的ox-LDL处理24 h。分别运用油红O染色观察细胞质脂滴变化,高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,Western blot法检测各组细胞ABCA1及KLF4蛋白表达。结果泡沫细胞模型组的细胞内存在大量的红色脂滴,KLF4及ABCA1蛋白表达及胆固醇含量较对照组升高;KLF4过表达细胞经ox-LDL处理后,细胞内脂滴较模型组明显减少,胆固醇含量下降,ABCA1蛋白表达进一步升高。结论KLF4可上调巨噬细胞ABCA1的表达,抑制ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积。     

施万细胞的功能及其在视神经保护中的应用

中枢神经损伤后的再生问题一直是近年来研究的热点,视神经作为中枢神经的代表在中枢神经系统损伤及再生的课题中得到了广泛而深入的研究。已有研究表明:哺乳类动物的视神经本身具有再生潜能,只是由于局部微环境阻止了视神经的再生。研究视神经的微环境及微环境的影响因素是研究视神经再生的关键。施万细胞(SCs)是一种主要的周围神经胶质细胞,可分泌多种神经营养因子,产生细胞外基质和细胞黏附分子,在视网膜神经节细胞再生中起重要的作用,可为视神经损伤的修复提供良好的微环境。本文就SCs的功能和在视神经保护中的作用以及SCs的移植应用前景进行综述。     

施万细胞可塑性和自噬对周围神经损伤修复的作用

周围神经系统在神经损伤后会表现出比中枢神经系统更强的再生能力,这得益于施万细胞显著的可塑性。可塑性是指施万细胞对损伤作出的反应,即去分化、激活或重新编程,其中包括激活自噬清除髓鞘碎片,而髓鞘清除对周围神经损伤的再生至关重要。自噬是神经元发育和生存所必需的细胞降解过程,尤其是在抵抗异常应力时,通过消除受损的蛋白质和细胞器来维持细胞稳态发挥了不可替代作用。神经受损后的自噬调节作用与施万细胞可塑性密切相关,自噬广泛参与了神经损伤后施万细胞可塑性的调节,其中包括促分化,以及调节轴突发生等。     

施万细胞线粒体在糖尿病周围神经病变中的作用机制

糖尿病周围神经病变(DPN)是最常见的糖尿病并发症,由于其病理机制尚未完全明确,目前仍缺乏有效的治疗手段.周围神经作为高血糖损害的主要靶点,其结构和功能的正常维持高度依赖线粒体的能量供应,因此线粒体功能障碍是多种神经退行性疾病的主要病因.施万细胞作为周围神经中最主要的胶质细胞,对于神经元的存活至关重要,但其在DPN中的...     

大鼠坐骨神经再生过程中的施万细胞自噬作用

目的 探讨大鼠坐骨神经再生过程中的细胞自噬作用。方法 横切大鼠坐骨神经制作wallerian变性模型,分别于造模后0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4、5、7、10、15 d取远断端组织行电镜结构观察。结果 轴突在第0.5天时从髓鞘脱离,溃变呈空泡状。第2天开始髓鞘皱褶、断裂形成碎片,神经膜细胞(Schwann cell, 施万细胞)内见大的膜结合髓鞘碎片和许多散在小碎片,并与溶酶体融合形成自噬泡,呈酸性磷酸酶(AcPase)阳性。第4天时内膜区偶见幼稚细胞,1周后见大量幼稚细胞。第7天后施万细胞内自噬泡数量开始减少。实验全程偶见巨噬细胞,内有吞噬泡。结论 大鼠坐骨神经再生过程中溃变髓鞘主要经施万细胞自噬清除,施万细胞脱分化为施万细胞祖细胞后大量增殖分化参与神经再生过程。     

施万细胞与背根节神经元体外共培养成髓鞘模型的建立

目的：探讨施万细胞与背根节神经元髓鞘化共培养的标准化方法,为研究周围神经髓鞘化的形成机制提供稳定的周围神经髓鞘化体外模型。方法：取出生1~3 d新生SD大鼠,培养施万细胞,经纯化鉴定后用于共培养。取孕14~15 d的SD大鼠胚鼠背根神经节,经纯化后用于共培养;将2种分别纯化的细胞进行共培养,加抗坏血酸诱导髓鞘的形成。利用免疫组化染色、扫描电镜和透射电镜,检测髓鞘的形成。结果：纯化后施万细胞纯度可达到98%以上,可用于共培养。背根节神经元贴壁良好,经纯化后几乎无杂细胞可见,可用于共培养。对共培养细胞进行MAG与NF的免疫组化染色,发现有数量可观的髓鞘形成,并且髓鞘是紧密包绕在神经元轴突上。扫描电镜下可观察到施万细胞包绕轴突形成髓鞘,而透射电镜下则可观察到有致密的髓鞘板层结构形成。结论：本实验成功建立稳定可靠的体外成髓鞘模型,可用于轴突的新髓鞘化实验研究。     

ABCA1在胆固醇逆转运中作用的研究进展

ATP结合盒转运蛋白A1（ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1）是一种以ATP为能源进行物质转运的膜蛋白,胆固醇、磷脂等脂类物质是ABCA1的主要转运底物,胆固醇负荷、cAMP、PPAR等信号在调节ABCA1表达中有重要影响。ABCA1在胆固醇逆转运（reverse cholesterol transport,RCT）过程中与载脂蛋白结合参与高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）的形成,是RCT中的第一步也是关键的一步,也是该领域中研究的热点。     

手法对家兔骨骼肌失神经支配后雪旺氏细胞S-100蛋白表达的影响

目的：通过观察推拿手法家兔骨骼肌失神经支配后肌湿重、雪旺氏细胞S-100蛋白表达水平,探讨推拿手法对受损神经及失神经支配骨骼肌的影响。方法：新西兰家兔120只,分为四大组：正常对照组30只、模型观察组30只、神经生长因子(NGF)治疗组30只、手法治疗组30只,分别于手法干预2周、3周、1月、2月、4月后,每组各取6只家兔,称量肌湿重,计算术侧与健侧的肌湿重比值;测定雪旺氏细胞S-100蛋白表达水平。结果：①腓肠肌肌湿重比：NGF治疗组在2周、3周、1月、2月及手法治疗组在2周、3周、1月、2月、4月均高于模型观察组(P＜0.05)。手法治疗组在2周、3周低于NGF治疗组(P＜0.05),4月时则高于NGF治疗组(P＜0.05)。②雪旺氏细胞S-100蛋白表达：NGF治疗组、手法治疗组在各个时期均高于模型观察组(P＜0.05)。手法治疗组在1月、2月均高于NGF治疗组(P＜0.05)。结论：推拿手法可以延缓周围神经损伤后骨骼肌萎缩、变性,促进损伤神经的修复。     

植入自体雪旺氏细胞的胎儿神经移植修复周围神经缺损的实验与临床研究

目的：研究修复周围神经缺损新的手术方法和验证胎儿神经,雪旺氏细胞对神经再生的作用。方法：用80只在白鼠,随机分成三组：A组自体神经移植组;B组单纯液氮冷冻胎儿神经组;C组液氮冷冻胎儿神经加自体雪旺氏细胞组,术后分别于4,12和24周取材,进行大体观察,组织学观察及电生理检测,临床应用胎儿神经加片体雪旺氏细胞修复周围神经缺损32例（45条）,术后1年进行神经功能评定,随访1－3年,结果：A,C两组术后4周开始再生纤维逐步增多,术后24周再生纤维增粗并形成神经束,而组再生纤维数目很少,复合动作电位峰值恢复率及传导速度恢复率,A,C两组恢复明显高于B组,临床应用32例＊（45条）周围神经,按Seddon的周围神经损伤术后恢复评定标准进行评定,优良率为65．8％,结论：植入自体雪旺氏细胞的胎儿神经移植是一种修复周围神经缺损的新方法,具有进一步空入研究和临床应用的前景。     

低强度脉冲超声对雪旺细胞增生及NT-3基因表达的影响

目的研究培养的雪旺细胞在低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)直接作用下,对细胞增生、NT-3及脑源性神经生长因子(BDNF)mRNA表达的影响。方法取新生1-3dWistar大鼠坐骨神经,经过酶消化分离雪旺细胞,培养在6孔板上。每天给予超声频率1MHz及声强(SATA)0.1W/cm25min连续刺激,持续14d。对照组除不给予超声刺激外,其他条件与实验组相同。采用5-溴-2-脱氧尿嘧啶实验(BrdU摄入实验)检测细胞增生率的变化,免疫组化及RT-PCR实验检测细胞因子的变化。结果免疫组化结果显示,分离的雪旺细胞标记物S-100鉴定98%以上阳性。BrdU摄入实验发现受超声刺激的细胞在培养第4,7,10,14天细胞增生率较对照组增高,其中前3个时间点差异具有统计学意义。在刺激第14天,实验组NT-3mRNA水平较对照组有显著上调,NT-3/β-actin比值分别为0.56±0.13和0.41±0.09(n=6,P<0.05)。而BDNF水平实验组较对照组显著下调,BDNF/β-actin比值分别是0.51±0.05和0.60±0.08(n=6,P<0.05)。免疫细胞化学证实2组雪旺细胞NT-3及BDNF均有超过98%的阳性率,但表达强度不同。结论给予低强度脉冲超声刺激可促进培养的雪旺细胞增生及神经生长因子表达的改变,本研究为低强度脉冲超声的应用提供了理论依据。     

聚乳酸管注入白芨胶和雪旺细胞修复周围神经缺损的实验研究

目的：研究聚乳酸管注入白芨胶和雪旺细胞对周围神经再生的影响。方法：30只Wister大鼠分为两组，分别在聚乳酸管（A组）注入或不注入（B组）白芨胶和雪旺细胞来桥接单侧坐骨神经10mm缺损。术后第8、12周进行显微解剖学、组织学等检查。结果：A组神经再生明显。结论：白芨胶载雪旺细胞在神经导管内明显地促进周围神经再生。     

周围神经挤压伤后转化生长因子β的表达

目的　观察大鼠坐骨神经挤压伤后转化生长因子 β(TGF β)蛋白表达的变化 ,了解TGF β在周围神经损伤修复过程中所起的作用。方法　取 2 1只Wistar大鼠 ,造成坐骨神经挤压伤 ,伤后 6h、1、3、7、14、2 1d取材分别进行组织学、免疫组化观察。结果　 3d时神经挤压伤处TGF β抗原呈阳性反应 ,7d时损伤处的雪旺细胞明显增多 ,且TGF β表达的量也增多 ,以后TGF β表达的量有所减少。 结论　TGF β参与周围神经的损伤病理过程。     

环氧合酶-2(COX-2)在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨COX-2在食管鳞癌发生、转移中的作用及其意义。方法采用免疫组化方法检测19例食管正常黏膜、轻中度(8例)、重度(7例)不典型增生食管组织及45例食管鳞癌组织中COX-2的表达。结果正常食管黏膜组织中COX-2不表达,轻中度、重度不典型增生组织及食管鳞癌组织中COX-2的阳性表达率,分别为1/8、3/7、28/45,依次增加(P<0.05)。不同分化程度和浸润深度的食管鳞癌组织中,COX-2阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05),但有淋巴结转移组COX-2的阳性表达率(80.95%)高于无淋巴结转移组的阳性表达率(45.83%)(P<0.05)。结论COX-2表达可能是食管癌发生过程中的早期事件,与淋巴结转移密切相关,与肿瘤分化程度及浸润深度无关,COX-2可以作为判断病情和评价预后的指标。     

雪旺细胞源神经营养因子对端侧吻合后神经再生的影响

目的研究雪旺细胞源神经营养因子对神经端侧吻合后神经再生的影响.方法取SD大鼠24只,随机分为实验组和对照组,每组12只;随机切断一侧腓总神经,与胫神经外膜开窗处行端侧吻合,另一侧作为正常对照.术后于实验组端侧吻合侧小腿外侧肌肉注射雪旺细胞源神经营养因子(10 μg/ml),而于对照组注射等量的生理盐水,隔天一次,共用2周;术后12周,行腓总神经传导速度测定、组织学检查及胫前肌湿重测定.结果实验组再生的腓总神经纤维质量、数目、运动神经传导速度和胫前肌湿重均优于对照组,但不如正常的腓总神经和胫前肌.结论雪旺细胞源神经营养因子对神经端侧吻合后的再生具有一定的促进作用.     

MDM2蛋白在宫颈鳞状细胞癌和尖锐湿疣发病中的作用

目的通过研究人乳头瘤病毒(HPV)感染性疾病宫颈鳞状细胞癌、宫颈尖锐湿疣及外阴尖锐湿疣组织中MDM2mRNA及蛋白的表达情况,探讨MDM2蛋白在上述疾病发病中的作用.方法分别利用RT-PCR、免疫组化法检测宫颈鳞状细胞癌、宫颈尖锐湿疣及外阴尖锐湿疣组织中MDM2mRNA及蛋白的表达情况,同时用PCR法检测HPV型别.结果46例宫颈鳞状细胞癌、19例宫颈尖锐湿疣及34例外阴尖锐湿疣中MDM2蛋白表达分别为78.3%、73.7%和58.8%;经x2检验,宫颈鳞状细胞癌和尖锐湿疣中MDM2蛋白表达无差异(P＞0.05).在6例宫颈鳞状细胞癌、6例宫颈尖锐湿疣及8例外阴尖锐湿疣中均检测到MDM2mRNA的表达,其表达强度与β-actin表达强度比值(MDM2/p-actin均值分别为0.77±0.30、0.75±0.29和0.82±0.24)经t检验,表明宫颈鳞状细胞癌和尖锐湿疣中MDM2mRNA表达亦无差异(P＞0.05).PCR检测示宫颈鳞状细胞癌主要以H1PVl6感染为主,而尖锐湿疣主要以HPV6/11感染为主.结论HPV的存在导致宫颈鳞状细胞癌和尖锐湿疣中MDM2蛋白升高,MDM2蛋白通过与P53抑癌蛋白结合而消除P53蛋白的负调节作用,从而促进细胞生长,但与HPV型别无关.     

周围神经43kD蛋白在损伤坐骨神经中的表达

目的：探索SD大鼠损伤坐骨神经组织中43kD蛋白的表达。方法：采用周围神经43kD蛋白单克隆抗体,以Western Blot方法检测大鼠损伤坐骨神经中相应蛋白的表达情况。结果：正常大鼠坐骨神经组织与大鼠损伤后2周的坐骨神经远侧端组织,在43kD处均有免疫反应阳性条带,在大鼠损伤后2周的坐骨神经远侧端组织中阳性反应产物着色较深。结论：大鼠坐骨神经组织中有43kD蛋白的表达,而损伤神经远侧端43kD蛋白表达增强。     

外源基因在周围神经吻合口中的表达

目的　应用外源基因缝线行周围神经吻合 ,探讨神经吻合口直接转基因并使外源基因在吻合口得以表达的可行性。方法　构建含有大肠杆菌 (Escherichiacoli,E coli ) β 半乳糖苷酶 (β galactosidase,β Gal)的结构基因(lacZ基因 )及人类巨细胞病毒 (cytomegalovirus,CMV)启动子的PCMVβ质粒。应用通过浸泡处理的 8 0医用尼龙无创缝线行兔坐骨神经外膜缝合。对照组应用浸泡过蔗糖PBS溶液的缝线 ,实验组应用浸泡过PCMVβ质粒溶液的缝线进行神经缝合。分期取出神经吻合部 ,进行 β 半乳糖苷酶组织化学染色及 β 半乳糖苷酶活性检测。结果　组织化学染色显示对照组术后各期的所有吻合部神经组织均无蓝染阳性细胞 ,而实验组术后各期的所有吻合部神经组织均有蓝染的阳性细胞 ;对照组术后各期吻合部神经组织中均未检测到 β 半乳糖苷酶活性 ,实验组吻合部神经组织从术后 2d到 30d都可检测到 β 半乳糖苷酶活性。 结论　应用外源基因缝线可使外源基因转移至周围神经吻合口中并表达出具有生物活性的外源基因表达产物 ,为应用基因治疗促进神经功能的恢复提供了可行途径。