孕妇外周血中胎儿基因组的研究进展

无创伤性产前诊断是人类遗传学发展的长期目标,从的外周血中分离胎儿细胞及游离DNA、RNA使之成为可能。胎儿核酸在母血中异常稳定,并含量丰富,快速代谢,使之成为重要的产前诊断侯选物质。     

应用母血中胎儿游离DNA进行无创产前诊断的研究进展

有创性产前诊断是诊断染色体病的金标准,但是不能广泛应用于所有孕妇;孕妇血中胎儿游离DNA的发现为无创性产前诊断提供了广阔前景,借助大规模并行基因组测序技术,建立起无创产前诊断染色体非整倍体的新方法。就胎儿游离DNA的来源、应用胎儿游离DNA进行非整倍体和基因产前诊断进行综述。     

孕妇外周血中胎儿游离DNA在产前诊断中的应用

孕妇外周血中胎儿游离DNA的发现,为无创性产前诊断开辟了一条新途径。检测孕妇血浆中特异的胎儿DNA序列已被用于胎儿性连锁疾病鉴定、RhD血型检查和多种单基因遗传病的产前诊断;游离DNA水平的变化还可被用作某些妊娠相关疾病如先兆子、早产和胎儿染色体疾病的临床诊断新指标。本文对母体外周血中胎儿游离DNA的生化特征及其临床应用研究,进行了总结和分析。     

孕妇外周血胎儿游离DNA应用于β地中海贫血产前诊断

目的：探讨孕妇外周血胎儿游离DNA在β地中海贫血产前诊断中的应用情况。方法选取2011年3月～2013年3月到妇产科进行产前诊断的妊娠妇女中选取28例作为研究对象,并对妊娠妇女采取常规的基因诊断以及胎儿游离DNA检测。结果穿刺诊断结果显示,正常例数为9例,杂合子例数为12例,双重杂合子例数为7例;胎儿游离DNA检测结果显示,IVS-Ⅱ-654突变基因的携带者共有11例,检测结果为阴性的例数共有16例,实验失败的有1例。结论在产前诊断中应用胎儿游离DNA检测β地中海贫血是可行的,然而母源性的游离DNA会对检测结果有所影响。     

应用甲基化识别定量检测胎儿DNA

目的建立一种应用表观遗传学方法定量检测孕妇血浆中游离胎儿DNA的方法。方法 48例正常孕妇为观察组,10例非孕健康妇女为对照组,抽取外周血10 mL,应用甲基化标志物T-box3基因,经DNA分离、甲基化敏感限制性内切酶消除样本中母源性(非甲基化)DNA。未分解的胎儿DNA在合成寡核苷酸的存在下行竞争性聚合酶链反应扩增,再用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱定量检测分析胎儿DNA。结果观察组血浆游离胎儿DNA平均为(148.0±63.5)×103拷贝数.L-1,胎儿DNA占标本中总游离DNA的比例为12%;对照组血浆甲基化DNA平均为(6.0±4.5)×103拷贝数.L-1;2组血标本中甲基化DNA拷贝数差异有统计学意义(P<0.05)。本检测方法的敏感性和特异性分别为99%和100%。结论应用甲基化识别可以对母血中分离出的胎儿DNA进行检测并定量分析,有助于扩大无创伤性产前诊断的临床应用范围。     

孕妇外周血中胎儿游离DNA在产科中的应用

检测孕妇外周血中胎儿游离DNA,为无创产前诊断及妊娠相关性疾病的防治找到了新途径,此种技术具有诸多优势。孕妇外周血中胎儿游离DNA测序可用于胎儿非整倍体疾病、胎儿单基因遗传病、胎儿血型的检测、胎儿性连锁疾病的产前诊断筛查;胎儿游离DNA水平的变化可作为一种新的生物指标为妊娠相关性疾病的诊断及治疗提供帮助。随着分子生物学技术的不断发展,对孕妇外周血中胎儿游离DNA的研究将更加深入。     

小片段游离胎儿DNA检测Y染色体性别决定区的临床意义

目的研究从早孕妇女外周血中提取小片段游离胎儿DNA检测胎儿Y染色体性别决定区（SRY）的方法,提高PCR检测的特异性和敏感性,评估利用小片段游离胎儿DNA对性连锁遗传病进行无创性产前诊断可行性。方法收集80例孕妇外周血,提取游离的胎儿DNA和提纯小片段游离胎儿DNA,PCR检测SRY基因。结果80例受试者中2种样本敏感性和特异性比较差异有统计学意义。结论可利用孕妇外周血中小片段游离胎儿DNA检测胎儿Y染色体性别决定区,敏感性和特异性优于总游离DNA,可用于孕早期性连锁遗传疾病和单基因突变疾病产前诊断。     

表观遗传学改变在产前诊断的应用

出生缺陷会导致婴儿患病甚至死亡，这已引起全世界医学界的广泛关注，近年来诊断学的研究热点是如何建立无创伤性的产前诊断。本文通过阐述遍观遗传学在区分母体和胎儿DNA上的应用以及对无创性产前诊断作出探讨。     

地中海贫血产前基因诊断的研究进展

地中海贫血,简称"地贫",好发于地中海沿岸、美国黑人人群和印度次大陆等地区,我国南方发病率也很高,尤其是广西,地贫基因的携带率高达20%,故产前基因诊断地贫就显得尤为重要.产前基因诊断包括胎儿DNA的取样和胎儿DNA的基因分析.胎儿DNA的取样技术主要有创伤性和无创伤性取样技术.创伤性取样技术包括羊膜腔穿刺术、绒毛活检术和脐静脉穿刺术,目前这类方法较为常用.无创伤性取样技术主要为从孕妇外周血中分离胎儿细胞和游离胎儿DNA的取样技术,及胚胎植入前诊断.对以上方法提取的胎儿DNA,再应用各种分子生物学方法进行地贫基因诊断,依据结果对胎儿做出继续妊娠或终止妊娠的决定.本文重点综述基因诊断和地贫高风险胎儿产前基因诊断的研究进展.     

孕妇血浆中游离胎儿DNA短串联重复序列检测

目的:建立一种简便、不依赖于胎儿性别和父本DNA的无创性产前诊断方法.方法:应用降落PCR和二次PCR扩增技术,结合母源DNA对照,以34例孕妇外周静脉血血浆作为标本,口腔上皮细胞拭子作为母源对照,孕妇配偶外周血DNA作为父源对照,检测正常孕妇血浆中游离胎儿DNA D17S1293、D21S11及DXS8377等基因位点.结果:34例孕妇血浆DNA中均检出非母源性等位基因条带,其中17例经父源DNA验证.结论:采用降落PCR和二次PCR扩增技术,可以提高孕早期微量游离胎儿DNA的扩增效率,准确、快捷地获得不依赖于父本DNA的胎儿遗传信息.     

应用表观遗传学方法探索孕妇血浆中胎儿游离DNA

目的应用表观遗传学DNA甲基化技术从母血浆中检测胎儿DNA序列,扩大了非创伤性产前诊断的检测范围。方法随机选择早、中、晚期正常孕妇及非妊娠健康妇女各20名,以非妊娠妇女20名作为对照组。提取血浆中的游离胎儿DNA,应用表观遗传学DNA甲基化技术检测其目的基因u-maspin的表达水平,进行定性及相对定量,并对各期孕妇的样本均数进行对比式统计学分析。结果未甲基化maspin在非妊娠健康妇女血浆中未能检测到,在早、中、晚期孕妇血浆中的浓度随妊娠进展呈升高趋势。结论应用表观遗传学DNA甲基化技术从母血浆中检测妊娠期特异性表观遗传学标志物u-maspin可行,扩大了非创伤性产前诊断的检测范围。     

无创胎儿DNA检测假阳性对产前诊断的影响分析

无创胎儿DNA检测(non-invasive prenatal testing, NIPT)假阳性是导致增加额外的产前诊断和孕妇依从性降低的重要原因,还可能带来非必要的引产。本文就无创胎儿DNA检测假阳性对产前诊断的影响分析进行综述,通过分析NIPT假阳性的原因,在临床应用中结合不同孕妇的个体情况,为个体化、规范化的产前诊断提供指导和理论依据。     

Advances on circulating fetal DNA in maternal plasma

The discovery of cell-free fetal DNA in maternal plasma in 1997 has opened up new possibilities for noninvasive diagnosis. By RT-PCR, circulating fetal DNA can be detected in the plasma of pregnant women, even in the first trimester of pregnancy, and thus can be used for noninvasive prenatal diagnosis of sex-linked disorders, the RhD status of fetuses, and single gene disorders such as beta-thalassaemia, congenital adrenal hyperplasia, and achondroplasia. In addition, quantitative aberrations of circulating fetal DNA may indicate various pregnancy-associated disorders, including preeclampsia, preterm labor and fetal trisomy 21.[第一段]     

血清学检测在高龄产妇产前诊断中预测胎儿染色体异常的应用效果研究

目的探讨血清学检测在与AMA产前诊断中预测胎儿异常的应用意义。方法选取该院进行产前诊断的AMA进行侵入性诊断,并对出现异常结果的AMA进行血清学的检测,观察检测中的异常结果出现率。结果经过两种不同方式的检测,羊水检测发现在20例研究对象中有3例检测出染色体异常,占33.3%的检测率,而血清学检测检测出共有6例异常结果,检测率为66.6%,明显大于羊水检测的方法,与不同年龄段的AMA染色体异常率检测差异有统计学意义。结论血清学检测在提高AMA胎儿染色体异常的异常率中非常具有优越性,可作为常用的诊断方案。     

胎儿有核红细胞在DMD产前基因诊断中的应用

目的探讨胎儿有核红细胞（FNRBCs）在DMD产前基因诊断中的可行性。方法对6例进行性肌营养不良症携带者孕妇（孕12～18周）抽取外周血进行密度梯度离心，富集胎儿细胞，在显微操作下吸取胎儿有核红细胞。对所富集细胞经提取DNA进行人Y染色体特异DNA扩增，判定胎儿性别。将其应用于DMD产前诊断中，并与用羊水进行产前诊断比较。结果SRY片段经PCR后，3例男性胎儿可见特异性条带，3例女性胎儿未见此电泳条带。母体外周血FNRBCs的DNA产前诊断中，2例为女性正常胎儿，1例为女性携带者，2例为正常男性胎儿，1例为DMD患儿，结果与用羊水进行产前诊断和产后个体性别证实一致。结论密度梯度离心结合显微操作方法分离FNRBCs能用于性别鉴定和遗传病的产前诊断。     

实时PCR和cycling probe技术检测母血浆游离胎儿DNA筛选重型β地中海贫血胎儿

OBJECTIVE: To analyze cell-free fetal DNA in maternal plasma for prenatal screening of beta-thalassaemia major. METHODS: Six couples undergoing prenatal diagnosis of beta-thalassaemia (gestational age range 23-26 weeks) were enrolled in this study. The husbands were all carriers of the CD17(A-->T) mutation, and the wives carreid another beta-thalassaemia mutation. The allele-specific primers and two fluorescent cycling probes were synthesized for the detection of the CD17(A-->T) mutation, using FAM and HEX fluorescence labeling, respectively. The cell-free fetal DNA in the maternal plasma was detected using real-time PCR, and the fetal genotype was confirmed by cord blood conventional prenatal diagnosis. RESULTS: In the 6 pregnancies, FAM and HEX fluorescent signals were detected in 3 maternal plasma samples; in the other 3 samples, only FAM fluorescent signals were detected, suggesting the absence of paternally derived CD17(A-->T) mutation. CONCLUSION: Examination of cell-free fetal DNA in maternal plasma using real-time PCR and cycling probe technology can be effective means for prenatal screening of beta-thalassaemia major.     

产前无创基因检测在胎儿性染色体非整倍体疾病筛查中的临床价值

目的：探讨产前无创基因检测（NIPT）在胎儿性染色体非整倍体疾病（SCAs）筛查中的应用价值。方法：选取2018年1月至2019年12月在温州市中心医院行NIPT普通三项或NIPT PLUS的单活胎孕妇27 116例为研究对象,其中NIPT普通三项有15 218例,NIPT PLUS有11 948例。利用高通量基因组测序平台及生物信息分析技术,对孕妇外周血中胎儿游离DNA进行深度测序,获取胎儿染色体信息。对检测结果高风险者进行遗传咨询,知情同意后行羊膜腔穿刺及羊水染色体核型分析。结果：NIPT普通三项共检测出SCAs 125例,阳性率为0.82%（125/15 218）,70例经羊水产前诊断证实阳性17例,阳性预测值24.29%（17/70）。NIPTPLUS共检测出SCAs 97例,阳性率为0.81%（97/11 948）,70例经羊水产前诊断证实阳性29例,阳性预测值41.43%（29/70）。结论：NIPT可作为胎儿SCAs的筛查方法,具有较高的临床应用价值。与NIPT普通三项相比,NIPT PLUS显著提高胎儿SCAs的检测效能。对于NIPT或NIPT PLUS结果高风险者必须进行侵入性产前诊断,对于结果低风险者应警惕漏诊可能。     

母体血浆中游离胎儿DNA在无创性产前诊断中的应用研究

目的 建立一种从孕妇血浆中检测胎儿DNA的无创性产前诊断新方法。方法 对30例孕7～41周妇女血浆游离DNA进行聚合酶链反应,特异性扩增的胎儿基因为Y染色体上的DYZ1位点,扩增片段的大小为149bp。30例孕妇血浆均经过酚氯仿法提取DNA作为模板,进行聚合酶链反应。结果 20例妊娠男性胎儿孕妇中有17例出现DYZ1基因扩增条带,检出率为85.0％。10例妊娠女性胎儿孕妇中未出现阳性扩增条带,无假阳性结果。本研究中早、中、晚孕期性别符合率分别为80％,80％,90％,总符合率为85.0％。结论 用酚氯仿法提取血浆中的DNA,可以提高模板的浓度和纯度,可改善PCR条件,提高结果的准确性。     

彩色多普勒超声在产前胎儿畸形筛查中的应用价值

 摘要：目的  探讨彩色多普勒超声诊断在产前胎儿畸形筛查中的应用价值。方法  回顾性分析2014年9月-2015年12月在该院行产前超声检查的孕妇1 387例（共1 402例胎儿）为研究对象,所有孕妇行≥1次彩色多普勒超声检查,常规检查胎儿基本情况,保存各切面图像并记录测量数据;观察胎儿畸形检出情况,并与产后或引产后临床诊断情况对比,分析产前彩色多普勒超声诊断仪应用价值。结果  1 402例胎儿经产后或引产后临床诊断证实畸形46例,畸形率为3.28%（46/1 402）,产前超声筛查发现41例畸形胎儿,畸形检出率为2.92%（41/1 402）,漏诊4例,误诊1例。结论  应用彩色多普勒超声诊断仪对胎儿畸形进行产前筛查,具有较高的检出率,可将其作为产前常规检查手段。